Facultad de Ciencias Biolgicas

Departamento de Ciencias Biolgicas

BIOL254 2015-10

Clase 04
Enfermedad Periodontal

Dr. Mauricio Bittner O.

mauricio.bittner@gmail.com

Caries y Enfermedad periodontal

Microbiologa de la enfermedad periodontal

Enca Sana

Periodontitis

Gingivitis

Enfermedades de la enca. Gingivitis

Inducida por la placa

Gingivitis
NO inducida por la placa

Dependiente slo de la placa

Modificada por factores sistmicos
Modificada por medicamentos
Modificada por la desnutricin
De origen bacteriano especfico
De origen viral (herpes)
De origen fngico (eritema lineal)
De origen gentico (fibromatosis)
Manifestaciones de enf. sistmicas
Lesiones traumticas

Enfermedad periodontal
Se clasifican de acuerdo a:
El grado de progresin de la enfermedad (crnica, agresiva)
La distribucin de la lesin (localizada, generalizada)
Grupo etreo (juvenil, adulta)
En asociacin con desrdenes sistmicos o del desarrollo

Enfermedad periodontal
Sano

Gingivitis

Periodontitis

Modificaciones a los postulados de Koch

Socransky postul las siguientes modificaciones para determinar los
patgenos periodontales:
i) La mayora de las bacterias blanco deben estar asociados a la periodontitis.
ii) La eliminacin de las bacterias blanco resulta en la detencin de la progresin
de la enfermedad.
iii) Debe ser posible determinar la respuesta del hospedero frente a las bacterias
blanco.
iv) Si es posible, la patogenicidad debera ser demostrada en un modelo animal
adecuado.
v) Debera ser determinado un nico mecanismo de patogenicidad.

Conformacin bacteriana subgingival

La placa supragingival contiene muchos
compuestos bioactivos (cidos orgnicos,
compuestos asufrados, enzimas proteolticas
PAMPs, etc.
Estos compuestos difunden hacia la
superficie del epitelio gingival aumentando
el flujo de fluido crevicular gingival y fluido
inflamatorio del tejido periodontal.
Este nuevo suministro de nutrientes
modifica el ecosistema adyacente a la enca
inflamada. Las bacterias proteolticas de la
placa se expanden, lo que acelera el dao
tisular

Conformacin bacteriana subgingival

Conformacin bacteriana subgingival

Existen ms de 500 especies capaces de colonizar la placa subgingival
Ribotipificacin

Se han descrito ms de 100 especies presentes en la microflora subgingival

que no son cultivables
Se estima que existen unas 300 especies desconocidas

Conformacin bacteriana subgingival

La Placa Subgingival de puede dividir en tres:
i) Adherida al diente:
Predominan Streptococci orales y Actinomyces spp., pero existen mayor proporcin
de anaerobios estrictos (Veillonella, Peptostreptococcus, Eubacterium y Fusobacterium).
Asociada a la caries radicular, ya que se relaciona directamente con la placa
supragingival.
Zona donde existe una mayor mineralizacin de la placa: por precipitacin de
sales a pH alcalino. Presencia de grandes cantidades de bacterias con la capacidad de
cristalizacin intracelular (Actinomyces spp., Corynebacterium matruchotii)

Actinomyces spp.

C. matruchotii

Conformacin bacteriana subgingival

La Placa Subgingival de puede dividir en tres:
ii) Asociada al epitelio:
No es bien conocida su composicin, pero estara constituida por especies con la
capacidad de unirse a superficies blandas.
Esta adhesin bacteria/clulas se debe principalmente a la presencia de fimbrias
especficas.
Principalmente a Gram negativos y bacilos mviles. Prevotella nigrescens / Prevotella
intermedia. Porphyromonas gingivalis, Capnocytophaga spp., Fusobacterium spp.,
Aggragatibacter actinomycetemcomitans, etc.
Estn asociados a la invasin del tejido conectivo.

