Formato Preinforme de Laboratorio

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA-UNAD
Escuela de Ciencias Agrcolas , Pecuarias y del Medio Ambiente-ECAPMA

Programa :Ingeniera Ambiental-IA
PREINFORME Laboratorio de Microbiologa
Nombre y Apellido: Diana Marcela Palacio Barreneche Cdigo: 43.257.915 Fecha: 31 de Octubre de 2015
TEORA BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO

INTRODUCCIN: Para el desarrollo de las prcticas de laboratorio es conveniente tener
en cuenta algunas normas elementales que deben ser observadas con toda
escrupulosidad. Cuando se trabaja en un laboratorio existe el peligro potencial de
ACCIDENTES, debido a las sustancias qumicas y elementos que se utilizan y la
posibilidad de cometer algn error al realizar un experimento, por tal motivo la seguridad y
la proteccin de la salud son indispensables para un ambiente de estudio y trabajo seguro
en un laboratorio, por lo tanto todo estudiante, auxiliar y docente debe cumplir las reglas
de seguridad e higiene en el laboratorio.
MENTEFACTO CONCEPTUAL
BIOSEGURIDAD EN EL
LABORATORIO
Conjunto de medidas
Tcnicas, cientficas y
organizativas
Que previenen a:
Personas
Instituciones
De la exposicin
a:
MATERIALES Y MTODOS
Materiales y Equipos requeridos: N/A

Reactivos a utilizar: N/A
PROCEDIMIENTO: N/A
TABLA DE DATOS: N/A
RESULTADOS ESPERADOS:
Medio ambiente
Agentes
infecciosos

Se espera que como estudiantes conozcamos las normas de bioseguridad en el

laboratorio, para que de esta manera la prctica se desarrolle en adecuadas condiciones
y no se presente ningn tipo de accidente.
GLOSARIO
Agente biolgico: Microorganismos, con inclusin de los genticamente modificados,
cultivos celulares y endoparsitos humanos susceptibles de originar cualquier tipo de
infeccin, alergia o toxicidad.
Agentes patgenos: Todo aquel microorganismo capaz de producir enfermedades o
infeccin.
Contaminacin: Presencia de un agente infeccioso en la superficie del organismo;
tambin en vestimenta, instrumentos quirrgicos, apsitos u otros objetos inanimados o
substancias, incluyendo el agua y los alimentos.
Riesgo: Probabilidad de que ante un determinado peligro se produzca un cierto dao,
pudiendo por ello cuantificarse.
BIBLIOGRAFIA
Gua
de
seguridad
y
bioseguridad.
Recuperado
de
http://www.usbcartagena.edu.co/phocadownload/facultades/salud/GUIA_SEGURIDA
D_Y_BIOSEGURIDAD.pdf
PRCTICA No. 1 DE RECONOCIMIENTO DEL LABORATORIO Y MATERIALES DE
MICROBIOLOGIA
INTRODUCCION: Es muy importante que los materiales y equipos de uso comn en el
laboratorio se identifiquen por su nombre correcto y uso especifico que tiene cada uno,
pero ms importante es saber manejarlo correctamente en el momento oportuno,
teniendo en cuenta los cuidados y normas especiales para el uso de aquellos que as lo
requieran. Los instrumentos y tiles de laboratorio estn constituidos de materiales
diversos.

MATERIALES Y EQUIPOS DE
LABORATORIO
Material de vidrio
Material de porcelana
Para poder efectuar operaciones
concretas en el laboratorio se
trabaja con aparatos elaborados
con materiales diversos como
vidrio, plstico, porcelana y metal.
Se clasifican de la siguiente
manera:
Equipos usados en el laboratorio
Material de plstico
Material de metal y madera
Microscopio
Balanza analtica
Horno
Plancha de calentamiento
Centrifugas
MATERIALES Y MTODOS
Materiales y Equipos requeridos:

Materiales
Portaobjetos
Cubreobjetos
Caja petri
Pipetas graduadas
Pipetas Pasteur
Tubos de ensayo
Matraces
Probetas
Tubos de Durham
Asas de inoculacin
Mecheros
PROCEDIMIENTO: N/A
Equipos
Estufas
bacteriolgicas
Bao bacteriolgico
Horno Pasteur
Autoclave
Jarra de anaerobiosis
Centrifuga
Nefelmetro de Mac
Farland
Membranas millipore
Cuenta colonias
Microscopio

