MICROBIOLOGIA - Bacteriologia, Medios de cultivo y

pruebas bioquimicas
Tema 1 - Microbiologia Clnica
(evolucin histrica, conceptos
generales, organizacin de laboratorio)
Microbiologa -

la

ciencia

desnudo(microorganismos;

que estudia

aunque

se

los

incluyen

seres

vivos

no

visibles

al

ojo

metazoos parsitos no microscpicos),

que atribuyen el origen de la vida sobre la tierra y el mantenimiento del equilibrio en la

biosfera (en

vida

libre

simbiosis => comensalismo,

como saprofitos
mutualismo

depredadores con

parasitismo),

distinto grado

aunque tambin tienen

de

efectos

negativos como producir enfermedades; Los virus y viroides => parsitos endo-celulares
obligados (no

se

replica

en

vida

libre); Microbiologa

medica =>

estudia

los

microorganismos que afectan al hombre (reino procariota/ bacterias, los eucariotas del
reino Fung,

los

virus

los eucariotas microscpicas (protozoos)

viroides); Parasitologa =>

ymacroscpicas (metazoos)

de endo

estudia
o

ectoparsito (los artrpodos estudiados tambin comovectores y reservorios de enfermedades

transmisibles);

Microbiologa medica:
- Microbiologa general => se estudia conocimientos histricos, clasificacin, estructura
y fisiologa de los microorganismos.
- Microbiologa

especial =>

se

estudia 4

infecciosos(bacteriologa, virologa, micologa y parasitologa) +

grupos

de

agentes

recientemente los

viroides (moleculas circulares de ARN de bajo peso molecular que carecen de cubierta
proteica) y los priones(protenas codificadas por genes celulares y actan como seales
reguladoras, responsables de algunas enfermedades neurolgicas graves - Creutzfeldt-Jacob y el
Kuru)

Evolucin histrica de la microbiologa - como ciencia especializada no aparece hasta

finales del siglo XIX; cuatro periodos:
-1 => periodo especulativo (desde la antigedad hasta los primeros microscopistas)
-2 => desde

1675

hasta

la

mitad

del

siglo

XIX (descubrimiento

de

los

microorganismos porLeeuwenhoek en 1675 - constructor de lentes holandes que invent el

microscpio simple)
-3 => periodo de cultivo de microorganismos hasta finales de siglo XIX (Pasteur y Kochlogro
cristalizar a la Microbiologa como ciencia experimental bien asentada.
-4 => desde

principios

del

siglo

XX

hasta

ahora (se

estudian fisiolgica, bioqumica, gentica, ecolgica y surgimiento de virologa, inmunolgia.

- Redi, Spallanzani y otros fisicos del siglo XVII demostraron que el microorganismo no se
genera espontaneamente (de novo), postularon la teora de la biognesis (ser vivo nace de otro
ser vivo).
- Pasteur (1822-1895) demostr que la fermentacin era producida por microorganismos en
crecimiento.
- Se dobl el interes de muchos naturalistas tras la publicacin de los libros de Darwin.
- Davaine

(1863-1868) encontr grandes

cantidades

de

m.o.

en

la

sangre

de

las

vacas(bacteridios) y Robert Koch (1843-1910) en 1876 aisl con sus tcnicas de cultivo puro el
bacilo de antrax (Bacillus anthracis); mas tarde Koch y su colegas confirmaron que las esporas
son

formas

diferenciadas

resistentes

de

bacilos

demostraron

que la

enfermedad poda transmitir sucesivamente a ratones sanos inoculndose bacilos obtenidos de

cultivo puro; basados en los postulados su maestro Henle, Koch postul siguentes
criterios:
- el microorganismo debe estar presente en todos los individuos enfermos
- el m.o. debe poder aislarse del hospedador y ser crecido en cultivo puro
- la inoculacin del m.o crecido en cultivo puro a animales sanos debe provocar la aparicin de
sintomas especficos de la enfermedad en cuestin (cada enfermedad infecciosa esta causada por
un tipo de bacteria diferente)
- el m.o. debe poder ser re-aislado del hospedador infectado de forma experimental.

Las 2 dcadas siguientes, se aislaron una gran variedad de bacterias patgenas; en Francia
elInstituto Pasteur se concentro sobre los procesos infectivos, la inmunidad del hospedador y
la obtencin de vacunas (vacuna antirrbica ensayada por Pasteur en 1885, contribuye al
nacimiento de la inmunolgia).

Conceptos generales y clasificacin - al finales del siglo XIX los microorganismos se

agrupan en un nuevo reino fuera de la teora de Darwin => Protistas para los protozoos, las
algas microscpicas, los hongos microscpicos y las bacterias como seres microscpicos;Chatton
en 1932 clasifica a los seres vivos en 4 reinos => animalia, plantae, protistas inferiores o
procariotas (bacterias) y protistas superiores o eucariotas (algas, hongos y protozoos); Whittaker
en 1969 agrupa en 5 reinos => animalia, plantae, fungi, procariotas y protista; Magulis en
1992 los agrupa definitivamente por ahora en 2 superreinos /dominios, 5 reinos y 2 subreinos =>
- Dominio: procaryotae, 1 reino: monera, subreino: archeobacteria y eubacteria (incluyendo
todas las bacterias divididas en grupos)
- Dominio: eucaryotae, con 4 reinos: protista, fung, animalia y plantae (incluyendo protozoos,
hongos, algas, animales y vegetales); protista => son unicelulares eucariontes pero que no
cumplen con las caractersticas para estar en algn otro reino organismos de este
tipo (p.ej. protozoos)

Diferencias bsicas entre los procariotas y los eucariotas:

- clula eucaritica => presenta un ncleo verdadero rodeado por una membrana nuclear con
determinado

numero

de cromosomas que estn constituidos

por ADN

hitonas(protenas del ncleo); el citoplasma contiene mitocondrias, cloroplastos, ribosomas y

otros orgnulos celulares y todo ello se recubre por una membrana que se prolonga hacia el
interior, organizando unos canales en el que forma el retculo endo-plasmtico (donde se
encuentran los ribosomas - responsables de la sntesis de protenas); la membrana celular puede
o no recubrirse de pared celular (carece de peptidoglicano) para proteccin o dar la consistencia
a la clula; posee celulosa o quitina.

- clula procaritica => mas primitiva, no esta organizada y no posee verdadero ncleo (ADN
no esta rodeado de una membrana - se encuentra libre); no posee mitocondrias,
sino mesosomas (repliegues de la membrana celular donde se hallan lasenzimas responsables de
la respiracin);

tampoco

hay

cloroplastos,

sino cromatforos(contienen clorofilas);

los ribosomas se encuentran pegados a la membrana citoplasmtica que estn protegidas por
una pared

celular (peptidoglicano -exclusivo

de

procariotas,

aunque arqueo-bacterias y

micoplasmas no lo poseen); las arqueo-bacterias, las eubacterias y los eucariotas se difieren en

=> la estructura de RNA polimerasa y en la composicion de los lpidos de su membrana.

- los virus => un grupo aparte que no se ha integrado en ningn reino y se discute si son o no
seres vivos; es incapaces de reproducirse por si mismos, dependen de un husped que les
proporcione el mecanismo de la replicacin y sntesis de macromolculas); una vez que han
conseguido esto, salen de la clula infectada produciendo su muerte; hay virus que infectan a
celulas animales, otros a vegetales y otros a bacterias; un virus se define como => un bloque de
material gentico rodeado por una cubierta proteica que le sirve como vehculo de transmisin;
algunos pueden llevar una envoltura circundante compuesta de lpidos y carbohidratos; los
viroides (30 especies) => agentes infecciosos (de menor complejidad gentica y estructural
conocida)

que solo

afectan

plantas

superiores;

constituidos

por 1

cadena

de

ARN cclica corta que no codifica protenas; tamao 10 veces menor que los virus (parecen ser
una etapa

primitiva

de

los

virus); los

priones

(proteinceous

infectious

particle) => partculas patgenas de naturaleza proteica sin acido nucleico; identificados en

1982, aunque desde el siglo XVIII se sospechaba de su existencia; las enfermedades "prion" en el
hombre (encefalopatas espongiformes transmisibles) afectan al sistema nervioso y se cree
que tambin a los musculos.

Organizacin de un laboratorio de microbiologia clnica

Estructura (depende del tamao y caractersticas, espacio que dispone y numero de personal):
1. reas/ secciones bsicas:
- Seccin de toma de muestras
- Seccin de recepcin y registro de muestras
- Seccin de siembra de muestras
- Seccin de medios de cultivo
- rea de almacn
2. reas/ secciones especializadas:
- Seccin de bacteriologa (se divide en reas => urocultivos, coprocultivos y parsitos, exudados
y anaerobios, hemocultivos)
- Seccin de micobacterias
- Seccin de micologa
- Seccin de antibiticos
- Seccin de serologa o inmuno-microbiologa
- Otras secciones (virologa o biologa molecular)
Normas de seguridad e higiene en el trabajo - tratan de evitar el riesgo de infeccin al
personal que trabaja en el laboratorio as como su extensin a la comunidad (establecidas por el
CDC/ centro de control de la enfermedad) americano y del instituto nacional de salud de
ese pas.
Niveles de seguridad biologa:
Nivel 1 => valido para laboratorios de enseanza que trabajan con microorganismo
no patgenos bien conocidos y patgenos oportunistas:
- las puertas permanecen cerradas mientras se trabaja
- las mesas de trabajo se desinfectan al terminar el trabajo y cuando es necesario
(derrame/contaminacin)
- todo material contaminado debe ser esterilizado antes de desecharlo

- no pipetear aspirando con la boca

- no comer, fumar, aplicarse cosmticos, morder los lapices, bolgrafos o tener alimentos en el
laboratorio.
- lavarse las manos despus de trabajar con microorganismos y al terminar la jornada (uso de
guantes).
- realizar las tcnicas correctamente, evitando la produccin de aerosoles.
- llevar bata durante el trabajo que se quitara al salir del laboratorio.
- los materiales que no pueden ser esterilizados en el propio laboratorio, se transportaran en
contenedores cerrados para el traslado hasta su descontaminacin; debe existir autoclave para
descontaminar en el mismo edificio.
- deben existir programas de desinfeccin y desratizacin
- el diseo del laboratorio debe permitir una fcil limpieza incluso entre los muebles que deben
ser impermeable, resistentes a los cidos, lcalis y al fuego.
- cada laboratorio debe tener un lavabo.
- si las ventanas se pueden abrir, deben estar protegidas con mosquiteros
Nivel 2 => permite el trabajo con microorganismo de peligrosidad potencial
moderada (hospitales o centros de salud a nivel primario); ademas de las normas del nivel 1,
comprende las siguientes:
- es obligatorio el uso de bata o pijamas que no deben usarse fuera del laboratorio, especialmente
en el comedor o cafetera o salidas fuera del edificio.
- las tcnicas serologcas con Ags sin capacidad infectante pueden realizarse en las mesas de
trabajo
- el acceso al laboratorio debe estar limitado.
- se deben utilizar guantes en todas las tcnicas con productos potencialmente peligrosos o
animales.
- en un accidente de exposicin a productos contaminados (derrame, pinchazos), comunicar
inmediatamente al responsable del laboratorio.
- se toma una muestra de suero del personal cuando comienza a trabajar, se archivara como
suero base.
- existir un manual de normas de seguridad en el laboratorio que todo el mundo debe conocer y
donde se exponga lo que debe hacerse ante un accidente.
- se trabajara con cabinas de seguridad de nivel I, II o III cuando se realicen tcnicas que
suponen produccin de aerosoles como centrifugacin, homogenizacin de muestras, siembra o
procesamiento de muestras en general.
Nivel 3 => es adecuado para trabajar con microorganismos de alto riesgo y comprende las
normas de los niveles 1 y 2 y ademas:
- todas las actividades con microorganismo o productos potencialmente patgenos se realizaran
en cabinas de seguridad; ningn trabajo se realizara en las mesas de trabajo.

- se utilizaran batas abiertas por la espalda, que no deben llevarse fuera del laboratorio;
utilizar guantes cuando se trabaja con material contaminado o animales que se desinfectaran
antes

de

desecharlos;

en

las

habitaciones

donde

se

tienen

los

animales

se

utilizaranmascarillas rgidas.
- en el laboratorio no debe haber plantas o animales que no se utilicen en el trabajo.
- el laboratorio debe estar aislado de la circulacin general, existiendo una doble puerta de
entrada con una habitacin para cambiarse de ropa y con ducha.
- las superficies y los muebles deben ser de fcil limpieza; las ventanas deben cerrar
hermeticamente; las puertas se cerraran automticamente.
- cerca de las puerta de salida existirn lavabos que pueden accionar con el pie, codo o rodilla.
- existir un autoclave para descontaminar en el propio laboratorio
- existir un sistema de extraccin de aire con circulacin del mismo de la puerta de entrada
hacia el interior del laboratorio; regulacin de la entrada y salida del aire acondicionado; el aire
de salida de las cabinas de seguridad tipo III saldr directamente al exterior; el de las cabinas
tipo I y II se elimina directamente al exterior o al sistema general del edificio pasando
previamente por filtros de alta eficacia (HEPA).
Nivel 4 => este nivel solo se establece en laboratorios de experimentacin y no en laboratorios
de microbiologia clnica; se necesita este nivel cuando se manejanmicroorganismos
de altsimo riesgo o que son exticos en ese pas, especialmente virus.

Tema 2 - El Control de calidad de un laboratorio

microbiologia clnica
El control de calidad sirve para:
- Garantizar la fiabilidad de las tcnicas que se realizan en el laboratorio
- Asegurar resultados rpidos y tiles
- Estandarizar las tcnicas e interpretar correctamente los resultados
- Controlar la calidad de las muestras, estableciendo una buena comunicacin con los clnicos y
el personal encargados de obtener muestras
- Aumentar la profesionalidad del personal del laboratorio y la confianza de los clnicos en los
resultados que reciben.
Metodos y reas de control de calidad
1. Control de calidad de las muestras => se debe controlar desde su obtencin, transporte
y procesamiento hasta la emisin de los resultados siguiendo normas elaboradas con criterios
claros de rechazo y establecer horarios fijos de recepcin de muestras.

2. Medios de cultivo => deben ser empaquetados correctamente en bolsas cerradas para
evitar la desecacin, almacenados correctamente y etiquetados con la fecha de caducidad (a 4C
dura 8-10 semanas; sin empaquetar a 4C dura 2 semanas; los caldos y agar en tubo con tapn a
4C - 6 meses); los que estn preparados en el laboratorio, siguen un control siguiente:
- Control de esterilidad => comprobar con 1 unidad de cada lote (<100) o 3 unidad si es un gran
lote mediante incubacin a 37C durante 24 horas; si se contaminan, debe rechazarse.
- Control de crecimiento => se inocula un medio de cada lote con un inoculo reducido
microorganismo

control

(cepas

de coleccin) que

asegure

el

crecimiento

con

un

inoculo estndar.
- Control de medios con caractersticas selectivas => se inocula con el germen que no debe
crecer en ello.
- Control de las caractersticas bioqumicas => se utiliza un control positivo que produce
la reaccin bioqumica esperada.
3. Reactivos de identificacin => se deben marcar con la fecha del primer uso y la
caducidad.
- Los reactivos de identificacin se deben utilizar siempre con un control positivo y negativo.
- No deben utilizarse reactivos caducados o cuyo aspecto no sea el adecuado y debe asegurarse
su almacenamiento correcto
- Hay que utilizar siempre el lote o el vial cuya caducidad este mas prxima
4. Cepas control => una coleccin de cepas de ATCC dispone de prcticamente todos los
microorganismo que se utilizan en controles de calidad.
5. Mantenimiento de las cepas control => se mantiene de manera que no pierdan
sus caractersticas tpicas.
6. Control de aparatos => se debe mantener una temperatura ambiente en el laboratorio
entre 23-29C y la humedad entre 30-50 %; al final de jornada se limpian los superficies con
un antisptico (fenol 5% o glutaraldehido)
- Limpieza =>

las neveras

congeladores se

limpian

se

descongelan peridicamente (mnimo 1 vez al ao); las cabinas de seguridad, centrifugas,

agitadores de tubos se limpian todos los das al acabar el trabajo con antisptico fenol 5%;
lasestufas y baos se limpian cada 6 meses.
- Temperatura => un control diario de las estufas, baos, neveras y congeladores antes de
empezar el trabajo; se usa un termmetro para cada aparato colocado en el interior del mismo
- Atmsfera de incubacin => se controla la cantidad de CO2 de las estufas con un indicador
que suele estar acoplado con sistema de alarma; se controla la atmsfera anaerobiamediante
catalizadores e indicadores de azul de metileno.
- Cabinas de flujo laminar => un cambio peridico de los filtros y un control de laslamparas
ultravioleta.
- Autoclaves => control de esterilizacion (fsico del aparato, qumico - tiras y biolgico esporas)

- Microscopios => se limpian con suavidad al terminar la jornada, taparlos con su funda; se
limpian cada semana los objetivos con alcohol-eter 50%; se realiza peridicamente un ajuste de
condensadores y objetivos.

Tema 3 - Tcnicas de
descontaminacin, desinfeccin y esterilizacin
En todo laboratorio de microbiologia se debe tener en cuenta:
- todo material para la recogida de muestra debe estar esterilizado
- todo material para la realizacin de las pruebas debe estar estril
- antes de cualquier esterilizacin, el material debe estar limpio y/o desinfectado
- conviene utilizar material desechable
- el material de uso asptico debe guardarse separadamente del uso sptico
- la limpieza de residuos en el suelo, mesas de trabajo y cualquier superficie se realiza
mediante desinfeccin peridica
- destreza y formacin por parte del personal sanitario de laboratorio (deben trabajar en
condiciones de total asepsia)
- la manipulacin de todo material debe seguir el protocolo de trabajo con medidas cautelares
para la prevencin de accidentes laborales.
Fases de la manipulacin del material del laboratorio
- Material desechable (jeringas, guantes, lancetas) => se utiliza una sola vez y se desecha o se
destruye; material punzante o cortante se desecha en recipientes resistentes a la puncin; si no es
punzante, se auto-clavar y se tirar en contenedores especiales.
- Material reutilizable (de vidrio, de metal, batas, gorro de tela) despus de su utilizacin se
limpia, se desinfecta o se esteriliza (segn los casos)
- Todo instrumento se limpia inmediatamente despus de utilizar (segn el protocolo de cada
caso), despus se desinfecta o se esteriliza directamente para destruir cualquier forma de vida
incluidas formas de resistencia o esporas.
- Materiales no esterilizados (pero si se desinfecta - destruir toda forma de vida patgena)
que se pueden utilizar => portaobjetos para la tincin, frascos lavadores con agua destilada,
frasco de colorantes, etc.
Principios bsicos de descontaminacin -

concepto

de

limpieza, desinfeccin y esterilizacin

- Limpieza => se separa el material entre los de uso asptico y sptico, se limpia; los
instrumentos se limpian primero con agua fra (la sangre se adhieren con calor), despus con

agua caliente y jabn frotando en los ngulos, se enjuaga y se volver a aclarar con agua
destilada; se seca y se comprueba su estado; se protege si es necesario.
- Desinfeccin => materiales

superficies

inertes

(suelo,

mesa),

se

utilizan

metodos qumicos (detergentes, hipocloritos, etc.); desinfeccin de manos, piel y mucosas

corresponde a tcnicas de antisepsia (se aplica tpicamente antispticos).
- Esterilizacin => se usa para la reutilizacin de cualquier material.
Tcnicas de descontaminacin fsica
A. Tratamientos trmicos por

calor

seco

y hmedo -

consisten

en

la esterilizacin o desinfeccin de los grmenes por aplicacin de calor seco o hmedo.

1. Descontaminacin por calor seco (depende de la temperatura, se consigue o no
la esterilizacin)
- Flameado => exponer un objeto a la llama de un mechero durante un tiempo segn el material
de que se trate (p.ej. la asa de siembra)
- Incineracin =>

se

usa

un horno

crematorio para

destruir material

desechables(jeringas, catteres)
- Horno seco => estufas de Pasteur o Poupinel (hornos metlicos de doble pared y bandejas
ajustables) mediante resistencias elctricas, esterilizan durante 2 horas a 180 o 3horas y media
a 160C; tienen termmetro externo que mide la temperatura en el interior y un selector de
temperatura y un reloj;
2. Descontaminacin por calor hmedo
- Ebullicin => se utiliza poco porque no es fiable; introducir el material en agua hirviendo
(100C) durante 10 minutos como mnimo; no es un mtodo de esterilizacin (no destruyen
esporas)
- Autoclave => un recipiente cilndrico que se cierra hermticamente; externamente lleva
un manmetro que registra la presin en el interior cuando esta en marcha; presenta
una vlvula de seguridad que se abrir espontneamente cuando la presin interna supere la
elegida o resulte peligrosa, una llave de purga que permite la salida de vapor y un reloj que
selecciona el tiempo deseado con alarma que indica el final del proceso; interiormente hay una
rejilla que se coloca por encima de una resistencia elctrica cubierta por agua destilada; es muy
utilizado y se conseguir esterilizacin si sometemos el autoclave a 1 atmsfera durante 20
minutos (120C); en el se puede esterilizar => material metlico, cristal, torundas, compresas,
paos,

batas, plsticos y gomas reutilizables; el

inconveniente=>

con

el

tiempo

los

objetos metlicos se oxidan.

Tcnica => con autoclave apagado y abierto, aadimos agua destilada hasta la rejilla, sin
cubrirla (para que el material que deseamos esterilizar no contacte directamente con el agua); las
piezas pequeas se colocan en cestas/ cajas; se cierra la tapa y se ajusta a presin; se abrir la
llave de purga para que permita la salida de vapor y se ajustara la presin deseada para
la esterilizacin y el tiempo (1 atmsfera - 20 minutos); se pondr en marcha el aparato y se
espera hasta que salga vapor por la llave de purga; se cerrara la llave de purga y

la presin comenzara a subir hasta llegar al nivel programado; a partir de aqu comenzara a
contar el tiempo de esterilizacin; una vez realizada la esterilizacin se apagara el interruptor del
autoclave y se esperara a que el manmetro baje a 0; cuando la presin este a 0, abriremos la
llave de purga para que salga gran parte del vapor que todava se encuentra contenido; esto se
realizara con cuidado para evitar descompresiones bruscas que podran originar la apertura de
aquellos recipientes tapados con algodn graso; una ves comprobado la salida de vapor, se abre
la tapa del autoclave y se extrae el material.
- Tyndalizacin => mtodo de esterilizaciones consecutivas (repetidas en 3-4 das hasta que se
elimine el germen contaminante); se utiliza cuando existe una contaminacin de algn material
o en el propio autoclave; tericamente no se deben alcanzar temperatura >100C y no se debe
abrir el aparato o recipiente que se somete a tyndalizacin; objetivo => destruir las esporas
cuando germinan y evitar contaminaciones por microorganismos resistentes.
- Vapor fluente => utilizar el autoclave siguiendo la tcnica habitual, pero la llave de purga
abierta, lo que impedir que se produzca presin y la temperatura nunca sea > 100C; es
utilizado para materiales o medios que no deban soportar temperaturas >100C (p.ej. medios
muy azucarados, para evitar su caramelizacin); es poco usado en microbiologia.
- Uperizacin => mtodo muy utilizado en la industria alimentaria (tratar el medio a una
temperatura de 149-150C durante unos instantes (1-5 segundos). No se alteran las propiedades
del medio y produce esterilizacin.
- Pasteurizacin => no

es

un mtodo de esterilizacin y

es

utilizado

en

la industria

alimentaria (calentar el medio a temperaturas entre 62C (15 minutos) y 72C (30 minutos); no
destruye las formas de resistencia.
Tratamientos a temperatura ambiente
1. Radiaciones ionizantes - las utilizadas en microbiologia son:
- Rayos ultravioletas => para mantener la esterilidad de superficies y recintos; tienenpoca
penetracion; acta impidiendo y alterando la duplicacin del ADN celular; se debe evitar su
presencia en la piel;

- Rayos gamma => para conseguir esterilizacin en fri, producidos por isotopos radiactivos;
presentan un poder de penetracin muy alto, constituyendo el mtodo de esterilizacin mas
utilizado

nivel

industrial (materiales

de

uso nico o

desechable p.ej.

guantes,

jeringas, catteres, prtesis, vlvulas y que pudiera alterarse por calor)

2. Sistemas

de filtracin (filtrar

a las estructuras

que

sobrepasen

un

determinado

tamao, segn el tipo de filtro; la efectividad del filtro es proporcional al tamao del poro,

pudiendo conseguirse esterilizacin); presencia de presin, vaci y la carga del filtro (+); las
bacterias en medios neutros son (-).
- Filtros de membrana => filtros de celulosa muy purificada y con un tamao de poro fino o
muy fino; existe desde sistemas sencillos hasta sistemas de piezas desmontables que llevan
acoplada una bomba de vaci para ejercer succin sobre el medio a filtrar.

- Filtros de vidrio poroso o de fibra de vidrio => se utilizan en casos especficos y tienen
mas resistencia que los anteriores.

- Filtros de Chamberland => son de porcelana porosa, mas caros que los anteriores y menos
utilizados.

- Filtros de flujo laminar => dispositivos de filtrado donde entra aire contaminado y
sale estril; utilizados como mecanismo de esterilizacin en campanas de flujo laminar, en
quirfanos y recinto que pretende crear o mantener un ambiente estril; flujo => vertical u
horizontal.

- Ultrasonidos => introducir el material en tanques de distintos tamaos con liquido

desinfectante; una vez puesto en marcha el dispositivo, comienza a vibrar a gran velocidad

originando pequesimas burbujas que entran en todos los recodos del material consiguiendo
eliminar los microorganismos; es poco utilizado, caro y poco practico.

Tcnicas de descontaminacin qumica

1. Metodos qumicos de desinfeccin (desinfectantes que

se

aplica

sobre

objetos

superficies y antispticos que se aplica sobre la piel y mucosas); condiciones que cumplir en un
buen mtodo de desinfeccin:
- matar el mayor numero de grmenes o al menos todos los patgenos
- ser econmico
- no ser corrosivo, toxico ni irritante para los tejidos
- se deber diluir al menos en agua
- tener un olor agradable
Los mas utilizados:
- Detergentes catinicos => diluidos al 1% para desinfeccin de manos; mas frecuente para
limpieza y desinfeccin de paredes, suelos, ropa y objetos (sin diluir)
- Clorofenoles => muy eficaces y se asocian con los detergentes catinicos para mejorar el
grado de desinfeccin.
- Compuestos clorados => para desinfeccin de superficies, ropas, urinarios; se suelen usar
diluidos en agua (lejias /hipocloritos)
- Acido fenico => diluido al 5% para la limpiar objetos y superficies.
-Amoniaco
Los antispticos mas utilizados:
- Alcoholes => limpiar y desinfectar la piel, las manos (etanol), el filo de instrumental y
superficies pequeas (metanol) que no tiene contacto con la piel (p.ej. alcohol isopropilico70%)
- Mercurio-cromo =>

contiene

mercurio

un

buen

desinfectante para

heridas

superficiales (las mantiene secas y protegidas)

- Derivados yodados => para preparar la piel antes de una intervencin quirrgica, en
la puncin lumbar,

antes

de puncin para hemo-cultivo,

etc.;

son efectivos

ejercen

su accin por oxidacin (p.ej. betadine, ibetane)

Metodos qumicos de esterilizacin - los mas empleados son "Oxido de etileno" => en
forma de gas (10C) mezclado con CO2, ya que puro es muy oxidante y podra explosionar al
mezclarse con O2; presenta un gran poder de penetracin y es muy efectivo y duradero;
la esterilizacin se produce a => temperaturas bajas (40C) con humedad relativa alta (40-60%)

durante un tiempo de 3-8 horas (media de 5); se requiere cmaras o instalaciones especificas
para ello, son muy caras; el oxido de etileno se aplica a cualquier material sensible al calor y que
no pueda esterilizarse por otros metodos (p.ej. endoscopia, plsticos termo-lbiles, cauchos,
material elctrico); el material esta listo para ser utilizado a las 48 horas despus de
la esterilizacin; deber conservarse estril en el interior de una bolsa de plstico cerrada por
procedimientos termoelctricos y dura 6 meses.
Control de esterilizacin - permiten comprobar la eficacia del proceso de esterilizacin
1. controles de esterilizacion de tipo fsico => incluidos en el aparato de esterilizacion
(manmetros -

miden presin; vacuo-metros -

miden

el vaci en

el

interior; termmetros, grficos que registran los valores parmetros mas significativos del
proceso: temperatura, humedad, presin, vaci, tiempo etc.)
2. controles de tipo qumico - comercializados en forma de cinta adhesiva, como indicadores
del proceso de esterilizacion (por encima de la temperatura determinada cambian de color),
fundamentalmente para el control trmico.
3. sistemas de tipo biolgico - comercializados en forma de capsulas cerradas en cuyo
interior hay esporas de resistencia a la esterilizacion conocida; dichas ampollas, tras haber sido
sometidas a condiciones de esterilizacion, se incuban a 56C (Bacillus strearat-haemophilus) o a
40C (Bacillus subtilis); a cabo de 24-48 horas, se procede a su lectura donde la germinacin y
cambio de color indicara si se han producido condiciones de esterilizacion.

Tema 4 - Toma de muestras (recogida, manejo y

tratamiento)
Seleccin de

la

muestra

para

tener significacin diagnostica - representativa del

proceso patolgico y cantidad suficiente (p.ej. no es relevante un esputo poco purulento y

contaminado por saliva); recipiente estril adecuado (para un pus de un absceso =>
anaerobio, estriles);
Procedimiento para la toma de muestras:
- La toma de muestras debe realizarse antes de iniciar el tratamiento ATB (al menos informar al
laboratorio de ATB que esta recibiendo)
- Es muy importante seguir las normas necesarias para evitar la contaminacin externa de las
muestras (descontaminar la piel, evitar reas con flora normal, medio de cultivo especficos para
el patgeno sospechoso)
- La extraccin o recogida de las muestras se debe realizarse en el estado adecuado de la
enfermedad (durante la fase aguda o diarreica)

- La cantidad recogida debe ser suficiente y es fundamental que se utilice unrecipiente estril y
que se envi a laboratorio lo mas pronto posible.
Extraccin de sangre para hemocultivos (septicemia)
La tcnica de extraccin (se hace en un pico febril > 38,5C /antes de la toma de
la siguiente dosis de

ATB) => smarch

en el antebrazo, escoger la vena antes de

la desinfeccin (alcohol 70 o clorhexidina alcohlica un rea de 5cm - frotando rigurosamente),

yodo-povidona 2% desde el centro hacia afuera en el circulo, dejar secar 1 minuto,
ponerse guantes estriles, realiza la extraccin , cambiar la aguja antes de inyectar la sangre en
las botellas de cultivo, desinfectar otra vez la piel con alcohol (sensibilidad al yodo), remitir las
botellas de hemocultivos inoculadas inmediatamente; se recomienda 3 muestras de 10 ml
(cada extraccin para 2 botellas (aerobios y anaerobios) en 24 horas con intervalo de >1 hora (al
menos 2-3 extracciones separadas 30 minutes en 24 horas) en sitios diferentespara dilucidar un
posible contaminante de la piel; en nios es suficiente extraer 1-5 ml mximo cada extraccin;
pacientes con tubuladora intravenosa/ catter, se toma en la va mas abajo; se extrae lo mas
limpio posible para no incluir bacterias saprofitas de la piel;los frascos se marcan con etiqueta
del paciente, numero de cama y hora de extraccin.
Recogida de LCR (el procesamiento inmediato/ urgente) => se recoge insertando un
agua, de forma asptica, en el espacio sub-aracnoideo a nivel lumbar, se recoge en 3-4
tubos estriles con tapa de rosca (tubo 3 o 4 => recuento celular, 1 y 2 =>microbiolgicos
y bioqumicos; si solo se llena 1 tubo => microbiologia retirara de forma asptica la cantidad
necesaria, el resto => citolgicos y bioqumicos; el volumen de muestra es importante (10
ml) para la deteccin (p.ej.M.tuberculosis y C.neoformans); no se deben refrigerar (temperatura
ambiente o estufa a 37) excepto para estudios virales se pueden refrigerarse hasta 24 horas o
congelarse a -70C si hay una mayor demora; la muestra bacteriana => turbio (meningococo
dentro de leucocitos), virales => transparente;
Recogida

de

otros lquidos estriles -

la aspiracin percutnea

de liquido

sinovial,

pleural, pericrdico y peritoneal se hace de forma asptica y se inyecta inmediatamente en un

frasco o tubo esterilizadas (transporte anaerobio), antes, se expulsar las burbujas de aire de la
jeringa; se puede aadir una pequea cantidad de heparina para evitar la coagulacion.
Recogida de muestras del tracto respiratorio superior:
- Exudado farngeo => se realiza mediante una torunda de algodn, dacrn o alginato de
calcio frotando vigorosamente ambas reas amigdalinas, la faringe posterior y las zonas
de inflamacin, ulceracin, exudacin o formacin de capsulas; la lengua se oprime con un
depresor para reducir al mnimo la contaminacin del hisopo con secreciones bucales.
- Exudado nasal => se realiza introduciendo un hisopo profundamente en cada fosa nasaly
rotando suavemente.

Tractor respiratorio inferior - el esputo es una muestra menos relevante por la posibilidad
de la contaminacin por saliva; una buena muestra => instruir debidamente al paciente para
lograr

una expectoracin profunda

(ayudarle

con

fisioterapia

respiratoria/

clapping, hidratacin o nebulizacin); pacientes con traquestomas => se recoge aspirando(en un

frasco de Lukens); las secreciones bronquiales se recoge mediante broncoscopio, instilando una
pequea cantidad de SF estril en el rbol bronquial (tambin puede estar contaminado por flora
del tracto superior, aunque es mas relevante que esputo); una muestra mas profunda se recoge
mediante broncoscopio con lavado bronco-alveolar (BAL) para buscar Pneumocistis carinii y
hongos; cepillado bronquial es una tcnica mas agresiva en caso de neumonas por aspiracin;
muestras

de

bacterias anaerobias

se

recoge

por

una puncin transtorcica,

biopsia

transbronquial y pulmonar abierta.