Fusobacterium

Capnocytophaga

Conformacin bacteriana subgingival

La Placa Subgingival de puede dividir en tres:

iii) No adherida o flotante:

Se dispone entre la placa adherida al diente y la adherida al epitelio. No
necesitan adherirse, slo establecen uniones dbiles.
Microflora similar a la de la placa adherida al epitelio. Compuesta
principalmente por Gram negativos y bacilos mviles. Porphyromonas,
Prevotella spp., Fusobacterium, Selenomonas, Aggregatibacter, Eikenella y
Treponema denticola (hacia el fondo donde al Eh es ms negativo).
Inducen y aceleran el proceso inflamatorio.

Progresin de la enfermedad
i) Inicialmente la enfermedad periodontal se manejaba eliminando la placa
bacteriana.
ii) Posteriormente se determin que microorganismos como bacterias eran
responsables de la patologa.
iii) En un comienzo la estrategia para determinar el o los agentes etiolgicos
consista en comparar la composicin microbiana de la placa subgingival entre sitios
sanos, gingivitis y periodontitis.
iv) En la actualidad, con el desarrollo de la biologa molecular, las metodologas de
diagnstico, tratamiento y estimacin de riesgo futuro se basan en el seguimiento y
cuantificacin de factores de virulencia.
Hoy en da es posible determinar el nmero de ciertos patgenos periodontales,
as como las propiedades de toxinas y enzimas destructoras de tejidos.

Progresin de la enfermedad
Enzimas proteolticas extracelulares:
i) Pueden degradar protenas de la matriz extracelular.
ii) Pueden degradar inhibidores de proteinasas de la matriz del hospedero.
iii) Pueden activar metaloproteinasas de la matriz del hospedero.
iv) Pueden inducir citoquinas pro-inflamatorias involucradas en la
destruccin tisular y reabsorcin sea.
v) Pueden alterar las defensas del hospedero:
a) degradando receptores celulares
b) degradando protenas del complemento
c) degradando anticuerpos y ciertas citoquinas

Progresin de la enfermedad

Lipopolisacrido Lpidos de ME Fimbrias Flagelo - Cpsulas - etc.

Identificacin Microbiana
Tcnicas genticas. DNA-DNA Checkerboard
Muestras

Sondas de DNA

Cada sonda de DNA es especfica

para una especie bacteriana

Identificacin Microbiana
Tcnicas genticas. DNA-DNA Checkerboard

Complejos microbianos en la Placa

Subgingival
Actinomyces
spp.

S. mitis
S. sanguis
S. oralis
Streptococcus spp.
S. gordonii
S. intermedius

V. parvula
A. odontolyticus

C. gracilis

S. castellatus
E. corrodens
C. gingivalis
C. sputigena
C. ochracea
C. consisus
A. actino. a

C. showae

C. rectus
P. intermedia
P. nigrescens
M. micros
F. nuc. nucleatum
F. nuc. polymorphum
F. nuc. vincentii
F. periodonticum
E. nodatum

A. actinomycetemcomitans b

S. noxia

P. gingivalis
T. forsythia
T. denticola

Complejos microbianos en la Placa

Subgingival

Segn estudios epidemiolgicos y en

modelos animales
1.- Aggregatibacter actinomycetemcomitans
2.- Porphyromonas gingivalis
3.- Tannerella forsythia (ex Bacteroides forsythus)
4.- Treponema denticola

Gram negativo
Capnoflico
Bacterias Gram
Negativas
anaerobias
estrictas

Prevotella intermedia/nigrescens, Eikenella corrodens, Campylobacter rectus,

Eubacterium nodatum, Fusobacterium nucleatum, Micromonas micros y
Streptococcus intermedius

Microbiologa de la Periodontitis Agresiva

Aggregatibacter actinomycetemcomitans

Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa)

Cocobacilo Gram negativo,

No formador de esporas,
Inmvil,
Anaerobio facultativo
Microaeroflico y Capnoflico

Lipopolisacrido (LPS),
Leucotoxina,
Cdt,
Fimbrias

Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa)