TABLA DE DATOS: N/A

Describir los materiales y equipos de laboratorio de manera detallada.
GLOSARIO
Microscopio: (del griego micrs, pequeo, y scopo, mirar)1 es un
instrumento que permite observar objetos que son demasiado pequeos para ser vistos a
simple vista. El tipo ms comn y el primero que se invent es el microscopio ptico. Se
trata de un instrumento ptico que contiene dos o ms lentes que permiten obtener una
imagen aumentada del objeto y que funciona por refraccin.
Aumento: El poder de aumento de una lente est determinado por el grado de curvatura
de su superficie y la distancia focal. En las lentes convexas mientras mayor sea la
curvatura, menor ser la distancia focal y mayor ser el aumento. Se ha enunciado
anteriormente que el microscopio compuesto aumenta en dos etapas y puesto que una
sola lente no es suficiente se deben colocar varias lentes una detrs de la otra,
potenciando de esta manera el poder de aumento. El primer juego de lentes, cercano al
objeto en estudio, se denomina objetivo y el segundo juego, cercano al ojo del observador
se denomina ocular (11). Cada sistema de lentes es capaz de producir una imagen
aumentada cuyo valor se enuncia con la letra x, as que 10x significa que la imagen est
aumentada 10 veces.
Resolucin: Es la capacidad que tiene un sistema ptico de aislar dos puntos que se
encuentran muy prximos entre s, de manera que se puedan ver individualizados uno del
otro (14). La riqueza de detalles que puede ser observada al microscopio depende de la
habilidad de este para hacer que los puntos del objeto que estn muy cercanos aparezcan
en la imagen como puntos separados. Mientras ms corta sea la distancia entre esos
puntos del objeto, ms finos sern los detalles. La distancia entre esos dos puntos se
conoce como Lmite de Resolucin, el cual es tambin referido como el Poder de
Resolucin y puede ser utilizada como un indicador del rendimiento del microscopio. Esto
se puede comparar vagamente con algunos aspectos de la informtica, el tamao del
pixel por ejemplo; mientras ms pequeo sea el tamao, mayor ser la cantidad de
detalles de la imagen digital.
Lmite de resolucin como la distancia mnima que debe existir entre dos puntos para
que sean distinguidos por separado, comprenderemos fcilmente la relacin inversa que
se establece entre poder resolutivo y lmite de resolucin: cuanto menor sea la distancia
que debe separar a dos puntos para que se distingan por separado, mayor ser el poder
resolutivo necesario para observarlos
Poder resolutivo es la capacidad que tiene un microscopio (o el ojo humano, etc.) de
percibir por separado dos puntos pequeos, adyacentes y cercanos. Vale decir, es la
capacidad para percibir detalles. El poder resolutivo aumenta a medida que disminuye la
distancia que separa dichos puntos. Es decir, si dos puntos distan 1cm uno del otro y yo
los veo como un solo punto borroso (aparte de necesitar urgente un oculista) tendr

menor poder resolutivo que alguien que los distingue por separado o que distingue
perfectamente puntos que distan de 0,5cm entre si.
BIBLIOGRAFIA
Materiales
y
equipos
de
laboratorio.
Recuperado
de
file:///C:/Users/windows7/Downloads/informematerialdelaboratorio-150321235657conversion-gate01.pdf
El
microscopio.
Recuperado
de
http://www.botanica.cnba.uba.ar/Trabprac/Tp1/microscopio.html
PRCTICA No. 2 MTODOS DE SIEMBRA PARTE A
INTRODUCCION: La inoculacin de medios de cultivo para la recuperacin,
mantenimiento y/o aislamiento de microorganismos, es un procedimiento fundamental e
importante. Debe tenerse cuidado con las tcnicas de siembra microbiana para evitar en
lo posible la contaminacin por otros microorganismos diferentes al deseado.
Sembrar: Es el acto de colocar el material

bacteriolgico en el medio de cultivo para promover
su crecimiento y desarrollo, y subsiguiente
multiplicacin. El resultado de una siembra se llama:
Cultivo
MTODOS DE SIEMBRA
Las siembras pueden ser:
Primarias: cuando el material es inoculado en los

medios por primera vez.
Secundarias: cuando el material a inocular

procede de una siembra primaria.
Los mtodos de siembra son:

Siembra por estra por
agotamiento
Siembra por dilucin
Siembra en TSI
Por picadura o puncin

Siembra por estras en superficie
MATERIALES Y MTODOS

Materiales
Muestra contaminada
con microorganismos
Agar nutritivo en caja
petri
Asa redonda
Gradilla
Vinipel
Marcador de vidrio
Reactivos a utilizar:
Reactivo
Agua
peptonada
Equipos
Incubadora
Mechero
Frmula
Concentracin
------
0,1%
PROCEDIMIENTO:
1. Desinfectar el rea de trabajo, prender el mechero y preparar el material de trabajo.
2. Coger parte de la muestra y colocarla en el tubo de ensayo que contiene el agua
peptonada. Homogenizar.
3. Dejar 20 30 minutos en incubacin los tubos.
4. Realizar un diagrama de aislamiento de colonias, en un circulo de papel (8 cm) para
ponerlo debajo de la caja de Petri (Figura 1)
5. Finalizado el tiempo de incubacin tomar el asa redonda y esterilizarla por calor hasta
que est est roja, dejar enfriar cerca al mechero.
6. Abrir el tubo con la muestra y tomar una asada.
7. Cerrar el tubo y colocarlo en la gradilla. Teniendo cuidado de que el asa no toque nada
y de no pasarla por encima del mechero, pero siempre estar cerca de este
8. Abrir la caja de Petri y seguir el esquema para el aislamiento.
9. Terminado la siembra, marcar las cajas en el borde de la base de la caja y envolverla
en papel vinipel.

10. Colocar el tubo y la caja a incubar a 37C. La caja debe estar boca abajo siempre. 11.
Desinfectar el rea de trabajo, apagar el mechero y entregar el material
TABLA DE DATOS:
Anotar los resultados obtenidos
Este procedimiento se denomina aislamiento de bacterias, debido a que las bacterias
presentes en una muestra se distribuyen sobre la superficie de un agar, y cada clula se
reproduce independientemente hasta formar un conglomerado de bacterias observables a
simple vista (colonia bacteriana). De esta manera es posible observar sobre la superficie
del medio, colonias de diferentes caractersticas en cuanto a forma, superficie, borde,
forma, color, aspecto y elevacin, lo que indica microscpicamente presencia de
diferentes tipos microbianos en la muestra. As se puede estudiar e identificar
independientemente cada especie.
GLOSARIO
Agar Nutritivo: Medio de cultivo utilizado para propsitos generales, para el aislamiento
de microorganismos poco exigentes en lo que se refiere a requerimientos nutritivos.
Siembra: Sembrar o inocular es introducir artificialmente una porcin de muestra (inculo)
en un medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano, para su desarrollo y
multiplicacin. Una vez sembrado, el medio de cultivo se incuba a una temperatura
adecuada para el crecimiento.
Siembra por estra por agotamiento: Con ste procedimiento se puede conseguir una
buena separacin de las colonias y aislarlas fcilmente. Para ello se funde el medio de
cultivo, se vuelca en caja de Petri y se deja solidificar. Con el asa previamente esterilizada
se toma material de un cultivo heterogneo y se descarga sobre la superficie del medio
formando estras.
Siembra por estras en superficie: Se siembra el material en la superficie de el agar
inclinado en un tubo de ensayo, all se extiende por toda la superficie con el asa
bacteriolgica, previamente esterilizada y cargada con el material a sembrar, haciendo
estras no muy amplias, pero tampoco muy estrechas. Se inicia por la parte ms profunda
de la superficie inclinada y se termina la estra en la parte ms cerca de la boca del tubo.
Siembra por dilucin: Se toma el tubo de ensayo con medio lquido, como el caldo
simple. Se toma el material a diluir y se siembra en el tubo con el uso del asa cargada con
el material bacteriolgico, se agita, con movimientos moderados.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Mtodos
de
siembra.
Recuperado
http://microbiologiauasd.blogspot.com.co/p/metodos-de-siembra.html
de
PRCTICA No. 2 MTODOS DE SIEMBRA PARTE B