Recogida de heces (se procesa lo antes posible):
- Toma de muestras para coprocultivo - se recoge con un escobilln que se introduce en
un tubo estril preparado con un medio de transporte adecuado (Cary y Blair) (tubo con una
cuchara y liquido rojo/transparente; tambin se puede utilizar frasco de orina estril; medio Cary
y Blalir mantiene la viabilidad de los patgenos intestinales); basta con impregnar la torunda en
las heces en la parte donde se observa sangre, moco o pus;
- Muestras para estudio parasitolgico - se recoge durante 3 das consecutivos, se
guardan en la nevera en un recipientes cerrados para evitar la desecacin (temperatura 3-5C);
los huevos, las larvas y los quistes de protozoos permanecen viables varios das; la cantidad de
muestra es pequea (1 cucharilla de caf en un frasco con alcohol polivinilico /PVA 1:3); para
investigar oxiuros (parsitos) se utiliza preparacin con cita de celofn; se proporcionan al
paciente 6 portaobjetos (se toma durante 6 das consecutivos) con cinta adhesiva transparente;
se toma la muestra a primera hora de la maana antes de lavarse; se aplica la cinta sobre los
margenes del ano con una suave presin, se retira y se coloca de en el porta;
Recogida de orina - el frasco estril no debe abrirse antes de la recogida; las partes genitalesse
lava solo con agua; se recoge a primera hora de maana para estudio microbiolgico, de
forma asptica, se echa el primer chorro, se recoge la segunda mitad unos 20-30 ml.
Sondaje vesical (puncion de sonda) y puncion suprapubica - se realiza por el personal de
enfermeria
Recogida de muestra de tracto genital - se utiliza un tubo con escobilln de algodn como
medio de transporte; exudado uretral => el hisopo se introduce 2 cm dentro de la uretra y se rota
suavemente antes de retirarlo (muestras separadas para el cultivo de gonococos y clamidias o
ureaplasmas => se utiliza 2 escobillones,1 para estudio de gonococos 2 para clamidias o
ureaplasmas); exudado cervical => se inserta un hisopo especial (como uretral) en el canal
cervical y rotando-lo y moviendo-lo durante 30" antes de retirar; exudado vaginal => el hisopo se
sumerge en el fornix posterior de la vagina; para aislamiento de gonococos pueden

ser transportados en elmedio de Stuart modificado o en el medio de Amies

con carbn en temperatura ambiente, hasta su inoculacin; para aislamiento de clamidias y
micoplasmas, el medio es tampon con sacarosa y ATB; se puede refrigerar si hay demora
en el proceso.
Procedimiento para muestras en anaerobiosis - se obtiene mejor con una jeringa y aguja, a los
que debe expulsarse todo el aire.
Transporte de muestras:
- Metodos convencionales => el mas utilizado es hisopos en tubos de plstico que llevan
incorporados diversos medios de transporte que consiste en un agar semi-solido, pH regulado,
carece de nutrientes, pero contiene tioglicolato de sodio como reductor, para prolongar la
viabilidad de los microorganismos cuando exista demora entre la recogida y su cultivo; los mas
utilizados => (1) Medio de Stuart (los exudados farngeos, conjuntivales, nasales y heridas) que
mantiene un pH favorable e impide la deshidratacin de las secreciones durante el transporte y
la oxidacin y autodestruccin enzimtica de

los patgenos presentes (2)Medio

de

Cary

Blair (muestras fecales) donde las salmonellas y las shigelas pueden recuperarse hasta
49 das despus de la toma de muestras y Vibrio cholerae hasta 22 das despus.
- Transporte de muestras para estudio en anaerobiosis => cuando la muestra se va a
procesar dentro de 30 minutos, puede servir como transporte una jeringa con una aguja
insertada en un tapn de goma; si la demora va a ser mayor, se usa un tubo /frasco ampolla lleno
de CO2 y libre de O2 con N2/ H2 con indicador en agar o caldo; la muestra liquido se inyecta a
traves

del tapn de

goma despus de

expulsar

el

aire

de

la

jeringa

aguja;

existe tambin un hisopo en un tubo anaerobiosis

Envi de muestras (las medidas especiales para un envi por correo a un laboratorio de
referencia):
- Muestras que contengan virus deben ser refrigeradas inmediatamente y enviarse en una caja
con unidades comerciales refrigerantes
- La sangre no se enva entera, se separa el suero y se enva en un tubo estril
- La muestra <de 50 ml debe ser envasado en un recipiente hermtico irrompible con espacio
suficiente entre ambos para retener en caso de rotura; el envase se coloca dentro de otro envase
para el envi; el envase externo se identifica con

un

rotulo rojo y blanco para

Agentes biolgicos /Material bio-medico.

Manejo inicial de las muestras en el laboratorio - la mayor parte de las muestras para
estudio bacteriolgico que vayan a demorarse en su procesamiento deben mantenerse en la
nevera a excepcin de LCR; los fragmentos de pelos o raspados de piel y uas para el aislamiento

de hongos pueden ser mantenidos a temperatura ambiente durante varios das antes de ser
inoculados (protegidos del polvo).

Tema 5 - Procesamiento de las muestras en

microbiologia clnica
(protocolos de siembra)
Normas bsicas generales (antes de proceder al procesamiento de la muestra):
1. Volante de peticin debe estar bien cumplimentada (filiacin y datos administrativos del
paciente, datos clnicos, datos de la muestra, teraputica seguida, determinacin solicitada)
2. Tener constancia de que la obtencin de la muestra ha sido realizada correctamente, siguiendo
las normas y criterios establecidos por el laboratorio, as como su recogida, transporte
y conservacin.
3. La siembra de dicha muestra se har en los medios idneos para cada caso, bien en placa, por
agotamiento y/o mtodo cuantitativo, o bien en tubo.
Procesamiento de las muestras
1. Orinas (debe llegar al laboratorio en contenedor estril y ha de conservarse a 4C en menos
de 24 horas)
[a] Agar sangre, chocolate o Cled/Cystine-Lactose-Electrolyte-Deficient (medios
general y especifico para orinas) => se siembra en 3 direcciones/ cubrir totalmente la
superficie

(cuantitativa

en

Cled

AS -

para

contar

colonias;

realizar

antibiograma); crecern todo tipo de germenes: cocos Gram+, bacilos Gram-,

levaduras; en Cled/AS no crecen cocos Gram- (Neisseria, Moraxella, Chlamydia); en AS
se

comprueba las caractersticas hemolticas o

no

de

las

bacterias

e.j. Stafilococcus

aureus (B hemoltico) y en Cled, las caracterstica lactosa (+) => amarillas o lactosa (-) sin
cambio de color => azul verdosas.
[b] Agar Mac Conkey (selectivo para bacilos Gram-) => se siembra por agotamiento en
cuadrantes (puede ponerse un disco de Colistina en el inoculo para ayudar a
la identificacin de E.coli (sensible a colistina - comn en orinas); crecen bacilos Gram=> Enterobacterias y tambin Pseudomonas; observaremos las caractersticas de lactosa
(+) => colonias rojas y lactosa (-) sin cambio de color => rosa.
[c] Agar Citrato de Simmons (solo en algunos protocolos); se siembra enla lengeta del
tubo preparado en pico de flauta; las colonias consumidoras decitrato (+) => vira a azul y

las

que

no,

permanece

verde;

se

usa para

la

diferenciacin

deEnterobacterias (para diferenciar entre coliformes y coliformesfecales. Los coliformes

fecales no fueron capaces de utilizar el citrato como fuente de carbono ni a las sales de amonio
como

fuente

de

nitrgeno. Los

coliformes

no

fecales como Enterobacter

aerogenes o Salmonella enteritidis podan utilizar el citrato en este medio dando una
reaccin alcalina) en base a su capacidad de utilizar el citrato (mediante citrato permeasa)
Los grmenes mas frecuentes que podemos encontrar (en orina se identifican
especies):
- E. coli (el mas frecuente) => bacilo Gram-, mvil, sensible a Colistina, lactosa (+), indol (+)
- Streptococcus faecalis => coco Gram+, catalasa (-), oxidasa (-).
- Proteus spp (todas) => bacilo mvil Gram-, resistente a Colistina, lactosa (-), oxidasa
(-), Triptfano Desaminasa/TDA (+), ureasa (+) tardo.
- Stafilococcus aureus => coco Gram+, catalasa (+), coagulasa (+), B hemoltico, oxidasa(-).
- Candidas spp (todas) => morfologa de levaduras (parece como hemates)
- Klebsiella spp => bacilo Gram-, inmvil, sensible a Colistina, ureasa (+), colonias mucosas,
lactosa (+), tardo.
- Pseudomonas spp => bacilo Gram-, mvil, sensible a Colistina, lactosa (-), oxidasa (+)
2. Coprocultivos (contenedor especifico para coprocultivo "Cary y Blair" / bote de
orina;conservada a 4C, procurar procesarla en <24H; se siembran por agotamiento en
cuadrantes).
[a] Hecktoen o SS => medios selectivos y diferenciales donde crecern el generoSalmonella
y Shigella; en Hecktoen las Salmonellas spp => colonias lactosas (-), verdosas y pueden
ser SH2/sulfihidrogeno/ acido sulfidrico (+) con fondo negro, sonbacilos mviles, sensible a
Colistina; las Shigellas spp => lactosas (-) , SH2 (-),bacilos inmviles en fresco y sensibles a
Colistina; las colonias lactosas (+) en este medio sern amarillas;
en SS las Salmonellas y Shigella sern el del medio (caramelo) y tambin con el fondo negro
(Salmonellas SH+ y lactosa- ); colonias lactosa (+) => rojizas; las colonias lactosas+ no
son patgenas (coliformes fecales) y no se investigan.
[b] Agar Yersinia CIN => para buscar colonias de Yersinia spp (rosa clarito - Yersinia
pestis, Yersinia enterocolitica y Yersinia pseudotuberculosis.) que aparece como lactosa
(+),sensible a Colistina y bacilos Gram- e mviles, fermentador de manitol. La inhibicin
selectiva de organismos gram negativos y gram positivos se obtiene mediante cristal
violeta (inhibidor de Gram+), desoxicolato sdico (inhibidor de Gam+) y los agentes
antimicrobianos: cefsulodina, Irgasan (Triclosan) y novobiocina (inhibidor de S.epidermidis).

[c] Agar Campylosel => crecer Campylobacter spp (bacilos Gram- con flagelos) como
colonias pequeas translucidas, sensibles a Nalidixico (especies C. coli y C.jejuni) resistente a
Nalidixico el C. fetus, en fresco aparecen en coma/en S, ureasa (+) oxidasa (+) catalasa (+); al
hacer la prueba del hipurato C.jejuni seran (+) y C.coli (-); P. hipurato => un procedimiento
cualitativo para determinar la capacidad de las bacterias de hidrolizar enzimticamente
(hipuricasa) el hipurato sdico que da lugar a acido benzoico y glicina un compuesto de color
morado.

[d] Caldo Selenito => caldo enriquecido para los gneros Salmonella y Shigella. el selenito
de sodio inhibe la flora Gram+ y la mayora de la flora entrica excepto Salmonella spp.

[e] Agar McConkey (solo en algunos protocolos) => los coliformes aparecern como colonias
rojas

por

ser

lactosas

(+);

no

es

necesario???

[f] Agar TCBS /tiosulfato citrato bilis sacarosa (detectar Vibrio cholerae) => aparecen
colonias de color amarillo sacarosa (+), oxidasa (+) y son bacilos Gram- pleomrficos; el extracto

de levadura y la peptona proporcionan el nitrgeno y las vitaminas.El citrato sdico, el tiosulfato

sdico, la bilis de buey y un pH alcalino fuerte inhiben los organismos Gram+ y suprimir los
coliformes (inhibidor para la mayora de las entero-bacterias), favoreciendo el crecimiento
de Vibrio cholerae porque este organismo es sensible a los entornos cidos. La alta concentracin
de sodio favorece el crecimiento de Vibrio cholerae que es halotolerante (tolera el medio salado)
y de otras especies de Vibrio, cuya mayora es haloflica. La sacarosa (+) es un carbohidrato
fermentable, y el cloruro sdico estimula el crecimiento. El tiosulfato sdico es una fuente de
azufre y acta con el citrato frrico como indicador para detectar la produccin de cido
sulfhdrico/SH2. El azul de bromotimol y el azul de timol son indicadores de pH. En Mc, Vibrio
Cholerae es lactosa (-).

3. Exudados vaginal y uretral (la muestra llegara en uno o varios escobillones; se siembra
por

agotamiento

en

cuadrantes).

[a] Agar Sangre (medio general) => buscamos Streptococcus B hemoliticos del grupo
B(S.agalactiae), que aparecern como colonias pequeas translucidas con un halo de B
hemlisis alrededor de la colonia; son cocos Gram+, catalasa y oxidasa (-), anaerobio facultativo,
prueba

de

ltex

(+).

[b] Agar chocolate => buscamos Haemophilus spp como colonias muy pequeas grisceas
que crecen bien por ser grmenes exigentes en su crecimiento que requieren factor X y/o
V (proceden de la degradacin de la Hb); tambin podemos colocar discos de factor X y/o V y
mirar el satelitismo; al fresco como coco-bacilos inmviles, Gram-; oxidasa y catalasa variable.
[c] Agar Thayer Martin o New York => buscamos N.gonorrhoeae o N.meningitis que
aparecern como colonias de color gris; son diplococos Gram-, catalasa (+), oxidasa (+) que
fermentan

la

glucosa

pero

no

el

resto

de

los

azucares.

[d] Agar Gardnerella => buscamos Gardnerella vaginalis, como colonias B-hemolticas y
al fresco como bacilo pequeo, Gram variable, anaerobio facultativo, oxidasa (-) y catalasa (-). La
presencia de sangre humana favorece el crecimiento de las especies estudiadas, ya que producen
-hemlisis alrededor de las colonias. La -hemlisis en agar con sangre humana es altamente
indicativa de presencia de G.vaginalis. Los antibiticos incluidos en el medio inhiben la mayora
de los contaminantes Gram- y de las levaduras.

[e]

Vagicult

Roiron (medio

liquido)

=>

crecen

levaduras

(Candidas

spp)

yTrichomonas (protozoo unicelular flagelado).

[f]

Agar

[g] Medio

Sabouraud (se
de

puede

incluir

deteccin

para

detectar Candidas

spp)

de Micoplasmas y Chlamydias

4. Semen - la muestra llegara en contenedor estril/ bote de orina; se siembra por agotamiento
en cuadrante en medios: Cled, McConkey , Agar Sangre, Agar chocolate, Thayer Martin o New
York, Roiron, y cultivo de Clamydias, buscando en cada caso los mismos grmenes que en el caso
del

exudado

vaginal.

5. Esputo - la muestra ha de llegar en contenedor esteril y conservarse menos de 24H a 4C;

antes de sembrar se observa por el microscopio si la muestra es valida/ no esta contaminada por
saliva; se siembra por agotamiento en cuadrantes; solo se siembra cuando en el Gram, el cociente

leucocitos/ celulas epiteliales sea > 2,5 (recuento en fresco/al microscopio); si es < a 1,5 es
dudoso. Cuando sean muestras de UCI o provenientes de neumonas se siembran siempre.
[a] Agar Sangre => buscamos colonias de Streptococcus pneumoniae oBranhamella
catharralis; S.pneumoniae >> colonias verdosas (alfa hemlisis) y al fresco como coco Gram+,
catalasa (-), sensible a la Optoquina; Branhamella catarralis >> colonias blanco-grisceas y al
fresco como cocos Gram-, oxidasa (+), catalasa (+) que no utiliza ningn azucar (no es
fermentadora), pero reduce los nitratos a nitritos/ nitratasa+ (lo que le diferencia del
genero Neisseria que
[b]

Agar

ademas

chocolate =>

es

fermentadora

buscamos Haemophilus

de

glucosa

spp como

colonias

maltosa).
puntiformes

translucidas, que al fresco como coco-bacilos, Gram-, catalasa y oxidasa variable; agar chocolate
polyvitex (contiene factor V/ NAD y factor X /hemina procedente de ladegradacin de Hb)
[c]

Agar

McConkey =>

donde

creceran Enterobacterias y

otros

bacilos

Gram-.

[d] Medio de Lowestein-Jensen (o Coletsos) => para rescatar Mycobacterium

tuberculosis, bacilos acido alcohol resistente (Zhiel Neelsen+) de crecimiento muy lento; los
niveles bajos de la penicilina y el cido nalidxico tambin estn presentes en el medio de LJ
para inhibir el crecimiento de lo Gram+ y Gram-, con el fin de limitar el crecimiento de especies
de micobacterias solamente. Presencia de verde malaquita en el medio inhibe las floras mayora
acompaante; que se desinfecta y se solidifica mediante un proceso de espesamiento; el Glicerol
mejora

el

crecimiento

de

Mycobacterium

tuberculosis.

[e] Medio Legionella => muestras de UCI; la Legionella pneumophila es bacilo Gram-(en
realidad, se tie muy mal, aerobio exigente, movil; en general, no fermenta ni oxida los azucares,
sino que utiliza los aminoacidos; es hipurato+ => un procedimiento cualitativo para
determinar la capacidad de las bacterias de hidrolizar enzimticamente (hipuricasa) el
hipurato sdico; necesita L-cisteina para crecer y tambin iones frricos Fe. La inhibicin del
crecimiento de las bacterias Gram+, la mayora de las bacterias Gram-, levaduras y mohos, a
travs de una combinacin optimizada de 3 antibiticos. Las colonias que crecen en medio Agar
Legionella y no crecen en medio AS deben considerarse, con alta probabilidad, colonias de
Legionella.

6. Cepillado bronquial (la muestra vendr en el cepillo y se conservara a 4C < de 24H);se

siembra en los mismos medios que en el caso anterior (esputo) aadiendo ademas: agar sangre
anaerobios (ASA) o medio AKV (agar sangre kanamicina-vancomicina), selectivopara bacilos
Gram-

anaerobios

Bacteroides (bacilo

Gram-,

anaerobio

estricto).

7. Exudado faringeo y oral (la muestra viene en torunda, se sembrara por agotamiento en
cuadrante).
[a] Agar sangre => crecera todo tipo de grmenes (medio general enriquecido)
[b]

Agar

chocolate =>

crecera

todo

tipo

de

grmenes

[c] Agar Mac Conkey => creceran las Enterobacterias y otros bacilos Gram- poco exigentes.
[d] Agar CNA /agar sangre (de cordero) colistina nalidixico, medio selectivo para Gram+/
inhibe los Gram- => para deteccion de Streptococcus B-hemoliticos, Enterococcus y
Staphylococcus??
[e]

Agar

Sabouraud (solo

en

orales)

=>

deteccion

de Candidas

spp.

8. Exudados varios - abscesos heridas ... (se sembrara por agotamiento en cuadrantes. La
muestra

ha

de

[a]

Agar

llegar

en

tubo

sangre =>

[b]

estril

y se

crecer

Agar

conservara
todo

4C

tipo

chocolate =>

menos

de

24H.

de

grmenes
idem

[c] Agar Mac Conkey => crecern las Entero-bacterias y otros bacilos Gram (-) poco
exigentes.
[d] Agar CNA /agar sangre (de cordero) colistina nalidixico, medio selectivo para Gram+/
inhibidor

Gram- =>

crecern

bien

los Steptococcus

B-hemolticos.

[e] Agar ANA (agar sangre anaerobios/ASA, aunque tambin puede utilizarse agar AKV, agar
sangre kanamicina y vancomicina) => medios selectivos para bacilos Gram- anaerobios
(estrictos)

y Bacteroides.

[f] Caldo Tioglicolato => crecen bien todo tipo de bacterias aerobias o anaerobias; permite el
desarrollo de una amplia variedad de microorganismos, incluidos los nutricional-mente
exigentes. Adems, se observa que las bacterias estrictamente aerobias, crecen en la parte
superior, mientras que las anaerobias facultativas o anaerobias estrictas crecen en las
profundidades del medio.

RELACION DE LAS BACTERIAS CON EL OXIGENO EN TIOGLICOLATO En base a la

relacin

de

las

bacterias

con

el

oxgeno,

estas

se

pueden

clasificar

en

1. Aerobio estricto: Un organismo el cual requiere utilizar el oxgeno como aceptador

terminal de electrones , puede tolerar un nivel del oxgeno equivalente o mayor de una atmsfera
de aire (oxgeno del 21%), y tiene un tipo terminantemente respiratorio de metabolismo
(Mycobacterium

tuberculosis,

Bacillus).

2. Anaerobio o Aerobio facultativo: Un organismo que puede crecer bien en ausencia del
oxgeno y en la presencia de un nivel de oxgeno equivalente a una atmsfera del aire (oxgeno de
21%)

=> Enterobacterias,

Vibrio

spp,

Haemophilus

spp..

3. Microaeroflico (anaerobio aerotolerante): Un organismo que es capaz de un crecimiento

oxgeno-dependiente, pero no puede crecer en la presencia de un nivel del oxgeno equivalente a
una atmsfera de aire (oxgeno de <21%) => Campylobacter fetus, Pseudomonas y
Neisseria.
4. Anaerobio estricto: Un organismo que es incapaz de crecimiento oxgeno-dependiente y
no puede crecer en la presencia de una concentracin de oxgeno equivalente a una atmsfera de
aire

(oxgeno

de

21%

nada

de

O2).

(Clostridium

botulinum).

5. Anaerobios aero-tolerantes: Pueden crecer con o sin oxgeno pero su metabolismo

es

siempre

fermentativo

(Lactobacillus)

9. Liquido cefalorraqudeo - se siembra por agotamiento en cuadrante del sedimento del

tubo centrifugado a 1500 rpm a 3000 rpm durante 20 minutos, si en el tubo hay mas de 1 ml de
muestra. Sino, vortear el tubo. La muestra se ha de procesar de inmediato y si no es posible,
conservarse

37C.

[a] Agar sangre => buscamos Neisseria meningitidis, como pequeas colonias no
hemolticas y al fresco se ve como diplococos, Gram-, oxidasa (+), catalasa (+), fermentador de
glucosa y maltosa (la fermentacin de este azucar le diferencia del gonococo; tambin puede
crecer Streptococcus pneumoniae (neumococo) que aparecen como colonias verdosas (Alfa
hemolisis)

al

fresco

como cocos

Gram+,

catalasa

(-),

sensible

la

optoquina.

[b] Agar chocolate => dem y ademas pueden crecer Haemophilus spp como colonias
puntiformes translucidas, que al fresco aparecer, como coco-bacilos, Gram-, catalasa y oxidasa
variable.

[c]

Agar

Thayer-Martin =>

medio

selectivo

para Neisserias,

meningococos
[d]

Medio

(f)

crecern

bien

los

/N.meningitidis.
tioglicolato (caldo)

Ademas

se

=>

har

medios

para

anaerobios

una

extensin

aerobios.

para

Gram.

10. Otros lquidos estriles (sinovial, pleural, pericardio...) - se siembran por agotamiento; la
muestra ha de llegar en tubo estril y su conservacin no se ha de demorar mas de 24H a 4C.
[a] Agar sangre => crecern casi todo tipo de microorganismos, con caractersticas
hemolticas

de

algunos

de

ellos.

[b] Agar chocolate => crecern casi todo tipo de grmenes, sobre todo exigentes.
[c] Agar McConkey => crecern Enterobacterias y otros bacilos Gram- poco exigentes.
[d] Agar CNA => agar columbia colistina nalidixico (sangre de cordero), selectivo para Gram
(+)
[e] Agar ASA => agar sangre anaerobios selectivo para bacilos Gram- anaerobios
yBacteroides.
11. Cateteres y sondas - se siembra mediante la tcnica de Maki (rodamiento del cateter)
[a] Agar chocolate => crecern casi todo tipo de grmenes, y podrn crecer bien algunos
exigentes

como

el

Haemophillus.

[b] Agar sangre => crecern bien casi todo tipo de grmenes y podr verse sus caractersticas
hemolticas

si

las

tuvieran.

[c] Caldo tioglicolato => si se observa crecimiento se har un pase por Agar chocolate.
[d]

Tambin

puede

ponerse

en

una

placa

de

agar

MacConkey.

12. Hemocultivos - la muestra se introduce en el vial de hemocultivos, conservando a 37C en

el Bactec (detecta CO2) hasta su identificacin.

Tema 6 - Medios de Cultivo en bacteriologa

clnica (Clasificacin y Preparacin)
Medios de cultivo - compuesto por distintos nutrientes requeridos para cultivar grmenes
como las bacterias, hongos y parsitos segn sus necesidades nutricionales de cada uno; en
funcin de sus requerimientos, existen grandes diferencias entre los medios de cultivo que nos
sirven para diferenciar cada tipo de microorganismo que podr crecer en unos medios de cultivo
y

no

Funcin
-

separar

en
de

aislar

distintas

otros.

medios
especies

microbiales

presentes

cultivo:
en

una

muestra.

- paso previo para el estudio de identificacin de un microorganismo problema.

- conocer el metabolismo en funcin del nutriente o sustrato que utiliza (lactosa) o metabolito
que

produce

(indol).

- estudios macroscpicos => visualizar las caractersticas de las colonias en medios slidos.
- realizar antibiogramas determinando la sensibilidad (mayor/menor) de la bacteria problema a
distintos
-

antibiticos.

pruebas

de

conservar

CMI
las

(concentracin
especies

minima

microbiales

inhibitoria)

muestras.

Requerimientos energticos y no energticos de los medios de cultivo - fuente de

energia (fuente de carbono y de nitrogeno) y fuente no energtica (azufre, fsforo, iones
metlicos, factores de crecimiento, f. de arranque y inhibidores) necesarios para el desarrollo
(crecimiento) de cultivos microbiales; fuente de carbono => acido acetico, alcohol, citrato sdico,
azucares (mono o disacridos incluso almidn => glucosa, lactosa, maltosa), CO2 (bacterias
fotosintetizantes y quimiolitotrofas); conocer el tipo de azucar utilizado => til para su
identificacin bioqumica y clasificacin taxonmica; fuente de nitrgeno (menos energtica) =>
protenas completas (gelatina - determinar actividad proteoltica/gelatinasa; extractos de carne y
sales de amonio), pptidos/polipeptidos (peptonas - extractos de levadura, casena - trpsica de
casena/triptfano => formacin de indol) o aminocidos y otros => nitratos, nitrogeno
organico, amoniaco, sales de amonio, aminoacidos; conocer la fuente nitrogenada => util
para clasificacin taxonmica; fuente de azufre => sulfatos, tiosulfatos, aminoacidos (metionina,
cisteina, tiamina); fuente de fosforo => fosfatos; iones metalico => hierro, potasio, sodio,
magnesio y en concentraciones mas bajas
Otros

=> cinc, manganeso, cobre, cobalto, etc;

requerimientos

no

energticos:

Factores de crecimiento => componentes que muchas bacterias no son capaces de fabricar
por si solas para su crecimiento (aminocidos => cisteina; factor X y factor V procedente de
la degradacin Hb; vitaminas, bases puricas y pirimidicas); factores de arranque =>
sustancias que permite a la bacteria salir de su fase de latencia y comenzar su fase de crecimiento
exponencial

(fuentes

de

energa

=>

glucosa;

iones

metlicos

que

estimula

el

crecimiento); factores inhibidores => componentes que bloquar el proceso metablicos de

algun microbio; muy tiles para la identificacin y tipificacin bioqumica de las bacterias
(azida sodica => impide Gram-; antibiticos => inhibidores y destructores; colorantes laeosina
azul de metileno utilizado por medio Levine; cristal violeta en medio Mac-Conkey => impide
Gram+).
Condiciones

que

ha

de

cumplir

un

medio

de

cultivo:

1. Una composicin de nutrientes adecuada (requerimientos energticos y no energticos)

2.
- Temperatura

Condiciones

fsico-qumicas

optima/ideal (segn la

especie

apropiadas:
microbiana

=> psicrfilas <20C;mesfilas 18-45C; termfilas > 45C; las bacterias patgenas del hombre

35-37C;

fuera

de

estas

no

crecen

e.j.: Yersinia 22C, Campylobacter 45C

- Grado

de

(los

humedad (cantidad

de

agua

crecen

mucho

mas

dos

son

gastrointestinales)

que

necesita

despacio;)

para

crecer)

- pH adecuado es en general cercano a la neutralidad +/- 7(estabilizante de pH => buffers o

tampones que facilitan el crecimiento); pH acido => Tiobacilos (cerca a 0); pH alcalino =>
bacilos

ureasa

positivo/ Proteus (en

- Presin osmtica en

torno

8)

y Vibrio

cholerae (pH

general isotnia (300

9)

miliosmoles)

- Presencia o ausencia de oxigeno; la mayora de las bacterias aerobias y anaerobias son

facultativos que se desarollan bien con y sin O2; existen pocos anaerobios estrictos; bacterias
microaeroflica

=>

Principales

produce

tipos

- segn su proporcin de

de

agua

mas

medios

su

consistencia

CO2.

de
(slidos,

cultivo
lquidos,

caldo)

- segn su uso / su utilizacin (para aislamiento, crecimiento en general /recuento,

identificacion,

mantenimiento

de

cepas,

para

antibiogramas)

- segn su origen del que proceden (naturales, sintticos y semi-sintticos, complejos)

- segn su presentacin (deshidratados
tubo, lquidos en

tubo,

Medios

liofilizados, slidos en

semi-slidos en

de

tubo,

doble

placa

fase

en

petri, slidos en

frasco

cultivo segn su proporcin en

tubo).
agua:

- Medios slidos > 15% de agar; para aislamiento, identificacin, elaboracin de

antibiogramas) =>1881 Koch utiliza la gelatina (inconveniente => se funde a 24oC y existen
bacterias gelatinasa positiva que destruiran tal medio); posteriormente Hesse su alumno usa el
agar (medio

inerte).

- Medios lquidos/caldos => contiene agua, fuente de carbono, sales minerales y algunos
lleva

factores

- Medios

de

crecimiento,

semisolidos =>

Medios

de

agar

vitaminas,

peptonas

semi-slidos

cultivo segn su

(<5%
uso

y aminocidos.
de

agar)

o utilizacin:

- Medios para aislamiento => {a} medios enriquecidos (componentes basicos + caseina soja,
triptofano

para

microorganismo

exigente;

e.j.

agar

sangre/chocolate

{b} medios

selectivos (componentes basicos + componentes que impiden el crecimiento de algn tipo

bacteriano

para

seleccionar)

e.j.

medio Rothe (para

aislar Streptococcus

faecalis /Gram+)contiene azida sdica que impide Gram-; la mayoria de medios selectivos son
tambin medios diferenciales {c} medios diferenciales (= medios selectivos + sustancias resalta
las caracteristicas microbiales de algunas; e.j. medio Levine (contiene eosina y azul de
metilenoque inhibe Gram+ y algunas Gram-, facilita a las enterobacterias y lactosa (para las
fermentadoras)
- Medios para crecimiento en general => liquida o solida sirve para el crecimiento de la
mayor parte de las bacterias (componentes basicos + sales y agua) ; e.j. el caldo comun (contiene

extracto de carne, peptona, glucosa, cloruro sodico y agua); el caldo Tioglicolato.

- Medios de identificacin (= medios diferenciales) => sirve para clasificar taxonmicamente el microoganismo; e.j. agua peptonada = indol positivo; caldo Stuart urea-indol = ureasa;
glucosa

fermentacin

de

glucosa

(sacarolitico

sacarosa

positivo).

- Medios de mantenimiento de cepas => mantener las cepas vivas durante periodos de
tiempo relativamente largos a temperaturas bajas para impedir su crecimiento; e.j. leche
descremada

congelada

- Medios

para

antibiogramas;

e.j. Proctor (antibiogramas

Hinton(a.b.bacterianas), Wilkins-Chapman (a.b.

Medios

fungicas), Mueller

bacteriana

de

anaerobicas).

cultivo segn su

origen

- Medios naturales => poco utilizados, se preparan artesanalmente, constituidos por ciertos
tejidos,

liquidos

organicos (leche,

huevo,

patata,

suero

sanguineo)

- Medios semi-sintticos => parte de su composicion son extractos naturales (levadura,

malta,

patata,

sagre,

leche) +

constituyentes

sintticos

- Medios sintticos => estructuras sintticas mas o menos puras y qumicamente definidas
disueltas en agua destilada (los mas utilizados en bacteriologia y en general); contiene: fuente de
carbono o azucar, fuente de nitrgeno inorgnica como iones NO-3, NH+4 o orgnica como
peptona, aminocidos, aminas, etc., compuestos minerales como oligoelementos, factores de
crecimiento

(vitaminas,

aminoacidos,

bases

puricas

pirimidnicas).

- Medios complejos => son los primeros que se utilizaron en bacteriologa; en actualidadse
uss mas en parasitologa y virologa; se preparan de forma compleja (tejidos animales/carne de
musculo,

higado,

Medios

corazon,

de

yema

de

huevo,

cultivo

Medios

segun

Medios
Medios

pepetonas,
su

deshidratados

azucares,

etc.

presentacion

liofilizados

ya
solidos

vegetales,

preparados

en

placa

Petri

Medios

solidos

en

tubo

Medios

liquidos

en

tubo

Medios
Medios

Principales

semisolidos
de

medios

doble
utilizados

en
fase

tubo
en

en

frasco
microbiologa

1. Agua peptonada (peptona en medio acuoso con pH 7 a 37C 24-48 horas) => determinacin
de la produccin de indol debido a su alto contenido en triptfano; tras laadicin de 5/6 gotas de
reactivo Kovacs en hidrxido potsico (KOH 40%) => anillo rojo en la superficie indicara indol
positivo.

2. Medio

Chapman (selectivo

diferencial)

=>

aislamiento

de Staphylococcus (halfilos)S.aureus (coagulasa+); Comp: alto contenido de cloruro sdico 75

gr (agar manitol salado); 15 gr de D-manitol (diferencial => azucar utilizado por algunos
estafilococos), 25 gr de rojo fenol (indicador positivo de pH a 37C 24-48 horas => amarillo
dorado); es orientativa, se debe completar la prueba con pruebas bioqumicas (coagulasa/latex);
S.epidermidis no fermentan el manitol, por tanto el color sigue rojizo o purpureo.

3. Agar de Thayer y Martin (Agar New York City) => no permite el crecimiento de muchos
microorganismos, pero si permite aislar gonococos y meningococos (Neisseria); Comp: agar
chocolate/

sangre

calentado +

VCAT (vancomicina =>

/Gram-,anfotericina =>

formula

inhibe

los

polyvitex

(vitaminas

Gram+, colistina =>

antifngico, trimetropinsulfametroxazol =>

aminocidos)

inhibe

los coliformes

antibitico

de

amplio

espectro).

4. Agar chocolate Polyvitex => medio general enriquecidos donde crecen la mayora de
bacteria

y Haemophyllus);

Comp: agar

aminocidos) incluyendo factores

chocolate

(hemina)

formula

dinucletido) proporcionados por la hemoglobina y PolyViteX.

(NAD/

polyvitex

(vitaminas

nicotinamida

adenina

5. Medio base Christensen (lquidos y slidos) => para la prueba de la ureasa; ureasa+ de
rojo => rosa; grmenes con ureasa+ => Proteus y Helicobacter pilory

6. Medio citrato de Simmons (agar solido) => prueba de citrato (como fuente de energa)
para la investigacin de bacilos Gram- (la diferenciacin entre coliformes y coliformes fecales.
Los coliformes fecales (E.coli) no fueron capaces de utilizar el citrato como fuente de carbono ni
a las sales de amonio como fuente de nitrgeno. Los coliformes no fecales comoEnterobacter
aerogenes o Salmonella enteritidis podan utilizar el citrato en este medio dando una reaccin
alcalina); Comp: citrato sdico, azul de bromotimol (indicador pH, de que el citrato esta
consumido /se alcalina; verde => azul); grmenes con citrato permeasa =>Klebsiella
pneumoniae, Salmonella, Enterobacter aerogenes.

7. Medio Clark y Lubs (caldo/ liquido) => para diferenciar entero-bacterias medianteprueba
de Voges-Proskauer (produccin de acetona/ acetil metil carbinol => por reduccin a 2,3
butanodiol o por oxidacin a diacetilo); y prueba de Rojo de Metilo (acidificacin del medio
con pH

<4,5 y

cambio

de

color

rojo);

grmenes

con VP+ => Klebsiella

pneumoniae yEnterobacter aerogenes; grmenes con RM+ => Proteus, E.coli y Salmonella.