Factores de adherencia:
Protena Aae
i) Adherencia a clulas epiteliales

Protena EmaA
i) Adherencia a colgeno

Polisacrido PGA (NAG)

i) Autoagregacin

Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa)

Factores de adherencia, invasin y evasin del sistema inmune:
Protena ApiA
i) Adherencia a clulas epiteliales
ii) Invasin de clulas epiteliales
iii) Resistencia al suero*

Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa)

Factores de adherencia e invasin:
Fimbria flp-1 y operon tad
i) Adherencia a clulas epiteliales
ii) Adherencia a la pelcula adquirida y superficies abiticas
iii) Formacin de Biopelculas
iv) Invasin de clulas epiteliales mediante receptores especficos

Generan un alto ttulo de anticuerpos. Adems anticuerpos especficos inhiben

adhesin>>>Vacuna?!

Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa)

Factores de adherencia y co-agregacin:

Operon pilABCD:
Pili Tipo IV y competencia
PilA unin a DNA

Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa)

Factores que modulan el sistema inmune:
Leucotoxina (LtxA)
Protena de 116 KDa anclada a la superficie del membrana externa de la
bacteria y secretada (LFA-1: CD11a CD18)

Destruccin de linfocitos va
apoptosis

Destruccin de linfocitos va
formacin de poros y necrosis

Desgranulacin de neutrfilos
Liberacin de MMP8

Desregulacin de la respuesta inmune!!!

Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa)

Factores que modulan el sistema inmune:
Lipopolisacrido (LPS)
Serotipificacin en base al
Antgeno O:
Mediante Anticuerpos y
PCR: a g.
b y c ms prevalentes en
Chile.
activacin de la va
alternativa del complemento.

Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa)

Factores que modulan el sistema inmune:
Lipopolisacrido (LPS)

Lpido A:
activacin de la va clsica
del complemento.

Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa)

Factores que modulan el sistema inmune:
Lipopolisacrido (LPS)

Citoquinas:
IL-8
IL-1
TNF (Factor de necrosis tumoral )
PGE2 (Prostaglandina E2)

Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa)

Factores que modulan el sistema inmune:

Aa estimula TH17

RANKL

Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa)

Factores que modulan el sistema inmune:
Proteasas
A. actinomycetemcomitans posee:
i) serina proteasas
ii) proteasas que degradan IgG (todas), IgA e IgM
Desregulacin de la
respuesta inmune
Degradacin de fibringeno y colgeno

Caries y Enfermedad periodontal

Enfermedad periodontal
Sano

Gingivitis

Periodontitis

Microbiologa de la periodontitis crnica

Treponema denticola

Espiroqueta Gram negativa,

Asacaroltico,
Mvil,
Anaerobio estricto

Lipopolisacrido, lpidos
Msp,
Enzimas proteolticas extracelulares,
Flagelo

Treponema denticola
Factores de adherencia e invasin:
Protena Msp (major surface protein)
i) (53 KDa): se une a fibringeno, fibronectina y laminina unin de la bacteria
a clulas del hospedero. Promueve la destruccin de clulas epiteliales (mecanismo
desconocido), formacin de poros?
ii) (64 KDa): se une a complejos de quimiotripsinas y a fibroblastos gingivales.
a) Poseen efecto citotxico sobre:
Fibroblastos gingivales
Linfocitos

Clulas epiteliales
Eritrocitos

b) Aumentan la respuesta inflamatoria:

Promueven la desgranulacin de PMN (colagenasas, gelatinasas) y
metaloproteinasas de la matriz (MMP-8 y MMP-9)

Treponema denticola
Factores de adherencia e invasin:
Flagelo

Permite un movimiento tipo

atornillador. Esto le permite moverse
en microambientes muy viscosos (FCG),
penetrar el epitelio gingival y tejido
conectivo.