INTRODUCCION: Los microorganismos tambin pueden ser cultivados en distintos tipos
de medios de cultivo tanto lquidos como slidos, en esta parte los estudiantes debern
hacer una siembra del microorganismo en medio lquido.

Cultivo
MTODOS DE SIEMBRA



agotamiento
Siembra por dilucin
Siembra en TSI

MATERIALES Y MTODOS

Materiales
Muestra contaminada
con microorganismos
Caldo nutritivo en
tubo de ensayo
Agar nutritivo solido
en tubo de ensayo
Pipeta de vidrio de
1ml
Asa redonda
Equipos
Incubadora
Mechero

Gradilla
Vinipel
Marcador de vidrio
Reactivo
Agua
peptonada
Frmula
Concentracin
------
0,1%
PROCEDIMIENTO:
1. Desinfectar el rea de trabajo, prender el mechero y preparar el material de trabajo.
2. Coger parte de la muestra y colocarla en el frasco que contiene el agua peptonada.
Homogenizar.
3. Dejar 20 30 minutos en incubacin .
4. tomar 1 ml de la suspensin y transferirla en el tubo que contiene el medio de cultivo.
5. incubar a 37 por 24 horas, observar el tipo de crecimiento
6. anotar los resultados obtenidos.
Siembra en medio semislido.
De la misma suspensin inicial tomar con un asa recta e introducirla en dicha suspensin,
posteriormente siembre por puncin en el medio semislido como indica a continuacin la
figura.

Siembra en medio slido con superficie inclinada

Tomar con asa recta de la misma suspensin inicial (muestra) y proceder a realizar la
misma accin anterior, incubar y observar el crecimiento, a continuacin se ilustra un
ejemplo.
Patrones de crecimiento en medios slidos
TABLA DE DATOS:
Anotar el crecimiento que obtuvo con su microorganismo.
Se espera observar un crecimiento de microorganismos en los medios de cultivo
utilizados.
GLOSARIO


formando estras.
Mtodos
de
siembra.
Recuperado
-
de
PRCTICA SIEMBRA DE HONGOS

INTRODUCCION: Los hongos son microorganismos eucariticos con condiciones de
crecimiento especiales e inters ambiental, pueden ser utilizados a nivel de industria.

Cultivo
MTODOS DE SIEMBRA



agotamiento
Siembra por dilucin
Siembra en TSI

MATERIALES Y MTODOS

Materiales
Cajas de petri con
agar PDA
Agujas de diseccin,
jeringas de insulina o
asa recta
Hongos de cualquier
gnero con
crecimiento no mayor
a 15 das antes de la
practica (En caja
petri)
Equipos
Incubadora
----------------
------------------
PROCEDIMIENTO:
1.
Tome con la aguja de diseccin o asa un cuadro de la colonia fngica de no ms
de 5 mm de dimetro, intente tomar de los extremos de la colonia, cuidadosamente
coloque el cuadro en la caja de Petri con agar PDA en el centro de la misma, incubar a
25.

TABLA DE DATOS:
Anotar el crecimiento que obtuvo con su microorganismo.
Se espera observar un crecimiento de microorganismos en los medios de cultivo
utilizados.
GLOSARIO
formando estras.
Mtodos
de
siembra.
Recuperado
-
PRCTICA No. 3 TCNICAS DE TINCIN
de

INTRODUCCION: El tamao de la mayora de las clulas bacterianas es tal que resultan

difciles de ver con el microscopio ptico. La principal dificultad es la falta de contraste
entre la clula y el medio que la rodea, y el medio ms simple de aumentar el contraste es
la utilizacin de colorantes. Estos pueden emplearse para distinguir entre tipos diferentes
de clulas o para revelar la presencia de determinados constituyentes celulares, tales
como flagelos, esporas, cpsulas, paredes celulares, centros de actividad respiratoria, etc.
Las clulas generalmente son tratadas para coagular el protoplasma antes de teirlas,
proceso llamado fijacin. Para bacterias, la fijacin por el calor es lo ms corriente,
aunque tambin puede fijarse con sustancias qumicas como formaldehido, cidos y
alcoholes. Despus de la fijacin, si se aade el colorante, no se producen ulteriores
cambios estructurales en el protoplasma. La fijacin se realiza habitualmente en clulas
que han sido fijadas sobre un portaobjetos, tratando despus ste con el agente fijador, y
siguiendo inmediatamente el proceso de tincin. La fijacin produce habitualmente el
encogimiento de las clulas; la tincin, por el contrario, hace que las clulas aparezcan
mayores que lo que son realmente, de manera que las medidas de las clulas que han
sido fijadas o teidas no pueden realizarse con mucha precisin. La mayora de los
colorantes son compuestos orgnicos que tienen alguna afinidad especfica por los
materiales celulares. Muchos colorantes utilizados con frecuencia son molculas cargadas
positivamente (cationes) y se combinan con intensidad con los constituyentes celulares
cargados negativamente, tales como los cidos nucledos y los polisacridos cidos.
Ejemplos de colorantes catinicos son el azul de metileno, el cristal violeta y la safranina.
Otros colorantes son molculas cargadas negativamente (aniones) y se combinan con los
constituyentes celulares cargados positivamente, tales como muchas protenas. Esos
colorantes incluyen la eosina, la fucsina cida y el rojo Congo. Otro grupo de colorantes
son sustancias liposolubles; los colorantes de este grupo se combinan con los materiales
lipdicos de la clula, usndose a menudo para revelar la localizacin de las gotculas o
depsitos de grasa. Un ejemplo de colorante liposoluble es el negro Sudn.