8. Medio

Cled/Cystine-Lactose-Electrolyte-Deficient (solido)

=> recuento

identificacin de grmenes en las vas urinarias; Comp: lactosa en alta cantidad, azul de
bromotimol (indicador del consume lactosa verde => amarillo); las colonias mas frecuente
=> E.coli (amarilla L+), Proteus (azul L-), Klebsiella (amarilla azulada y muy mucosa (L+),
Pseudomonas aeruginosa (verde L-), Streptococcus faecalis (amarilla L+), Staphylococcus
aereus (amarilla L+).

9. Agar sangre (se comercializa con nombre TSA => tripticasa, soja, agar) => investigacin de
microorganismos hemolticos (consume hemates); es un medio general enriquecida; Comp:
sangre de cordero (agar columbia) o caballo o ternero => estriles y desfibrinadas; alfa
hemlisis/ neumococo (parcial) => halo verdoso/difuso alrededor de la colonia; beta
hemlisis/ Streptococcus B-hemoltico y Staphylococcus aureus que causan anginas (total) =>
halo transparente; gamma hemlisis/ Pseudomona causa gastro intestinales (no hemolizar) =>
sin halo.

10. Medio eosina azul de metileno /EMB (Medio Levine) => selectivo y diferencial, para
aislamiento de entero-bacterias Gram- (E.coli, Enterobacter, Salmonella, Shigella, Proteus,
Klebsiella)

Comp: alto

contenido

de

lactosa (indicador

fermentadora), eosina

azul

de

metileno(indicador de pH y inhibidor los Gram+ y las floras de Gram- fastidiosas).

11. Medio de agar Hektoen (diferencial y selectivo) => aislamiento de entero-bacterias

patgenas

Gram-;

Comp: sales

biliares (inhibe

Gram+), lactosa (indicador

de

L+

=>

amarillo/naranja) sacarosa, peptona, tiosulfato sdico y citrato frrico amoniacal (indicador de

la produccin SH2/H2S => puntos negro), azul de bromotimol, fuschsina cida (indicadores de
pH); en condicin normal es verde => fermentacion de lactosa/acidificacin => vira a
amarillo/naranja

(caractersticas

de fermentadora

L+Escherichia,

Serratia,

Klebsiella,

Citrobacter, Enterobacter y Vibrio cholerae); cuando se consume lactosa + peptona (se acidifican
primero, y despus se basifican) => verde; cuando se consume azufre/ disulfurasas+ =>
precipita el hierro y la colonia se vuelve negro (caracterstica de Salmonella y Proteus vulgaris).

12. Medio Kliger o KIA (Kliger Iron Agar) => medio solido en tubo (color caramelo); muy
semejante y mas utilizado es TSI (triple sugar, iron) + 10 gr de sacarosa; muy utilizado para la
identificacin de entero-bacterias, pruebas de la lactosa, glucosa, gas y SH2; Comp: lactosa
(indicador de L+), peptonas, glucosa, citrato frrico amoniacal y tiosulfato sdico(componentes
para producir SH2), rojo fenol (indicador de pH); los grmenes productor deSH2+ => Proteus,
Salmonella y Citrobacter; los productores del gas CO2+ => Salmonella y Citrobacter y E.coli.

13. Medio MacConckey (color rosa) => aislamiento e identificacin de entero-bacterias

Gram-/ poco exigentes; Comp: sales biliares (inhibidor Gram+), lactosa (indicador L+), cloruro
sodico, rojo neutro, cristal violeta (inhibidor los cocos de Gram+); L+ (consumidor de lactosa)
=> rojo (E.coli y Enterobacter aerogenes), L- (no fermentador)=> Salmonella, Shigella y
Pseudomonas; Gram- exigentes => Neisseria, Haemophyllus.

14. Medio Mueller Hinton (general) => para la realizacion de antibiograma por el mtodo de
Bauer-Kirby

15. Medio Ornitina Movilidad/ MIO (preparado en tubo/ semisolido) => identificacin de
la movilidad bacteriana (entero-bacterias), capacidad para descarboxilar la ornitina (orinitina
descarboxilasa /est dada por un color prpura/ alcalinidad del medio y la produccin de indol
(al aadir reactivo de Kovacs); La movilidad se demuestra por un enturbiamiento del medio o
por crecimiento que difunde mas all de la lnea de inoculacin; el germen que da resultado
positivo de los 3 pruebas => E.coli.

16. Medio caldo F-Selenito (selectivo) => medio enriquecido con fosfato para el aislamiento
de Salmonella; Comp: selenito sdico (inhibidor de flora Gram+ y Gram- excepto Salmonella);
despus tambin se hace cultivo con agar SS.

17. Medio

agar

S-S (color

caramelo)

=>

aislamiento

de

las bacterias

patgenas

importantesSalmonella y Shigella; Comp: lactosa (indicador fermentadora de L), tiosulfato

sdico y citrato de hierro (indicador de SH2), sales biliares y verde brillante (inhibidor bacillos
Gram+), rojo neutro (indicador de pH); L+ (coliformes - E.Coli y Klebsiella) => rojas o
rosadas; L- y SH2- => incoloras (tpico de Shigella); L- y SH2+ con la precipitacin de hierro
=> negro (tpico de Salmonella).

18. Medio Agar XLD (agar xilosa-lisina-desoxicolato) => se utiliza para el aislamiento y
diferenciacin

de bacilos

entricos

especialmente Shigella (entero-bacterias

Gram-,

especialmente

patgenas);

del

gnero Salmonella y

Comp.: xilosa (la

fermentan

los entricos menos Shigella), sacarosa y lactosa, desoxicolato de sodico (inhibe Gram+); se
puede utilizar para la identificacin de lactasa+, lisina descarboxilasa+ => Salmonellaque
alcaliniza el medio y SH2+ (tiosulfato sdico + citrato de hierro amoniacal).

19. Medio

caldo

Columbia =>

caldos

para hemocultivos.

20. Medio Castaeda (caldo y solido) => bsqueda de grmenes Brucella, Vibrios y
Pasteurella en

sangre

(hemocultivos).

21. Medio de Lowenstein-Jensen (selectivo) => cultivo de Mycobacterium tuberculosis y

otras micobacterias; Comp: fcula de patata, verde malaquita => inhibidor de la mayora de
grmenes; la prueba se confirma con tincin de acido alcohol resistencia (Con la tincin de ZiehlNeelsen las micobacterias se observan como bacilos de color rojo); micobacterias patgenas
crecen muy lenta (+ 7 das); los niveles bajos de la penicilina y el cido nalidxicotambin estn
presentes en el medio de LJ para inhibir el crecimiento de Gram+ y Gram-, con el fin de limitar
el crecimiento => nico de micobacterias.

22. Medio Sabouraud => para el aislamiento e identificacin de hongos micelares y

levaduriformes.
23. Medio

Sabouraud

gentamicina

tetrazolium =>

para

el

aislamiento

e identificacinde Candida (levaduriformes); La gentamicina inhibe el crecimiento de la

mayora de las bacterias Gram- y Gram+.

24. Medio Schaedler con vitamina K3 (caldo o agar solido) => para cultivo deanaerobios
(estrictos y facultativos); La presencia de factores de crecimiento como el extracto de levadura, la
hemina y la vitamina K3 y la adicin de sangre de cordero permite el crecimiento incluso de las
especies

ms

exigentes.

El agente reductor (L-cistina) y la elevada concentracin de dextrosa en el medio favorecen el

crecimiento
de

especies

25. Medio

anaerobias
CPS

p.ej. Lactobacillus,

cromognico (agar/

Streptococcus,

solido)

=>

es

Clostridios

un

medio

de

Bacteroides.

aislamiento

de identificacin destinado a las muestras urinarias; permite realizar (1) el recuento

microbiano (mtodo de inoculacin estandarizado); (2) identificacin de: Escherichia
coli, Enterococcus del grupo D, KES (Klebsiella, Enterobacter, Serratia), Proteeae (Proteus,
Providencia, Morganella); la concentracin elevada de agar evita el crecimiento invasivo de
Proteus; el medio se inocua directamente a partir de la orina, respetando tcnicas adecuadas de
toma

de

muestras

su

transporte;

permite

la

identificacion

directa

de:

a. E.coli => coloracin espontanea (rosa a burdeos) de las colonias productores de Bglucuronidasa (B-GUR) y coloracin azul revelada por el reactivo indol cuando la cepa
genera triptofanasa.
b. Enterococcus y KES => coloracin espontanea azul-verde de las cepas que producen Bglucosidasa (B-GLU).
c. Proteeae => coloracin marrn revelada
genera triptfano desaminasa (sin

por

el

reactivo

reactivo

TDA cuando

la

cepa

es

incoloro).

Modo operativo - dejar atemperar las placas a temperatura ambiente; inocular la muestra con el
asa calibrada de 10ul => sumergir el asa en la orina, mantenerlo verticalmente; descargar el asa
al realizar una estra sobre un radio de la placa; realizar estras perpendiculares muy apretadas
sobre toda la superficie de la placa; incubar en la estufa con la tapa hacia abajo a 37C en
aerobiosis;

se

examinan

los

cultivos despus de

24

horas

Lectura

de incubacin.
e interpretacin:

Recuento - estimar la concentracin bacteriana comparando la densidad de las colonias

presentes sobre la mitad superior de la placa con la del esquema; <1000 (negativo), entre 1000 100.000

(dudoso),

mas

de

100.000

(positivo)

Identificacin -

observar

las

colonias

(1) Colonias de color rosa a burdeos o translucidas con centro rosa a burdeos=> presuncin de
E.coli; confirmar mediante una deteccin de indol (depositar una colonia sobre un disco de papel
previamente embebido de una gota de reactivo R1 del envase ID Indol TDA) => indol+ da
una coloracin azul (E.coli); la ausencia de color azul (indol-) se debe proceder a la pruebas de
API.
(2) Colonias de color azul-verdoso y observacin de cocos Gram+ mediante examen directo
=> Enterococcus; si no cumple esta condicin, se debe proceder a las pruebas de API.
(3) Colonias de color azul-verdoso y observacin de bacilos Gram- mediante examen directo
=> grupo KES; la identificacin se debe proseguir mediante pruebas bioqumicas (ureasa+ =>
Klebsiella; ornitina

descarboxilasa+ =>

Enterobacter; gelatinasa+ =>

Serratia).

(4) Colonias incoloras a marrn-anaranjado => efectuar TDA (depositar sobre algunas
colonias idnticas, una gota de reactivo R2 del envase ID Indol TDA), observar
la coloracin despus de unos 30 segundos => TDA+ da una coloracin marrn +/- oscuro;
efectuar indol => indol+ da color azul (Proteus, Providencia o Morganella); ausencia
de coloracin azul

es indol- (Proteus

mirabilis);

TDA-

da

una coloracin amarilla

la identificacin se debe proceder a las pruebas de API.

Tema 7 - Metodos de Siembra (cultivo de las cepas)

Sembrar - cultivar la muestra utilizando tcnica y medios adecuados para conseguir el objetivo
(identificar
Preparacin

el
de

microorganismo).

inculos (pequea

parte

de

muestra)

- Muestras viscosas o concentradas (anlisis cuantitativo) => suspender un cultivo joven y puro o
un producto patolgico (muestra biolgica) en 5 ml de solucin diluyente (caldo de cultivo, suero
fisiolgico

estril

agua

destilada

estril.

- Ajustar con la escala con un gradiente de turbidez (tecnica de Kirby-Bauer) => tubos
numerados como patrn de referencia segn la concentracin de microorganismos; se ajusta

mediante

comparacin

visual

aproximada

mediante

la

absorbancia

de

espectrofotometra;escala de Mcfarland => una serie de tubos con precipitacin blanco de

sulfato de bario por reaccin de acido sulfrico + cloruro de bario (escala 0,5 = 1,5 x 10.6/ml de
microorganismos en el inoculo; escala 1 = 3 x 10.6 /ml; escala 2 = 6 x10.6./ml.

Metodos

de

inoculacin

1. Metodos

de

aislamiento

siembra

de
-

microorganismos
inoculacin:

{a} En medio liquido; con asa => se sumerge el asa cargada en el medio y se agita; con pipeta =>
se vierte el contenido de la pipeta sobre el medio de cultivo y se homogeneiza; con escobilln =
con

asa.

{b} En

medio

solido (en

placa):

- Inoculacin previa al vertido en placa (tcnica de Barry - no se utiliza mucho) => 0,1 ml de
inoculo + 25 ml de medio cultivo => fundido/ atemperado a 45-55C para no esterilizar =>
homogeneizar

=>

verter

en

la

placa

de

Petri.

- Inoculacin sobre la superficie del medio solidificado (tcnica de Kirby-Bauer) => se prepara el
inoculo en un tubo estril; se introduce un escobilln estril impregnando; se elimina el exceso
presionando el escobilln con movimiento de rotacin contra las paredes del tubo; se siembra la
placa emplenando la tcnica de los tres giros distribuyendo uniformemente el inoculo; se deja
secar la placa 4-5 minutos en posicion semiabierta e invertida, quedando lista para ser utilizada
(en
{c} En

los
medio

antibiogramas).
solido (en

tubo):

- Siembra por estria en superficie inclinada => se toma la muestra con el asa /hisopo; se
introduce en el tubo que contiene el medio; desde el fondo y en progresin ascendente se desliza
el asa en movimiento de zig-zag (se utiliza para pruebas bioqumicas y renovar cepas).
- Siembra en picadura (para ver la movilidad de los grmenes en la zona de puncin + pruebas
bioqumicas) => se toma la muestra con la aguja o hilo; se punciona en el centro del medio
introduciendo la punta de la aguja hasta 2-3 mm del fondo del tubo; se extrae la aguja por la
misma linea que se introdujo; medio solido inclinado => puede realizarse tambien una siembra
en estra por la superficie del medio con la misma aguja; agar semi-solido => puede usar el asa
en lugar de la aguja.

2. Metodos de siembra - aislamiento (para obtener cepas puras/ bien aisladas) :

{a} Siembra en estria o zig-zag => se deposita el inoculo en el extremo superior de la placa; se
siembra con el asa o con hisopo, a partir del inoculo, con un movimiento en zig-zag cada vez mas
amplio de lado a lado de la placa; el estriado ha de hacerse sin presionar el medio, suavemente,
sin levantar el asa y sin flamearla; las colonias mas aisladas las obtendremos en la zona mas
distal

del

inoculo,

es

decir

al

acabar

la

siembra.

{b} Siembra en tres direcciones => se deposita el inoculo en el extremo superior de la placa
dejando deslizar hacia el centro para ello inclinaremos la placa (tambin se puede arrastras con
el asa); mediante asa o escobilln, haremos movmientos laterales de un lado a otro de la placa,
dejando las estrias muy juntas; giramos la placa 90 y realizamos la misma operacin, sin
flamear o cambiar de asa; volvemos a girar la placa haciendo lo mismo; al final nos queda una
placa muy bien tapizada. Se realiza en urinocultivos para el contaje de las colonias.
{c} Siembra en estra multiple => se deposita el inoculo en un extremo de la placa; con el asa se
reparte en varios tramos, siguiendo el borde de la placa; entre cada tramo se ha de flamear o
cambiar el asa; los segmentos seguidos describen un poliedro regular y el ultimo tramo se efectua
hacia

el

interior

en

el

que

se

obtendran

colonias

aisladas.

{d} Tcnica por agotamiento en cuadrantes (lo que usamos) => es muy similar a la anterior pero
sin flamear el asa y estriando mas los cuadrantes, aprovechando mas la placa.
{e} Tcnica de los 4 cuadrantes => se divide la placa en 4 cuadrantes (pueden rotularse por la
parte posterior); se deposita el inoculo en el extremo superior de uno de los cuadrantes y se
siembra en estra; sin flamear el asa, se realiza la misma operacion sucesivamente en los otros 3
cuadrantes; en cada uno de ellos se sembrara el inoculo que queda adherido al asa, tras la
siembra del anterior; en el ultimo de los cuadrantes sembrado, se encuentran las colonias
aisladas.
{f} Tcnica de los tres giros => se siembra en estra la mitad de la placa; flamear el asa; se gira la
placa 90, sembrando en estra la mitad superior de la misma; se repite la operacin, es decir se
ha de flamear el asa, se gira la placa y se estra; la colonia aisladas aparecer en la zona sembrada
en ultimo lugar.

Tema 8 - Caractersticas biolgicas de la bacteria

(Morfologa)
Bacterias - organismos unicelulares de tamao 0,2-2 um, relativamente sencillos, cuyamaterial
gentico

no

esta

rodeado

por

una

membrana

nuclear especial

(procariotas).

Estructura - constituidos por elementos obligados (presentes en todas las bacterias

eindispensables para su vida => pared celular, membrana plasmtica, citoplasma, ribosomas y la
regin nuclear); elementos facultativos (son elementos de supervivencia y virulenciaque
pueden estar o no presentes en la bacteria => capsula, flagelos, pelos/pilis, endosporas e
inclusiones citoplsmicas)

Pared celular - es el limite externo de la clula con estructura rgida, parecida a la pared celular
de las clulas vegetales; funciones => protegerse de cambios externos adversos,mantener la
morfologa de la clula, proporciona la resistencia a los antibiticos, dar un paso selectivo de
algunas sustancias, proporciona la especificidad de grupo y de tipo (clasificacin), implicada en
la patogenicidad; dar el color en la tincin de Gram, violeta oscuro => Gram+ y color rosa =>
Gram-.
Estructura y composicion de la pared celular - Gram+ => mono-estratificada y gruesa,
compuesta por mureina (peptidoglicano - mono-capa, 50% peso seco/mucha cantidad),
polisacridos, protenas y cidos teicoicos; Gram- => biestratificada y fina (1 capa es mureina
en poca cantidad y 2 capa formada por polisacridos protenas, fosfolipidos y lpidos, no tiene

cidos teicoicos); las bacterias que no son sensibles a la tincin de Gram => BAAR/ acido alcohol
resistentes (micobacterias); las que sin pared celular => los de genero mycoplasma/ patgenas;
la que tienen (formas S), pero la pierden (formas L).

Membrana plasmtica - estructura delgada que se extiende por dentro de la pared celular,
encerrando

al

citoplasma; funciones =>

acta

como barrera

selectiva,

interviene

en

ladegradacin de nutrientes y produccin de energa, en algunas se encuentran pigmentos y

enzimas para

la

fotosntesis;

estructura

y composicin =>

fosfolpidos,

protenas

glicolpidos; mesosomas => plegamientos hacia dentro de la membrana plasmtica, irregulares

(no existen en las celulas eucariticas), se encargan de dirigir la duplicacin del ADN bacteriano
y

realizar

la

respiracin.

Citoplasma - es todo lo que hay en el interior de la membrana plasmtica; funcin => engloba
los orgnulos celulares (regin nuclear, ribosomas, inclusiones/depsitos de reserva,
vacuolas); no

tienen

ni

aparato

mitocondria;composicion =>

80%

golgi,

de

agua,

ni

retculo

enzimas,

endotelial

iones

plasmtica,

principios

ni

inmediatos.

Regin nuclear - una zona en el interior del citoplasma donde se acumula el acido
nucleico;funciones => el acido nucleico transmite la informacin gentica de la clula sobre
estructuras y funciones celulares; estructura y composicion => es un ncleo difuso que contiene 1
molcula

ADN

bicatenario,

formando

cromosomas

(enroscada

en

forma

de

anillo); plsmidos => estructuras que pueden existir ademas de ADN cromosmico (formadas
por moleculares de ADN extra-cromosmico bicatenario, pueden estar libres o unidos al ADN
cromosmico /episomas), se replican independientemente, se transmite por conjugacin, portan
genes muy importantes que determinan la resistencia a antibiticos, tolerancia a metales txicos
y

sntesis

de

enzima.

Ribosomas - son orgnulos celulares muy abundantes (presentes en eucariotas y procariotas)

dan aspecto granuloso a su citoplasma; funciones = > sntesis de protenas;estructura y
composicion => en grupos de 3 o 4 unidos por un filamento de ARN mensaje (polirribosomas),
cada ribosoma tiene 2 subunidades de 30 y 50 Svedberg (velocidad relativa de sedimentacin),
procariotas

70S

eucariotas

80S;

comp:

60%ARNr

40%

protenas.

Elementos facultativos (algunos no tienen - variables) - son elementos de supervivencia y

virulencia
Inclusiones citoplsmicas - aparecen en el citoplasma y no tienen una estructura
uniforme; funciones => depsitos de reserva e intervienen en funciones de regulacin;
Tipos: (1) Grnulos de reserva => lipdicos, corpsculos metacromticos (fosfato inorgnico),
polisacridos (glucgeno y almidn), grnulos de azufre; (2) Vacuolas => acmulos de gases o
lquidos rodeados

de

membrana

(donde

se

fija

CO2).

Flagelos - largos apndices filamentosos frecuentes solo en los bacilos (su presencia es
rara);funciones => responsable de la movilidad (elementos patognico: facilitar la difusin de las
bacterias

membranas); estructura =>

traves
tres

partes

de

(filamento,

las

codo

corpsculo

basal); tipos =>montricas (1 solo flagelo en un extremo), loftricas (2 o mas en un

extremo), anftricos (un grupo de flagelos en un extremo y otro grupo en el otro
extremo), pertricos (flagelos

distribuidos

en

toda

la

superficie

de

la

bacteria);

Pelos /pilis o fimbrias - elementos rgidos constituidos por una protena (pilina); cortos, muy
numerosos,

distribuidos

sobre

la

superficie,

mas

frecuentes

en

Gram-

que

en

Gram+;funciones => capacidad de fijacin a superficies (pelos comunes), proporcionan pelos

comunes y sexuales (son morfolgicamente iguales), sistema de intercambio de informacin
gentica

por

conjugacin

(pelos

sexuales).

Endosporas - solo en bacilos (Bacillus aerobio estricto y Clostridium anaerobio estricto); una
forma de resistencia que adoptan algunas bacterias ante situaciones adversas (deficiencia
nutricional, desecacin, frio, temperaturas elevadas, agentes qumicos); se forman por un
proceso de esporulacin /esporognesis, pueden permanecer latentes durante cientos de aos y
volver a una forma vegetativa por un proceso germinacin; localizacin => zona central,
subterminal o terminal (depende de su tamao, pueden o no deformar el bacilo); la
espora=> clula en reposo con capacidad de resistencia a la desecacin, calor y agentes
qumicos;esporulacin => la produccin de estructuras, enzimas y metabolitos nuevos y la
desaparicin de muchos componentes celulares; Morfolgicamente comienza con el aislamiento
del ncleo y elementos energticos mediante el crecimiento en vaginante de la membrana; los
elementos esenciales para la vida quedan protegidos en esa nueva estructura (endosporas); la
bacteria queda en estado latente esperando una condicin externas favorables para resurgir.
Capsula - estructura que rodea la pared bacteriana; se visualiza con tincin negativa (tinta
china); funciones => regula el intercambio de agua, iones y nutrientes, sirve como almacn
externo

de

nutrientes, defensa

frente

Acs,

fagos

y celulas

fagocticas (elemento

virulencia),protege de la desecacin (contiene agua), formacin de colonias (habitualmente

engloba mas de una bacteria); estructura y composicin => polisacridos y protenas.

Tamao y Morfologa de las Bacterias - 0,2 - 2 um; es preciso utilizar el microscopio

ptico; la morfologa => informacin primaria sobre el tipo de bacteria, pero no de forma
concluyente (viene dada por la rigidez de la pared; formas => esfrica/coco, coco-bacilo,
bastoncillo/cilndrica/bacilo, helicoidal/espirilo, en coma/vibrio, espiral/espiroqueta, estrella y
cuadrangular /forma de hifas de hongos (actinomyces/ streptomyces - productor de muchos
ATB,

ATF

inmunosupresores); agrupacin

de

los

cocos => aislados,

en

parejas/diplococos (granos de cafe - tpico de neisserias/meningitis), en cadenas/estreptococos,

tetradas o tretacocos (4 celulas => micrococcus/micrococacceae), en racimos/estafilococos, en
formas cubicas de 8 elementos/sarcinas (sarcinas ventriculi - tolerancia al medio cida/
estomago); agrupacin

de

los

cadena/estreptobacilos,

algunos

bacilos => aislados,

se

parecen

en

parejas/diplobacilos,

cocos/cocobacilos(E.coli),

en
en

forma empalizada/letra china (corynebacterium - algunos son saprofitos de la piel y tambin

causante
Aroma

de
tpicos => Pseudomonas

difteria).

aureginosa (olor

a jabn); Haemophyllus (olor

asemen/yeso); Citrobacter (olor a ftido); Proteus (olor a amoniacal); Klebsiella y E. coli (olor
a levadura de pan).

Tema

10

Fisiologa

de

las

bacterias

Morfologa macroscpica - estudio de la forma y estructura de las colonias (masas

constituidas por muchos millones de bacterias, se aprecian a simple vista y originadas a partir de
una bacteria en el medio solido); reconocible en funcin de => 1. caractersticas o tipo de medio

de cultivo solido donde se ha desarrollado (un microorganismo puede dar lugar a distintos tipos
de colonias) 2. tipo de microorganismo (mayor movilidad => colonias extendidas y planas); la
verificacin de las colonias (siempre en medios slidos sembrndolo por estra) => en placa y en
tubo
Las

con
colonias

en

agar
placa

inclinado.

sembrndolo

por

estra

El tamao y el aspecto de cada colonia son bastante constante para cada genero y especies, hecho
que se puede utilizar como caracterstica diferencial; tamao => 1-2 mm (E.coli); 4-6mm
(stafilococcus en agar sangre); extendidas en forma de velo invadiendo toda la superficie del
medio (Proteus en AS); puntiformes +/- 0,5 mm o inferiores (stafilococos en AS); forma =>
segn el espesor (planas, elevadas, semiconvexas, cncavas semicncavas, semiesfricas, en
meseta); segn los bordes (lobuladas, onduladas, rizoides, redondeadas, filamentosas,
especuladas); superficie de la colonia/ elevacin/ aspecto => lisa, rugosa (con capsulas),
plana, acuminada, umbilicada, mucosa, seca; consistencia de la colonia=> duras, viscosas,
mucosas, secas, muy secas, cremosas; transparencia y coloracin=> debido a la elaboracin
de algn tipo de pigmento, formacin de alguna sustancia por parte de la bacteria o la utilizacin
de algn sustrato del medio que se acidifique o basifique;la presencia o no de halos de
transparencia => generado por la prueba de la gelatinasa (+) en placa y tambin por la
actividad hemoltica de ciertas bacterias con hemolisinas (estreptococos hemolticos tipo alfa,
beta y gamma).

Las

colonias

en

tubo,

con

agar

inclinado

sembrndolo

por

estra

Las colonias presentan las mismas caractersticas que en placa, pero su visualizacin es mucho
peor (menor superficie); aspecto => filiforme, rizoide, arborescente, filamentoso, difuso, perlado,
equinulada, arrosariada.

Morfologa microscpica - estudio de la estructura fina de las bacterias

1. Estudio

de

oval/esfrica

=>

su

forma

coco/cocoidea;

como

clula

cilndrica/bastn

procariota

=>

bacilo;

individual:

espiral/helicoidal

=>

espirilo/sacacorchos /espiroquetas; filamentosa/forma de hifas de hongos => filamentosas

(actinomyces/ streptomyces), formas intermedias => vibrio, coco-bacilos; bacterias helicoidales
=> Borrelia (poca espiras y amplitud), Treponema (tiene mas espiras) y Leptospira (muy
apretadas

enroladas).

2. Estudio de su agrupacin bacteriana (no todas las formas bacterianas se agrupan, p.ej.
los espirilos y los actinomicetos) => los mas frecuentes son las formas cocoideas y las bacilares
son menos frecuentes; las cocoideas => diplococos (parejas /granos de caf => neisserias y
neumococos); estreptococos (paralelos/cadenas => streptococcus); tetradas o tretacocos (4
celulas

=>

micrococcus/micrococacceae);

estafilococos

(racimos

=>

staphylococcus/

micrococcus); sarcinas (cuboidales de 8 celulas o mas; sarcina ventriculi y tambin

stafilococcus); las

bacilares =>

irregulares/en

diplobacilos/parejas,

estreptobacilos/

empalizada/letra

TAXONOMA

cadenas

china

CLASIFICACIN

formas

(corinebacterium).

DE

LAS

BACTERIAS

La clasificacin definitiva de las bacterias esta aun por establecer; los que se utilizan actualmente
deben considerarse como provisionales o transitiva; la mas utilizada suelen ser recogidas de las
manuales BERGEY'S en la 9 edicin de Bergey's Manual of Determinative Bacteriology de 1994,
se

agrupan

las

bacterias

en

35

grupos,

situados

en

categoras

mayores:

1. Eubacterias Gram- (bacterias verdaderas) con 16 grupos; en esta categora se

incluyen a la mayor parte de las bacterias que provocan a la patologa humana.
Espiroquetas:
-

Familia Leptospiraceae (genero

Familia Spirochaetaceae (genero

- Leptospira)
- Borrelia,

Treponema)

Helicoidales /vibrioides aerobias - microaerfilas mviles (crecen mejor a bajas

presiones
-

de

oxgeno):

Familia Campylobacteriaceae (genero

- Campylobacter,

Helicobacter)

Bacilos y cocos aerobios - microaerfilos (crecen mejor a bajas presiones de oxgeno):

-

Familia Pseudomonadaceae (genero

Familia Alcaligenaceae (genero

- Pseudomonas,

- Bordetella)

=>

Stenotrophomonas)

bacilos

Familia Legionellaceae (genero

Familia Neisseriaceae (genero

coco-bacilos
- Legionella)

- Neisseria)

=>

diplococos

- Familia Moraxellaceae / Familia Branhamaceae (genero - Moraxella, Branhamella) =>

diplococos
Bacilos

Otros

generos
anaerobios

=> Brucella (cocobacilos)

y

facultativos:

- Familia Enterobacteriaceae (genero - Citrobacter, Enterobacter, Escherichia, Klebsiella,

Serratia,

Hafnia [coliformes] Morganella,

Proteus,

Providencia,

Salmonella,

Shigella,

Yersinia/peste)
-

Familia Vibrionaceae (genero

- Vibrio,

Aeromonas,

Plesiomonas)

Familia Pasteurellaceae (genero

- Haemophilus)

Otros

=> Gardnerella

Cocos

generos

Gram-

anaerobios =>

genero

- Veillonella

- Familia Rickettsiaceae (genero Coxiella, Ehrlichia, Rickettsia) - son parsitos intercelulares

obligados,

altamente

pleomrficas

cocos/bacilos/hilos

- Familia Chlamydiaceae (genero Chlamydia) - son parsitos intercelulares obligados de

forma

esfrica.

2. Eubacterias Gram+ con 13 grupos (17-29); en este grupo hay los que provocan patologia
humana

(la

Cocos =>
Bacilos

genero
esporulados =>

Bacilos

regulares

no

Bacilos

mayoria).

- Staphylococcus
genero

- Bacillus (aerobio)

esporulados =>

genero

irregulares

Streptococcus
y Clostridium (anaerobio)

Lactobacillus

no

Listeria

esporulados:

Familia Corynebacteriaceae (genero

- Corynebacterium)

Familia Mycobacteriaceae (genero

- Mycobacterium)

Micobacterias:
-

3. Micoplasmas (Mollicutes / bacterias sin pared) de 1 solo grupo (30); dentro de este
grupo,

los

que

provocan

patologa

humana

=>

genero Mycoplasma/ Mycoplasma

pneumoniae y Ureaplasma.
4. Arqueobacterias con 5 grupos (31-35); todas las bacterias de este grupo no provocan
patologia humanas (viven en las situaciones extremas => termofilas/ termogenas)
Taxonoma => la ciencia de la clasificacin que agrupa y separa los organismos de acuerdo con
su caractersticas fenotpicas, estructurales o genticas para facilitar su estudio; la misin =>
construir un esquema racional, para clasificar y nombrar los organismos; el sistema jerrquico
de la taxonoma se ha formado gradualmente a partir del sistema binomial / binominal / binaria
de nomenclatura genero y especie establecida por Linneo en 1758 (un botnico); la taxonoma no
es una ciencia esttico, goza de gran dinamismo y esta en la relacion con los avances de los
procedimientos empleada para su estudio; el termino de sistemtica se utiliza como sinnimo de
taxonoma; los grupos de taxonoma van de dominio - imperio - reino - tribu - divisin - clase orden

familia

genero

especie.

Para la asignacin de una bacteria, se siguen las normas recogidas por el cdigo internacional de

nomenclatura bacteriana y adquieren validez cuando ha sido publicado por el Intl Journal of
Systematic Bacteriology; bien en un articulo o bien dentro de los sistemas en las listas de las
bacterias aprobadas que incluyen sus nmeros; una especie bacteriana, viene definida por un
nombre

genrico

de

un

nombre

especifico

latinizado

helenizado

concuerdan

gramaticalmente; la inicial de genero va con letra maysculas y el de especie con minsculas;

tanto el nombre de genero o especie se escriben con letra cursiva/ italica o en su defecto,
subrayado; en la denominacin de un especie, la palabra que define genero puede ser abreviada a
su inicial seguida de un punto (p.ej. E.coli o E.coli); los nombres de las bacterias no se eligen de
manera arbitraria, sino que pueden ser descriptivos, p.ej. Staphilococcus aureus (cocos en forma
de racimos - dorados); o pueden dar homenaje a un autor p.ej. Pasteurella, Bacilo de Koch,
tambin puede dar referencia a un acontecimiento p.ej. Legionella; el nombre generico es nico;
para referirse a un especie o varios especies no determinadas su genero => E.spp/ sp; algunas de
las categoras taxonomia superiores, se forman aadiendo las palabras que las asignan distintas
terminaciones, p.ej. aceae; para el orden => ales (sufijo) p.ej. Mycoplasmatales; todas las
categoras

taxonoma

se

expresa

en

cursiva

FLORAS

itlica.

BACTERIANAS

Flora Normal de la especie humana => la poblacin de microorganismos comensales que

normalmente coloniza la piel y las membranas mucosas de las personas adultas sanas; la piel y
las mucosas colonizadas por microorganismos dinmicos => cambios cualitativos y cuantitativos
constantemente;

poblaciones:

1. La flora residente (FR) => un numero relativamente fijo de especies de microorganismos

(comensales y oportunistas) en una zona definida (si se producen alteraciones, suelen ser
temporales);

permanecen

intactas;

encuentran

condiciones

fisiolgicas

nutritivas

adecuadas; no es esencial para la vida, pero es normalmente beneficiosa (produce vitamina K en

el intestino y ayudan en la absorcin de nutrientes y impide la colonizacin de microorganismos
potencialmente

patgenos.

2. La flora transitoria (FT) => microorganismos no patgenos o potencialmente patgenos,

que colonizan la piel o las mucosas en periodo corto de tiempo; tiene poca importancia, pero si la
flora residente se altera, la flora transitoria puede multiplicarse y producir infecciones.
La supresin de FR => vaci ecolgico => ocupacin de microorganismos ambientales o de otras
zonas

de

cuerpo

=>

infecciones.

FR oportunistas => los que tienen acceso a lugares estriles; algunos ejemplos:
- Streptococcus viridans son comensales del tracto respiratorio superior y de la boca, si alcanza
el

torrente

sanguneo

=>

si

vlvula

cardaca

daada

=>

posible

endocarditis;

- Bacteroides son comensales del intestino grueso => si apendicitis perforada => posible
peritonitis

bacterimia.