El flagelo est compuesto por tres

filamentos:
FlaA (38 KDa)
FlaB1 (35KDa)
FlaB2 (35 KDa)
FlaB3 (34 KDa)

Treponema denticola
Factores que modulan el sistema inmune:
Enzimas proteolticas extracelulares. Trepolisina o Dentilisina
i) hidroliza: fibringeno, transferrina, gelatina, colgeno tipo IV, IgG e IgA.
ii) degrada: bradiquinina, sustancia P y angiotensinas I y II.
iii) degrada: inhibidores de proteasas como 1-antitripsina, antitrombina III,
etc.
iv) induce: apoptosis en clulas epiteliales.
La habilidad de degradar protenas de la matriz, protenas regulatorias de proteasas y de la
respuesta inmune contribuye a la destruccin incontrolada del tejido periodontal y
progresin de la enfermedad"

Treponema denticola
Factores que modulan el sistema inmune:
Enzimas proteolticas extracelulares. Cistalisina
Hidroliza protenas y libera:
i) piruvato: utilizado como fuente de energa
ii) NH3: alcaliniza el medio.
iii) H2S: es txico para glbulos rojos y otras clulas presente en
el epitelio (mal olor).

La cistalisina hidroliza puentes dislfuro, por lo tanto, inactiva inmunoglobulinas,

citoquinas, etc, desregulando la respuesta inmune. "

Tannerella forsythia ex Bacteroides forsythus

Bacilo fusiforme Gram negativo,

Sacaroltico,
Anaerobio estricto,
Requiere cido N-acetilmurmico

Lipopolisacrido,
Enzimas proteolticas extracelulares,

Tannerella forsythia
Factores de virulencia:
Se sabe muy poco de sus factores de virulencia porque es muy difcil de cultivar en el
laboratorio.
LPS
Parecido al de P. gingivalis (reacciones cruzadas en ensayos de ELISA)
Enzimas proteolticas extracelulares
Enzimas tipo tripsina:
Serina proteasas (70 KDa y (81 KDa)
Cistena proteasa hemoltica PrtH (48KDa)
Otros antgenos
Protena tipo GroEL
BspA (protena de superficie). Ttulo elevado de anticuerpos en
pacientes con periodontitis crnica. Se unira a CD14 y TLR-4?! y a fibringeno.

Porphyromonas gingivalis (PG)

Cocobacilo Gram negativo,

No mvil,
Asacaroltico
Anaerobio obligado

Cpsula,
Lipopolisacrido,
Fimbrias,
Enzimas proteolticas extracelulares,
Hemaglutininas.

Porphyromonas gingivalis (PG)

Porphyromonas gingivalis (PG)

Factores de adherencia, invasin y evasin del sistema inmune:
Cpsula: Antgeno capsular K
Serotipificacin:
K1, K2, K3, K4, K5, K6 y K(-)
Cpsula de PG:
i) aumenta la invasividad
ii) inhibe la adherencia de los fibroblastos del
ligamento periodontal al diente
iii) resistencia a la fagocitosis
iv) disminuye la activacin de la va alterna del
complemento
v) aumenta la hidrofobicidad de la bacteria

Porphyromonas gingivalis (PG)

Factores de adherencia e invasin
Fimbrias
i) Son altamente antignicas tanto en pacientes con periodontitis agresiva como con
periodontitis crnica.
ii) Altos niveles sricos de IgA e IgG (isotipo IgG3).
iii) Esta compuesta por fibrillas de una protena de 43 KDa codificada por el gen fimA
iv) De acuerdo a su antigenicidad son clasificadas en serotipos: Tipo I, II, III, IV y V
Tipo I: adhesin e invasin de clulas epiteliales orales y fibroblastos

La invasin estimulara la expresin de receptores ICAM-1, VCAM-1, Selectinas P

y E. Reclutamiento de linfocitos aumentando la inflamacin.
La inmunizacin con pptidos fimbriales protege de la prdida de hueso en un modelo
murino.