TCNICAS DE TINCIN
Diferencial: el colorante utilizado pone de
manifiesto diferencias entre clulas bacterianas o
entre partes de una misma clula, estas tcnicas
utilizan ms de un colorante o bien ciertos
reactivos complementarios para la tincin.
La tincin es un proceso por el cual las molculas de

un colorante se absorben a una superficie. El uso de
colorantes permite cambiar el color de las clulas de
los microorganismos y poder realizar la observacin
en microscopio ptico.
Tincin de Gram
1) Las clulas son fijadas por medio del calor
sobre un portaobjetos, se tien primero con una
solucin de cristal violeta y son lavadas despus
para quitar el exceso de colorante.
Simple: el colorante utilizado sirve solo para

denotar la morfologa celular.
tipos de tincin
Tincin negativa:
Un mtodo sencillo de tincin para bacterias,
que adems es un claro caso de cromofobia y
que por lo tanto funciona aun cuando los
mtodos de tincin positiva fallan, es la tincin
negativa
MATERIALES Y MTODOS

Materiales
Lminas
Laminillas
Agua destilada estril
Asas bacteriolgicas
redonda y asa recta
Colonias aisladas de
bacterias para
observacin de
bacterias
Guantes de ltex
Equipos
Mechero
Microscopio ptico
Reactivo
Azul de
metileno
Cristal
violeta
Lugol
Alcohol
Frmula
Concentracin
------
------
------
------
------------
-----------

cetona
Fucsina
bsica o
safranina
Tinta china
-----------------
-------------
----------
-----------
PROCEDIMIENTO:
1. Coloracin simple
a. En una lmina portaobjetos limpia, colocar una gota del agua destilada estril (trabajo
con muestra slida) o una gota del cultivo bacteriano (trabajo con muestra liquida) sobre
la misma y con ayuda del asa redonda estril extender la gota de suspensin a un rea no
superior a dos centmetros cuadrados.
b. Dejar que la preparacin se seque al aire. Fijar con calor, pasando tres veces seguidas
a travs de la llama del mechero.
c. Dejar enfriar la lmina. Lo anterior se conoce como la realizacin de un frotis y se hace
para coloraciones donde la muestra debe ser fijada y luego si iniciar las coloraciones
respectivas.
d. Colocar la preparacin sobre una rejilla encima del vertedero.
e. Cubrir la suspensin con algn colorante dado por el profesor, as: i. Cristal violeta: 1
minuto ii. Azul de metileno: 5 minutos iii. Fucsina: 1 minuto
f. Terminado el tiempo de coloracin segn el colorante empleado, eliminar el colorante
lavando con agua suavemente.
g. Dejar secar y colocar la preparacin en la platina del microscopio y observar con el
objetivo de menor aumento inicialmente hasta llegar al objetivo de 100X
2. Coloracin compuesta
a. Realizar un frotis de la muestra seleccionada
b. Colocar en la rejilla para coloracin y cubrir el frotis con cristal violeta esperando que
transcurra 1 minuto. Lavar con agua el colorante.
c. El segundo colorante es el lugol, el cual se deja por 1 minuto sobre el frotis
d. Realizar la decoloracin con la mezcla alcohol-acetona, por 25 segundos. Lavar
inmediatamente con agua.
e. Finalmente adicionar el colorante de contraste, fucsina o safranina, por 30 segundos.
Lavar con agua.

f. Escurrir el exceso de agua, dejar secar y montar al microscopio para hacer las
observaciones respectivas.
TABLA DE DATOS:
Anotar las morfologas observadas posteriores a la coloracin, si es posible tomar fotos
Se espera observar las morfologas posteriores a la coloracin.
GLOSARIO
Tincin: La tincin es un proceso por el cual las molculas de un colorante se absorben a
una superficie. El uso de colorantes permite cambiar el color de las clulas de los
microorganismos y poder realizar la observacin en microscopio ptico. Dado que las
bacterias son casi incoloras, no presentan contraste con el medio en el cual se
encuentran suspendidas y no pueden observarse claramente sin algn tratamiento previo.
Tincin Simple: Se utiliza un solo colorante, por lo que todas las estructuras celulares se
tien con la misma tonalidad (Tinta china, Azul Metileno de Loeffler, Azul de
lactofenol). El Hidrxido de potasio al 10% (solucin de KOH) permite ver elementos de
hongos ya que el KOH digiere parcialmente los componentes proteicos, por ejemplo de la
clula husped, pero no acta sobre los polisacridos de las paredes celulares de los
hongos.
Tincin Diferencial: Se utilizan varios colorantes combinados. Las estructuras celulares
se diferencian en funcin de los diferentes colorantes que fijan de acuerdo con su propia
constitucin qumica. Los ejemplos clsicos sera la tincin de GRAM o la de ZiehlNeelsen
Tinciones especficas: Se utilizan para incrementar el contraste en las clulas
microbianas y revelan estructuras particulares, entre las que se incluyen en los flagelos y
las cpsulas.
Tincin negativa: Un mtodo sencillo de tincin para bacterias, que adems es un claro
caso de cromofobia y que por lo tanto funciona aun cuando los mtodos de tincin
positiva fallan, es la tincin negativa. Esto puede ser conseguido simplemente
extendiendo la muestra en un portaobjetos y aplicando directamente sobre ella una gota
de nigrosina o tinta china y cubriendo luego la muestra humedecida con un cubreobjetos.
Luego de esto, los microorganismos pueden ser observados fcilmente por medio de
microscopa en campo claro como inclusiones claras muy bien contrastadas contra el
medio oscuro que las rodea