- Infecciones de pacientes inmunodeprimidos por causas diversas (cncer, leucemias, linfomas,

SIDA)

- E.coli es comensal del colon => lugar estril (o no habitual) a traves de uretra => infeccin
urinaria
Las causas de las interpretaciones errneas => no se toma en cuenta al microorganismo
como patgeno o se le descarta (como mero contaminante); la omisin o inclusin de una
especie en una de las categoras no implica que no pueda ser aislada en otra zona del cuerpo o
que

en

Flora

normal

- Las

condiciones
de

especiales,

la

piel,

principales (en

boca

faringe

pueda

producir

enfermedad.

vas

respiratorias

superiores

epidermiditis (coagulasa-),Staphylococcus

traquea)

=> Staphylococcus

aureus (coagulasa+)

en

pequeas

cantidades, Micrococcus spp, Neisseria de especies no patgenas, Estreptococos A-hemolticos y

no

hemolticos,

las

anaerobias

facultativas, Candidas.

- FT/no residente se elimina o se disminuye => pH acido, los cidos grasos de las secreciones
sebceas, lisozima, el sudor y el lavado diario con jabones desinfectantes; se disminuye de forma
temporal

=>

la

repoblacin

es

muy

rpida.

- Al nacer => la boca y faringe son estriles; tras 12 horas => Streptococcus viridas (las mas
abundantes en la boca), posteriormente => estafilococos (S.epidermiditis), diplococos Gram-,
difteroides

(Corynebacterium); salida

de

dientes =>

espiroquetas

de Bacteroides,

Fusobacterium e Actynomicetes, vibrios anaerobios, Lactobacilos y levaduras; Adulto normal=>

las
-

principales
Los

bronquios,

Flora

(mira

bronquiolos

normal

alvolos

del

arriba!!)
suelen

ser

tracto

estriles.
intestinal

- Al nacer => estril, posteriormente => colonizado por microorganismos de los alimentos
dependiendo de la dieta (p.ej. la leche materna => Estreptococos y Lactobacilos y el bibern
=> flora

mixta con

menos

Lactobacilos)

- Adulto normal => el esfago contiene lo que previenen de la saliva y comida; en el

estomago hay poco (pH acido protegen la clera y salmonelosis - excepto Helicobacter pilorique
puede causar ulcera pptida, tiene ureasa que alcalina/neutralizar el acidez: degradar la urea =>
amoniaco); el intestino delgado superior contiene Lactobacilos y enterococos;intestino delgado
inferior (leon y ciego) contiene la flora fecal; el colon contiene >100 especies 96-99% anaerobios
facultativo y estricto => Bacteroides spp, Fusobacterium spp, Lactobacilos/ Bifidobacterium
spp,

Clostridium

spp,

cocos

Gram+

anaerobios

(Peptostreptococcus

spp).

- La utilidad/beneficio => sintetiza la vitamina K, transformacin de los pigmentos biliares

en

cidos

biliares,

absorcin

metabolismo

primario

de

nutrientes.

- La administracin de anti-microbianos orales => la posible proliferacin de cepas

resistentes

al

anti-microbiano

administrado

pueden

ser

diseminada.

- La administracin de ATB por va parenteral en una ciruga intestinal => necesario para reducir
al mnimo posible el numero de microorganismo, evitar trauma en el acto quirrgico y infeccin

peritoneal

Flora

normal

diseminada.
de

la

uretra

- Los mas frecuentes son estafilococos, enterococos, Corynebacterias, Neisserias no patgenas,

enterobacterias

(la

mayora

son

pobladores

de

la

piel

que

recubre

esta

zona).

- En los cultivos de orina, se deben limpiar con cuidado la zona perineal antes de tomar una
muestra.
Flora

normal

de

la

vagina

- Al nacer, esta colonizada por Lactobacilos aerobios (produce pH acido), posteriormente el pH

acido se convierte en neutro y aparece flora mixta de cocos y bacilos, hasta la pubertad.
- En la pubertad esta colonizada por Lactobacilos aerobios y anaerobios que produce cidos por
su metabolismo de hidratos de carbono => cambio a pH acido (proteccin a los otros
microorganismos

potencialmente

patgenos.

- En la mujer adulta esta colonizada ademas de los anteriores (Lactobacillus acidophillus aerobios y anaerobios), estreptococos anaerobios (hemoliticos o no hemoliticos) y otros; el moco
cervical

contiene

lisozima

con

actividad

bactericida.

- En la menopausia la flora vaginal cambia, aparece de nuevo una flora mixta de cocos y bacilos.
- La administracin de antibiticos de amplio espectro, puede eliminar las especies protectoras,
producindose una multiplicacin excesiva en la vagina de levaduras (candidas) u otras
causantes
Flora
Predomina

de
normal
los

de

difteroides

vaginitis.

la

conjuntiva

(Corynebacterium

del

xerosis), Staphylococcus

ojo

epidermidis y

estreptococos no hemolticos; pueden estar presentes otras especies; el control de la flora lo

ejercen las lagrimas, por su contenido en lisozima.

Tema 11 - Examen Microscpico (observacin de

microorganismos vivos)
Nociones

de

microscopia

(repasar

apuntes

de

curso)

Microscopio instrumento que permite amplificar la imagen de un objeto o de un ser pequeo

(micros: pequeo y scopein: ver); inventado 1610 por Galileo, el primer cientfico italiano
observando

el

exterior

de

una

abeja

Jansen,

el

holands.

Fundamento Si se sita entre el ojo y el objeto un sistema ptico capaz de aumentar el

angulo visual, se podr ver el objeto con mayor amplitud y claridad. El sistema de lentes produce una imagen aumentada de una muestra diminuta. El objetivo - pequea lente de
proyeccin que aumenta y proyecta la imagen primaria del objeto hacia el extremo superior del
tubo del microscopio (imagen area). El ocular (lupa) - aumentando la imagen area. La imagen

final - se forma en la retina del ojo. La imagen virtual (el ojo percibe la imagen final en el plano
virtual).
Aumento es el numero de veces que se ve el tamao de un objeto por encima de su valor real.
En el microscopio ptico compuesto, se calcula multiplicando el aumento individual del objetivo
por el aumento individual del ocular. Objetivo - x4, x10, x40, x100. Aumento ptico ocular - x5,
x10
Resolucin la capacidad del microscopio para mostrar los detalles ms finos de un objeto.
Poder de resolucin (limite de resolucin o distancia resoluble) la distancia minima entre dos
puntos que permite distinguirlos como tales (la capacidad de microscopio para distinguir 2
puntos

separados

aunque

estn

muy

prximos

entre

si).

Disminuir la distancia resoluble = aumentar el poder de resolucin = aumentar la apertura

numrica (AN) = disminuir la longitud de onda de la luz empleada = aumentar el ngulo alpha
en el espacio objeto = aumentar el ndice de refraccin (IR) en el espacio objeto (rellenar el
espacio existente entre la muestra y el objetivo con una sustancia de mayor ndice de refraccin,
como

aceite).

Numero de campo dimetro de la imagen observada a travs del ocular (en mm).
Profundidad de foco el espesor de la muestra que es posible tener enfocado por completo ><
aumento

AN

(apertura

numrica)

de

la

lente.

El contraste para mejorarlo, disminuye el cono de iluminacin (se controla mediante el

diafragma
Partes

de
de

apertura)
un

procedente
microscopio

del

condensador.

ptico

compuesto:

Parte mecnica sistema de soporte o esttico (pie, brazo, cabezal); sistema de ajuste (anillo
de ajuste de las dioptras, tornillo de fijacin del cabezal, tornillos reguladores de la platina,
tornillo de elevacin del condensador, tornillos de centrado del condensador, tornillo de
seguridad del condensador, control del diafragma de apertura del condensador, anillos de
enfoque macro-mtrico y

micromtrico,

control

de

ajuste

de

la

claridad/

la

luz).

Parte ptica sistema de iluminacin (fuente de luz - lampara halogena de intensidad

graduable; condensador - dispositivo que contiene una lente que concentra la luz, generada en la
lampara, hacia la preparacin; diafragma de apertura - el control adecuado del cono de
iluminacin que atraviesa la muestra y entra en el objetivo = se ajusta AN); lentes (objetivos generan imagen real, invertida y aumentada del objeto; oculares - captan la imagen formada por
el objetivo y la amplian)

Material necesario para la visualizacin microscpica portaobjetos esmerilado y

biselado, cubreobjetos 22x22, lquido de inmersin (se usa sin cubreobjetos) es imprescindible
cuando se observa muestra desecada con objetivo de 100x (tradicionalmente aceite de madera de
cedro,

actualmente

Tipos

aceites

sinttico)

de

microscopios:

Microscopio de campo oscuro si dentro de la muestra hay elementos transparentes, con

un indice de refraccin diferente al del medio que los circunda, la luz es difractada e incide sobre
el objetivo y pueden ser visualizados; permite la observacin de seres microscpicos
transparentes

no

teidos

(Treponema

pallidum

preparacin

en

fresco).

Microscopio de fluorescencia consta de una fuente de luz muy intensa (lmpara de Hg a

alta presin), emite una radiacin que puede incidir en la muestra desde abajo, tras atravesar un
condensador de campo oscuro (iluminacin transmitida); se emplea un tipo especial de liquido
de inmersin (glicerina); Tipos de fluorescencia: Fluorescencia primaria - fluorescencia natural
(auto fluorescencia) - vitamina A-tiamina, vitamina B-riboflavina; Fluorescencia secundaria colorantes fluorescentes: auramina (demostrar la presencia del bacilo de Koch en esputos),
naranja de acridina (detectar Gardnerella vaginalis en los exudados vaginales; Fluorescencia
terciaria inmunofluorescencia - fijacin del fluorocromo (colorante) como rodamina y
ficoeritrina

al

elemento

investigado

(a

traves

de

Ac

marcado).

Fuente de luz => Filtro primario => Muestra Fluorescente => Filtro secundario => Luz
fluorescente
de

exitacion

(UV)

Observador

Microscopios electrnicos de transmisin (TEM) una gran amplificacin y permite la

observacin de elementos que son demasiado pequeos como para ser vistos en un microscopio
ptico, pero no sirve para observar elementos vivos, a causa del vaco que ha de establecerse
dentro del tubo y es muy costoso (solo se usa en lab de investigacin). El poder de resolucion en
microscopio electronico es x1000 > que microscopio ptico; emplean electrones en lugar de unas
fotones; microscopio ptico < 200 nm - fotones: 400 - 700 nm longitud de onda.

Microscopio electrnico de barrido (MEB) no tiene tanto poder de resolucin como el

de transmisin, pero sin embargo, proporciona una enorme profundidad de campo y genera
unas imgenes que producen una gran sensacin de tri dimensionalidad. 1973 se comercializo el
3 modelo que une las caracteristicas de los 2 anteriores (la gran resolucion de los TEM y la gran
definicion

contraste

de

los

MEB.

Examen en fresco de bacterias vivas (Gota pendiente) - para conocer la movilidad y la

disposicin bacteriana en una muestra se debe observar los grmenes vivos a partir de cultivos
jovenes (lleva pocas horas), que permiten visualizar mejor su movilidad y su preparacin en
fresco.
Condiciones

que

de

cantidad

la

para

adecuada

recogida

distribuida

cantidad

cumplir

muestra

muestra

adecuadamente

debe

en

en

de

(ni

portaobjetos

agua

fin:

ni

poco)

mucho

condiciones

el

este
de

(amplia

esterilidad
y

homognea)

colorante

adecuada

- para la fijacin por calor => no debe calentarse demasiado (no quemar el dorso de la mano y la
gota

+/-consumida)

=>

para

hacer

tincion

- seguir el mtodo o tcnica adecuada, se trabaja con limpieza y orden, evitando cualquier
contaminacin.
Tcnicas para observar los microorganismos vivos - examen en fresco, entre
portaobjetos y cubreobjetos, sobre gota pendiente en porta excavado (no lo hacemos) y con
tincin

vital.

Examen en fresco - suspender el microorganismo en agua destilada o SSF colocandolo en un

portaobjetos y posteriormente visualizarlo por microscopio su morfologa (cocos o bacilos),
disposicin/agrupacin y motilidad; Material => portaobjetos, microscopio, portaobjetos
excavado, cubreobjetos, asa de siembra, mechero Bunsen o de alcohol (para flamear el asa de
siembra), muestra de microorganismo problema, agua destilada estril, vaselina (opcional).
Tcnica - Mtodo de examen en fresco entre portaobjetos y cubreobjetos:
-

preparar
depositar

portaobjetos
una

gota

de

cubreobjetos

agua

estril

limpios

en

el

desengrasados

portaobjetos

(50ul/lambdas)

- con el asa de siembra esterilizada por flameado, tomar un poco de muestra del microorganismo
y

suspenderla

en

la

gota.

- homogeneizar la muestra, colocar con cuidado sobre la suspensin un cubreobjetos, evitando

que

se

formen

observar

burbujas
al

de

aire

microscopio

al
con

caer

el

cubre

objetivo

sobre
de

la
40

suspensin.
aumentos.

Mtodo de examen en fresco sobre gota pendiente en porta excavado:

- colocar en el centro de un cubreobjetos una gota de la suspensin microbiana con una asa de

siembra
-

estril.

colocar

vaselina

en

los

bordes

del

pocillo

del

porta

excavado

- invertir el cubre sobre el porta excavado, colocandolo encima del rea cncava del portaobjetos.
- la vaselina adherir el cubre al porta formando una cmara evitando su evaporacin y
corrientes

de

se
observar

aire.

invertir
al

microscopio

la

con

objetivo

preparacin
de

40

aumentos.

Resultados - es importante no confundirlos con los movimientos brownianos que se producen

cuando se desplaza el medio liquido y hace que todos las bacterias siga dicha corriente en dicha
direccin;

el

sellado

con

vaselina

evita

este

problema.

Coloracin vital - es una tcnica intermedia entre los exmenes en fresco y las tcnicas de
tincin despus de fijacin previa???; consiste en teir las muestras bacterianas con colorantes
muy diluidos, permite al microorganismo acumular parcialmente dichos colorantes; la dilucin
debe ser muy altas para que no resulten toxicas para las bacterias, evitando la muerte de tales
grmenes; material => microscopio, asa de siembra estril, portaobjetos, cubreobjetos, mechero,
papel

de

filtro,

una

suspensin

de

muestra

problema,

aceite de inmersin, altas diluciones de colorantes para disminuir su toxicidad (rojo neutro en
solucin acuosa al 1:1.000 o 10 lambas : 10 ml y azul de metileno en solucin acuosa al 1:1.000 o
1:500).
Tcnica (se puede hacer igual como en fresco) - colocar sobre el portaobjetos limpio y
desengrasado una gota de suspensin muestra junto con otra gota del colorante diluido utilizado;
mezclar bien ambas gotas con el asa de siembra y colocar el cubre objetos con cuidado para
evitar que se formen burbujas de aire; observar al microscopio con objetivo de inmersin;
resultados => los microorganismos se visualizaran vivos y ligeramente coloreados de rojo, en el
caso de haber utilizado como colorante el rojo neutro o de color azul si se utiliza el azul de
metileno.

Tema

12

Las

tinciones

en

bacteriologa

La morfologa bacteriana (es incolora) puede ser estudiada por visualizacin de los
microorganismos => vivos sin teir (observar su posible movilidad) y teidos mediante
colorantes con una concentracin que matan la bacteria y no permiten observar su movilidad,
pero

mejora

Ventajas

notablemente
de

la

visualizacin
las

de

su

tcnicas

morfologa
de

estructuras.
tincin:

- observar mas adecuadamente su morfologa y permite diferenciar entre los distintos tipos
- dar informacin complementaria de sus estructuras internas y/o externas que no se observa en

fresco.
- al conocer sus caractersticas tintoriales, nos orienta hacia un grupo u otro en la clasificacin
bacteriana.
Factores

que

afectan

toda

tcnica

de

tincin:

- pureza del colorante (a + impurezas => + error y - calidad en la tincin).

-

concentracin

pH

del

del

colorante

(en

(valores

general

ideales

son

elaboracin
tcnica

lo

(material

temperatura

cantidad

0,2

entre

limpios

/vienen

seguir

los

6,8-7,4)

preparadas)

pasos

general

muestra

2%)

colorante

hacemos

(en
de

+/-

entre

del

(no

empleada

oscilan

neutro

conservacin

colorante

de

la

la

tcnica)
ambiental)

(representativa

homognea)

- realizar correctamente el frotis (fijarlo bien, en general por calor => coagula las proteinas
bacterianas, para que no se arrastre con el colorante mordientes y decolorantes)
- soluciones mordientes (ayudar a fijar el colorante a las estructuras microbianas, p.ej. lugol en la
Gram)
-

tiempos

de

tincin

(segn

el

colorante

que

usemos)

Principales tcnicas de coloracin - clasificacin de colorantes => [1] segn su origen

(naturales y artificiales) [2] segn su comportamiento qumico (cidos, bsicos y neutros).
Colorantes naturales - extrado de plantas como la hematoxilina (del tronco de una planta
que por oxidacin produce hematena; el azul de ndigo (de una leguminosa); extrado de
animales

como

el

carmin (de

una

cochinilla)

Colorantes artificiales - preparados artificiales y obtenidos de alquitrn de hulla(colorantes

anilina cidos, bsicos y neutros en forma de sales) p.ej. cristal violeta, violeta de genciana,
fucsina

bsica,

acido

pcrico,

azul

de

metileno,

etc.

Colorantes segn su comportamiento qumico - se unir de forma mas estable a la

estructura que tie, dependiendo de su estructura fsico-qumica; constituido por un anillo
bencnico que unen distintos radicales => radical cromforo; a+ numero de radicales => +poder
colorante

de

la

solucin;

[1] colorantes cidos o aninicos: la carga del radical colorante es (-) => colorantes
citoplasmticos que son bsicos (los componentes citoplasmticos captan muy bien los
colorantes

cidos)

=>

las

eosinas,

las

auraminas.

[2] colorantes bsicos o catinicos: la carga del ion cromforo es (+) => colorantes de la
zona nuclear que son cidas o ligeramente cidas => fucsina bsica, cristal violeta o violeta de
genciana,

azul

de

toloudina,

azul

de

metileno

las

tioninas.

[3] colorantes neutros: es una sal compuesta de un colorante acido y un colorante bsico =>
el eosina azul de metileno; es hidro-solubles (posee las propiedades de colorantes cidos y
bsicos).

[4] colorantes indiferentes: insolubles en agua y solubles en alcohol, no predomina ni la

carga+ ni (-), pero tampoco es de carcter neutro => colorantes de los lpidos como Sudan III,
Negro

Sudan,

etc.

En bacteriologa es frecuente la utilizacin de => fucsina fenicada, violeta de genciana, azul de

metileno (son colorantes bsicos) y de aadir un mordiente que ayude a fijar dicho colorante; los
colorantes cidos se utiliza como un contraste y los colorante neutros e indiferente como
coloraciones particulares; el proceso de tincin => reaccin de intercambio de iones entre
colorante y sitios activos de la superficie o del interior de la clula (los iones teidos/colorantes
reemplazan iones de los componentes celulares) y esto permite contrastar mucho mas el germen
con

respecto

al

medio

que

le

rodea.

Preparacin de un frotis - realizar una extensin y fijar la muestra problema para posterior
coloracin y visualizacin al microscopio; poner en un portaobjetos, a traves de un asa de
siembra una cantidad de microorganismo problema suspendido en medio liquido estril,
extendindolo adecuadamente hasta formar una fina pelcula homognea que posteriormente se
fijara generalmente con calor cuando sea requerido, segn el mtodo de tincin que se utilizara
posteriormente; material => portaobjetos, asa de siembra o platino, agua estril, muestra
problema; tcnica => pequea cantidad de la muestra liquida se deposita y se extiende
homogneamente en el centro del portaobjetos con el asa de siembra para tener una capa fina
(segn la viscosidad, se puede diluir con unas gotas de agua estril); si la muestra es solida (una
colonia), se deposita primero una gota de agua estril y se aade con el asa de siembra una
pequea cantidad de la colonia, se extiende homogneamente; dejar secar al aire; se fija
mediante el flameado (en algunos casos se podr hacer con alcohol) para coagular las protenas y
los
Tcnica

grmenes
de

quedan

adheridos

tincin

al

portaobjetos.

los

pasos:

-realizar un frotis y fijacin por calor (generalmente), con la intensidad de calor adecuada que
soporte

el

dorso

de

la

mano.

-coloracin segun el tipo de tincion (generalmente con colorantes basicos que tien estructura
acida)
-decoloracin que permite diferenciar distintos grupos bacterianos (genero Micobacterium son
resistentes a la decoloracion cida/BAAR); Gram- decoloradas con el alcohol 96/alcohol
acetonas,

alcohol

acido,

acidoclorhidrico

=>

micobacterias

-lavado siempre entre paso y paso con agua destilada para evitar interferencias entre un
producto

otro.

-coloracin de contraste (generalmente cido), se aplican al final para las estructuras

decoloradas
-observacin

con

el

decolorante,
al

p.ej.

safranina.
microscopio

Tipos

de

tinciones

bacterianas:

(1) Tincin simple => fijacin previa, se utiliza 1 solo colorante, permite la visualizacin de la
morfologa y la agrupacin bacteriana; clasificacin => tinciones simples con colorantes bsicos,
cidos y neutros; se basa en => la afinidad de los colorantes que suelen ser de tipo bsico (azul de
metileno, violeta de genciana, azul de toloudina => 1-2 minutos, dan color azul a las celulas o
fucsina

fenicada

diluida

=>

da

color

rojo

los

componentes

celulares.

(2) Tincin negativa => es un tincin simple (1 solo colorante => tinta china o solucin acuosa
de nigrosina al 1%) con diferencias que no necesita fijacin previa (no mata las bacterias),
permite observar caractersticas estructurales de la bacteria ademas de su morfologa sobre un
fondo oscuro, como es la presencia de capsulas p.ej. los neumococos; se basa en => colorante
acido cargado negativamente, los microorganismos no se tien (se quedan claros y brillantes
sobre un fondo teido oscuro); para obtener una capa fina (para dejar pasar el paso de luz del
microscopio y evitar a formarse grietas al secarse el colorante) se puede hacer una extensin con
el borde de otro portaobjetos; resultado => se observan las capsulas (si las tienen) en forma de
un halo mas claro que rodea el cuerpo de la bacteria.

(3) Tinciones diferenciales => fijacin previa (en general por calor), se utiliza 2 colorantes(el
ultimo es de contraste), permite visualizar su morfologa y caractersticas estructurales
(composicion de la pared bacteriana, su resistencia a la decoloracin cida (t.Gram y
t.ZhielNeelsen).
(4) Tinciones estructurales => fijacin previa (en general por calor), se utiliza al menos 2
colorantes, nos permite observar su morfologa y caractersticas estructurales como esporas,
flagelos,

cilios,

capsulas,

corpsculos

metacromticos

(utiliza

solo

colorante???).

Tincin diferenciales de Gram => descubierto en 1883 por Cristian Gram, cuando trabajaba
con material de biopsias y utilizada a partir de 1886 como tincin diferencial; es mas empleado
en bacteriologa, para clasificar 2 grandes grupos (Gram+ y Gram-); distinto comportamiento
debido a la distinta composicion de la pared de las celulas bacterianas; se emplea como el primer
colorante bsico (cristal violeta o violeta de genciana) que teir de color azul violeta todas las

bacterias, posteriormente un mordiente el lugol que aumenta la afinidad del primer colorante a
las celulas (lo fijara), finalmente un agente decolorante que decolora solamente un tipo de
bacterias (Gram-) que sern teidas con el colorante de contraste o segundo colorante (la
safranina) de color rosa-rojo; si se quedan con el color azul violeta sern Gram+.

Material de la tincin Gram => portaobjetos, pinzas de madera, asa de siembra, mechero de
Bunsen, pipeta Pasteur, asa de tincin (punte), frasco lavador, muestra problema, aceite de
inmersin,

colorantes

para

la

tincin

de

Gram.

Tcnica:
- realizar la preparacin de frotis => extender 1 gota de agua destilada estril + una colonia de la
bacteria
-

problema

fijacin

por

por

el

la

superficie

calor,

pero

de

no

la

quemar

portaobjeto
las

bacterias

- aplicar el colorante cristal violeta durante 1,5 minuto o violeta de genciana durante 2 minutos
-

lavar

abundantemente

con

agua

para

eliminar

el

exceso

de

colorante

- aadir un mordiente, el lugol durante 1 minuto (solucin iodoiodura de potasio con OH de 96

o

con

acetona

vuelve

decolorar

a
lavar

con

lavar
cubrir

el

5/1

o
con

solucin

con
agua

con

la

50%)

el

decolorante

abundantemente
portaobjetos

OH

exceso

(alcohol
con

safranina

durante

90)
agua

minuto

- lavar con agua para arrastrar los restos de colorantes y dejar secar al aire
-

observar

con

objetivo

de

inmersin

(100x).

Tincin de grmenes del acido alcohol resistentes (BAAR + criptococo)

A. Tincin

de

Ziehl-Neelsen

Este mtodo fue desarrollado por Ehrlich en 1882 trabajando con bacilo de Koch y mejorado
posteriormente por Ziehl-Neelsen; objetivo => diferenciar del resto, las bacterias tipos BAAR
(bacterias acido alcohol resistentes, p.ej. Mycobacterium), debido a su gran cantidad de
componentes miclicos (lipoideos y cereos/cera) que forman parte de la pared de este tipo de
bacteria (los colorantes convencionales no penetran en el interior de estas bacterias); De ah se
necesitan colorantes altamente concentrados y la presencia de calor que facilite su penetracin al
interior de dichas bacterias; una vez teidas, su decoloracin posterior no es posible (resiste
incluso a decoloraciones cidas); dicha tincin se emplea principalmente para el diagnostico y
estudio

de

enfermedades

como

tuberculosis

la

lepra.

Material => es el mismo que esta descrito en la tincin simple, pero en cuanto los reactivos: 1
colorante - solucin fenicada de fucsina bsica (carbo fucsina), 2 colorante de contraste solucin hidro-alcohlica de azul de metileno fenicado, 3 decolorante - alcohol acido al 3%(97%
alcohol).
Tcnica => preparacin de frotis y fijacin calor; cubrir el frotis con fucsina fenicada bsica 5
minutos aplicando en este tiempo calor, hasta la emisin de vapores, evitando que se caliente
demasiado o que se seque el colorante; lavar abundantemente con agua destiladahasta arrastrar
el colorante; decolorar con alcohol acido para arrastrar restos del colorante (10-30
segundos); lavar abundantemente con agua destilada; cubrir el frotis con colorante de
contraste /azul de metileno fenicado 30 segundos sin necesidad de calentar, para teir aquellas
bacterias que no son resistentes a la decoloracin (se han decolorado) y resaltar el color rojo de
los

BAAR+;

lavar,

secar,

rotular

observar

con

objetivo

de

inmersin.

Resultados => con el 1 colorante, BAAR- y BAAR+ (ambas) se tien de rojo; con el
decolorante, BAAR- se decoloran y BAAR+ no se decoloran; con el 2 colorante (de contraste),
BAAR- setien de azul y BAAR+ permanecen de color rojo/ acido alcohol resistencia+ (bacilos
Mycobacterium

algunos

Nocardia)

B. Mtodo de Kin Youw modificado (coloracin en fri) Reactivos => 1 colorante:

fucsina fenicada (con fenol) de KinYouw, decoloracin a 3%, 2 colorante: azul de metileno
fenicado (con fenol); tcnica => idntica, salvo para la fucsina de KY, dejamos actuar 5 minutos
sin calentamiento; existen otras tcnicas de tincin de los BAAR => tincin de auramina o de
rodamina
Tincin

que
de

usan

microscopio

espiroquetas

(para

de

fluorescencia.

las

espiroquetas)

Tincin estructurales => tincin de esporas, de flagelos, de cilios (similar a flagelos, pero corto y
se extiende por todo el cuerpo, como pilis), de corpsculos metacromticos y de capsulas.
Tincin especiales => tincin de auramina y de naranjo de acridina.

Tema 13 - Pruebas bioqumicas para la deteccin del

metabolismo hidrocarbonado de las bacterias.
Metabolismo - conjunto de reacciones qumicas que tiene lugar en las celulas vivas; necesitan
energa que se obtiene por oxidacin (perdida de electrones) de sustancias introducidas en forma
de alimentos; la gran mayora de las bacterias (hetertrofas) se nutren de sustancias orgnicas
que proceden de otros seres vivos y otras (auttrofas - cianobacterias) se nutren de sustancias
orgnicas que sintetizan ellas mismas a partir de sustancias inorgnicas; 3 etapas en
metabolismo =>
1-catabolismo/hidrlisis/degradacin de sustancias nutritivas => compuestos mas sencillos +
energa

en

forma

de

ATP

(adenosin

trifosfato)

2-anfibolismo/metabolismo intermedio del producto del catabolismo => compuestos de bajo

peso

molecular

3-anabolismo/metabolismo
macromolculas

biosinttico

/moleculas

de

complejas

sustancias

simples =>

gasto

biosntesis
de

de

energa.

Enzima - catalizadores biolgicos (protenas); cada enzima afecta solo a un sustrato especifico.
Reduccin =>

captan

electro

nes.

Catabolismo de hidratos de carbono - oxidacin de azucares para obtener la energa es muy

importante, aunque tambin se catabolizan lpidos y protenas; la 1 etapa de la degradacin de
la glucosa => oxidacin de esta para formar acido pirvico (gluclisis); 2 procesos => la
respiracin (necesita O2) o la fermentacin (no necesita O2); la gluclisis (no precisa O2) se
produce
1 va

en

glucoltico/

vas,
ruta

en
de

funcin

de

Embden-Meyerhof

la
Parna

dotacin

enzimtica.

(EMP) fue

descubierto

porPasteur => se obtiene 2 moleculas de ATP mediante fosforilacin por cada molcula de
glucosa que se oxida; este proceso se puede realizar en presencia o no de O2; a partir de la
formacin de acido pirvico, las bacterias que usan esta va, normalmente utilizan la va
fermentativa para acabar transformando este acido pirvico en cidos mixtos; degradacin/
hidrlisis de glucosa (6C) => acido pirvico + 2 ATP (fosforilacin) => cidos mixtos
(fermentacion); son 9-10 reacciones qumicas con un enzima diferente en cada una; utilizados
por las bacterias fermentadoras que poseen deshidrogenasas (Clostridium, Enterobacter,
Salmonella)
2 va de las pentosas fosfato /va fosfoglucnica (va HMP) - es una ruta mixta y va
alternativa; este ciclo rompe los azucares de 5 carbonos /pentosas y tambin glucosa,mediante
sucesivas reacciones y produce => pentosas intermedias (precursores de sntesis de cidos
nucleicos y ciertos aminocidos) de gran utilidad para las celulas; ademas de la gluclisis via
EMP, muchas bacterias utilizan HMP como una va alternativa para la oxidacin de la glucosa =>
produce acido lctico o acido mixto + 1ATP (p.ej.Enterobacterias/ E.coli); esta va es un hbrido
de la va ED y la EMP, ya que en las primeras etapas, la oxidacin de la glucosa es similar a la via
ED y en las etapas posteriores es similar a la va EMP, es decir: proporcionan a las bacterias no
oxidativas un medio de oxidar la glucosa a acido pirvico puro, porque no tienen las enzimas
necesarios para comenzar la va EMP, apareciendo en los sistemas analticos como
fermentadoras.
3 va de Entner-Doudoroff (va ED/ va aerobia => requiere O2) - es otra va por la
cual la glucosa se oxida a acido pirvico; por cada molcula de glucosa se producen 1 molcula de
ATP para ser utilizada por la clula en reacciones bio-sintticas; esta va requiere enzimas
especficos y solo los microorganismos que las poseen pueden utilizarla sin seguir la va de las
pentosas fosfato ni la gluclisis; los microorganismos que la utilizan sonPseudomonas y

Neisseria (aerobio estricto), por carecer de las deshidrogenasas necesariaspara oxidar el acido
pirvico al acido lctico u otros cidos; los hidrogeniones se transfieren al ciclo de Krebs y se
acabaran obteniendo agua; oxidacin de glucosa => acido pirvico + 1ATP (no producen acido
lctico

ni

acido

mixto)

Respiracin - es un proceso fosforilacin oxidativa de generacin de ATP y se caracteriza por el

aceptor final de electrones generalmente es una molcula inorgnica (O2); la glucosa se degrada
=> acido pirvico se sigue oxidando por la va de la respiracin o la fermentacin (en funcin del
sistema enzimtico que tienen) => ATP + CO2 + H2O; durante la respiracin, cualquier
molcula orgnica puede ser degradada /oxidada con un mayor rendimiento que en la
fermentacin.
Respiracin aerbica - cuando el aceptor final de Hidrgenos (electrones) es el O2; en la
respiracin, el acido pirvico producido por la gluclisis se escinde en 2 partes: una parte se
unen con CoA => forman acetil CoA que entra en el ciclo de Krebs donde se liberan electrones y
protones

(H+);

la

otra

parte

para

biosntesis???

Cadena de transporte de electrones (se encuentra en la membrana citoplasmtica de las celulas

procariticas y en las membranas internas de las mitocondrias en las celulas eucariticas) - los
electrones se mueven desde los coenzimas reducidos hasta una molcula inorgnica como O2 en
la respiracin aerbica o hasta una molcula inorgnica diferente del oxigeno NO3- ion nitrato,
SO2-4 ion sulfato, etc.; las moleculas transportadoras de electrones son 3 tipos =>
[1] flavoprotenas - realizan reacciones de oxidacin reduccin, [2] citocromos - protenas con un
grupo prostticos (Fe) en forma oxidada, [3] ubiquinonas o coenzima Q - transportadores no
proteicos

de

bajo

peso

molecular.

Respiracin anaerbica - cuando el aceptor final de electrones (H-) es una sustancia

inorgnica distinta del O2, tal como iones nitratos NO-3, sulfatos SO2-4, carbonatos CO2-3.
(Pseudomonas

Bacillus)

Fermentacin - proceso que se inicia a partir de acido pirvico formado en la gluclisis de

EMP /HMP, en cual el aceptor final de los electrones es un compuesto orgnico y no requiere
O2; caractersticas principales => (1) no precisa O2, pero se puede ocurrir en su
presencia, (2) no necesita el ciclo de Krebs ni cadena transportadora de electrones, (3) utiliza1
molcula orgnica como aceptor final de electrones, (4) libera energa a partir de azucares y
otras moleculas orgnicas (aminocidos, cidos orgnicos, purinas, pirimidinas), (5) libera
solamente 2 moleculas de ATP por cada molcula del sustrato inicial, (6) los productos finales
pueden ser acido lctico, etanol y CO2, acido propinico, acido actico, CO2 y agua, acido
butrico, etc. (compuesto orgnico); cuando el aceptor final de electrones es el lactato, se
producir acido lctico y en general cuando el aceptor final sean otras sales orgnicas, se
formaran cidos mixtos p.ej. acido succnico, que son responsables de la cada de pH en las
pruebas empleadas, para la identificacin bacteriana; ademas, las bacterias que tienen la

dotacin enzimtica apropiada, pueden seguir degradando estos cidos mixtos hasta CO2 y otros
compuestos orgnicos; es til el anlisis de los productos finales para identificar as los
microorganismos; la mayor parte de la energa producida en la fermentacin queda almacenada
en los productos finales; las fermentadoras => Streptococcus, Lactobacillus, Clostridium,
Escherichia,

Salmonella,

Enterobacter.

