Mtodos de tincin de protenas

y ADN
MSc. Claudia Rodriguez

PARA PROTENAS

Azul de Comassie
Detecta: 8 25ng/ml
Tincin fcil.
Un paso de lavado en agua
destilada es necesario para
eliminar los restos de SDS
del gel.
Las protenas pueden ser
completamente desteidas
y recuperadas para anlisis
o secuenciamiento.

Nitrato de plata
Seguro
nico componente
peligroso: forlmaldehdo.
Deteccin: 0.5 ng de
protena.
Geles 1D, 2D
Inconveniente: La fijacin
liga quimicamente a las
protenas con la matriz

no sugerido para analisis
de proteinas o elucin.

Tincin con zinc

Tie todas las reas del gel
de poliacrilamida en donde
no hay protenas
Los iones de zinc forman
complejos con imidazol, los
cuales precipitan en la
matriz del gel excepto
donde ocurre saturacin de
protenas con SDS
Tiempo: 15min
Deteccin: <1ng de
protena.
Compatible con WB

SYPRO
Solucin acidica pero
no txica.
Protocolo sensillo.
Geles 1D, 2D, IEF,
mebranas de
nitrocelulosa
Sensibilidad: 1- 10ng
de protena por banda

PARA CIDOS NUCLEICOS

BROMURO DE ETIDIO
Uso: 0.2 a 0.5g/ml
Deteccin: <5ng de ADN
Extremadamente
peligroso.
Se intercala con el ADN.
Permite la extraccin del
ADN de las bandas para
secuenciamiento.

SYBR GREEN
Uso: 1:10 000 x 15min
ADNds = 20pg/ml
ADNss = 100pg/ml
Se puede aadir antes o
despus de la electroforesis.
No es txico.
Puede ser removido y no
interfiere con otras tcnicas
de recuperacin de ADN del
gel.

ADN diluido del fago 174

cortado con una ER

Fast Blast DNA Stain (500X)

Seguro
no txico
Costo-efectivo
puede
ser usado hasta 7 veces.
15 minutos para poder
visualizar las bandas.
Permite la visualizacin
de mnimo 50ng de ADN
Usado a 100X = 15min
Usado a 1X = 8 horas

Nitrato de plata
Seguro
nico componente
peligroso:
forlmaldehdo.
Deteccin: 0.1 a 0.001ng
de ADN por banda.