Tincin Gram: La tincin de Gram es uno de los mtodos de tincin ms importantes en

el laboratorio bacteriolgico. Su utilidad en la prctica de referencias a la morfologa
celular bacteriana (cocos, bacilos, positivos, negativos, etc.) se basan justamente en la
tincin de GRAM
Tinciones.
Recuperado
http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioTinciones.htm
de
PRCTICA No. 4 OBSERVACION MICROSCOPICA DE HONGOS

INTRODUCCION: La clula fngica es similar a cualquier organismo eucarionte, aunque
existen diferencias subcelulares entre la clula de un hongo inferior a la de uno superior.
Cuando se estudian los hongos se pueden observan dos grandes grupos: los
algodonosos, que se conocen con el nombre de mohos y otros que forman colonias
hmedas y se conocen como levaduras.
OBSERVACION MICROSCOPICA DE
HONGOS
Mtodo
A) Cultivo del moho
B) Observacin con la lupa binocular
C) Observacin con el microscopio
MATERIALES Y MTODOS
Observars las hifas a modo de pequeos

tubos, sin tabiques de separacin y con
numerosos ncleos esparcidos en el
citoplasma comn (hifas sifonadas). En el
extremo de algunas hifas aparece un
engrosamiento (columnilla) rodeado del
esporangio, en cuyo interior se hallan las
esporas..

Materiales
Cultivo de hongos
Lminas portaobjetos
Laminillas
Equipos
Microscopio
Reactivo
Azul de
lactofenol
Frmula
Concentracin
------
------
PROCEDIMIENTO:
Colocar en el centro de la lmina portaobjeto una gota de azul de lactofenol, luego tomar
con el asa micolgica previamente estril parte del hongo y resuspenderlo en la gota del
colorante. Colocar luego una laminilla encima de esta preparacin y esperar 3 minutos.
Finalizado este tiempo montar al microscopio y observar en 10X y 40X.
TABLA DE DATOS:
Se espera observar las distintas partes que conforman un hongo.
GLOSARIO

Micologa: es la ciencia que estudia los hongos, estos organismos fueron durante mucho
tiempo considerados miembros del reino de las plantas.
Micelio: Un micelio fngico es una red de filamentos llamados hifas. El micelio obtiene
nutrientes (generalmente de materia orgnica en descomposicin) y produce el cuerpo
fructfero. A menudo, la mayor parte del micelio es subterrneo.
Cuerpo fructfero: El cuerpo fructfero de un hongo es una estructura reproductiva. Un
champin es un organismo tpico de fructificacin de hongos, que se adjunta a un micelio
bajo tierra. Un cuerpo fructfero produce esporas.
Esporas. Las esporas estn involucradas en la reproduccin de los hongos. Lanzadas por
el cuerpo fructfero, las esporas de hongos son haploides, es decir, que slo tienen un
cromosoma de cada gen (como los gametos humanos). Las esporas pueden germinar
cuando golpean el suelo hmedo.
Partes de un hongo. Recuperado de http://www.ehowenespanol.com/parteshongos-hechos_506651/
PRCTICA No. 5 CONTROL DEL CRECIMIENTO BACTERIANO

INTRODUCCION: Los factores fsicos y qumicos tienen un efecto notable sobre la vida
de los microorganismos en su medio ambiente natural. Algunos estimulan su desarrollo
en tanto que otros lo retardan o lo impiden. El conocimiento del efecto de esos
parmetros medio ambientales no solo permiti estudiar los microorganismos bajo
condiciones controladas de laboratorio para favorecer su crecimiento sino que posibilit
aprender la forma de controlarlos.

CONTROL DEL CRECIMIENTO

BACTERIANO
Parmetros fsicos y qumicos que

afectan el crecimiento y desarrollo
de los microorganismos
Parmetros fsicos
Parmetros qumicos
Temperatura
Microorganismos psicrfilos
Mesfilos
Termfilos
Ph
Presin osmtica
Las fuentes de carbono

Nitrgeno, Azufre y Fsforo
Oxgeno
Agentes antimicrobianos
Espectro
de
actividad
antimicrobiana
MATERIALES Y MTODOS

Materiales
Cultivo de
microorganismos
Gram- Positivo
Cultivo de
microorganismos
Gram- Negativo
Medio de cultivo
nutritivo en cajas petri
con diferentes PHs
Medio de cultivo
nutritivo en cajas de
petri con diferentes
concentraciones de
NaCl
Medio de cultivo
nutritivo en cajas de
petri
Caldo Nutritivo
Equipos
Estufa
Incubadora

