Professional Documents
Culture Documents
Vektor
didefosf
orilasi
menggu
nakan
10 unit
alkalin
fosfatas
e
tersebut
diinkubasi
pada 37C
selama 1
jam dan
enzim akan
denaturasi
pada 65C
selama 1
jam
telah
didefosfori
Memasuk
lasi
kan
dipurifikas
vektor
i dengan
dengan
DNA
perbandi
purificatio
ngan 3:1
n kit (MBI
Fermentas
)
Reaksi tersebut diinkubasi
dalam larutan buffer DNA ligase
(50 mM Tris-HCl pada pH 7,6; 10
mM MgCl2; 1 mM ATP dan 1 mM
DTT) selama 24 jam pada suhu
28C
Transformasi DNA
Ekspresi materi genetik asing yang
masuk melalui dinding sel.
Diperkenalkan oleh Frederick Griffith pada tahun
1982, berdasarkan penelitian bahwa suatu bakteri
dapat melepaskan fragmen DNAnya ke dalam
suatu medium yang kemudian akan masuk ke
dalam sel bakteriyang lain dalam kultur tersebut.
Bakteri diubah menjadi kompeten (istilah untuk bakteri
yang siap bertransformasi), misalnya dengan
mendinginkannya pada larutan yang mengandung
kation divalen seperti Ca2+ untukmembuat dinding sel
menjadi permeable dan dapat dilalui oleh DNA plasmid.
Proses Transformasi
Molekul DNA rantai ganda berikatan pada
reseptor yang terdapat dipermukaan sel.
Perikatan ini bersifat reversible.
Pengambilan DNA donor yang bersifatirreversible.
Pada saat ini DNA donor menjadi resisten terhadap
enzim DNAase di dalammedium.
Konversi molekul DNA donor yang berupa
rantaiganda menjadi molekul rantai tunggal melalui
degradasi nukleotida terhadap salah satu rantai.
Integrasi (insersi kovalen) seluruh atau sebagian
unting tunggal DNA donor tersebut kedalam
kromosom resipien.
Segregasi danekspresi fenotipik gen donor yang
telah terintegrasi
Teknik Heat-Shock
Teknik Elektroporasi
Referensi
Sajidan. 2011. Transformasi Ekspresi Gen Asing dalam Sel Bakteri.
[http://sajidan.staff.fkip.uns.ac.id/2011/02/28/transformasi-ekspresi-genasing-dalam-sel-bakteri/] diakses pada Sabtu, 3 Oktober 2015 pukul 21.29
Sitorus, Dame Hartini Afrian. 2014. TRANSFORMASI BAKTERI DENGAN DNA
DAN EKSPRESINYA. Bogor.
[https://www.academia.edu/9702710/TRANSFORMASI_BAKTERI_DENGAN_D
NA_DAN_EKSPRESINYA] diakses pada Sabtu, 3 Oktober 2015 pukul 21.00
Ahmed, Sibtain dkk. 2003. Cloning of Endoglucanase Genefrom Trichoderma
harzianum in E.coli. Pakistan: Pakistan Journal of Life Science.
[http://www.pjlss.edu.pk/pdf_files/2003_2/122-126.pdf] diakses pada Jumat,
2 Oktober 2015 pukul 22.00
Doherty, Aidan J. dkk. 2000. Structural and Mechanistic Conservation in DNA
Ligation. Amerika: Oxford University Press
[http://nar.oxfordjournals.org/content/28/21/4051.full.pdf+html] diakses
pada Jumat, 2 Oktober 2015 pukul 21.48
Anonim. 1999. DNA Ligation.
[http://arbl.cvmbs.colostate.edu/hbooks/genetics/biotech/enzymes/ligation.
html] diakses pada Jumat, 2 Oktober 2015 pukul 22.17