Prueba de la B-D Galactosidasa (ONPG) - se basa en la capacidad que tienen los

microorganismos de fermentar lactosa, mediante 2 enzimas => Lactosa Permeasa (esta en la
membrana celular y es capaz de transportar la lactosa a traves de ella) y B-D-Galactosidasa (esta
en el interior de la clula y es capaz de desdobla la lactosa en glucosa y galactosa).
Clasificacin de los microorganismos segun su capacidad de fermentar o no la
lactosa:
-

fermentadores

activos

de

lactosa

en

24

horas

(poseen

ambos

enzimas)

- no fermentadores de lactosa (carecen de ambos enzimas, no degradan la lactosa, no penetra en

la

clula)

- fermentadores tardos de lactosa (poseen el enzima B-D-Galactosidasa, permeabilizar la lactosa

ligeramente cuando la concentracin es alta en 2-15 das).

La aplicacin fundamental es la diferenciacin de Enterobacteriaceae =>Escherichia

(+) es fermentadora activo, Proteus (-) es no fermentadora y Klebsiella (+) es una fermentadora
tarda de lactosa, es decir lactosa (-) y ONPG (+); para detectar la enzima B-D-Galactosidasa =>
se utiliza un compuesto similar a la lactosa (orto-nitrofenol): al liberarse al medio alcalino por la
accin

de

BDG

produce

un

color

amarillo.

Material => 1 tubo de ensayos estriles, bao mara o estufa a 37C, asa de siembra, solucin
fisiolgica

esteril,

discos

de

ONPG,

microorganismo

problema

Tcnica => una suspensin densa (con muchas colonias) de un cultivo puro en 0,5 ml de suero
fisiologico estril se aade un disco de ONPG y mezclar durante unos segundos, incubar a 37C
durante

30-60

minutos

(en

general

se

vira

antes

de

30

minutos)

Resultados => en ONPG+ se produce una coloracin amarillo y en ONPG- no se produce color
(incoloro).

Tema 14 - Pruebas bioqumicas para la deteccin

del metabolismo proteico de las bacterias
Principal productor de energa => catabolismo de la glucosa y las oxidaciones de proteinas
y lpidos (estan relacionados entre si); la hidrlisis de protenas/ protena+agua (mediante
enzimas proteolticos extracelulares, secretadas por ciertas bacterias que sirve para su
tipificacin/tipacin) => polipptidos y aminocidos; las pruebas bioqumicas investigan
fundamentalmente la capacidad de un microorganismo de producir la hidrlisis de la
gelatina; catabolismo de protenas/ protelisis se realiza mediante proteinasas/proteasas y
peptidasas (desaminacin) para obtener => ion amonio NH4+ (+) acido orgnico; acido
orgnico entrar al ciclo de Krebs y ion amonio NH4+ es secretado de la clula .
Produccin de acido sulfhdrico - tcnica con indicador incorporado al tubo/a la placa =>
algunos microorganismos actan metabolizando protenas con aminocidos azufrados (cistina,
cisteina) y liberan azufre en forma de gas acido sulfhdrico SH2; el gas es detectado a traves del
medio que contiene fuente de hidrgeno (azucar) fuente de azufre(tiosulfato sodio, cistina,
cisteina) y un indicador de pH (sales de hierro /citrato frrico amoniacal) => un precipitado
negro); se observara la liberacin del gas SH2 por algunos microorganismo que poseen enzimas
desulfurasas (activada por la fermentacin de la glucosa => acidifica/produce cidos/baja el pH)
que actan sobre los aminocidos azufrados; la temperatura de incubacin (estufa) tiene que
oscilar entre 35-36C (superior a 37 se inhibira la produccin de SH2).

Material => tubo de cultivo (KIA/kliger iron agar y TSI/triple sugar iron), agujas y asas de
siembra, estufa de cultivo, muestras de problema; si se realiza en placa de cultivo (Hektoen y SS);
Tcnica => a partir de un cultivo puro y reciente de microorganismo problema se tomara una
muestra con una aguja; sembrar en picadura (tubo de KIA o TSI) o con agotamiento en
cuadrante

(Hektoen o SS); incubar durante 18-24 horas; si la tcnica se realiza

con Brucella(microaerofila),

se

debe

incubar

con

una

atmsfera

de

CO2.

Resultados => SH2 positivo (Salmonela y Proteus) se observa a lo largo de la linea de

inoculacin ennegrecimiento del medio; SH2 negativo (Brucella y Shigella) no se ennegrece el
medio.
Bacteria con enzimas desulfurasas (activada por la fermentacin de azucar) + indicador de
pH/sales de Fe + fuente de S + (H+) => H2S gas + indicador pH => precipitado negro insoluble/

puntos

negros

(FeS)

Prueba de las descarboxilasas - enzimas que actan sobre el grupo carbxilo de los
aminocidos Lisina, Ornitina, Arginina para formar => aminas (alcalinas) y se desprende
CO2 (el proceso se realiza en anaerobiosis) => se realiza mediante el sistema multiprueba (API buscar el cdigo en el libro); estas pruebas se aplican para la identificacin de
Enterobacteriaceas; se investiga la alcalinizacin del medio inicialmente de color purpura, se
observara el viraje del color del indicador del pH; la presencia del enzima investigado supondr
la alcalinizacin del medio (sigue el mismo color como el inicio); cada pocillo contiene indicador
de pH y amino acido correspondiente al enzima a investigar; cada descarboxilasa acta sobre un
aminocido especifico; en cada reaccin se desprende CO2 y se alcaliniza el medio:
-

L-lisina

L-ornitina

LDC/lisina

descarboxilasa

ODC/ornitina

=>

descarboxilasa

Cadaverina

=>

Putrescina

CO2

CO2

- L-arginina + ADH/arginina deshidrolasa => L-citrulina + NH3 (descarboxilacin) =>

Putrescina +CO2

Material =>

pruebas

de

API,

pipeta

Pasteur.

Reactivos => caldo de Moller para descarboxilasas (lleva pequea cantidad en su composicion
una pequea cantidad de glucosa, peptonas y los indicadores rojo cresol y purpura de bromo
cresol, pH6); aminocidos ensayados en forma L, muestra de problema y papel parafina.
Tcnica => se aade una gota del inoculo (suspensin microbiana) en cada pocillo de la prueba
de

API;

se

incuba

35C

durante

18-24

horas.

Resultados => durante las primeras horas de incubacin, el caldo vira a amarillo, por la
fermentacin de glucosa que lleva el medio; pero si el aminocido es descarboxilado, el pH
vuelve a subir, ya que se forma aminas alcalinas que es de color purpura (descarboxilasa+); si se
queda amarillo sera descarboxilasa-; grmenes con descarboxilasa+ (Escherichia no es 100%
descarboxilasa+

de

Lisina,

Arginina

Ornitina):

- Lisina => Klebsiella,

Serratia,

Salmonella

- Ornitina => Serratia,

Proteus,

Salmonella

- Arginina => Salmonella, Pseudomonas

Tema 15 - Pruebas bioqumicas para la deteccin de

la actividad enzimtica de las bacterias
Pruebas oxidasa - esta denominacin se le da de forma genrica al enzima citocromo
oxidasa que participa en la transferencia de electrones en la cadena respiratoria hacia el
oxigeno; oxidasa => enzima que cataliza la transferencia de electrones del sustrato al oxigeno;
los aerobios o anaerobios facultativos obtienen su energa por la respiracin y la almacenan en
forma de ATP, el oxigeno es reducido a partir de un sustrato orgnico que procede de la nutricin
con la intervencin de un sistema de transporte de electrones denominado cadena
respiratoria, producindose agua o perxido de hidrgeno segn la especie microbiana; los
citocromos son hemo-protenas que contiene Fe y actan como ultimo eslabn de la
cadena respiratoria aerobio, transferindo H+ al O2 con formacin de H2O; este sistema se
encuentra en los organismos aerobios y anaerobios facultativos, carenciandolo de ello los
anaerobios estrictos; se observara el cambio de color de un indicador de pH incoloro cuando esta
reducido (p-fenilendiamina=> formar indofenol de color violeta oscuro) y coloreado cuando se
oxida;
Aplicacin => detectar en el microorganismo estudiado el enzima citocromo oxidasa;
diferenciar entre Enterobacteriaceas (oxi-) de Pseudomonadacea (oxid+); diferencia entre
gneros Moraxella (oxi+), Neisseria (oxi+) de Acinetobacter (oxi-).

Material => placa sembrada con microorganismo problema, asa de plstico, papel de filtro,
porta,

reactivo

oxidasa

de

Kovacs.

Tcnica => mezclar una pequea muestra pura con el reactivo en el papel de filtro que se sita
por encima de una porta, esperar 30-60 segundos y se observar el posible cambio de color; otra
manera: se aade directamente el reactivo oxidasa de Kovacs sobre las colonias de la placa Petri
con agar sangre y tambin en otro medio; si son oxidasa positivo toman un color marrn y en
seguida

pasan

negro

parduzco.

Resultados => oxidasa+ aparece un color purpureo en el papel, si se desarrolla el color a los 1060" se considera oxidasa retardado positivo, despus de 60" es negativo; oxidasa- no se produce
color.
Pruebas

de

catalasa

La catalasa es una enzima que se encuentra en la mayora de los microorganismos aerobios y

anaerobios facultativos que contienen citocromo; es un enzima fundamental que acta sobre el

perxido de hidrgeno /H2O2 (es un producto final de la degradacin aerobica oxidativa de los
hidratos de carbono); si se acumula H2O2, estos grmenes moriran; fundamento: si el
microorganismo tiene el enzima catalasa y se pone en contacto con H2O2 => se descompone en
H2O + O2; aplicacin => diferenciacin de Streptococcus (-) de Staphylococcus (+) y
Micrococcus (+);

Material => portaobjeto, pipeta Pasteur, asas de siembra de plstico (las de platino catalizar la
reaccin)
Reactivo =>

H2O2/

agua

oxigenada,

microorganismo

de

problema

Tcnica => se coloca una gota de H2O2 (agua oxigenada) en un porta objeto, simultneamente,
con una asa se aade una colonia del cultivo del microorganismo de 12-24 horas, homogeneizar y
observar.
Resultados => catalasa+ forma

burbujas

de

O2 inmediatamente; catalasa- no

aparecen

burbujas; se podrn observar falsos positivos si se utilizaran medios de cultivo agar sangre o
otros

que

lleven

hemates

(los

hemates

contiene

catalasa).

Pruebas de Nitrato reductasa o Nitratasa (se realiza con multiprueba de API)

La nitratasa (nitrato reductasa) es el enzima que cataliza el proceso en cual el nitratos son
reducidos a nitritos (presentes en algunos microorganismos anaerobios o anaerobios facultativos
que utilizan nitrgeno como ultimo aceptor de electrones en el proceso metablico/ respiracin
anaerbica); depende de la especie bacteriana se trate, se pueden producir diversos productos
finales; reaccin: nitrato/NO-3 + nitratasa => nitrito/NO-2 =>N2 (nitrgeno molecular/ gas
nitrgeno) o otros => amoniaco / oxido ntrico / oxido nitroso / hidroxil amina; la prueba
detecta los productos finales liberados al medio mediante un reactivo colorimtrico API;
aplicacin => diferenciacin de especies de Haemophilus y Neisserias; cuando no se forma
color (rojo) al aadir los reactivos, puede significar => [1] no se ha reducido el nitrato,
se comprueba aadiendo polvo de zinc que acta como reductor y si hay un cambio al rojo, es
nitratasa (-) y si no hay cambio de color, sera nitratasa (+); [2] la reduccin de nitratos ha sido
llevada hasta la formacin de N2, se observa con la aparicin de grietas o burbujas; [3] la
reduccin de nitratos ha formado otros productos nitrogenados (oxido ntrico, amoniaco,
hidroxil-amina, etc.);

Material => multiprueba de API; reactivo => Nit A y Nit B, Zinc en polvo, microorganismo; el
medio no debe contener azufre ya que si el microorganismo es productor de H2S (acido
sulfhdrico) este impide la formacin de color; tcnica => hacemos un inoculo a partir de un
cultivo puro reciente de 12-24 horas, inoculamos el medio; incubar a 37C durante 12-24 horas,
agregar 1 gota de Nit A y 1 gota de Nit B, observar si hay un cambio o no antes de 30 segundos (se
interpreta rpido, ya que el color puede desaparecer); si no se forma color, se aade al tubo un
poco

de

polvo

de

Zinc; resultados =>

hay

posibilidades

de

que

sean Nitratasa+ (Haemophilus y Branhamella Catarallis): [1] cuando aparece color rojo o
rosado fuerte al aadir el reactivo A y B que indica la reduccin de nitratos a nitritos; [2] al
aadir polvo de zink no se desarrolla color indica formacin de otros productos
nitrogenados;Nitratasa- => cuando se forma color rojo o rosado al aadir polvo de zinc en menos
de

30

segundos.

Prueba de Ureasa (se hace en manual y con el sistema API) - detecta la presencia de la ureasa
en los microorganismos cuando se observa la alcalinizacin de un medio liquido; la ureasa
cataliza la hidrlisis de la urea => carbonato amnico, que sube el pH, con lo que el medio se
alcaliniza; aplicacin => diferenciar Proteus (+) de otras Enterobacteriaceas / E.coli (-) o
positivo retardado (+) como Klebsiella;

Material => tubos de cultivo, asas, pipeta Pasteur, estufa de cultivo o bao mara.
Reactivo => caldo urea de Stuart/ urea-indol (de color mbar) y microorganismo de problema
Tcnica => con el asa estril se toma una muestra de cultivo puro reciente 18-24 horas;
inoculamos el microorganismo en un tubo con caldo urea de Stuart; incubar 37C; la reaccin se
produce

entre

1-4

horas

Resultados => en ureasa (+) el caldo de color mbar vira a rosa fuerte durante el tiempo de
reaccin (1-4 horas); en ureasa (-) no vira el indicador; algunas cepas de Klebsiella, Enterobacter,
Brucella,

requieren

das

de

incubacin.

Prueba de Coagulasa (se hace con el kit comercial que contiene Acs anti coagulasa) - observar
la coagulacion del plasma en forma de grumos o precipitacin al ponerse en contacto el
microorganismo con el reactivo (si se utiliza el plasma en la prueba); la coagulasa es un enzima
producido

por

microorganismos

capaz

de

coagular

en

plasma; aplicacin =>

diferenciar Staphylococcus aureus (coco Gram+, catalasa+, beta hemoltico + y coagulasa+) de

otro Staphylococcus; esta prueba solo se hace si el germen es coco Gram+, catalasa+, beta
hemoltico +; tcnica => (usando el kit comercial /prueba de ltex) seguir la instruccin de la
casa comercial que hacen el reactivo; resultados => coagulasa+ se observa en forma de grumos
(si se utiliza un plasma como reactivo => se observara la formacin de un hilo de fibrina en la
reaccin) y en coagulasa- no se forma grumos.

Prueba de Triptfano Desaminasa (TDA) - se basa en la capacidad que tienen algunas

bacterias de desaminar el triptfano por la accin de TDA, produciendo => acido indol
pirvico que reacciona con citrato frrico amoniacal y el cloruro frrico que lleva el medio
produciendo un color marrn (determina la presencia de la enzima TDA); tcnica => en un
medio liquido de TDA (color mbar); se puede utilizar el reactivo urea-indol; aadimos 1 sola
colonia de un cultivo puro y 1 gota de reactivo TDA del API, incubar a 37C entre 18-24 horas, y
leer; resultado => el color marrn/caf indica la presencia de TDA+ y sera negativo si no hay
cambio de color; los gneros que tienen TDA+ => Proteus, Providencia y Morganella.

Tema 16 - Pruebas bioqumicas simultaneas

(macro-tcnicas, micro-tcnicas, sistemas rpidos,
otros mtodos)
Macrotcnicas - sistemas multiprueba que permiten realizar varias pruebas bioquimicas
simultneamente,

facilitando

notablemente

la

Kliger

Iron

Triple

Sugar

Agar

Sulfuro

Indol

Motilidad

identificacin

(ASIM)

del

microorganismos:

Agar

(KIA)

Iron

(TSI)

Motility

Indol

Agar

(MIA)

IMVIC

Lisina

Iron

Agar

(LIA)

Motilidad

Indol

Ornitina

(MIO)

KIA
-

(Kligler

Iron

utilizacin

de

Agar)

azucares

se

pueden

realizar

(fermentacion

glucosa

produccin

0,1%

de

produccin

de

pruebas
y

la

vez:

lactosa

1%)

gas

acido

(CO2)

sulfhdrico

(SH2)

Por fermentacin de azcares, se producen cidos, que se detectan por medio del
indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio cido. El tiosulfato de
sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno el que reacciona luego con una sal de hierro
proporcionando

el

tpico

sulfuro

de

hierro

de

color

negro.

Fundamento => cuando el microorganismo fermenta los azucares, se acidifica el medio porque
se forman cidos orgnicos; si el medio no tienen azucares como fuente de hidratos de carbono,
utilizara protenas que alcalinizan el medio por la formacin de aminas; las protenas en
condiciones de aerobiosis (en el pico) se metabolizan mejor por la va de descarboxilacin
oxidativa de los aminocidos que en anaerobiosis (en el fondo); la glucosa se metaboliza mejor
que lactosa (la molcula es mas pequea/sencilla); para metabolizar la lactosa, el
microorganismo
Material =>

tubos

debe
de

tener B-D
cultivo,

asa

galactosidasa
y

aguja

de

y
siembra,

lactosa
estufa

permeasa.
de

cultivo

Reactivo => tubo con agar KIA en pico de flauta (color rojo anaranjado), microorganismo
Tcnica => es importante tener un tubo de control; se recoge una colonia puro y joven con un
aguja; inocular por picadura y estra un tubo de cultivo con medio KIA en pico de flauta; incubar
18-24 horas a 37C; la reaccin se ha de observar justo despus de terminar el periodo de
incubacin (suficiente tiempo para la fermentacin del azucar); si se lee despus de 24 horas, se
puede dar un falso alcalino, porque el germen habra utilizado la peptona y el medio se alcaliniza;
el pH esta ajustado a 7,4 (neutro) e indicador rojo fenol a 6,8 (cualquier cambio de pH va a virar
el

medio);

Resultados => se observaran los 3 parmetros: cambios de pH/color, produccin de gas CO2
(grietas en el medio/ se desplaza) y produccin de acido sulfhdrico SH2 (precipitado negro);
siempre se compara con un tubo de control no inoculado.

Cambios de pH - [a] resultado final de la fermentacin solo de la glucosa => K/A zona
superficial roja (reaccin alcalina de las aminas) y zona profunda amarillo (reaccion
cida);despus de la fermentacin de la glucosa, el medio de cultivo inicialmente es amarillo

entero, pero posteriormente la parte del pico se alcalina/rojo (haba poca cantidad de
glucosa) por la descarboxilacin oxidativa de los aminocidos (que forman la peptona) que se
produce mejor en aerobiosis; la fermentacin de glucosa en el pico es inicialmente mediante la
va EMP, utiliza tanto para los aerobiosis y anaerobiosis, dando un intermedio clave (acido
pirvico), que a su vez el acido pirvico es degradado mediante el ciclo de Krebs por los
aerobiosis o anaerobiosis facultativos dando CO2 + H2O y ATP; en cambio, en el fondo, el acido
pirvico es degradado hacia acido lctico y acido mixtos que mantiene el pH acido de manera
estable.;

son

caractersticas

de Morganella,

Providencia

Shigella; tambin P.mirabilis, S.typhimurium, S.enteritidis, S.flexneri.

[b] en la fermentacin de glucosa y lactosa => A/A zona superficial y profunda son amarillas
(caractersticas

de E.coli

K.pneumoniae);

[c] no metabolizan ni lactosa ni glucosa (pero si la peptona) => K/K todo el tubo es de color rojo
(si se trata de anaerobiosis) o si se trata de aerobiosis, la zona profunda es de color naranja (se
alcalina

mas

la

zona

con

mas

O2

=> Pseudomonas,

P.aeruginosa)

[d] si no se consume ni glucosa, ni lactosa ni peptona => no hay cambio de color en el tubo
(grmenes

inertes).

Produccin de gas CO2 - aparecen burbujas, agrietamiento o desplazamiento del medio del
fondo del tubo, debido a la formacin de hidrgeno y de anhdrido carbnico (CO2)
Produccin de acido sulfhdrico SH2 - se manifiesta por el color negro de la capa profunda
o un anillo negro cerca de la parte superior de la capa profunda o un precipitado negro en la capa
profunda (que puede enmascarar la acidificacin del medio => fermentacin de la glucosa activa
la

desulfurasas);

TSI (Triple

Sugar

SH2+

=> Proteus

Salmonella.

Iron) - identificacin de Yersinia enterocolitica como sacaroltica

(tambin Proteus, Lactobacillus y Clostridium), ya que el medio lleva el 3er hidrato de carbono
(sacarosa al 1%); los fundamentos y la interpretacin de los resultados son los mismos que en el
mtodo anterior, pero es imposible saber si el azucar utilizado es uno u otro o ambos.

Agar sulfuro-indol-motilidad/ ASIM o motility-indol-agar (MIA) - tal como indica su

nombre, sirve para determinar la motilidad de los microorganismos, la produccion de indol y la
formacion de acido sulfhidrico; la forma de realizarla es la siguiente => se siembra en picadura y

se incuba a 37C durante 18-24 horas; la motilidad se vera por la zona del inoculo con un zig-zag
(en la picadura); la produccion de indol se vera con un cambio de color a violeta purpura (el
medio es de color violeta clarito); la produccion de SH2 se vera por un cambio a negro.

IMVIC (Indol - Motilidad - rojo de Metilo - Voges-Proskauer - Citrato) - se emplean en

la identificacin de la familia enterobacteriaceas; se hacen de una en una y conjuntamente;
Prueba de indol => estudia el metabolismo proteico/ la capacidad de degradar el triptfano
(aminocido) y de formar segn la bacteria: indol y productos indlicos (escatol, acido indolactico),

mediante triptofanasa

(enzima

intracelular).

Material => tubos de ensayo, asa de siembra, pipeta Pasteur, estufa de cultivo, mechero.
Reactivo => caldo urea-indol de la casa Biomerieux, reactivo indol de Kovacs, microorganismo.
Tcnica => Mtodo de Kovacs: en el tubo con 500 lambdas de reactivo urea-indol, se siembra el
microorganismo problema, incubar a 37C durante 4 horas, aadir al cultivo 2 gotas de reactivo
indol de Kovacs (debe ser siempre fresco), agitar suavemente el tubo y dejar unos segundos en
reposo.
Resultado => en indol+, aparece un anillo rojo en la superficie del medio (E.coli); en indol-, no
hay cambio de color (Klebsiella pneumoniae)

Prueba de rojo de Metilo => muchas enterobacteriaceas con importancia clnica (E.coli,
Proteus mirabilis, Yersinia, Salmonella typhimurium, Citrobacter freundii, Sighella, Vibrio)
son anaerobios facultativos, que para tener energa para sus reacciones metablicas, utilizan la
fermentacin acido-mixta de los hidratos de carbono producindose => acido succnico, acido
actico, alcohol etlico (cidos mixtos); en RM positivo, aparecen un color rojo fuerte en la

superficie

en

RM

negativo,

Material =>

no

hay

cambio

igual

en

la

superficie

del

que

medio.
anterior

Reactivo => Medio de Clark y Lubs en tubo (liquido amarillo), solucin de rojo de metilo y
microorganismo
Tcnica => (a) en el tubo del medio Clark y Lubs se siembra el microorganismo problema (b)
actualmente se utiliza la modificacin de Barry que es poner un inoculo abundante en 0,5 ml de
reactivo de Clark y Lubs y dejar incubar entre 18-24 horas (c) a este cultivo se le aaden unas 5
gotas de indicador rojo de metilo que es rojo a pH 4,5 y amarillo a pH 6,3; el medio cambiara de
color

cuando

el

pH

sea

inferior

4,5.

Resultados => RM+ superficie del medio rojo fuerte y RM- => color amarillo en la superficie
del medio

Prueba de Voges Proskauer (2 microbilogos) - lo podemos hacer en el API => la

fermentacin butanodilica/ butilengliclica/ acetonica (acetil metil carbinol) que es una va
alternativa de metabolismo de acido pirvico, se produce => un metabolito neutro (producto
intermediario), en presencia de aire y hidrxido potsico 40%/KOH (por oxidacin) se forma =>
diacetilo y aadiendo alfa naftol, se forma un complejo rojo; por reduccin, la acetona forma =>
2,3
Material =>

butanodiol;
multiprueba

API

resto

igual

Reactivo => Medio de Clark y Lubs (liquido amarillo), solucin de alfa naftol (VP2),solucin de
hidrxido potsico al 40% o hidroxilo sdico al 40% (KOH), microorganismo problema.
Tcnica => en un tubo de ensayo que contenga un medio de Clark y Lubs se siembra el
microorganismo problema, se incuba 24 horas a 37C, se aade 0,2 ml (200 lambdas) solucin
KOH 40%, luego 0,6 ml de la solucin alfa naftol, agitar e inclinar casi horizontalmente el tubo
para que se favorezca la oxidacin de la acetona, reposar el tubo 10 minutos e interpretar los
resultados.
Resultados => en VP positiva (+), p.ej. Klebsiella pneumoniae y Enterobacter aerogenes, antes
de 1 hora aparece coloracin rojo rosada en la superficie del medio; VP negativa (-) p.ej.E.coli y
Proteus, la superficie del medio queda de color amarillento o cobrizo (la reaccin de los reactivos
al mezclarse); la mayora de enterobacteriaceas en VP dan reacciones opuestas a la reaccin de
RM (VP+ => RM- o VP- => RM+); las bacterias VP+ producen menor cantidad de cidos mixtos
que sern insuficientes para bajar pH del medio con rojo metilo, por ello, cuando una bacteria es
RM- => VP+.

Prueba del Citrato => se investiga la capacidad del microorganismo de utilizar el citrato como
nica fuente de carbono y sales de amonio inorgnicas como fuente de nitrgeno , por el
crecimiento de colonias y el viraje de color del indicador incorporado en el medio causado por la
alcalinizacin; los microorganismos que utilizan el citrato, tambin utilizan las sales de amonio;
citrato sdico es una sal de acido ctrico que es uno de los metabolitos del ciclo de Krebs y
algunas bacterias pueden obtener energa por una va diferente a la de la fermentacion de los
hidratos de carbono, utilizando al citrato como nica fuente de carbono;la alcalinizacin del
medio es producido por la formacin de amoniaco a partir de las sales de amonio que haba y la
formacin

de

carbonatos

Material =>

bicarbonatos

se

debe

igual

la

degradacin

que

del

citrato.
anterior

Reactivos => medio solido de Citrato de Simmons en tubo con azul de bromotimol (agar
inclinado)

microorganismo

de

problema

Tcnica => inocular un tubo de Citrato de Simmons con microorganismo mediante escobilln,
solo la lengeta y guardar otro tubo que sirve de control negativo; incubar 24-48 horas a 37C
dejando los tubos destapados para que se desprenda el CO2, leer los resultados a las 18-24 horas
de

incubacin.

Resultados => en Citrato (+) p.ej. Enterobacter aerogenes, aparece color azul intenso en la
superficie del medio y crecimiento de colonias en la lengeta; en Citrato (-) p.ej. E.coli, no
aparece cambio de color (verde) ni crecimiento.

Micro-tcnicas
1. Sistema
en
Tiras
(API
Biomerieux)
El material y reactivos necesarios para la realizacin de estas pruebas se encuentran
comercializados en kits; fundamento => los medios deshidratados en micro-tubos se rehidratan mediante una suspensin de 5 ml de agua estril con 1 colonia bacteriana y se incuban;
el proceso metabolismo del microorganismo, genera cambios del color en el medio de cultivo o al
aadir reactivos y esos cambios se interpretan mediante tablas de lectura o ordenadores (se
deben seguir rigurosamente las instrucciones del fabricante); principalmente se utiliza para la
deteccin de Enterobacteriaceas, bacterias aerobios no-fermentativas, anaerobios, levaduras,
estafilococos; despus de utilizar todo debe ser incinerado o descontaminado en autoclave o
sumergido en un germicida.

2. Sistemas
en
Tubos
(entero-Tube
BBL)
Se utiliza para identificacin de Enterobacteriaceas y otras aplicaciones; fundamento => un
tubo en forma de lpiz con numerosos compartimentos (normalmente son 8 con diferentes
medios, donde pueden leer hasta 11 caractersticas); este tubo se inocula (con 1 colonia del medio
y alambre de la inoculacin atraviesa todas las cmaras) y se incuba, produce cambios de color
en cada compartimento; mediante un cdigo numrico o colorimtrico, se puede identificar al
microorganismo.

3. Sistema
rpidos
metodos
automatizados
Cuando las muestras son procesadas a traves de metodos automatizados se logran excelentes
resultados en tiempo muy cortos (se deben seguir las normas dadas por los fabricantes);
- Para deteccin primaria del crecimiento (espectrofotometra infrarroja) => detecta los niveles
de
anhdrido
carbnico
(CO2),
p.ej. BACTEC
- Para identificacin (fotometra) => VITECK (crecimiento, identificacin y antibiograma)

Tema 17 - Pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos

Antibiograma - estudio de la sensibilidad del microorganismo patolgico a los
antimicrobianos; se debe hacer antes de establecer el tto de una infeccin microbiana;
diferentes metodos de antibiograma => (1) por difusin que daran resultados
cualitativos de resistencia, sensibilidad o intermedios a los diferentes ATB (2) por dilucin nos
dar resultados cuantitativos en base a 2 conceptos (CMI/ Concentracin Mnima Inhibitoria y
CMB/ CM Bactericida) (3) por deteccin enzimtica, consiste en detectar la enzima del germen
que confiere resistencia a los ATB p.ej. deteccin de betalactamasa, adenilasa, acetilasa, etc.
Clasificacin
de
las
sustancias
anti-microbianas:
(a) un microorganismo es sensible => cuando ATB alcanza niveles plasmticos => a CMI en el
lugar de la infeccin; CMI => la mnima cantidad de ATB capaz de inhibir el crecimiento de un
germen; CMB => la mnima cantidad de ATB que matara al germen; normalmente CMI es
suficiente para combatir una infeccin y los mecanismos inmunitarios se encargan de eliminar el
microorganismo, siendo por tanto la CMI es el termino mas utilizado.
(b) un microorganismo es resistente => cuando la concentracin mxima de ATB que se puede
localizar en el lugar de la infeccin no es suficiente para eliminar el germen, es decir, la
concentracin de ATB necesario para destruir el germen no se puede elevar mas por efectos

txicos secundarios.
(c) microorganismo de sensibilidad intermedia => no esta afectado por dosis normales de ATB
dadas a intervalos normales, pero con una dosis alta en el lugar de la infeccin sin llegar a dosis
que produzcan efectos txicos, puede eliminar el germen.

Casos clnicos => Pseudomonas que da problemas respiratoria/ urinaria y es resistente a casi
todos los ATB, se dar una dosis toxico o una combinacin de ATB por va endovenosa.
Normas bsicas => no efectuar un antibiograma directamente del producto patolgico, ni
tampoco utilizar mezclas de grmenes (se debe realizar un aislamiento por agotamiento en
placa), excepto para muestras de orina ambulatoria (normalmente es una infeccin monomicrobiana); para elegir un ATB se deber ensayar aquellos que son tiles clnicamente y se
encuentran
disponibles
en
el
mercado
farmacutico.
Factores a tener en cuenta => (1) caractersticas tintoriales del germen (Gram+o-) (2)lugar
de la infeccin (especialmente las vas urinarias y meningitis); es importante porque es necesario
que la CMI sea alcanzable en los lquidos corporales para que sea efectivo (3)bacteria
investigada.
La seleccin de ATB representativo de cada grupo para realizar las pruebas de
sensibilidad
Normalmente se selecciona un ATB representativo de cada grupo para realizar las pruebas de
sensibilidad; habitualmente se acepta que no es necesario hacer pruebas de sensibilidad para un
ATB cuando no se han descrito resistencias en esas especies, p.ej. Streptococcus pyogenes.

1. Betalactmicos => todo el grupo tiene en comn que presenta un anilla betalactmico y el
mecanismo de accin consiste en inhibir la formacin de peptidoglicano de la pared celular;
son bactericidas.
a. Penicilinas - tiene espectro desigual => aveces es mas efectivo a uno pero no a otro.
* Penicilina
G
sodica la
forma
oral
es
P
V
* Amoxicilina - infeccin del tracto respiratorio inferior: bronquitis aguda y crnica, neumonas
bacterianas
y
bronconeumona, producidas
por
estreptococo, estafilococo sensible,neumococo y H.influenzae. Gastrointestinal: fiebre tifoidea o
paratifoidea. Genitourinaria: cistitis, uretritis, pielonefritis, bacteriuria, gonorrea, aborto sptico,
sepsis puerperal. De piel y tejido blando (incluida infeccin de herida quirrgica),
por estreptococo, estafilococo sensible
y E.
coli.
* Amoxicilina + acido clavulanico (es un inhibidor de las betalactmasas producida por
algunas
bacterias)
b. Cefalosporinas actualmente
se
ha desarrollado
la
4
generacin (semisintticos; bacteriostticas frente
a cocos
Gram+
y
bacilos
Gram-)
* Cefotaxima (indicado para gonorrea; profilaxis quirrgica; epiglotitis y meningitis
porHaemophilus)
* Cefuroxima (efectividad contra Neisseria gonorrheae y otras bacterias productoras de
penicilinasa; es activa contra Streptococcus pneumoniae, Staphylococcus aureus,
Staphylococcus epidermidis y estreptococo beta-hemoltico; son susceptibles Escherichia coli,
Klebsiella
pneumoniae,
Proteus
mirabilis)
2.
Derivados
de
betalactmicos:
* Aztreonam - se utiliza comnmente frente a las infecciones causadas por Pseudomonas
aeruginosa, pero su espectro abarca a las enterobacterias (incluida Escherichia coli), como
p.ej. Klebsiella,
Haemophilus,
Citrobacter
y
Proteus.
3. Aminoglicosidos => en general su mecanismo de accin es la inhibicin de la sntesis de
protena en diferentes fases segn el ATB; en general derivan de los hongos y son
potentesbactericidas; son de amplio espectro y provocan toxicidad renal y audio
vestbular en
alta
dosis
o
a
las
personas
susceptible.
* Estreptomicina (tratamiento
de
infecciones
causadas
por grmenes
sensibles,
como:Mycobacterium tuberculosis, Salmonellas, enterococos, estreptococos, neumococos y
algunos Gram- como Haemophilus influenzae; es eficaz en infecciones del tracto respiratorio)
* Gentamicina (Acta
sobre
bacterias Gramaerobias,
incluyendo enterobactericeas,Pseudomonas y Haemophilus. Acta tambin sobre estafilococos (S.aureus y
S.epidermidis)
* Tobramicina (Infecciones del tracto respiratorio inferior como neumona, bronconeumona
y bronquitis aguda causadas por P.aeruginosa, Klebsiella sp., Enterobacter sp., Serratia sp.,
E.coli
y
S.aureus)
* Neomicina (es activo in vitro contra Escherichia coli, Klebsiella y contra flora anaerbica
intestinal)
4.