Porphyromonas gingivalis (PG)

Factores que modulan el sistema inmune:
Lipopolisacrido (LPS)
Es el antgeno de superficie ms importante de PG. (IgG2)

Antgeno O: tetrasacridos fosforilados

i) Rha-P (1-3) Gal-P (1-3) Glc-P (1-4) GlcNAc-P
ii) Glc-P (1-4) Rha-P (1-3) GalNAc-P (1-3) Gal-P

Porphyromonas gingivalis (PG)

Factores que modulan el sistema inmune:
Lipopolisacrido (LPS)
Las modificaciones del LPS de PG son importantes en la respuesta del hospedero:
IL-1
IL-6
Fibroblastos gingivales
IL-8
IL-13
IL-5
IL-10

Linfocitos Th2

El LPS de P. gingivalis induce la reabsorcin sea estimulando clulas mieloides

(macrfagos) y no-mieloides (fibroblastos). Adems bloquea la inmunidad adquirida
estimulando clulas de la lnea linfoide (Th2)

Porphyromonas gingivalis (PG)

Factores que modulan el sistema inmune:
Enzimas proteolticas extracelulares
PG posee una gran cantidad de proteasas extracelulares, pero las ms importantes son
las denominadas gingipain (gingipainas), que poseen el 80 % del total de la actividad
proteoltica y el 100% de la actividad proteoltica tipo tripsina de esta bacteria.
Cistena Proteasas

Gingipain R (arg-gingipain)
Gingipain K (lys-gingipain)

Gingipain R
rgpA

rgpB

Gingipain K

kgp

Porphyromonas gingivalis (PG)

Factores que modulan el sistema inmune:
Gingipain: (Modificaciones post-traduccionales)

HA: dominio hemaglutinina /adhesina. Posee el mayor poder antignico

Porphyromonas gingivalis (PG)

Efecto sobre los componentes del
complemento (reclutamiento de
PMN, evasin de la opsonizacin
Activacin de Metaloproteinasas y fagocitosis)
Degradacin de los receptores de
de la Matriz, MMP (aumentando
PMN (evasin de la actividad
actividad proteoltica del
antibacteriana y fagocitosis)
hospedero)
Degradacin de citoquinas
(desregulacin de la reaccin
inflamatoria local)
Activacin de la va de la
Calicrena/Quinina (generacin
de fluido crevicular gingival)

Gingipains

Estimulacin de la sntesis de
MMP por los fibroblastos
gingivales (aumento local de la
actividad proteoltica)

Degradacin de pptidos
antibacterianos (evasin de la
Des-regulacin de la coagulacin actividad antibacteriana)
y las vas fibrinolticas (liberacin
de trombina, reabsorcin sea y
tendencia al sangramiento)

Prevotella intermedia/nigrescens

Bacilo Gram negativo,

Anaerobio estricto,
Algunas especies presentan
pigmentos negros

Lipopolisacrido,
Hemaglutininas,
-lactamasas

Fusobacterium nucleatum
Fusobacterium nucleatum:
subsp. nucleatum
subsp. vicentii
subsp. polymorphum

F. nucleatum mejora la unin de P.

gingivalis en clulas del hospedero.
Agrava la prdida de hueso alveolar
e induce una mayor respuesta
inflamatoria en comparacin con la
mono infeccin en modelo murino.
Efecto sinrgico en la destruccin de
tejido blando en un modelo murino.

Hiptesis de la placa ecolgica

Reduccin
de la placa

Acumulacin
de placa

Inflamacin
reducida

FCG bajo
Alto Eh

Respuesta
Inflamatoria

Cambios
Ambientales

Inflamacin
aumentada

FCG alto
Bajo Eh

Predominio G(+)
Anaerobios
Facultativos
Cambio
Ecolgico
Predominio G(-)
Anaerobios
Obligados

Los microorganismos son necesarios, pero no suficientes para el desarrollo de

la Enfermedad Periodontal.
El rol de la respuesta inflamatoria del hospedero es un determinante crtico
de la susceptibilidad y severidad de la Enfermedad Periodontal.