Pipetas estriles de 1
y 2 ml
Vaso de precipitado
de 500 ml
PROCEDIMIENTO:
1. ACCIN DE LA TEMPERATURA Suspender una colonia del microorganismo
seleccionado en el caldo nutritivo y dejarlo por media hora para un desarrollo de los
microorganismos en el medio de cultivo. Luego tomar 0.1 mL del medio y sembrarlo sobre
el medio slido del agar nutritivo. Llevar el caldo nutritivo donde se inoculo el
microorganismo a la estufa y ponerlo a ebullicin por el tiempo dado por el profesor y
sembrar como al inicio. Llevar las dos cajas de Petri e incubarlas a 37oC.
2. ACCION DEL pH Dividir la base de las cajas en dos cuadrantes con el marcador de
vidrio y con el asa redonda sembrar por estras en un cuadrante el microorganismo Gramnegativo y en el otro el Grampositivo. Realizar este procedimiento con todas los medios
de diferentes pH.
3. ACCIN DE LA PRESIN OSMTICA Dividir la base de las cajas en dos cuadrantes
con el marcador de vidrio y con el asa redonda sembrar por estras en un cuadrante el
microorganismo Gram-negativo y en el otro el Grampositivo.
4. ACCIN DE LA LUZ ULTRAVIOLETA Dividir la base de las cajas en dos cuadrantes
con el marcador de vidrio y con el asa redonda sembrar por estras en un cuadrante el
microorganismo Gram-negativo y en el otro el Grampositivo. Seguidamente tapar la mitad
de la caja con papel de aluminio y colocar sobre la otra parte de la caja la luz ultravioleta
por 5 y/o 10 minutos, tapar la caja y llevar a incubar.
TABLA DE DATOS:
Anotar los resultados
Analizar el crecimiento bacteriano bajo ciertos parmetro fsicos y qumicos.
GLOSARIO
Temperatura: la supervivencia de los microorganismos se presenta normalmente en las
temperaturas usuales para el desarrollo de los animales superiores, aunque se da el caso
de algunas bacterias resistentes a extremos de fro o de calor. Se puede hablar por
consiguiente de una taxonoma microorgnica referida a rangos ptimos de adaptacin a
la temperatura.

Microorganismos psicrfilos: adaptados a bajas temperaturas, en trminos generales

se maneja un rango de 0C a 20C como lmites normales para su crecimiento.
Mesfilos: viven en temperaturas moderadas, en un rango de 20C a 40C., los
microorganismos mesfilos, son los ms comunes. Por ejemplo, la temperatura ptima
para la mayora de las bacterias patgenas se aproxima a los 37C.
Termfilos: soportan altas temperaturas, contemplan como rangos usuales de tolerancia
de 40C. a 80C. y por consiguiente sus endosporas son normalmente resistentes al calor
y sobreviven a los tratamientos trmicos aplicados a conservas enlatadas aunque no
crecen a las temperaturas normales de almacenamiento.
pH: Normalmente los pH (acidez o alcalinidad de una solucin o medio de crecimiento) de
rango neutro (6,5 a 7,5) son los ms adecuados para el crecimiento bacteriano y muy
pocas bacterias soportan pH inferiores a 4.0. Por esta razn el manejo de la acidez es un
recurso para el control microorgnico. Como en el caso de las temperaturas existen
algunas bacterias que soportan niveles extremos de acidez, razn por la cual se Las
denomina acidfilas. Se conocen bacterias que sobreviven a pH de 1.Los rangos alcalinos
generalmente inhiben el crecimiento microbiano. En los ensayos de laboratorio para el
cultivo de bacterias se requiere neutralizar los cidos que producen las bacterias
mediante sustancias qumicas denominadas tampones. Las sales de fosfato amortiguan la
acidez y la mantienen en el rango usual de crecimiento para la mayora de las bacterias
(de 6,5 a 7,5) y de paso aportan el fsforo que es un nutriente necesario.
Presin osmtica: Los microorganismos estn formados por un 80-90% de agua y por
consiguiente son fcilmente afectados por soluciones hipertnicas o sea con una
concentracin de solutos mayor a la de la clula microbiana, razn por la cual esta pierde
agua por el efecto conocido como plasmlisis. Por consiguiente la adicin de sales o de
azcar produce una contraccin celular que evita el crecimiento bacteriano.
Control
del
crecimiento
bacteriano.
Recuperado
http://datateca.unad.edu.co/contenidos/201504/micro/3_1controlcrec.htm
de
PRCTICA No. 6 RECUENTO DE UNIDADES FORMADORAS DE COLONIAS - UFC

INTRODUCCION: Microorganismo aerobio mesfilo son todas las bacterias, levaduras y
hongos capaces de desarrollarse en condiciones de aerobiosis a 30C. Es un parmetro
que sirve para estimar la flora total, pero sin especificar tipos de microorganismos. Es uno
de los indicadores ms tiles del estado microbiolgico de un alimento, agua, suelo entre
otros. Tiene un valor limitado como indicador de la presencia de patgenos o sus toxinas.
Altos recuentos microbianos se consideran poco aconsejables para la mayor parte de los
alimentos.

RECUENTO DE UNIDADES
FORMADORAS DE COLONIAS - UFC
MTODOS
Recuento directo de bacterias al
microscopio
En diversos estudios microbiolgicos

(como anlisis de alimentos, de agua
de bebida, de productos farmacuticos
o del medioambiente entre otros), se
requiere conocer el nmero de
microorganismos presentes en un
material con objeto de determinar su
calidad.
Recuento directo
electrnicos
con
contadores
Recuento en filtros de membrana
Mtodos de recuento de bacterias

viables en placa
Recuento en placa por siembra en

profundidad.
Recuento en placa por siembra en
superficie
MATERIALES Y MTODOS
Materiales
2 cajas de petri
esteriles4 tubos de
ensayo con agua
peptonada al 0,1%
estriles
4 pipetas de 1 ml o
una pipeta automtica
(100 1000 UL)
1 frasco de dilucin
con 90 ml de agua
peptonada al 0,1%
50 ml de agar nutritivo
previamente
preparado y
atemperado a 45 48C
Marcador de vidrio
Contador de colonias
Equipos
Incubadora a 35C
Balanza