Lincosamidas => inhibe

la

sntesis

proteica

* Clindamicina (es un buen ATB frente anaerobios) - Su actividad antibacteriana es similar a

la de eritromicina (macrolidos) en contra de estafilococos y estreptococos; adems es efectiva en
contra
de anaerobios,
en
especial Bacteroides
fragilis.
5. ATB polipeptdicos y glucopeptdicos => su mecanismo de accin es inhibir la
formacin
de
peptido
glicano
de
la
pared
celular (bactericidas)
a.
Activos
frente
a
Gram+
* Bacitracina - es utilizado para la identificacin del estreptococo del grupo A a cual es
sensible; es bactericida; se utiliza tpicamente para infecciones cutneas (por su efecto de
nefrotoxicidad) acta sobre cocos y bacilos Gram+ (Neisseria y Treponema pallidum)
* Vancomicina - por su alta toxicidad renal y ptica, se reservan para infecciones de
Gram+ resistentes; es bactericida; tiene accin ante cocos Gram+ y bacilos Gram+
b. Activos frente a Gram- => ambas (polimixinas) se usan tpicamente sobre Gram-,
tambin se usa como ATB de identificacin; tienen accin ante entero-bacterias (exceptoProteus,
Providencia y Serratia), Pseudomonas aeruginosa, Vibrio, Pasteurella, Haemophillus y
Bordetella; son ATB de segunda eleccin (para bacilos Gram- resistentes a otros ATB)
* Polimixina
B
* Polimixina
E
(Colistina)
c.
Activos
frente
a
Mycobacterium
tuberculosis

6.
Otros
* Fosfomicina - es un ATB de origen espaol de un amplio espectro que acta sobre la pared
celular (se
usa
en infeccin
urinaria)
* Acido fucsidico - acta sobre la sntesis proteica y destaca su accin sobre Staphylococcus
aureus.
7. Tetraciclinas - son bacteriostticas y su mecanismo de accin es inhibir la sntesis de las
protenas; no se deben administrar a menores de 8 aos por tener efecto secundarios sobre la
denticin y los huesos; tambin pueden producir toxicidad sobre el tracto gastrointestinal y
el higado; son de amplio espectro; origen biolgico o semi-sinttico; activas frente a cocos y
bacilos Gram+ y Gram- aerobios; son frmacos de eleccin en brucelosis, clera,
granuloma
inguinal (ETS).
* Tetraciclina
* Doxiciclina - es el tratamiento de fiebre tifus, fiebre Q, erupciones pustulosas por Ricketsiasy
fiebre de las montaas rocosas por Ricketsias, infecciones del tracto respiratorio causadas
por Mycoplasma
pneumoniae; el
tratamiento
de
infecciones
causadas
por
Gram-: chancroidecausado
por Haemophilus
ducreyi,
plaga
debida
a Yersinia
pestis (anteriormente Pasteurella
pestis), tularemia debida
a Francisella
tularensis (anteriormente Pasteurella
tularensis), clera
causada
por Vibrio
cholerae (anteriormente Vibrio comma), infecciones por Campylobacter en fetos causadas
por Campylobacter fetus (anteriormente Vibrio fetus), brucelosis causada por especies
de Brucella (junto
con
estreptomicina), bartonelosiscausada
por Bartonella
bacilliformis, granuloma
inguinal causado
por Calymmatobacterium
granulomatis.
8. Cloranfenicol - es de amplio espectro; inhibe la sntesis proteica y es toxica a nivel

medular;
es
de
origen sinttico, bacteriosttico, acta frente
a
Gram+
y
(especialmenteHaemophilus
influenzae y Salmonella)
9. Macrolidos y similares - inhiben la sntesis proteica; amplio espectro; se dan cuando es
alrgica
a
penicilina;
son bacteriostticos
y
bactericidas
en
alta
dosis.
a. Eritromicina (un buen ATB frente neumnia atpica, legionelosis, difteria, tos ferina)
b. Azitromicina - para tratar ciertas infecciones causadas por las bacterias, como la bronquitis;
neumona; enfermedades de transmisin sexual (ETS); y las infecciones en los odos, pulmones,
piel y garganta; no tienen ningn efecto sobre los resfriados, la gripe y otras infecciones virales.
c. Claritomicina - interfiere la sntesis de protenas en las bacterias sensibles; faringitis,
amigdalitis, sinusitis, bronquitis aguda, reagudizacin de bronquitis crnica, neumona
bacteriana (adquirida en la comunidad), infeccin de piel y tejidos blandos leve-moderada,
foliculitis, celulitis, erisipela, infeccin localizada o diseminada por Mycobacterium
avium oM.intracellulare, infeccin localizada por M.chelonae, M. fortuitum y M.kansaii.
Prevencin de infeccin diseminada por M.avium complex en pacientes con VIH de alto riesgo
10.
Quimioterpicos
de
sntesis
a. Sulfamidas (es bacteriosttico, de origen sintetico; inhibe la sntesis de acido flico; activo
frente
Gram+
y
-,
Clamidias,
Nocardia)
b. Trimetropin+sulfametoxazol (cotrimoxazol) - inhibe la sntesis de acido flico; elimina las
bacterias que provocan infecciones, incluyendo las infecciones que afectan las vas urinarias, los
pulmones
(neumona),
odos
e
intestinos
c. Quinolonas (6) - inhiben la replicacion del ADN bacteriano son buenos ATB de amplio
espectro,
pero
se
ha
abusado
mucho.
d. Norfloxacina - infecciones de las vas urinarias y la prstata; inhibe la replicacin del ADN
bacteriano. La norfloxacina pertenece a una clase de antibiticos llamados fluoroquinolonas;
tomar
norfloxacina aumenta
el
riesgo
de
que
desarrolle
tendinitis.
e. Ciprofloxacina - inhibe la replicacin del ADN bacteriano; para tratar o prevenir determinadas
infecciones bacterianas, tambin se usa para tratar o prevenir el ntrax (una infeccin grave que
se puede propagar en forma intencional como parte de un ataque bioterrorista) en quienes han
estado expuestos a los grmenes del ntrax suspendidos en el aire; tomar ciprofloxacina aumenta
el
riesgo
de
que
desarrolle
tendinitis.
11.
Quimioterapia
antituberculosa actualmente
se
emplea:
* Rifampicina - ATB sistmico, antituberculoso, bactericida. Inhibe la sntesis de ARN
bacteriano.
Tuberculosis
en
todas
sus
formas
(asociado
a
otros
tuberculostticos). Brucelosis.Erradicacin de meningococos en portadores asintomticos, no
enfermos. Alrgicos o con contraindicaciones a otros antibiticos o quimioterpicos. Infecciones
causadas
porestafilococos (S.aureus,
S.epidermidis,
cepas
polirresistentes)
y
por enterococos (S.faecalis,
S.faecium).
* Isoniacida - para tratar la tuberculosis, y para prevenirla en personas que han tenido contacto
con las bacterias de la tuberculosis. Elimina slo las bacterias activas (en crecimiento). Debido a
que las bacterias pueden estar en un perodo de incubacin (sin crecimiento) durante largos
perodos, la terapia con isoniazida (y otros medicamentos para evitar la tuberculosis) debe
hacerse
durante
mucho
tiempo (por
lo
general entre
6
y
12
meses).
* Etambutol - el tratamiento de tuberculosis pulmonar; debe ser usado en conjuncin con otros

frmacos
12.
*
*
*
*

antituberculosos.
Quimioterapia

Amfotericina

antimictica:
Nistatina
Miconazol
B.
Fluconazol

13.
Quimioterapia
anti-viral
* Aciclovir - antiviral activo frente al virus herpes humano, inhibe la replicacin de ADN viral,
interfiriendo
con
el
ADN
polimerasa
viral.
* Ribavirina - La ribavirina se utiliza con un medicamento interfern, para tratar la hepatitis C
en personas que no han sido tratadas con interfern antes. La ribavirina pertenece a una clase de
medicamentos antivirales llamados anlogos de nuclesidos. Esta acta impidiendo que el virus
que provoca la hepatitis C se propague dentro del cuerpo.

Pruebas de sensibilidad anti-microbiana - tcnicas que investigan la actividad antimicrobiana de distintos quimioterpicos frente al microorganismo estudiado; sus principales
aplicaciones:
- contribuir a la identificacin de los microorganismos (p.ej. sensibilidad del
neumococo/S.pneumonia
a
la
optiquina;
del
S.pyogenes
a
la
Bacitracina)
- constituye una base fundamental para la instauracin de una terapia adecuada.
Son tcnicas estandarizadas y se ha demostrado que existe un paralelismo entre los resultados de
sensibilidad obtenidos in vitro con los efectos teraputicos in vivo; la prueba mas utilizada es la
difusin en medio solido a excepcin de los grandes laboratorios que utilizan sistemas
multiprueba
o
mtodos
automatizados
(Vitec,
Pasco...)
Antibiticos - un grupo de compuestos qumicos teraputicamente muy tiles y que antaose
caracterizaban por ser subproductos metablicos de un microorganismo siendo casi siempre
letal para otros grmenes (p.ej. a los hongos); actualmente la mayora son sintetizados en el
laboratorio; uno de los primeros es descubierto en 1927, cuando Alexander Flemming descubri
la penicilina extrayendo-lo de un hongo (Penicillium notatum) siendo en 1929 cuando efectu
los primero ensayos de sensibilidad anti-microbiana (se contaminaron las placas sin querer por
un hongo); en 1939 Rose y Miller intentaron estandarizar las mltiples variantes de los anlisis
de sensibilidad microbiana por difusin en placa y posteriormente en los aos 50, Kirby-Bauer y
Anderson estandarizaron la tcnica que se utiliza actualmente por difusin en medio solido o en
placa.

Los
a.
1.
2.
3.
4.
b.

principales
Prueba

de
Prueba
Prueba
Prueba
de

pruebas

para

hacer

un

antibiograma:
Manuales
dilucin
en
medio
solido
y
liquido
de
elucin
en
disco
de
deteccin
enzimtica
difusin
en
medio
solido
(de
Kirby-Bauer)
Automatizadas

Trminos
utilizados
en
las
pruebas
anti-microbianas:
- Microorganismo sensible o sensibilidad => es inhibido por un ATB a dosis habituales
- Microorganismo de sensibilidad intermedia => el germen "in vitro" no es claramente sensible
al ATB, pero si lo seria "in vivo" incrementando la dosis habitual sin llegar a dosis toxicas
- Microorganismo resistente o resistencia => no es sensible al ATB a dosis habituales y es
necesario
administrar
dosis
toxicas
- CMI (cantidad mnima inhibitoria) => es la menor concentracin de un ATB capaz de inhibir el
crecimiento
bacteriano
de
una
cepa
dada
- CMB (cantidad mnima bactericida) => es la menor concentracin de un ATB con la que no
quedan
bacterias
vivas
de
una
cepa
dada
Tcnicas manuales de realizacin de las pruebas de sensibilidad anti-microbiana
a. Pruebas de dilucin (es una tcnica de centros de investigacin /lenta /engorrosas) => se
basan en el estudio al unisono de diferentes concentraciones de ATB, lo que les da un carcter
cuantitativo en base a los conceptos CMB y CMI; 2 tipos => en medio liquido y solido; se utilizan
10 tubos con grmenes en caldo nutritivo o agar y a cada tubo se le aade una cantidad prefijada
de ATB diluido seriadamente, excepto en el tubo de control; se incuban 18-24 horas a 37C y se
examina la turbidez que indica crecimiento de grmenes; en el tubodonde no hay turbidez se ha
inhibido el crecimiento de los grmenes; con estos datos estudiamos la CMI y la CMB de los
antibiticos.
b. Pruebas de elucin en disco (disolver) => se realiza introduciendo discos de un ATB en
tubos con caldo nutritivo; el ATB se disuelve en el caldo alcanzando una concentracin final
conocida, posteriormente se inocula un volumen de una suspensin microbiana y se sigue la
misma metodologa descrita antes obtenindose resultados cuantitativos o cualitativos en base a
sensibilidad, sensibilidad intermedia o resistencia (no se utilizan habitualmente).
c. Pruebas enzimticas de deteccin => fundamentalmente se detectan las betalactamasas; un reducido numero de bacterias son resistentes a las penicilinas y
cefalosporinas(ATB B-lactmicos) debido a que producen un enzima (b-lactamasa) capaz de
inactivar estos ATB, p.ej. los gonococos, pneumococo y algunos estreptococos; consiste en
observar el crecimiento de los grmenes en presencia de dichos ATB; se toma la colonia
sospechosa y mezclar-la con un sustrato que si cambia de color nos indica que la colonia es Blactamasa (+), por lo tanto es resistente a los ATB B-lactamico; se denomina Prueba de
NITROCEFIN.
d. Prueba de difusin en medio solido (antibiograma clsico) => estandarizadodesde

los aos 50 (se hace igual en todo el mundo) por Kirby-Bauer y Anderson en todos sus pasos y es
mas utilizado actualmente en forma manual; fundamento => depositar discos impregnados de
ATB sobre cultivos de microorganismos en placa; la difusin del ATB a traves del medio produce
un halo de inhibicin del crecimiento cuyo dimetro sera proporcional a la potencia del ATB
dando resultados cualitativos de resistencia, sensibilidad o sensibilidad intermedia a los ATB;
material => placas de Petri (9cm), pinzas metlicas estriles o dispensador automtico, pie de
rey o regla milimetrada, medio Mueller-Hinton, discos de ATB, suspensin microbiana al 0,5
escala Mc Farland (10 elevado 8 u.f.c./ml; escala Mc Farland => el 0,5 se prepara aadiendo 0,5
ml de Cl2Ba 0,04 M a 99,5 ml de acido sulfrico 0,36M); una placa llena => mas de 10 elevado 6.
Tcnica => el medio Mueller-Hinton se vierte en placas con un espesor de 4 mm; la siembra
utilizada preferentemente (a) la de Kirby-Bauer: se introduce un escobilln en el inoculo
preparado al 0,5 Mc Farland (no tenemos) y se siembra en 3 direcciones y se deja
aproximadamente 4 minutos la placa semi-abierta e invertida antes de colocar los discos; (b)la
de Barry: se hace una inoculacin previa al vertido de las placas, se aaden 0,1 ml del inoculo a
25 ml del medio Mueller-Hinton fundido y se vierte en placa (no se usa mas)

Eleccin de ATB => se debe seleccionar un ATB representativo de cada grupo excepto en los
casos donde existan diferencias significativas en los espectros de actividad o resistencia; los
aspectos importantes que prevalecen a la hora de seleccionar un ATB => las caractersticas
tintoriales del germen (Gram+o-), el lugar de la infeccin (orina, meningitis) y la bacteria
investigada.
Concentracin de los discos => tiene que estar perfectamente estandarizada sigundose las
normas de la Federacin de Drogas y Alimentos/ FDA => la actividad del disco debe estar entre
65% y 150% y de la OMS => entre 75% y 135%; siempre se debe utilizar un control para controlar
la actividad de los discos; en general, se escogen discos con una concentracin que producen un
halo de inhibicin entre 20 y 30 mm para organismos tipificados como sensibles y de menos de
10
mm para
los
resistentes.
Implantacin de los discos (papel de filtro grueso de un dimetro 6mm que van impregnados con
una concentracin determinada de ATB); Manual => se saca el disco de ATB con unas pinzas
estriles y se deposita en la placa, la distancia mnima entre los discos es de 24 mm para evitar la
superposicin de los halos, deben estar situados a 15 mm del borde como mnimo (se colocan 8
discos) una vez depositado el disco se presiona ligeramente con la punta de
pinzas; Automtica => se utilizan dispensadores automticos que son unos dispositivos de
plstico del tamao de una placa de Petri con unos orificios gua que permiten la colocacin
simultanea de todos los discos en el lugar adecuado, y con una pinza se presionan ligeramente
los discos para que al girar o invertir la placa no se caigan los discos.

Incubacin

=>

18-24

horas

35-37C

(mximo

48

horas)

Lectura e interpretacin del antibiograma => los resultados se expresan segn el halo de
inhibicin que aparece alrededor de cada disco; el halo se mide con una regla calibrada o pie de
rey midiendo los dimetros, y segn cual sea clasificaremos al germen como sensible (la dosis
habituales es eficaz), intermedio (se deben incrementar las dosis habituales sin llegar a dosis
toxicas)
o
resistente
(ATB
es
totalmente
ineficaz);
Observacin
al
mtodo:
1.
preservar
la
estandarizacin
en
todos
sus
pasos
2. puesto que la difusin del ATB es casi instantnea no debe moverse ningn disco una vez que
se
ha
puesto
en
contacto
con
la
superficie
del
agar
3.
los
discos
se
tienen
que
conservar
en
la
nevera
4. procurar que la lectura se haga a las 18-24 horas, evitndose el exceso de incubacin
5. Aunque el medio elegido es el Mueller-Hinton, se pueden emplear medios enriquecidos como
AS
(estreptococo),
agar
chocolate
(Haemophylus)
para
grmenes
exigentes
6.
de
vez
en
cuando
hay
que
colocar
controles
de
calidad
7.
cuando
el
germen
sea
anaerobio
el
mtodo
es
diferente
Mtodo automatizados de identificacin y susceptibilidad - actualmente existen
diferentes metodos automatizados para realizar el antibiograma; los mas utilizados se basan
fundamentalmente en la medida bien fotomtrica o bien turbidimtrica del efecto de un ATB
sobre el crecimiento de una bacteria en medio liquido comparndolo con el de la misma bacteria
en un medio sin ATB; otros metodos se basan en tcnicas de impedancia elctrica
microcalorimetra
bioluminiscencia,
radiometra
...
Los metodos fotomtrico y turbidimtrico p.ej. sistema Vitec, se resume:
- se utilizan unas tarjetas desechables del tamao de un naipe donde se inyecta la muestra ya
diluida mediante un modulo inyector; la tarjeta presenta unas perforaciones donde lleva
incorporadas
diferentes
medios
selectivos
liofilizados;
- la tarjeta se sella y se coloca en un modulo incubador y de lectura, leyndose de manera
automtica los resultados cada hora; los datos los almacena un ordenador que los compara con
valores umbrales ya almacenados; el ordenador puede dar resultados a las 4 horas (lo normal
entre
4
-13
horas)
El sistema Microscan utiliza un sistema semejante al de dilucin en caldo pero en miniatura
utilizando paneles con caldo de Mueller-Hinton deshidratado (como API); tras la inoculacin y
re-hidratacin con una suspensin estandarizada del microorganismo y suincubacin a 35C por
un mnimo de 16 horas, la CIM o una sensibilidad cualitativa (sensible, intermedio o resistente)
para el organismo en prueba se determina observando la menor concentracin ATB, que muestre
inhibicin de crecimiento; esta deteccin puede hacerse manualmente mediante un visualizador
de micro-dilucin o mediante un lector conectado a un ordenador; viene en tripletes de un ATB
con
diferentes
concentraciones.
Agentes antimicrobianos (ATB) activos frente a Gram- => Cefuroxima, Cefotaxima,
Colistina, Tobramicina, ; frente a Gram+ => Eritromicina, Tetraciclina, Vancomicina,

Meticilina, Clindamicina, Doxicilina; frente a ambos Gram+ y - => Ampicilina, Cefalotina,

Gentamicina, Cotrimoxazol, Cloranfenicol, Imipenem, Amoxicilina+acido clavulonico.

Clasificacin
de
los
antibiticos
segn
su
efecto
bacteriano
Bactericidas => Penicilinas, Cefalosporinas, Aminoglucsidos, Rifampicina, Quinolonas, Mon
obactmicos, Polimixinas.
Bacteriostticos => Tetraciclinas, Eritromicina, Sulfonamida, Novobiocina, Cloranfenicol
Clasificacin de los antibiticos segn su mecanismo de accin sobre la estructura
bacteriana
I.
Inhibicin
de
la
sntesis
de
la
pared
celular
Penicilinas
Cefalosporinas
Vancomicina
Fosfomicina
Tercoplanina
Bacitracina
II.
Lesin
en
la
permeabilidad
de
la
membrana
celular
Poliomixinas
Colistinas
Nistatina
Anfotericn
B
III.
Inhibicin
de
la
sntesis
proteica
Cloranfenicol
Tetraciclina
Aminoglucsidos

IV.
Inhibicin
Quinolonas

de

la

sntesis

de

cidos

Lincomicinas
Eritromicina
nucleicos
Sulfonamidas
Rifampicina
Trimetropn

Nota: (*) Penicilina semisinttica resistente penicilinasa

Estudio de la orina
Funcin del rin:
- La eliminacin de nuestro organismo de una importante cantidad de residuos metablicos,
muchos de ellos intiles, y de otros que incluso pueden comportarse como txicos.
- La regulacin de la composicin de los fluidos de nuestro organismo facilitando as, tanto la
supervivencia de las clulas como el optimo desarrollo de todos los procesos metablicos.
- El control hormonal de la presin arterial (adrenalina, noradrenalina)
- El control de los niveles orgnicos del calcio (mineral corticoides aldosterona, 1,25
dihidroxicolecalciferol)

- El control de la eritropoyesis (eritropoyetina)

Nefronas - son unidades funcionales bsicas consiste de 2 partes => el glomerulo (dentro de la
cavidad "capsula de Bowman") y la red tubular.
El glomerulo - rodeado de una cavidad (capsula de Bowman) y dispone de una extensa red
vascular; filtrar/ depurar el plasma 25 ml de sangre por minuto (150 litros de plasma/ dia); se
filtra agua, urea, creatinina, aminocidos, cido rico, glucosa, protenas de bajo pm.
La red tubular - el filtrado por el glomerulo es recogido en la capsula de Bowman y se dirige
hacia la red tubular donde se lleva a cabo un proceso de reabsorcin selectiva => reabsorber
agua, ciertos elementos tiles para el organismo y que deben ser recuperadas (glucosa, agua,
sodio, cloruro, potasio, bicarbonato, urea, aminocidos, proteina) y permite la secrecin de otras
que, por su toxicidad, deben ser posteriormente eliminadas mediante la miccin (amonio, urea,
hidrogeniones/H+); se elimina 1 ml de orina por minuto (1500 ml diarios); la red tubular esta
formada por => tbulo contorneado proximal, asa de Henle, tbulo contorneado distal
y tbulo colector.
Mecanismo de la funcin renal:
- Filtracin glomerular => filtra el plasma desde los capilares que lo envuelven hasta la capsula
de Bowman.
- Reabsorcin tubular => el producto de la filtracin glomerular se modifica su composicion al
atravesar la red tubular.
- Secrecin tubular => transporte de sustancias, desde la red capilar hacia los tbulos renales;
destaca la secrecin activa de iones H+, que permite la regulacin del equilibrio acido-base en el
organismo.
Procedimiento de la recogida de muestra (el personal facultativo determina el tipo de
muestra necesaria para el anlisis) => informar a la persona del objeto del anlisis; indicar el
tipo de muestra deseada; orientar acerca de la tcnica de obtencin de la misma; indicar las
pautas de almacenaje y transporte adecuado (si se toma fuera del laboratorio); insistir en la
importancia de la limpieza en general y de la higiene antes de la recogida (evitar
la contaminacin involuntaria); describir el tipo y caractersticas mas adecuadas delrecipiente a
utilizar; tener en cuenta la capacidad del paciente para evacuar la vejiga de forma voluntaria y la
necesidad de utilizar tcnicas invasivas para obtener la orina en condiciones adecuadas.
Recogida de muestras de orina
- Miccin espontanea => paciente responsable de la misma para obtener muestra
sin contaminacin; prevencin: eliminar la primera porcin de la miccin y asegurar el lavado
minucioso previo de los genitales; indicaciones: anlisis fisico-qumico, estudio del
sedimento, concentracin de creatina y microbiologia (en ocasiones).
- Cateterismo vesical/ sondaje (realizada por personal enfermera) => pacientes que presentan
dificultades de la miccin, mujeres para evitar la contaminacin vaginal.
- Puncin supra-pbica (realizada por personal facultativo) => diagnostico de infeccin por
microorganismos extraos en nios.

Tipos de muestras para un anlisis de orina (sin supervisin

- miccin espontanea):
- Primera orina de la maana => se recomienda porque la concentracin de solutos es variable a
lo largo del da y esta en relacin con la ingesta de liquidos.
- Orina tomada al azar => muestra valida para cultivos microbiologicos
- Orina minutada (fraccionada, de 2 horas, de 24 horas) => gran utilidad para el paciente
diabeticos
Anlisis de orina - procedimiento tcnico encaminado a examinar los componentes que la
integran, su cantidad y la proporcin en que se encuentran; su estudio proporciona
gran informacin acerca de mltiples alteraciones orgnicas y de muy diversa etiologa (rion,
procesos metablicos) => permite detectar alteraciones patolgicas,
estados fisiolgicos particulares no patolgicos (embarazo) y un buen funcionamiento renal.
Objetivos:
- obtener informacin del estado general del rion y las lesiones que pudieran afectarlo
- detectar la existencia de una alteracin a nivel de las vas urinarias
- teniendo en cuenta aquellos productos que se eliminan va urinaria, detectar alteraciones
funcionales de otros rganos
- detectar las alteraciones metablicas de diversa etiologia
- se intenta encontrar sustancias o componentes que normalmente no se encuentran en la orina
- detectar alguna alteracin en la concentracin (por defecto o por exceso) de componentes que
habitualmente se encuentran en la orina
Tipos de anlisis de orina => anlisis elemental, completo, rutinario, anormales y
sedimento.
Parmetro bioqumico => Densidad - Bilirrubina - Cuerpos cetnicos - Protenas Urobilinogeno - Glucosa - Hemoglobina - Nitritos - pH - Hemates - Leucocitos (actualmente se
utiliza determinacin por qumica seca / tiras reactivas).
Anlisis general de una muestra de orina:
- Fsico/macroscpico => cantidad, aspecto/turbidez, color, olor, densidad, pH
- Qumico/anormales => protenas, glucosa, cuerpos cetnicos,
sangre/hemoglobina, bilirrubina/ pigmentos biliares, urobilingeno/ urobilina, nitritos
- Microscpico => estudio de estructuras cristalinas/cristales y de formas amorfas
en suspensin, estudio citolgico, estudio bacteriolgico.
- Microbiolgico => urinocultivo, identificacin del germen (pruebas bioqumicas), ATB
(antibiograma).
- Parasitolgico => tcnicas especificas de visualizacin macroscpica de parsitos;
estudio microscpico de parsitos en la muestra de orina: parsitos enteros o parte de ellos,
huevos, formas de resistencia (quistes).
El orden cronolgico de
un anlisis general=> caractersticas fsicas macroscpica - sedimentacin (a 1500 rpm
durante 10-15 minutos) - pruebas bioqumicas (tiras reactivas); la muestra sobrante se debe
guardar hasta que la analtica haya concluido; hay que revisar los resultados del sedimento

concuerdan con las pruebas qumicas y comprobar las anomalas detectadas han sido
confirmadas.
Examen fsico - macroscpico
Es orientativo => para diagnosticar una patologa, hay que confirmar con
otros anlisis complementarios; hay que tener en cuenta situaciones fisiolgicas (menstruacin,
grado de hidratacin, etc.) que pueden alterar las caractersticas de la muestra;
1)- Cantidad / diuresis normal 1200-2000 ml/24H; alteracin => oliguria/inferior,
poliuria/superior, anuria/falta de eliminacin (<300 ml/24H)
2)- Aspecto / turbidez; recin emitida: clara y transparente; almacenada: sedimento
blanco/fosfatos y carbonatos, sedimento rojizo (uratos desaparecer al calentar la orina a 60C);
3)- Color amarillo / mbar (en funcin de la concentracin)
4)- Olor aromtico, ligeramente amoniacal
5)- Densidad 1.010-1.030 (se determina mediante tiras reactivas);
6)- pH normal 5,5-6 (ligeramente cida); pH alcalino => posible contenido de grmenes con
ureasa.
Pruebas bioqumicas cuantitativas
Protenas - en condiciones normales las protenas se encuentran 130-150 mg/da en funcin del
volumen de orina eliminado; en recin nacidos 2-8 mg/100 ml;cantidad de protena (con
peso molecular menor)=> (a) albumina 1/3 del total (fisiolgica); (b) globulinas; (c) protena de
Tamm-Horsfall (T-H) es muco-protena viscosa que no se encuentra en el plasma - se forma en el
tubulo contorneado distal, constituye la matriz de los cilindros; (d) transferrina; (e) IgA.
Proteinuria => eliminacin de proteina en orina superando los VN
- intensa (>4 g/da) indica un dao renal grave; se dan en sndrome nefrtico, glomerulonefritis
(aguda y crnica), congestin venosa renal;
- moderada (de 0,5 - 4g/da) indica un dao renal menos graves; se dan en pielonefritis
con hipertensin, nefropata diabtica, mieloma multiple.
- leve (<0,5 g/da) se dan en riones poliqusticos, lesiones renales incipientes.
- de patrn glomerular => pierde su selectividad en la filtracin.
- de patrn tubular => cuando hay lesin tubular
- de forma intermitente o transitoria => puede ser fisiolgica (hay que comprobarlo)
- de forma persistente => suele cursar con hematuria y su pronostico es peor.
Glucosa - la orina normal carece casi por completo de glucosa (filtrado y absorbido);
normoglucemia => 6-120 mg/dl; umbral renal 160 mg/dl; glucosuria => aumento de
la concentracin de glucosa en orina por encima de los VN, causada por (1) aumento de la
glucemia por encima de umbral renal (2) alteracin renal (tubulopata)
Cuerpos cetnicos (compuesto por acido acetilacetico/diacetico, acido beta-hidroxibutirico,
acetona) - en personas sanas, los CC se sintetizan en el hgado y se metabolizan por completo, de
forma que en la orina aparecen en
concentraciones mnimas (indetectables); cetonuria=> aparicin de
cuerpos cetnicos detectables en orina; la presencia de cetonuria y el aumento de cetonemia

implica que no se realiza correctamente el catabolismo oxidativo de los cidos grasos; las causas
de cetonuria:
- sobrecarga de lipidos en la dieta
- diabetes mellitus (coma diabetico)
- vmitos (en nios y embarazadas)
- bajo consumo de hidratos de carbono o alteracin en su metabolismo
- ayuno prolongado
Hemoglobina - no aparece en orinas normales; hemoglobinuria => presencia de Hb en
orina (si la cantidad es alta, se puede ver a simple vista); causas => enfermedad renal
de vas altas, anemias hemolticas, reacciones transfusionales, infecciones (malaria, paludismo)
Pigmentos biliares (bilirrubina y biliverdina) - se forman en bazo, higado y MO
por degradacin fisiolgica de Hb; 2 tipos => BB-Albumina / indirecta y BB-Glucurnico
/directa; aparece BB en orina, siempre que aumente la BB directa en sangre por causas =>
enfermedad obstructiva (ictericia obstructiva/ acumulacin en
sangre), lesiones hepticas(hepatitis, hepato-toxicidad).
Urobilingeno - BB directa con la bilis, pasa al intestino delgado donde por accin de la
flora bacteriana se transforma en urobilingeno o estercobilingeno (se elimina en mayora con
las heces y la orina en menor concentracin); la cantidad de urobilingeno aumenta en la
orina en las hepatitis y las anemias hemolticas; la determinacin de urobilingeno debe
realizarse rpidamente en orina, ya que se transforma en urobilina + O2(falso negativo).
Nitritos - su aparicin en la orina indica crecimiento bacteriano (bacteriuria), de germenes
capaces de reducir los nitratos ingeridos con la dieta, hasta nitritos (entero-bacterias); un
resultado negativo de la prueba de los nitritos, no indica ausencia de microorganismos, ya
que puede haber bacterias que no son productores de nitritos o ausencia de nitratos ingeridos en
la dieta.
Examen microscpico de orina - sedimento urinario - estudio de elementos o estructuras de
origen y composicion variados que aparecen suspendidos en la orina que proporciona ayuda para
el diagnostico y evolucin de las enfermedades renales; la muestra debe examinarse antes de
transcurridas 3-4 horas desde su recogida (algunas estructuras como celulas y cilindros se
lisan fcilmente; obtencin del sedimento: homogeneizar bien la muestra, verter 10 ml en un
tubo de centrifuga (fondo cnico), centrifugar a 1500 rpm durante 10 minutos; decantar el
sobrenadante (quedando solo 1 ml), re-suspender el sedimento residual, montar un fresco (una
gota entre porta y cubreobjetos, evitando la formacin de burbujas), observar al microscopio a
40x, intensidad lumnica media y condensador a media altura; tambin se puede observar a 10x
en
el permetro de
cubre
si
hay
los
cilindros
hialinos.
Estructuras
organizadas
- Hemates: pueden proceder de cualquier parte del sistema renal; en gran
numeroindica infeccin, traumatismos, neoplasias y litiasis renal; presencia normal de 12/campo o como una contaminacin menstrual; pueden confundirse con levaduras y cristal de
oxalato clcico monohidratado; con tincin Gram se diferenciar => los hemates son teidos de

rojo, levaduras de violeta y cristales incoloros; es importante distinguir entre macrohematuria (se ve en el sedimento de color rojizo) y micro-hematuria (nicamente se detecta al
microscopio), tambin si el color rojo observado macroscpicamente procede de hemates o
Hb (al centrifugar el sedimento, el color rojizo de Hb permanece).

- Leucocitos (neutrfilos): pueden proceder de cualquier parte del sistema renal; >50% de ellos
se lisan al permanecer mas de 2-3 horas a temperatura ambiente; presencia normal de 12/campo (varn) y 1-3/campo (mujer); cifra superior de normal en el sedimento => piuria
(>5 leucocitos/campo indica => infeccin renal en cualquier nivel);

- Espermatozoides: formados por 2 partes cabeza y cola; frecuente en un sedimento

del varn (eyaculaciones recientes, poluciones nocturnas, etc.), y en mujer despus de haber
mantenido
relaciones
sexuales.
- Bacterias: la composicion de orina es un excelente medio de cultivo para los
microorganismos; la mayora de ocasiones son fruto de una contaminacin de la flora
saprofita alojada en zonas prximas al meato urinario => anal, perineal, vaginal (sobre todo en
mujeres); su presencia en el sedimento, no debe ser tenida en cuenta salvo que vaya acompaada
de
piuria (aumento
de
leucocitos).
- Levaduras: su presencia en la gran mayora debido por una contaminacin, salvo
acompaada de una piuria; en personas diabticas, debido a la glucosuria, parecen facilitar el
crecimiento mictico; su identificacin es sencilla, por su forma ovoidea, frecuentemente con
presencia de celulas en gemacin; su tamao es ligeramente mayor que los hemates (pueden
confundirse); su aumento en la orina se trata de vaginitis causada por Candida albicans.
- Parsitos: (1) Protozoos: normalmente se trata de Trichomonas vaginalis (frecuente en
sedimentos de mujeres con vaginitis que puede ser asintomtico y mas raro en los de
hombres); aspecto piriforme de mayor tamao que los leucocitos y una gran motilidad (por sus
flagelos); su identificacin es mas complicada cuando la motilidad esta mermada (al ser de un
tamao semejante al de los leucocitos); la piuria que le acompaa puede hacer pensar

(errneamente) en una infeccin bacteriana y se descarta esta posibilidad al obtener urocultivos

negativos;
(2) otros parsitos: su aparicin es siempre el resultado de una contaminacin de la muestra de
orina con materia fecal;

Celulas
epiteliales:
el rbol urinario
esta
revestido
por 3
tipos
de
epitelio => (1)columnar /tubular /renales /cuboideo (capsula de Bowman, tbulos distal,
proximal y colector) (2) transicional o urotelio (pelvis renal, urteres, vejiga y uretra)
y (3) escamoso (uretra y vejiga); una escasa descamacin es normal, pero se puede aumentar por
causas => microorganismos, productos qumicos, cuerpos extraos, procesos degenerativos,
procesos
invasivos-destructivos.
- Celulas tubulares /renales /cuboideas: son de tamao 1/3 mayores que los leucocitos; su
forma normal es redonda con ncleo grande y cntrico; un sedimento normal 0-1/campo;
aumentado en pielonefritis y glomerulonefritis.

- Celulas de transicin (segunda capa de vejiga): el epitelio transicional

espluriestratificado (3 capas => basal, intermedia y superficial); las celulas son de tamao 2-4
veces mayor que leucocitos; su forma es redondeada, piriforme o raqueta con
un ncleo pequeo;
un
sedimento normal
0-2/campo;
su
aumento
exige
un
estudio citolgico mas completo (p.ej. tincin de Papanicolau), por posibilidad de un carcinoma
en cualquier punto entre la pelvis renal y la vejiga.

- Celulas del epitelio escamoso: son planas y tienen abundante citoplasma con nucleo
centrico y pequeo; a veces sus bordes aparecen doblados, replegados; un sedimento normal 01/campo.

Cilindros: se forma en tbulos colectores y distales; es un resultado de la consolidacin de

las protenas en los tbulos de las nefronas; es normal encontrarse algunos (sobre todo hialinos)
en el sedimento; se desintegra en la orina a pH alcalino y en presencia de bacterias (con
ureasa); la matriz de todos ellos es una muco-protena (Tamm-Horsfall) segregada en la
orina; causantes de su formacin => (1) disminucin del pH de la orina, (2) aumento de la
densidad o concentracin de solutos, (3) un grado de estancamiento de la orina (disminucin del
filtrado glomerular); el lugar de la nefrona en que se forman, determina su tamao y forma =>
cilindros estrechos (contorneados) proceden de los tbulos distales y cilindros anchos se
originan
en
los tbulos colectores.
- Cilindros hialinos: se pueden encontrar en grandes cantidades en orinas normales
(deshidratacin y estrs fsico) y tambin en nefropatas; su aparicin en el sedimento no
tiene significacin clnica (1-2/campo); para visualizar su escasa refringencia, hay que evitar un
exceso de iluminacin; normalmente sus contornos se aprecian con suficiente nitidez y uno de
sus extremos es romo (un dedo de guante); existe tambin cilindros granulo-hialinos, muy
semejante a los hialinos, pero con algunas incrustaciones en su estructura
(sin significacin clnica);

- Cilindros granulosos: predomina la estructura granular y desaparece el aspecto hialino;2

tipos => cilindros granulosos finos (semejante a los hialinos en tamao y forma; tienen mayor
refringencia
debido
a
la
masiva
pequeos grnulos de inclusin)
y
cilindros
granulososgruesos (estructura totalmente diferente a los hialinos; son de mayor tamao,
aspecto rgido y mayor refringencia; sus borden son contrastados y angulados; en orinanormal 01/campo; el aumento de su presencia indica una nefropata.

- Cilindros celulares: la presencia de ellos en la orina nunca es normal; tipos:

(1) Epiteliales - la matriz del cilindro engloba celulas epiteliales que se han desprendido de la luz
tubular;
gran
variedad
de nefropatas,
lesiones del
epitelio
tubular
(debidas
adiversos txicos industriales, medicamentos y virus) puede causar la formacin de este
cilindros.
(2) Hemticos (eritrocitarios) - aparecen en sedimentos con hematuria; es un signo de lesin a
nivel del parnquima renal (vasculares o pielonefritis); la cantidad de estos cilindros suele
ser escasa y
dificulta
su localizacin.
(3) Leucocitarios - fcil de reconocer porque los leucocitos presentes en su matriz se conservan
estables durante el trayecto por los tbulos; su presencia normalmente acompaada por piuria
intensa e indica infeccin localizada en el parnquima renal(pielonefritis) o lesiones de tipo
inflamatorio
(glomerulonefritis
aguda).
(4) Bacterianos - se parecen a los granulosos toscos; generalmente unidos a piuria y muy
probablemente se trate de una pielonefritis.

- Cilindros grasos: cilindros granulosos o celulares con pequeas inclusiones lipdico (gotitas
de grasa); muy refringentes y tonalidad amarillenta donde se localizan dichas inclusiones; indica
una nefropata todava no manifestada.

- Cilindros creos: son muy refringentes, rgidos, de apariencia dura, superficie rugosa y
brillante (como la cera de las velas), los extremos angulados y generalmente de gran tamao; su
presencia es un sntoma claro de una alteracin renal importante; suelen estar inmersos en
una cilindruria (presencia de la mayora de los diversos tipos de cilindros).

Estructuras
no
organizadas
Cristales: en general son productos finales del metabolismo que adoptan formas
cristalinas segn la condiciones fsico-qumicas de la orina (la pH sobretodo, densidad,
temperatura, etc.) y se excretan a nivel urinario; se diferencian en 3 grupos:
(1) Cristales endognos normales - no corresponden a alteraciones metablicas ni funcionales,
muy frecuente en el sedimento y pueden aparecer en orinas recin emitidas.
(2) Cristales endognos patolgicos reflejan
trastornos metablicos o afectacin grave
de algn rgano o
sistema
y
muy
raras
veces
aparecen
en
orina.
(3) Cristales exgenos - aparecen en la orina tras la introduccin en el organismo (va enteral o
parenteral) diversas sustancias (contrastes radiolgicos/ contraste radiopaco va endovenosa y
medicamentos p.ej. sulfonamidas, etc.)

- Cristales de acido rico: en orinas cidas; son birrefringentes; de formas variadas (p.ej. agujas);
color entre marrn rojizo, el amarillo e incluso incoloros; indica una situacin patolgica o
concentraciones elevadas de acido rico; un sedimento normal 0-2/campo.

- Cristales de oxalato clcico mono-hidrato y di hidratado: en orinas cidas y ligeramente

neutras; menos frecuente; de forma prismas incoloros -casi nunca aislados-unidos por un punto
intermedio (pesas de gimnasia), la mas frecuente es de forma sobre; tambin los hay de forma
redondeados, finamente estriados, incoloros y con una depresin central (radios de bicicleta); un
sedimento normal 0-2/campo.

- Uratos amorfos: en orinas cidas; se presentan como un precipitado amorfo, coloreado

debido a la presencia de pigmentos urinarios de color amarillo-naranja (color ladrillo); no tiene

mucha importancia clnica.

- Cistina:
en orinas cidas;
tiene significacin clnica por
si
solos
=>
aparecen
comoconsecuencia de cistinuria; aspecto incoloro con forma de placas hexagonales, regulares
finasy transparentes; es imprescindible una vez observados en el sedimento, confirmar
la concentracin de cistina en la orina.

- Leucina y tirosina: en orinas cidas; raramente se observan; son productos finales del
metabolismo proteico y suelen aparecer juntos en situaciones clnicas graves=> destruccin o
necrosis tisular importante, fundamentalmente de tejido heptico (hepatitis, cirrosis, etc.); los
cristales de tirosina forman manojos de agujas finas y los de leucina son
como grnulos esfricos de estras radiales y concntricas, de aspecto oleoso o graso y muy
refringentes; ambas son de color amarillo o marrn.

- Cristales de bilirrubina: en orinas cidas; de pacientes con bilirrubinemia (bilirrubina alta

en sangre); de forma agujas con color marrn-rojizo (flecha verde).

- Uratos amoniacos: en orinas muy alcalinas; de color amarillo/marrn muy intensa;

predomina la forma esfrica de distinto tamao; no tienen mucha importancia clnica,
peropueden estar asociados a infecciones del tracto urinario, por bacterias con ureasa+.

- Carbonato clcico: en orinas alcalinas o neutras; no es frecuente y no tiene mucha

importancia clnica (procedencia de ingesta vegetales); de forma amorfo o granular, en ocasiones
como pequeos lazos y raramente como pequeas esferas incoloras;

- Fosfato clcico (hipurato clcico): en orina alcalina o neutra; no es frecuente; de

forma prismas largos y afilados (agujas), en ocasiones se agrupan formando rosetas o
estrellas, tambin como placas granulares, amorfas e incoloras (similares a acido rico); no tiene
mucha importancia clnica, pero puede ser ligada a hipertrofia de prstata o algunas infecciones
urinarias crnicas; clculos urinarios contienen fosfato clcico.

- Fosfato triple (amnico-magnesico-clcico): frecuente en orinas alcalinas o neutras;

de forma tapa de atad, aunque tambin puede verse como octaedros (muy variable); no tiene
mucha importancia clnica.

- Cristales de creatina: raramente encontrados en orinas de adultas, pero es frecuente en

orinas de nios y nias antes de la pubertad; es un metabolito de la degradacin endgena del

tejido muscular (su aumento => distrofias musculares, poliomielitis, etc.); de forma pseudohexagonal caracterstica.
- Fosfato amorfo: en orinas alcalinas; de semejante forma a uratos amorfos, pero de color
blanquecino.

Informe
del
sedimento
urinario
1. debe preceder por el estudio de "anormales" en orina (tiras reactivas => pH, densidad
y caractersticas patolgicas)
2.
deben
observarse
al
microscopio
optico (40x)
al
menos
10
campos.
3. debe proporcionar una visin del valor medio de cada elemento o estructura, obtenido en
todos
los
campos
observados.
4. debe ser "escueto" y "conciso" (solo hay que poner lo verdaderamente importante)
5. debe seguirse un orden => hay que informar primero el examen realizado de citolgico,
segundo
el
de qumico y
por
ultimo
el
de microbiolgico.
Examen citolgico:
- celulas hematolgicas => se redactan con nmeros y abreviaturas (p.ej. 6-8 L/C = no.leucocitos
por campo); se informa si existe piuria y hematuria y si se forma acmulos.
- celulas epiteliales => se redactan con adjetivos: escasas (algunas 1-3) - moderada (3-4)
-abundante (6-8) - intensa (muy abundante 10-12); las importantes son las renales y las
de transicin; las celulas escamosas (de las vas bajas), se informan cuando son abundantes.
- cilindros: se redactan al igual que las celulas; es importante identificarlos e indicar en el
informe el
tipo
de
cilindro.
Examen qumico (en un sedimento de orina normales, es frecuente no incluirlos en el
informe):
- cristales => se redactan con adjetivos; cuando son muy abundante, se habla de "diatesis".

- compuestos
amorfos =>
se
redactan
con adjetivos
Examen microbiolgico:
- bacterias => se redactan con adjetivos; es necesario especificar el tipo de m.o. y su movilidad
- levaduras =>
se
informa
con adjetivos.
Examen microbiolgico de una muestra de orina - en condiciones normales carecen
totalmente de flora bacteriana; la infeccin del tracto urinario es frecuente y la mayora de
m.o. patgenos proceden de la flora intestina => Bacilos Gram- (E.coli, Proteus spp,
Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae); Cocos Gram+ (Streptococcus grupo D y
Staphylococcus); Levaduras (Candida spp.); la toma de muestra debe ser obtenida en
condiciones aspticas en un recipiente estril, evitando en todo momento la contaminacin; el
paciente
debe
ser
instruido
de
la
forma
mas
adecuada.
Anlisis de microbiolgico (urinocultivo)
1. Preparacin de
un
"inoculo"
2. Sembrar en medio Cled (la ausencia de electrolitos, impide la invasin por
proteus);McConkey (un medio selectivo y diferencia para m.o. Gram-); agar Cetrimide (eficaz
para
la bsqueda de
pseudomonas)
3. Incubar a la temperatura optima de crecimiento de los m.o. buscados (generalmente a 37C)
4. Realizar el recuento tras la incubacin (presumible-mente han crecido los causantes de
la infeccin) => menos de 10.000 mo/ml de orina es negativo; mas de 100.000 mo/ml
hay infeccin urinaria; entre 10.000 y 100.000 mo/ml el diagnostico es incierto; puede
haberse infeccin no detectada por causas => un tratamiento ATB instaurado, una obstruccin a
nivel de las vas renales o la muestra recogida por una puncin supra-pbica (sin pasar por la
uretra,
donde
esta
la infeccin).
5. Una vez determinada la infeccin, hay que resembrar en medios selectivos, para proceder
la identificacin (tipacin) del germen causal de la misma.

Tema 18 - Cocos aerobios y anaerobios facultativos

(patologa e identificacin)
Gram+ => Micrococaceae (Staphylococcus - Micrococcus Planococus); Streptocococeae (Streptococcus Pediococcus
Aerococcus);Peptococaceae
Gram- => Neisseriaceae (Neisseria
Branhamella

Stomatococcus
Gemella
-

Moraxella)

Staphylococcus => cocos Gram+ inmviles, aerobios y anaerobios facultativos, tamao +/- 1
um; en forma de racimos, catalasa+, gelatinasa+, nitratasa+, fermentadores de muchas
azucares (via EMP); no capsulados y resiste al calor; crecen en medios generales y medios con
alto contenido de NaCl (halfilo); resistentes a agentes externos, distribuidas ampliamente en la
naturaleza, flora normal de las mucosas y la piel, causante de la intoxicaciones alimentarias,
heridas,
etc.
Especies
importantes (existe
>25
especies
y
varios
sub-especies/
cepas)
(1) S. aureus (saprofito de >40% de fosas nasales y 10% de vaginas) => estafilococo dorado
(pigmento amarillo); coagulasa+; fermenta el manitol; sensible a la novobiacina.
- 30 Ags (propiedades antifagocitarias y producen estructuras pigenas/ caractersticas en las
lesiones: polisacrido A es el mas importantes - inducen la formacion de Acs; protena A - un
potente agente antignico) => se subdividen en tipos segn sus caracteres antignicos;
- Produce toxinas (hemolisinas - lisan eritrocitos y leucocitos; t.exfoliativa/ exotoxina - causa
eritemas en la piel; leucopidinas - destruyen pmn y macrfagos; enterotoxina - anula
la accin del jugo gstrico y acta en el centro del vomito, nauseas y diarreas);
- Fermentos/enzimas (coagulasas - activa la protrombina; fibrinolisinas o estafiloquinasasactivador del plasmingeno; penicilinasas o beta-lactamasa - romper el anillo b-lactamico de las
penicilinas
creando
resistencia);
- Hemolisinas alfa provoca hemlisis beta en
AS; hemolisina
beta provoca hemlisis alfa en
AS;
- Enterotoxinas tipo A, B (causan intoxicaciones alimentaria) y D causa enterocolitis;
La accin patogena directa => procesos inflamatorios, forunculos, supurativos y de
necrosacin (en heridas y quemaduras); indirecta => afecta al tubo digestivo por la enterotoxina (gastroenteritis con nauseas, vmitos y diarreas, duracin 1-2 das, se trata con sueros
orales o anti-diarreicos); la bacteria no llega al intestino (solo su toxina), por eso no se encuentra
en las heces; crece muy bien con la temperatura veraniega y en las
cremas; infeccin generalizada
(septicemia) => formacin de cogulos o
trombos
intravenosos, artritis, pleuritis, endocarditis, osteomielitis o meningitis en los debilitados
(periodo de incubacin 1-6 horas).

(2) S.epidermidis y (3) S.saprophyticus son estafilococos oportunistas; distribuidas en el

medio ambiente, la piel y mucosas; son patgenas en debilidad; S.saprophyticus puede tener
pigmento dorado y puede fermentar Manitol; S.epidermidis sensible a la novobiocina (lo que le
diferencia
a
S.saprophyticus).
Aislamiento
de
los
estafilococos:
- Muestra procede de las heces => medios selectivos Chapman, ricos en NaCl(carcter halfilo),
contiene manitol (diferencia S. aureus del resto de Staphylococcus); Otros tipos de muestras
=> medio
AS (observar caractersticas de
las
colonias
color, hemlisis,
etc).
Pruebas bioqumicas:
- Los estafilococos degradan muchas azucares (glucosa, sacarosa, fructosa, manosa, etc.);
produce gelatinasa+, catalasa+, nitratasa+, crecen muy bien a 37C, hemolisina alfa y beta,
coagulasa+
(S.aureus).
Diagnstico bacteriolgico:
- Toma muestra con torunda estril o por puncin segn los casos en total asepsia; tincin Gram;
aislamiento en medio Chapman/manitol salado y AS, tras la incubacin observar las colonias;
pruebas bioqumicas - coagulasa (S.aureus), fermentacin de glucosa, catalasa, gelatinasa,
hemolisinas
alfa
y
beta
(cepas patgenas),
fibrinolisinas,
fermentacin
del manitol (S.aureus); estudio
de
la
sensibilidad
a
la novobiocina(diferenciar S.epidermidis de S.saprophyticus)
- Diferenciacion del genero Staphylococcus y Micrococcus (en principio no es patogeno) =>
Staphylococcus sensible a bacitracina y eritromicina; Micrococcus a veces pueden daroxidasa+.
- Estafilococos
coagulasa- es
un
grupo heterogneo
(+
importante
son S.epidermidis yS.saprophyticus) 80% en el pasado no causan infecciones importantes, pero
cada vez esta tomando mas importancia; ademas muestra resistencia a varios ATB alternativa de
penicilina (meticilina y cloxacilina); pueden producir infecciones urinarias, bacteriemias (por
la implantacin de cateteres i.v.) y endocarditis.

Streptococcus => cocos Gram+, tamao pequeo, capsulados, anaerobios facultativos, se

agrupan en cadenas, fermentador de glucosa, son saprofitos, oportunistas y algunos patgenos;
poseen Ags (polisacrido C - segn sus caractersticas, se clasifican engrupos A-V de
Lancefield; protena M antifagocitarias, la
posee
el
grupo
A)
Clasificacion
A. segn el tipo de hemolisis (capacidad de romper hemates - produce hemlisis alrededor
de
sus
colonias
en
AS)
=>
gamma hemoltico,
alfa hemolticos/ hemlisis parcial (decoloracin parda
verdosa
- S.viridans);beta hemolticos/ hemlisis total (halos de transparencia grandes entorno a su
colonia) -grupos A, B, C, D (enterococo) G y F; estreptococo NO Beta-hemolticos - grupo
D, S.viridansy S.pneumoniae (alfa
y
gamma)
B. segn sus caracteres bioqumicos (sensibilidad a bacitracina, optoquina, tolerancia a
NaCl, degradacin de
bilis
esculina
y
factor
CAMP):
Sensible
a bacitracina (grupo
A)
Crecimiento
en NaCl
6,5% (grupo D
enterococos)
- Factor CAMP => potenciar la accin hemoltica de S.aureus (lo produce grupo B)
- Pruebas de bilis esculina - hidrolisan este compuesto (grupo D enterococos)
Sensible
a optoquina (S.pneumoniae /neumococo)
- Hidrlisis de hipurato sdico (grupo
B)
C. segn los caracteres antignicos (a
traves
de
reacciones serologcas especificas
=> aglutinacin, precipitacin, inmunofluorescencia, etc.) => los Ags en la pared celular
(pptido glicano - toxica y facilita la unin de ellos a las clulas epiteliales
invadidas; polisacrido C - distintas caractersticas que confiere la agrupacin de los
estreptococos
(grupos
de
Lancefield);
- Grupo A (la + importantes) => la mayora son Beta-hemolticos y patogenos al hombre;
protena M se presenta como pelos en el permetro de la pared celular (anti-fagocitaras).
- En las capsulas del grupos A y C se encuentra enzima hialuronidasa(caractersticas antifagocitaras)
Accin patgena e Inters clnico:
(1) Streptococcus del grupo A (S.pyogenes) => causan 90% de las infecciones
estreptoccicas; muy sensibles a los agentes externos; son floras de la mucosa nasal y farngea;

poseen polisacrido C (proporciona la especificidad de grupo) y protena M(facilita la

adherencia a las clulas invadidas y proteccin a la fagocitosis); son Beta-hemolticas, sensibles a
la
bacitracina y
variable
a
optoquina
- Poseen hemolisinas estreptoccicas/ estreptolisinas (O y S); estreptolisina
S(poco antignico) => holoprotena toxica responsable de hemlisis en medio AS;estreptolisina
O (muy antignico) => hetero-protena exotxica muy
activa
de
efecto hemoltico frente
a glbulos rojos y leucocitos (pmn y macrfagos => alterando la estructura celular); induce a
la formacin de Acs
ASLO.
- Produce toxina eritrognica responsable del exantema de la fiebre escarlatina;
- Enzimas estreptoquinasas (activador de plasmingeno => plasmina en fibrinolisis); induce
a
la formacin Acs;
se
utiliza
en
el
hospital
en
procesos trombo-gnicos.
- Enzima desoxirribonucleasa estreptoccica (despolimeriza ADN); son antignicas y se
distingue
en
4
grupos
(A-B-C-D).
- Enzima Hialuronidasa (hidroliza el acido hialurnico del tejido conjuntivo); facilita
su invasin.
- Proteinasa
estreptoccica (origina procesos
inflamatorios
y necrosacin)
Patogenicidad de S.pyogenes (grupo A) => Infecciones en la piel o mucosas (+frecuentes anginas/faringitis sobre todo a nios/contacto directo, otitis y sinusitis) 95% de infecciones
naso-faringeas son producidas por estreptococos del grupo A; infecciones NO
supuradas/ inmunolgica => fiebres reumticas (complicaciones de tto no adecuados),
glomerulonefritis, endocarditis, meningitis, sepsis.

(2) Streptococcus del grupo B (S.agalactiae) => saprofito del hombre en rinofaringe, uro-genital, vaginal e intestinal; produce infecciones oportunistas; hipurato+(degrada el
hipurato sdico) es lo que le diferencia del grupo A; posee factor CAMP (potenciar
la accin hemoltica de S.aureus); puede origina meningitis e infecciones pulmonares en el
neonato, infecciones del tracto respiratorio, mucosas, piel, etc; son Beta-hemoliticos, resistente a
la bacitracina;

(3) Streptococcus
del
grupo
C => es el mas proximo al grupo
A;
sonBeta hemolticos (tambin alfa y gamma) y muy sensible a los agentes externos; resistente a
la bacitracina; crecen en medios salinos (NaCl 6,5%); posee enzima hialuronidasa; saprofito del
hombre en la rinofaringe; puede producir mastitis en vacas, muermo en caballos y sepsis ??? en
el
hombre.
(4) Streptococcus del grupo D => son alfa, beta y gamma hemolticos; resistentes a agentes
externos
y
ATB;
- los enterococos => S.faecalis y S.faecium; son saprofitos del intestino del hombre; crecen
bien en NaCl 6,5% (a diferencia de los NO enterococos); hidrolizan la bilis esculina; son alfabeta-gamma hemolticos; resistente a la bacitracina; puede producir infeccin urinaria e herida.
- los No enterococos => S.bovis, S.equinus y S.anginosos (afecta vacas y caballos);hidrolizan
la
bilis esculina;
resistente
a
la
bacitracina;
(5) Streptococcus del grupo G, F y E => saprofitos de la rinofaringe, vias genitales e
intestino en el hombre; pueden producir infecciones en vias urinarias, heridas; resistente a la
bacitracina; son alfa y beta-hemolticos; crecen variable en medios salinos (NaCl 6,5%)
(6) Streptococcus Alfa hemoliticos (S.viridans) => no son capsulados; producen alfa y
gamma hemolisis; saprofitos de la orofaringe, mucosa bucal, placa dental (caries); resistente a la
optoquina;
(7) Streptococcus pneumoniae (neumococo) => es un grupo a parte; diplococos, Gram+
y son capsulados; muy sensibles a medios externos; son alfa y gamma hemolticos;sensibles a
optoquina; crecen variable en medios salinos (NaCl 6,5%); saprofito en aparato respiratorio;
puede producir neumonias, inflamaciones sinusitis, otitis y meningitis (mas frecuente en
adultos);

Aislamiento:
- toma de muestra con total asepsia de la rino-faringe con hisopo estril, una muestra del pus (si
hubiera); se analiza de inmediato (estreptococos son sensibles a medios externos);
- un frotis para la tincin de Gram; si se sospecha S.pneumoniae se realiza
una tincin negativa con tinta china y prueba de "Quellung" (determinar Ags de la capsula); se
produce una reaccin de Quellung cuando un Acs tipo especfico se une al polisacrido capsular
del neumococo y causa un cambio en el ndice refractivo de la cpsula hacindola aparecer
hinchada
y
ms
visible.
- la siembra en AS-CNA (posibles hemlisis - estreptococos son resistentes a nalidixico que
inhibe el crecimiento de otros grmenes); realizar hemocultivos si se sospecha endocarditis o
sepsis; las colonias son grisaceos, redondos de bordes lisos y pequeos; medios selectivo y
diferencial con NaCl 6,5% => permite el crecimiento de enterococos del grupo D.
Pruebas bioqumicas:
- pruebas de catalasa-, hemolisis en AS, sensibilidad o no de optoquina y bacitracina; hidrolisis
de hipurato (positivo
en
el
grupo
B), utilizacin de bilis
esculina.
- identificar los grupos antignicos segn el tipo de sustancia polisacrido C (clasificacin de
Lancefield) por metodo serolgicos => prueba de ltex (romper la capsula para sacar la
sustancia; reaccin inmuno-complejo
Ag-Ac).
- los Gram+ en general son sensibles a la vancomicina excepto algunos cocos Gram+, catalasaque
no
son
estreptococos
(Pediococcus es resistente
a
la
vancomicina).
Pruebas serologcas
/
inmunologicas:
- la bsqueda en el suero (dilucin seriadas) del paciente de Acs frente a toxinas y enzimas de
estreptococos (sobre todo grupo A) => ttulos de Acs antiestreptolisinas O (ASLO); para saber si
la infeccin es aguda o creciendo; en caso de fiebres reumticas con ttulos de ASLO negativos, se
determinan los ttulos de Acs antiestreptoquinasas (ASK), antihialuronidasas(ASH); pruebas
de hinchamiento capsular con suero antineumococico polivalente (prueba de Quellung) muy
utilizado para determinar S.pneumonia => se aaden Acs contra Ags capsulados, si
hay aglutinacin es signo de que esta estreptococo.
Neisseria => cocos Gram-; en forma de diplococos (granos de caf), aerobios; son saprofitos de
mucosas (genitales, faringe, fosas nasales) y cavidades del hombre y los animales;citocromooxidasa y catalasa+; utilizan azucares con metabolismo oxidativa y fermentativa;
producen pigmentos carotenoides; nutricional-mente exigentes; sensibles a medios externos.
Especies

mas

importantes - 4 gneros =>

Neisseria,

Branhamella

(B.catharralis),

Acinetobacter
y
Moraxella.
(1) Neisseria meningitidis (meningococo) => es una especie patgena para el hombre;
son parsitos obligados del hombre (no se encuentran libre en la naturaleza); es difcil de
cultivar si hay competicin (acompaadas por otros grmenes); son capsulados; utiliza glucosa y
maltosa; posee fimbrias (facilita su adherencia) y capsulas (contiene polisacridos con
comportamientos serolgicos diferentes A,B,C, etc.); crecen a 35-37C; son muy sensibles a
medios externos; producen meningitis epidmico (contagio por gotas de flugge en
contacto ntimos); otros causantes de meningitis => Haemophyllus influenzae, Streptococcus
agalactiae, Escherichia coli, Pseudomona aeroginosa, Micobacteria, Neisseria meningitidis,
Cryptococcus
neoformans
y
otros.
(2) Neisseria gonorrhoeae (gonococo) => idnticas caractersticas que meningococo;
utiliza glucosa como fuente de carbono; requieren medios enriquecidos con CO2 5-10% para
potenciar su crecimiento a 35-37C; son muy sensibles a medios externos y
son parsitos estrictos del hombre y produce gonorrea (no se encuentra libre en la naturaleza);
(3) Neisseria saprofitas => saprofitos de la rino-faringe y genitales; son poco exigentes y
crecen a 22-35C en medios generales; resistentes a medios externos y no son patgenos para el
hombre.
Accin patgena e inters clnico
Neisseria meningitidis (meningococo) => diplococos /granos de caf; coloniza las mucosas
y vas respiratorias (sobre todo superiores); 5-30% son portadores sanos en rino-farngeo;
afectan a nios de 6 meses hasta 5 aos (causas mas importantes de mortalidad
infantil); tambin afectan nios
mayores y adultos jvenes de
6
hasta
25
aos;estructura antignica =>
componentes
de
su capsula (polisacrido),
las fimbrias (facilitar la adherencia y la invasin) y protenas de la membrana (toxica sobre las
celulas
invadidas);
Cuadro clnico - comienza con una rino-faringitis de sintomatologa leve (sobre todo en nios
- en adultos se forman Acs anti meningococo) evoluciona a forma severa, se complica con
bronquitis; si el meningococo pasa a la sangre, originara micro-focos en la piel conerupciones
petequiales (1-2mm) en el tronco e extremidades inferiores, cefaleas, fiebres altas, artralgias;
puede pasar a LCR con fiebres muy altas, cefaleas fuertes, rigidez de nuca, vmitos, diarreas,
etc.; se agravan hasta la muerte sin tto efectivo y rpido; el examenLCR es turbio, purulento con
abundantes meningococos (debido a acumulacin de pmn con meningococo dentro (celulas
CLUE); tto con penicilina (G) - el tto del portador es rifampicina.

Neisseria gonorrhoea (gonococo) => idnticas caractersticas que el meningococo; su

afinidad particular es sobre las mucosas uro-genitales, con fimbrias (adherencia a las celulas
epiteliales dificultando la fagocitosis); posee endo-toxina que inactiva Acs prximos; produce
gonorrea
en
hombres
y
mujeres
(ETS);
Cuadro clnico - tras un contacto sexual, los gonococos se adhieren a la superficie de la
mucosa gracias a las fimbrias y protenas de la membrana; posteriormente se penetran a tejidos
sub-epiteliales y empiezan a multiplicarse, liberando endo-toxina con efecto toxico a la uretra,
cuello del tero, ano (donde colonicen), produce la destruccin de celulas del epitelio
y supuracin (secrecin purulenta) y dolor a la miccin; en las mujeres puede ir acompaada
por uretritis, vaginitis y 20% salpingitis de las trompas (produce esterilidad en mujeres); 50% de
los casos son asintomticos con lo que la ausencia de tratamiento conduce a la cronificacin;
puede provocar bacterimia dando artritis supurativos; tto => penicilina o sus derivados; en
neonatos provoca gonococia ocular que conduce a la ceguera - se previene instilando gotas de
nitrato de plata - mtodo de "Crede" y (contra Chlamydia es mas efectivo) eritromicina???

Aislamiento
caracteres bioqumicos diagnostico
N.meningitidis - toma de muestra de LCR (puncin lumbar), sangre y/o exudado faringeo; se
deben examinar de lo antes posible (sensibilidad al medio externo); se transporta en un medio
de Thayer-Martin modificado a 37C (en caliente); si la muestra de LCR es turbio o purulento, se
divide en 2-3 tubos; 1er tubo se centrifuga y sobre el sedimento se realizan frotis Gram; 2nd
tubo se utiliza para la siembra en AS, agar chocolate, Mueller Hinton y Thayer-Martin; 3er
tubo se realiza un hemocultivo y recuento celular; meningococo crecen dando colonias
transparentes diminutas y no hemolticas; las placas se incuban a 37C enambiente de CO2 510%.
- Pruebas bioqumicas => catalasa+, oxidasa+, prueba de la utilizacin de glucosa y maltosa
por oxidacin (aerobio),
lactosa-,
nitratasa-.
- Estudios serolgicos => inmunofluorescencia directa del LCR o el suero, contrainmunoelectroforesis y tcnica ELISA.
Existe
sistema
de
multi-prueba
para
Neisseria
y
Haemophylus.
N.gonorrhoeae - toma de muestra a partir de la uretra (hombre), recto en homosexuales y
uretra, cuello de tero y recto (mujer), se realizan en el laboratorio (sensibilidad a medio
externo), por la maana antes de la primera miccin (al ser posible); se procede de inmediato al
estudio directo y la siembra en medios especficos o se transporta en medio TM modificado.
- se realiza la tincin (Gram- en forma de granos de caf); en el frotis se ven los pmn con
diplococos dentro; la siembra se har en AS, agar chocolate, Thayer-Martin (con factores de
crecimiento y ATB vancomicina, anfotericina, colistina y trimetropin que inhibe el crecimiento
de otros grmenes); en TM los gonococo son colonias pequeas de color gris y los
meningococo son blanquecinas se incuba a 35-37C y atmsfera enriquecida de CO2 5-10%;

- Pruebas bioqumicas => utilizacin de azucares por va oxidacin (glucosa+, lactosa, maltosa+
para meningococo, y sacarosa); oxidasa y catalasa son positivos, nitratasa-.
- Pruebas serologcas => hemo-aglutinacin, inmunofluorescencia indirecta, ELISA (mas
utilizadas)
- Sistema de identificacin multiprueba para Neisseria y Haemophylus.

Neisseria saprofitos (Neisseriaceas) - normalmente son flora de oro-faringe/ naso-faringe;

son especies de bajo patogenicidad, aunque a veces implicadas en meningitis y otros; no
requieren
medios
especiales
para
su
crecimiento.
- Branhamella catharralis / Moraxella catharralis => hoy en da la clasificacin es
confusa (la tendencia - dentro de la familia moraxellacea), otros autores tienden a diferenciarla y
la clasifican como familia Branhamellaceae; es Gram-, oxidasa+, catalasa+, nitratasa+ (reducen
nitratos a nitritos), no fermentan azucares, crecen bien en medios generales (AS, agar chocolate y
Thayer Martin), son aerobias o 5% de CO2; flora normal de naso-faringe, pero a veces
se asla como agente causal en septicemias e infecciones otorrinolaringolgicas (sinusitis, otitis).
- Acinetobacter => anteriormente clasificada dentro de la familia Gram- no fermentadoras
(pero oxidasa- => bacteria inerte) junto con Pseudomonas; actualmente esta incluido dentro de
la familia Moraxellaceae; son microorganismos que pueblan fundamentalmente suelos y aguas y
presentes en medios hospitalarios (infeccin nosocomial); la especie mas importante
=> A.calcoaceticus (causan neumonas, infecciones urinarias y sepsis); crecen en Mac, AS y
otros; en AS producen colonias grises con halos de hemlisis, oxidasa-, catalasa+, son
cocobacilos
Gram- (se
pueden
confundir
con
Neisserias
por
su
tamao).
- Moraxella => coco-bacilo, Gram-, no fermentador, inmvil, oxidasa+, catalasa+, difcil de
distinguir con Neisseria; en general los no fermentadores son muy difciles de distinguir y
requiere
numerosas
pruebas bioqumicas para
etiquetarlos.