PROCEDIMIENTO:
1.
Hacer diluciones de la muestra lquida de acuerdo al tipo de producto.
Si es una muestra contaminada deben realizarse diluciones altas

En muestras procesadas se hacen diluciones bajas
2. Sembrar en profundidad por duplicado 1 mL de cada una de las diluciones
seleccionadas
3. Adicionar de 15 20 mL del agar nutritivo a la temperatura adecuada
4. Mezclar inmediatamente el inculo con el medio, con movimientos circulares de la
placa a favor y en contra de las manecillas del reloj, como en ngulo recto. Debe evitarse
que el medio impregne la tapa.
5. Dejar solidificar, adicionar una capa sellante de 5 mL sobre la caja y dejar solidificar
nuevamente.
6. Una vez solidificado el agar, se vierten las placas e introducen en la incubadora (35C
durante 72 horas).
7. Sacar de la incubadora y realizar el recuento
8. Lectura: se deben contar las cajas cuyo nmero de colonias est comprendido entre 30
y 300 UFC. Es conveniente ir marcando las colonias para evitar volver a contarlas. Hallar
la media. El nmero contado se multiplica por el factor de dilucin y los resultados se
expresarn en unidades formadoras de colonia (UFC) por mL o g, dependiendo del tipo
de alimento de partida.
9. Siempre se informan dos nmeros enteros y el resto en exponente.
TABLA DE DATOS:
Se espera obtener el conteo de las colonias formadas.
GLOSARIO
Conteo bacteriano: seala la magnitud de la poblacin total bacteriana. En ese sentido
se puede determinar por diversas tcnicas que se basan en algunos de los siguientes
tipos de medida: cuenta celular (directamente al microscopio o mediante un contador
electrnico de partculas o indirectamente con la cuenta de colonias), masa celular (en
forma directa pesando el contenido celular del nitrgeno o indirectamente por
turbidimetra, proporcional al nmero de clulas) y actividad celular (indirectamente
relacionando el grado de actividad bioqumica al tamao de la poblacin bacteriana)

Contador Coulter : es un aparato utilizado para contar y medir el tamao de partculas en

solucin. Se utiliza principalmente para contar clulas sanguneas en su aplicacin como
contador hematolgico, pero tambin se puede utilizar para bacterias, clulas y partculas
virales.
Conteo en caja de petri: Mtodo ms usado para contar bacterias. Un caldo de
cultivo con microorganismos es diluido y posteriormente muestras del mismo son
distribuidas en la caja de petri contenedora de agar. Es de suponerse que cada clula se
dividir en sus mltiples alrededores para producir colonias separadas en el agar. Cada
clula es llamada unidad formadora de colonias (UFC).
Conteo por filtracin: Es realizado cuando la cantidad de bacterias es muy pequea,
como en casos de lagos y arroyos relativamente puros. En esta tcnica se necesitan al
menos 100 mL de agua que atraviesen una membrana delgada de un filtro, con poros tan
pequeos que no permitan el paso de bacterias, de esta forma stas son retenidas en la
superficie del filtro.
Unidades Formadoras de Colonias: (abreviadamente, UFC) es un valor que indica el

grado de contaminacin microbiolgica de un ambiente. Expresa el nmero relativo
de microorganismos de un taxn determinado en un volumen de un metro cbico de agua.
-
Conteo bacteriano. Recuperado de https://es.wikipedia.org/wiki/Conteo_bacteriano
PRCTICA No. 7 APLICACIONES DE LA MICROBIOLOGIA AMBIENTAL

INTRODUCCION: La microbiologa enfocada en la parte ambiental ha permitido
diagnosticar e implementar nuevas alternativas para el desarrollo agrcola, en el mbito de
la ingeniera ambiental y la industria. Con los conocimientos adquiridos en el curso y
teniendo un conocimiento bsico de la microbiologa, los estudiantes realizaran las
siguientes pruebas que actualmente se utilizan a nivel mundial y especficamente en el
pas

APLICACIONES DE LA MICROBIOLOGIA AMBIENTAL
CONTROL DE CALIDAD EN
ABONOS ORGNICOS Y SUELOS
POR NMERO MS PROBABLE
(NMP)
DETECCIN DE
PSEUDOMONAS EN
SUELOS
INDICADORES DE
CONTAMINACION DE AGUAS
POTABLES
MATERIALES Y MTODOS
CONTROL DE CALIDAD EN ABONOS ORGNICOS Y SUELOS POR NMERO MS

PROBABLE (NMP)
1.
Frascos con solucin salina 0.85% o agua peptonada al 0.1% (90 ml)
2.
Tubos tapa rosca con 9 ml de solucin salina o agua peptonada al 0.1%
3.
15 tubos tapa rosca con 9 ml de caldo de cultivo LBT (Lauryl Tryptose Broth)
4.
15 campanas durham para observar produccin de gas (dentro de los tubos de
LBT)
5.
15 tubos trapa rosca con 9 ml de caldo de cultivo LMX (FLUOROCULT) para
cultivo de E. coli
6.
Reactivo de kovacs
7.
Lmpara U.V
8.
Pipetas de vidrio de 1 ml
9.
Muestra de abono orgnico (los estudiantes debern llevar la muestra, puede ser
abono orgnico comercial, lombricompost, humus etc)
DETECCIN DE PSEUDOMONAS EN SUELOS
1.
Frascos con 90 ml de solucin salina al 0.85% o agua peptonada al 0.1%
2.
Tubos tapa rosca para diluciones con 9 ml de solucin salina al 0.85% o agua
peptonada al 0.1%

3.
Cajas de Petri con agar King b o cetrimide
4.
Rastrillos de vidrio
5.
Pipetas de vidrio de 1 ml
6.
Suelo procedente del algn sitio de derrame de petrleo o que estp impactado
por derivados del petrleo (suelos de cultivos donde se ha fumigado) o cualquier suelo.
7.
Lmpara de luz UV
INDICADORES DE CONTAMINACION DE AGUAS POTABLES
1.
2.
3.
Equipo de filtracin por membrana (equipo millipore de plstico)

Membrana de nitrocelulosa de 0.45 micrometros para filtacion.
Jeringa (para hacer vaco) 4. Cajas de Petri con agar Cromocult para coliformes.
PROCEDIMIENTO:
CONTROL DE CALIDAD EN ABONOS ORGNICOS Y SUELOS POR NMERO MS
PROBABLE (NMP)
1.
Pesar 10 gramos de la muestra, mezclarla con los 90 ml de solucin salina o agua
peptonada.
2.
Realizar diluciones seriadas hasta 10-3 .
3.
Marcar los tubos de LBT y LMX en 3 series de 5, es decir 5 tubos marcados como
10-1 , 5 tubos marcados como 10-2 , 5 tubos marcados como 10-3 .
4.
A partir de las diluciones sembrar 1 ml de cada dilucin en los tubos con los dos
medios.recuerden que por cada dilucin deben inocular 5 tubos de medio.
5.
Incubar a 37 por 24 horas
6.
Realizar la lectura, la cual se realiza contando el nmero de tubos positivos, para
el caso de coliformes fecales (LBT) se presenta turbidez y presencia de gas en las
campanas durham, sino se presentan los dos fenmenos se tomarn como negativos)
7.
Por ejemplo en la dilucin 10-1 se presentaron 3 tubos positivos, en la dilucin 102 1 tubo positivo, en la dilucin 10-3 0 tubos positivos, obtenindose una combinacin de
310, con ese nmero se dirigen a la tabla de Numero ms probable segn la EPA-1680
2006.
DETECCIN DE PSEUDOMONAS EN SUELOS
1.
Pesar 10 g de la muestra y mezclarlos con los 90 ml de solucin diluyente, agitar
bien y realizar diluciones seriadas hasta 10-6 .
2.
Sembrar 0.1 ml de las diluciones 102 , 10-4 , 106 en superficie por duplicado,
proceder a hacer siembra masiva con los rastrillos cuidando que no se rompa el agar,
incubar a 30 grados por 4 das.
3.
Posterior a la incubacin con ayuda de la lmpara observar las colonias con
fluorescencia o pigmentacin azul verdosa, realizar el recuento de la dilucin que
contenga entre 30 y 300 colonias.
4.
Realizar los clculos de la siguiente manera, por ejemplo, en la dilucin 10- 6 se
contaron 48 colonias, ese valor se multiplica por el factor de dilucin, por el factor de
correccin as: 48(numero de colonias contadas x106(factor de dilucin) x10(factor de

correccin, es un nmero constante)=48x108UFC/g (UFC hace referencia a unidades

formadoras de colonia)
INDICADORES DE CONTAMINACION DE AGUAS POTABLES
1. Tomar 100 ml de agua de la llave, la cual se inocular con una asada de cultivo de E.
coli, agitar muy bien.
2. Colocar la muestra en la parte superior de la campana de filtracin y con la ayuda de la
jeringa realizar el vaco para permitir el paso del agua de un lado al otro.
3. Con unas pinzas estriles retirar la membrana y colocarla sobre el agar cromocult, la
parte de la cuadrcula debe ir mirando hacia arriba.
4. Incubar por 24 horas a 37 c y observar el nmero de colonias con las caractersticas
tpicas de E. coli y coliformes totales (consultar la coloracin en este medio, se encuentra
por internet)
TABLA DE DATOS:
Los indicadores de contaminacin son utilizados para medir el grado de contaminacin o
afectacin de cuerpos de agua, agua de consumo etc, en Colombia para el caso de aguas
potables la normatividad exige un valor de 0 unidades formadoras de colonia en 100 ml de
agua muestreada para el caso de coliformes totales como indicador.
GLOSARIO
Agar cromocult: se establece como base para el nuevo estndar de la ISO para la
enumeracin de las muestras en agua de E. coli y coliformes.
E. coli: tambin conocida por la abreviacin de su nombre, E. coli, es quizs el
organismo procariota ms estudiado por el ser humano. Se trata de una entero
bacteria que se encuentra generalmente en los intestinos animales, y por ende en
las aguas negras, pero se lo puede encontrar en multitud de ambientes, dado que es un
organismo ubicuo. Fue descrita por primera vez en 1885 por Theodore von
Escherich, bacterilogo alemn, quien la denominBacterium coli. Posteriormente
la taxonoma le adjudic el nombre de Escherichia coli, en honor a su descubridor.
Biorremediacin: La biorremediacin es el proceso de limpieza de ambientes
contaminados (Coyne, 1998) o tambin, es el proceso de biodegradacin y
biotransformacin controlado o espontneo que busca eliminar o atenuar los
contaminantes ambientales a travs de la actividad biolgica en los sitios afectados
(Madsen, 2008).
Aplicaciones
de
la
microbiologa
ambiental.
Recuperado
de
http://datateca.unad.edu.co/contenidos/358010/exe/captulo_1_mundo_microbiano.html

Formato Preinforme de Laboratorio

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Sembrar: Es el acto de colocar el material

Las siembras pueden ser:

Primarias: cuando el material es inoculado en los

Secundarias: cuando el material a inocular

Los mtodos de siembra son:

Por picadura o puncin

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Materiales y Equipos requeridos:

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Sembrar: Es el acto de colocar el material

Las siembras pueden ser:

Primarias: cuando el material es inoculado en los

Secundarias: cuando el material a inocular

Los mtodos de siembra son:

Por picadura o puncin

Materiales y Equipos requeridos:

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