Tema
19
- Entero-bacterias y
(patologa e identificacin)

vibrios

Entero-bacterias bacilos
o coco-bacilos Gram-,
aerobios
y
anaerobios
facultativos, mviles (flagelacin pertrica) o inmviles, fermentadoras de glucosa (con o
sin produccin de CO2), oxidasa-, catalasa+; algunos usan metabolismo fermentativo y otros
usan metabolismo oxidativo; la mayora son nitratasa+; algunos son sulfuhidratasa+ (Proteus y
Salmonella), indol+ (E.coli); son saprofitas/ flora del tracto gastrointestinal del hombre y de los

animales; tambin se encuentra en el agua y en el suelo; resistentes a medios externos; son

potencialmente patgenos en individuos debilitados y produce infecciones oportunistas; algunos
son patgenos siempre donde sea se encuentra, otras depende de la muestra donde se asla y el
resto
se
cuestiona
su
papel.
Caractersticas antignicas:
- Ag somtico / Ag O => es lipo-polisacrido, termo-estables, se encuentra en la pared
bacteriana, es una endo-toxina (la parte polisacrido es muy antignico y la parte lipdica es
inactiva bioqumica-mente).
- Ag capsular / Ag K => se encuentra en la capsula bacteriana, es polisacrido, es antifagocitaras (relacionado con la virulencia de ciertas especies como E.coli K-1 y Salmonella
thyphi).
- Ag flagelar /Ag H => es caracterstico de las cepas mviles, es proteico y responsable de
la accin patgena de
la
bacteria.
Clasificacin segn su
capacidad
para
fermentar
la
lactosa:
- Fermentadoras rpidas de
lactosa
(coliformes)
=> Escherichia,
Enterobacter
y
Klebsiella(tarda a
veces)
- Fermentadoras lentas de lactosa / ONPG+ (coliformes) => Citrobacter, Serratia, Hafnia,
Yersinia
(patgeno)
y
Shigella
sonnei.
- NO fermentadoras de lactosa (no coliformes) => Salmonella, Shigella, Proteus, Morganella,
Providencia
y
Edwardsiella.
Salmonella - entero-bacterias no coliformes, mviles con flagelacin pertrica; bacilos Gram-;
en general provocan infecciones entrico febriles (gastroenteritis, entero-colitis o fiebres
tifoideas
o
para-tifoideas).
Especies importantes - S.typhi, S.choleraesuis, S.enteritidis, S.paratyphi A,B y C, S.arizonae.
Accin patgena e inters clnico
- Ag somtico O, Ag flagelar H y Ag capsular VI (en S.typhi - Ag termolbil con poderprotector
frente
a
los cidos /cida gstrica, resistencia y
anti-fagocitaras)
- endo-toxina y enterotoxina (efecto irritante y citotxico sobre el tracto intestinal)
Cuadros clnicos
1. Infecciones entricas (S.typhi - fiebres tifoideas o S.paratyphi A,B o C - paratifoideas); Las fiebres tifoideas son transmitidas al hombre va oral (alimentos crudos, poco
hechos, mal conservados y aguas contaminadas), llega al estomago, resiste la acidez gstrica,pasa
al intestino delgado (leon), penetra por endocitosis destruyendo parte de las celulas de la
mucosa
intestinal;
una
vez
dentro
las
salmonellas
son fagocitadas por macrfagos ytransportadas por
diferentes vas y provoca bacterimia =>
todo sucede en el periodo de incubacin (8-15 das); comienzo brusco de signos y sintomas
=> los macrfagos les transportan hacia el bazo, higado y MO, produciendo multiplicacin de
nuevas salmonellas, volver al intestino generando placas ulceradas, necrosacin de placas de
Peyer
y
en
casos
mas
graves
originar perforacin y
hemorragias.
Las fiebres para-tifoideas son mucho mas leve con un periodo de incubacin de entre 7-10

dias con bacterimia y estado febril que dura varias semanas; no hay perforacin intestinal ni
hemorragias ni invasin de salmonellas a otros rganos; cuadros clnicos => dolores de
cabeza, fiebres altas, anorexia, astenia/ cansancio; preciso un tratamiento que dura 9-10 das.
2. Infecciones
gastrointestinales
y
enterocolitis (S.enteritidis la
mas
frecuente,S.choleraesuis, S.typhimurium y otras); periodo de incubacin 12-36 horas; se
transmite por alimentos contaminados con una concentracin de salmonellas de 10 millones a
mil millones/ml, depende de tipo de la cepa; el alimento les facilita su llegada a pasar el
estomago y llegar al intestino delgado colonizando el leon y el ciego, se penetran por fagocitosis
al epitelio y se multiplican originando una inflamacin que genera cuadros diarreicos con dolor
abdominal (perdidas de electrolitos y agua), fiebres altas, nauseas, vmitos; re quiere
untratamiento de re-hidratacin que dura 6 das - las floras se encargan de eliminarlas.

Aislamiento
pruebas bioqumicas diagnostico
de
Salmonella
Salmonelosis => toma muestra de las heces (coprocultivo), anlisis del alimento sospechoso;
medios de cultivo SS, McConkey, caldo selenito; pruebas bioqumicas: ONPG-, TDA-, Citrato+
(S.cholera-suis y S.enteritidis,
tambien
son
CO2+
y
Ornitina
descarboxilasa+),
SH2+, fermentacion de azucares: Glucosa+, Trehalosa+ (S.typhi yS.enteritidis), etc.
Fiebres tifoideas y para-tifoideas => toma muestra de diferentes localizacin segn la
fase de enfermedad; en la fase de incubacin se busca en heces (coprocultivos), en
orina(urocultivo), sangre (hemocultivo); en la fase inicial de la enfermedad / periodo febril, se
realiza hemocultivo; en el periodo posteriores o finales se busca en heces (coprocultivo); medios
adecuados; se realiza las pruebas bioqumicas, reacciones de aglutinacin cuantitativa (ttulos)
de Ags O, H y VI a traves de sueros especficos monovalentes y polivalentes, especialmente para
Ag
VI
(pruebas inmunolgicas).
Mucaptest => prueba inmunolgica utilizando suero polivalente (Acs anti O y anti H), un
resultado
positivo
dara
unas
colonias
fluorescentes (posible
Salmonella).

Shigella - bacilo Gram- inmvil, no fermentador de lactosa (excepto S.sonnei) ;

son patgenas para el hombre, provoca afecciones graves y contagiosas sobre el tracto
gastrointestinal (disentera bacilar) especialmente en ambientes de salubridad baja.
Accin patgena e inters clnico - se debe a la produccin de sustancias toxicas, Ags O y
K, plsmidos (facilita la invasin), adhesinas (adherencia a las celulas que invaden),exotoxina
con propiedades cito-toxicas (tipo A - origina necrosis celular, ulceras, hemorragias
y perforacin), neuro-toxicas y entero-invasivas (tipo B - adherencia a las celulas del epitelio
gastrointestinal); al llegar al intestino del hombre va oral (puede resistir el acido gstrico, por la
alta cantidad ingerido y tambin protegido por los alimentos), ejerce su accin toxica, pasar al
colon originando necrosis con signos y sintomas caractersticas (las toxinas deS.disenteriae no
suelen pasar a la sangre); cuadros diarreicos van acompaados dedolor clico, nausea, vmitos,
malestar general y fiebres muy altas con deposiciones sanguinolentas con moco y pus.
Aislamiento
pruebas bioqumicas,
diagnostico
de
Shigella
Toma muestras de heces recin emitidas en los primeros das de la enfermedad (hay mayor
numero de shigellas), eligiendo restos de moco y sangre si los hubiera; el estudio
riguroso(teniendo en cuenta que Shigella se destruye en medios cidos y a temperaturas <4C;
medios
de
cultivos
SS,
McConkey,
Hektoen,
Yersinia
CIN,
Campylosel,
TCBS;pruebas bioqumicas TDA, KIA (K/A para Shigella y A/A para S.sonnei), ONPG (positivo
para S.sonnei),
fresco,
ureasa-,
VP-, nitratasa+, manitol
(positivo para Shigella y negativopara S.disenteriae);
pruebas
de aglutinacin cuantitativa
(titulo) para demostrar Acs en el suero del paciente a traves de sueros especficos mono y
polivalentes.

Escherichia - entero-bacterias bacilar o coco-bacilar Gram- mviles, fermentadoras de glucosa

y lactosa, produce CO2, aguantan temperaturas altas (la diferencia de otros
coliformes), resistente a medios externos, fcil de encontrar en el agua, alimentos (indicativo
de contaminacin fecal reciente); saprofito de flora aerobia y anaerobia facultativa del tubo
digestivo; puede provocar trastornos gastrointestinales de diarrea, infecciones urinarias,
meningitis en neonatos y excepcionalmente bacterimia; la especie mas importante para el
hombre es E.coli (segn la cepa puede tener Ag somtico O, capsular K y flagelar H, fermentos
y endo-toxinas).
Accin patgena e inters clnico - los cuadros clnicos son variables segn el tipo de toxina
que originen; algunas cepas de E.coli forman Ag O y K anti-fagocitaras y resistencia a
bactericidas y ATB (alto poder invasivo); otras cepas forman endo-toxinas, causante de cuadros
febriles y diarreicos; otras cepas tienen un mecanismo de accin anlogo al de Shigella con
menor gravedad; a veces la entero-toxina que producen es parecida a la deVibrio cholerae que
causa
perdida
masiva
de
agua
y
electrolitos.
- si la cepa de E.coli forma una entero-toxina citotxica parecida a Shigella => cuadros diarreicos
en brotes epidmicos que afectan a nios y lactantes (E.coli entero-patgena)
- si forma una entero-toxina semejante a Vibrio cholerae => procesos diarreicos en nios,
adultos, originndose espordica-mente brotes epidmicos (diarrea del viajero - E.colienterotoxgena)
- si forma una entero-toxina citotxica similar a S.disenteriae => procesos diarreicos graves,
hemorragico
espordicamente
en
brotes
(E.coli entero-hemorragica)
- si presenta ciertos plsmidos que incrementan su capacidad de invasin => cuadros diarreicos
graves que afectan a nios, adultos con brotes epidmicos en casos aislados (E.colienteroinvasiva)
Las cepas de E.coli se distingue con sueros antignicos; E.coli tambin puede provocar
infecciones urinarias (cistitis, pielonefritis, etc), infecciones biliares, heridas, meninges
(meningitis
en
neonatos).

Aislamiento,
pruebas bioqumicas diagnostico
Toma de muestra representativa de alimento, agua, heces, exudado; frotis de Gram; medios de
cultivo Mc, Levine; pruebas bioqumicas => lactosa+, indol+, citrato-, sensible a la Colistina.

Yersinia - entero-bacterias muy patgenas para el hombre (Y.pestis - causante la

peste bubnica); son coco-bacilos Gram-, mviles a 25Ccon flagelacin pertrica e inmviles a
37C, fermentadores de glucosa (ONPG variable),capsuladas (Y.pestis) y oxidasa-.
Especies mas importantes - Y.pestis (agente etiolgico de la peste bubnica en el hombre)
trasmitida a traves de ratas y pulgas, originando enfermedad grave febril, epidmico de alta
mortalidad; Y.pseudotuberculosis afecta
animales
y
excepcionalmente
al
hombre; Y.enterocolitica (sacarosa+ en medio TSI); los 2 ltimos afectan mas a animales que
al
hombre
(nios)
=>
originando
estados
febriles
y
diarreicos.
Accin patgena e inters clnico de Y.pestis => cuadros agudos y febriles con
alta inflamacin de los ganglios linfticos, hemorragias internas, petequias difusas en la piel, en
ocasiones septicemia y neumnia; es muy contagiosa, se origina en lugares de salubridad baja; la
muerte se produce por shock sptico (fracaso multi sistmico) o por neumnia; factores de
virulencia:
- La toxina murina (liberada al medio cuando muera la bacteria) => protena que bloquea
la utilizacin de
O2
por
parte
de
las
celulas.
- Endo-toxinas (liberadas en el transcurso de la enfermedad) => origina el proceso febril
- Ag
V con
propiedades anti-fagocitaras
- Coagulasas y fibrinolisinas
Y.pestis llega al hombre a traves de la picadura de pulga (infectada por ratas con
peste),atraviesa los vasos linfticos, pasa a los ganglios donde se multiplica originando
bubones,pasa a la sangre y se disemina por el bazo, higado, pulmones, piel, mucosas, se
multiplica provocando lesiones pigenas (toxina murina), hemorrgicas, necrtica y
edematosa; en casos graves aparece coagulacion intravascular diseminada (CID) (por
la accin de lascoagulasas) o ditesis hemorragica (por la accin de las fibrinolisinas), colapso
circulatorio,
toxema
generalizada
y
muerte; formas clnicas:
1. Peste bubnica (la mas frecuente); tras el periodo de incubacin de 3-7 das despus de la
picadura, aparecen signos y sintomas con escalofros, vmitos, formacin de bubones en las
ingles axilas y/o zonas submaxilares (los tejidos circundantes aparecen inflamados); sin

tratamiento
se
agrava
hasta
la
muerte.
2. Peste pulmonar (es la complicacin de peste bubnica); se produce afeccin pulmonar
grave
con
insuficiencia
respiratoria,
cianosis;
es
altamente
mortal.
3. Peste septicmica es estadios ltimos de la peste en cual quiera de sus formas y es
generalmente
mortal.
Aislamiento
pruebas bioqumicas diagnostico
Toma de muestra de exudados purulentos del bubn (por aspiracin), de sangre, LCR, tejido
pulmonar, ndulos linfticos o esputo, heces, segn los casos; la tincin Gram-, nigrosina
(visualizacin de capsulas); medios de cultivo => Mc, Yersinia CIN (colonias muy
pequeas); pruebas bioqumicas => mvil a 22C y inmvil a 37C, Lactosa-, ONPG+,ureasa+,
indol y TDA-, oxidasa-, nitratasa+; a veces Y.pestis y Y.pseudotuberculosis son ONPG
variable; Y.enterocolitica es sacarosa+.

Entero-bacterias oportunistas - bacilos Gram- aerobios y anaerobios facultativos, poco

exigentes nutricional-mente, ampliamente distribuidos en el medio ambiente; son saprofitos de
la flora gastrointestinal, resistente a medios externos y ATB; no son patgenos al no ser si
el husped es debilitados, pueden provocar infecciones hospitalario; en la mayora son lactosa+,
bacilos
Gramcoliformes;
Principales especies de coliformes/ lactosa+ (Escherichia, Enterobacter, Citrobacter,
Serratia, Klebsiella y Hafnia) y no coliformes /lactosa- (Proteus, Morganella y Providencia).
1. Escherichia => Gram- aerobias y anaerobias facultativas, fermentadoras rpidas de lactosa y
glucosa,
produce
CO2, indol+,
citrato-, sensible
a
Colistina, mviles.
2. Enterobacter => fermentadora rpida de lactosa, produce CO2, produce acetona de la
glucosa (VP+), citrato+, mvil, ornitina-descarboxilasa+, son comensales de flora intestinal;
puede provocar a individuos debilitados diarreas, infecciones del tracto respiratorio, heridas, etc;
especies
importantes: E.aerogenes y E.cloacae.
3. Serratia =>
fermentadora
lenta
de
lactosa
(ONPG+)
y
la
glucosa,produce acetona (VP+), mviles, citrato+,
ADNasa+, ornitinadescarboxilasa+, saprofitas
del
hombre y tambin en
el medio
ambiente (agua
y
otros lquidos), resistentes a ATB y desinfectantes; provoca infecciones urinarias y sepsis a
personas
debilitadas.

4. Citrobacter (huelen a peste) => fermentadora lenta de lactosa (ONPG+), mvil, fermenta la
glucosa y VP- RM+, citrato+; son comensales del tubo digestivo del hombre y puede provocar
infecciones urinaria, respiratoria, sepsis, bacterimias, meningitis a los individuos debilitados;
especies
importante
=> C.freundii.
5. Klebsiella => inmviles, fermentadoras tarda de
lactosa,
utiliza
glucosa
yproduce acetona (VP+), citrato+, ureasa+; son comensales del tracto gastrointestinal
y vas respiratorias superiores; puede provocar neumonas, rinitis, infecciones urinarias; especies
importante => K.pneumoniae (sub especies VP+ y VP-) y K.oxytoca (indol+).
6. Hafnia => mviles a
22C y inmviles a
37C,
fermentadora
lenta
de
lactosa
(ONPG+),citrato+, utiliza glucosa y produce acetona (VP+); provoca infecciones hospitalarias.
7. Proteus, Morganella y Providencia => NO fermentan la lactosa, pero si glucosa y
produce CO2, RM+; mviles, TDA+ (diferenciar del resto entero-bacterias), pueblan aguas
residuales, el suelo, materia orgnica y son comensales en la flora intestinal del hombre; pueden
provocar
infecciones
hospitalarias;
especies
importantes:
- Proteus mirabilis (indol-, ureasa+, TDA+, SH2+), P.vulgaris (indol+, ureasa+, TDA+)
- M.morganii (ureasa+, indol+,
TDA+)
- Providencia
rettgeri (ureasa-,
indol+,
TDA+)
P.mirabilis puede
provocar infeccin urinaria, descompone
la
urea
de
la
orina quegenera precipitacin de sales clcicas => formacin de clculos renales; tambin puede
provocar infecciones gastrointestinales, toxinfecciones alimentarias, heridas, etc.

Accin patgena e inters clnico - si el husped se encuentra debilitado (postoperatorio,

tratamiento inmunosupresores) los saprofitos podran ser patgenos; las infecciones mas

frecuentes
=>
- tipo urinario (40% de las infecciones hospitalarias - pacientes sondados, encamados,
intervencionados quirrgica-mente) provocado por E.coli, P.mirabilis, P.vulgaris, Klebsiella y
Enterobacter, provocando cistitis (de las vas bajas) y pielonefritis (de las vas altas); son
infecciones agudas con fiebre, dolor lumbar, polaquiuria o anuria y disuria; es frecuente en
los anlisis de
orina
piuria,
bacteriuria
y
proteinuria;
- tipo abdominal son poco frecuente => abscesos y peritonitis debido a perforacin intestinal.
- tipo respiratorio (20% de las infecciones hospitalarias) afectando vas respiratorias
altas, neumonas y
bronco-neumonas (pacientes
con
afecciones crnicas)
Aislamiento
pruebas bioqumicas diagnostico
- Toma de muestra segn las afecciones o procesos patolgicos en condiciones de total asepsia
Examen
directo
(fresco
y tincin Gram)
- Aislamiento en medios especficos/ selectivos (Hektoen, Mac) que inhiben los Gram+
- Pruebas bioqumicas e inmunolgicas

Familia Vibrionaceae - Genero Vibrio, Aeromonas y Pleisomonas (los patogenos)

Especie mas importante y patgeno del genero Vibrio - V.cholerae => bacilos Gramanaerobios facultativos de morfologa curva (pleomrficos), mviles (flagelacin loftrica),
crecen bien en medios generales y pH alcalino (sensibles al medios cidos), oxidasa+ (la
diferencia de la enterobacteriaceae), halfilo, catalasa+, afectan al tracto gastrointestinal del
hombre; es el agente causal del clera => provoca diarreas graves hasta llegar a
la deshidratacin (diarreas
masivas), shock
hipovolmico,
coma
y

muertepor deshidratacin (puede perder hasta 10-15 lt/da de agua y electrolitos); se diferencia
dePseudomonas por
la
diferencia
en
el patrn de fermentacion
de
azucares.
Accin patgena e inters clnico:
- Ag somtico O (polisacridos) se
utiliza
para
su tipacin
- Ag flagelar H (no tiene valor para su tipacin - comn a todas las cepas)
- Exotoxina / entero-toxina proteica (el principal efecto patgeno del clera - provoca diarrea
masiva)
- Adhesina (protena que tiene afinidad por los azucares) que permite adherirse a la pared
intestinal
Para formar cuadros graves es necesario su penetracin por va oral (agua o alimentos
contaminados con el bacilo, p.ej. productos marinos crudos), eludir el medio acido del
estomago (sucede cuando se ingieren >100 millones de grmenes - en el caso de epidemias
donde
se
encuentra
1 milln/
ml
de
agua).
Aislamiento
caracteres bioqumicos diagnostico
- Toma de muestra a partir de las heces diarreicas, vmitos, procedindose de inmediato a
su identificacin (sensible
a
medios
externos);
medio
de
transporte Cary-Blair.
- Aislamiento en medios de cultivo especficos TCBS que impide el crecimiento de gran parte de
microorganismos => produce colonias amarillas por la fermentacion de la sacarosa sobre el
medio
verde
y tambin se
siembre
en
el
Mc.
- Pruebas bioqumicas => oxidasa+, catalasa+, sacarosa+ (produce un tipo de acido dbiles que
no
bajara
mucho
el
pH)
Pruebas serologcas para
determinar el
titulo
de
Acs.
Aeromonas - bacilo Gram- no fermentadoras de la misma familia; el especie mas
importante Aeromonas hydrophila; catalasa+ y oxidasa+, VP+, lactosa-, ureasa-, indol+,
SH2-, mviles; no son halfilo (a diferencia de Vibrio) implicadas en procesos diarreicos.
Plesiomonas - tiene las mismas caractersticas bioqumicas que Aeromonas (excepto en
pruebas de VP y ornitina descarboxilasa); el especie mas importante Plesiomonas shigelloides(se
propone a incluirla a la familia enterobacterias); hay que hacer API para distinguirla de
Aeromonas (Plesiomonas
ornitina
descarboxilasa+)

Tema 20 - Bacilos y cocobacilos aerobios y

anaerobios facultativos (patologa e identificacin)
Pseudomonas - bacilos pequeo (coco-bacilo) Gram-, mviles (flagelacin), en
generalaerobios estrictos, catalasa y citocromo oxidasa positivos, en
generalmetabolismo glucdico oxidativo; ampliamente distribuidos en el agua y suelo, pasando
de aqu a los animales y al hombre; son oportunistas en el ambiente hospitalario (pacientes
inmunodeprimidos), en ocasiones resultan muy graves (resistente a muchos ATB - hay que
combinar varios).
Los especies mas importantes:
- P. aeroginosa => presenta pigmentos fluorescentes, saprofita en la piel, tubo digestivo??,
puede provocar cuadros graves en individuos debilitados y es mortal si se produjese septicemia;
- P. maltophilia (ahora se llama Stenotrophomonas maltophilia) se llama as, porqueoxida
maltosa (no oxida la glucosa); cogen cada vez mas importancia; oxidasa variable.
Accin patgena e inters clnico - Pseudomonas aeroginosa
- Ag somtico O (polisacridos), Ag flagelar H (proteico), Ag mucoide M (produce exotoxinas =>
enterotoxina responsables de cuadros diarreicos y toxina eritrodrmica).
- Sustancia => (1) piocina (pigmento azulado de accin bactericida), (2) fluoresceina(pigmento
verde amarillo) y (3) pigmento melnico (tie de color marrn los cultivos).
- Cuadros graves o muy graves (de carcter oportunista) => sinusitis crnicas, infecciones del
aparato respiratorio (neumonas, faringitis, bronco-neumonas); puede producir endocarditis en
drogadictos y paciente con SIDA; enterocolitis, pielonefritis y meningitis en neonatos; en
grandes quemaduras, agravando la lesin o provoca infeccin de heridas quirrgicas; en casos
mas graves puede originar bacterimia (quemaduras graves).
Aislamiento - caracteres bioqumicos - diagnstico bacteriolgico
- Toma de muestra de cualquier producto patolgico, especialmente de carcter purulento en
total asepsia.
- Examen directo (tincin Gram); si el pus es azulado se sospechara de P.aeroginosa.
- Aislamiento en medios generales (el bacilo piocinico es fcil de cultivar) a temperatura
37C; es importante estudiar la presencia de pigmentos que se difunden en el medio;
lapiocianina es un pigmento responsable de la coloracin azul verdosa que puede adquirir el
medio y el olor a jabn de las colonias son las caractersticas de P.aeroginosa.
- Pruebas bioqumicas de citocromo oxidasa+, catalasa+, gelatinasa+, utilizacin de la
glucosa va oxidativa (aerobio).
- Pruebas serologcas para buscar Acs anti Pseudomonas.

Brucella - bacilos pequeos (coco-bacilos) Gram- inmviles, aerobios estrictos, algunas crecen
mejor en atmsferas ricas en CO2 (5-10%), su crecimiento es lento, catalasa+, oxidasa+,
nitratasa+, ureasa+, sensibles a medios cidos y se destruyen fcilmente a temperatura de
pasteurizacin.
Especies
mas
importantes (en funcin del husped en
el
que
anidan):
- Brucella melitensis afecta a cabras y ovejas; afecta al hombre a traves de sus leches no
esterilizada,
quesos
frescos,
carne
cruda
o
poco
hecha.
- Brucella abortus afecta a bvidos (la mayora de los casos de brucelosis en Espaa - en
menor proporcin B.melitensis)
Accin patgena e inters clnico - depende de su estructura antignica; Brucella es capaz
de mantenerse latente en el interior de la celulas que la han fagocitado y posteriormente,
empezar a multiplicarse con la consiguiente produccin de endo-toxina;penetran en el hombre a
traves de heridas y va digestiva (alimentos procedentes de animales infectados (leche no
esterilizada, quesos frescos, carne cruda o poco hecha); posteriormente,pasaran a los
ganglios linfticos, donde sern fagocitadas por neutrfilos (en la sangre) y macrfagos (en los
tejidos) y se distribuyen por todo el organismo, volver a pasar al torrente circulatorio
originando bacterimia (brucelosis aguda o fiebres de Malta); se caracteriza por artralgias
difusas (dolores de articulaciones), sudoracin abundante, esplenomegalia y otras distintas
formas clnicas dependientes de la localizacin de Brucella (orquitis, neumnia brucelar, etc); las
fiebres son ondulantes con tendencia a las recidivas(frecuente entre los 3 y 6 meses
subsiguientes a la infeccin por Brucella);

Bordetella bacilos
o
coco-bacilos
Gram- aerobios
estrictos, inmviles (algunas
son mviles), capsulados; son parsitos estrictos (no se encuentran libres en la
naturaleza); se
transmite
por
las
gotitas
de
flugge o
contacto
directo.

Especies
mas
importantes:
- Bordetella pertussis (bacilo Bordet y Gengou) => la mas patgena y es elagente etiolgico de la
tosferina
- B.parapertussis => aislada en casos benignos de tosferina y no es estrictamente patgena
- B.bronchiseptica => afecta mas a animales que al hombre; aislada en el hombre
excepcionalmente
en casos
benignos
de
tosferina.
Accin patgena e inters clnico (Bordetella pertussis) - se infectan a traves de gotitas
(flugge) que se producen al hablar; tras periodo de incubacin de 1-2 semanas, empiezan a
multiplicarse en la superficie de las celulas epiteliales ciliadas de la traquea, bronquios y
bronquiolos,
originando inflamacin en
estas
zonas, paralizacin de
sus
cilios y
consiguiente necrosacin; presenta una fuerte accin tusgena (tos seca) que puede llegar a
agotar debido a la accin de la toxina proteica y incremento de las mucosidades queobstruyen los
bronquios (bronco-constriccin) lo que facilita un dficit en la ventilacin pulmonar; puede
originar cianosis, taquicardia y vmitos alimenticios; es altamente contagiosa, pero ya
existe vacunas de la tosferina.

Haemophilus bacilos
muy
pequeos
Gram- aerobios
y
anaerobios
facultativos, inmviles y patgenos para el hombre y muchos animales; sensibles a medios
externos, desecacin, el calor y muchos antispticos; necesita medio de cultivo especifico con
sangre como AS o agar chocolate (contiene factores X/hemina o ferroprotoporfirina y factor
V/NAD o nicotinamida-adenina-dinucleotido necesarios para el proceso de respiracin).
Especies mas importantes (clasificadas en funcin de los factores que necesitan):
- Haemophilus influenzae (bacilo de Pfeiffer) es el agente etiolgico de 10-15% de
lasmeningitis en nios de corte edad en Espaa y de neumonas en ancianos; requiere
ambosfactores
V
y
X.
- H.parainfluenzae es agente causales en ciertas meningitis, afecciones respiratorias y
septicemias; tambin son saprofitos en fosas nasales y boca; requiere solo factor V.
- H.ducreyi es agente etiolgico del chancro blando (enfermedad venrea /ETS); requiere
solo factor
X.
Accin patgena e inters clnico (Haemophilus
influenzae):
- Es capsulada (su capsula esta formada por polisacridos distintos de A-F) en Espaa es mas
frecuente
la
del tipo
B.

- Posee endo-toxina que es responsable de lesiones en la traquea y bronquios en procesos

neumnicos
- Suelen afectar a las vas respiratorias originando neumonas, bronquitis aguda en ancianos y
adultos
debilitados.
- Puede producir meningitis en nios de corta edad; se transmite por va area y mas frecuente
en invierno y primavera; comienza como infeccin de las vas respiratorias altas yposteriormente
se extiende via sangre hasta el sistema nervioso produciendo meningitis purulenta con
mortalidad
alta
sin
tratamiento
a
tiempo.
- Existe vacuna para H.influenzae tipo
B.
Aislamiento
caracteres bioqumicos diagnostico de Haemophilus:
- Toma de muestra a partir del exudado farngeo, esputo o lquidos purulentos (en caso
de infeccin de vas respiratorias), LCR por puncin lumbar (en caso de sospecharmeningitis).
Examen
directo
(tincin Gram, tincin negativa)
- Se cultiva en agar chocolate o AS de conejo/caballo, se aaden discos que contengan factores V
y X, ATB como la bacitracina que inhibe a otros grmenes; se formaran satelitismo segn sus
necesidades
de
los
factores;
incubar
en
la atmsfera rica
en
CO2.
- Pruebas bioqumicas => indol+,
ureasa+,
nitratasa+,
oxidasa
variable
(segn la
cepa),fermentacion
de
glucosa
positiva,
ONPG-.
- Tcnicas inmunolgicas => determinar el Ags capsular (se realizan por la urgencia del
diagnostico)

Legionella - la especie mas importante para el ser humano, es Legionella pneumophila(el

agente etiolgico de la legionelosis / neumnia atpica por Legionella); un coco-bacilo o bacilo
Gram-, aerobio estricto, requiere medios muy especficos para crecer (agar legionella),catalasa+,
oxidasa+, en ocasiones puede presentarse de forma filamentosa; en general son mviles, pero
algunas
cepas
son inmviles.
Accin patgena e inters clnico - se transmite va area a partir de aerosoles procedentes
de aguas contaminadas o sistemas de aire acondicionado o humidificadores
contaminados con Legionella; tras el periodo de incubacin (+/- 1 semana) se produce fiebres
altas, astenia, malestar generalizado, tos, anorexia, dolor pleural agudo, disnea (un
cuadro tpico de una neumnia atpica); se conoce como la enfermedad de los legionarios; el
pronostico sera mas severo en ancianos o adultos debilitados aunque con el tratamiento preciso
suele remitir sin problema.

Bacillus - de la familia Bacillaceae; el genero Bacillus son bacilos esporulados aerobios o

anaerobios facultativos con tamao entre 1-7 micras Gram+ y en su mayora mviles; otro
genero de la misma familia es Clostridium son bacilos esporulados y anaerobios estrictos, que
origina en su mayora potentes exotoxinas responsables de cuadros clnicos graves.
Especies
mas
importantes
de Bacillus:
- Bacillus
anthracis (agente etiolgico del ntrax
o
carbunco)
- Bacillus cereus (responsable en muchas ocasiones de trastornos gastrointestinales)
- otros bacilos son comensales para el hombre o saprofitos del suelo, agua, etc., y que depende
del estado inmunitario, puede producir diferentes cuadros clnicos (p.ej. Bacillus subtillis).
Accin patgena e inters clnico de Bacillus
anthracis:
- Es un bacilo grande, habitualmente se presenta en forma de cadenas cortas o en parejas,
formando fcilmente esporas sobre todo en los cultivos viejos; es inmvil, presenta
capsulas(los patgenos) y exotoxina proteica que proporcionan propiedades anti-fagocitaras.
- En general, el cuadro clnico que produce es el carbunco animal o humano; en el humano tiene
lugar tras un primer contacto a partir de animales infectados que tras periodo de incubacin de
2-3 das surge una pstula maligna (color negro en la mano) en el punto de contagio (las manos
y cabeza); comienza con una ppula eritematosa que se complica a vescula pruriginosa que se
convierte en ulcera o escara, que sin tratamiento puede necrosarse y extenderse en superficie y
profundidad; los casos no tratados, podran ser graves, ya que existe el riesgo de septicemia
intensa que en pocas horas podra originar la muerte; lo mas habitual son las formas benignas
que
curan
con
facilitad
tras
un
tratamiento.
- En casos excepcionales pueden aparecer formas internas como el carbunco pulmonar ante
la inhalacin de polvo contaminado con esporas de Bacillus anthracis que da lugar
a neumonas graves; tambin puede producirse carbunco intestinal por la ingestin de alimentos
contaminados con las mismas esporas y originara diarreas, vmitos, dolor tipo clico, fiebre, etc.

Acinetobacter - (tambin esta descrito en genero de Moraxella/ Neisseriaceas) este genero

engloba especies que pueblan la flora de suelos y agua, al igual que Pseudomonas, son bacilos
Gram- no fermentadoras, capsuladas y presentes en ambiente hospitalarios donde afectan a
pacientes inmunodeprimidos; la especie mas frecuente es Acinetobacter calcoaceticus que
produce infeccin urinaria, neumonas y sepsis; crecen bien en Mc y AS que da colonias grises
y B-hemolticas; se
diferencian
de Pseudomonas en
que Acinetobacter es oxidasa-;
son fcilmente confundible con Neisserias porque es bacilo muy pequeo (cocobacilo); tambin es muy resistente a los ATB.

Tema 21 - Corinebacterium
(patologa e identificacin)
Genero Corinebacterium - pequeos bacilos inmviles a temperatura corporal, se comportan
como Gram+, suelen agruparse en formas geomtricas parecidas a letras chinas o abecedario
(empalizadas); presenta granulaciones metacromticas, catalasa+, anaerobios facultativos y
pueden dar lugar a un velo superficial en medios lquidos; presentan ciertos rasgos comunes
con Mycobacterium en su pared bacteriana que es muy rica en cidos miclicos, arabinosa y
galactosa, aunque la tincin de BAAR (Zhiel-Nielssen) paraCorinebacterium resulta negativa; la
especie
mas
importante
es Corinebacterium
diphteriae.
Accin patgena e inters clnico de Corinebacterium diphteriae - el bacilo diftrico llega al
hombre por va respiratoria a traves de gotitas de saliva (pflugge) u objetos recientemente
contaminados invadiendo la oro-faringe y las amgdalas; desde aqu se extiende, liberando
toxinas y enzimas inhibiendo la sntesis proteica celular, originando necrosis en las celulas
epiteliales que invade; este epitelio necrosado junto con leucocitos y fibrina formara una
pseudomembrana
que
cubre
las amgdalas,
que
puede
llegar
a
provocar

una obstruccin respiratoria si se extiende por la naso-faringe y laringe; tal pseudomembrana se

encuentra fuertemente adherida a las mucosas, de forma que si se intenta arrancar, originaria al
paciente una fuerte hemorragia; en general los signos y sintomas de la difteria suelen ser de tipo
respiratorio; en casos excepcionales, por va linftica podra pasar a la sangre difundindose al
resto del organismo.

Tema 22 - Mycobacterium y Nocardia

(patologa e identificacin)
La familia Mycobacteriaceae engloba un solo genero Mycobacterium; son pequeos
bacilos finos rectos y a veces incurvados, excepcionalmente pueden encontrarse algo
filamentosos; son inmviles con una pared tpica y caracterstica no encontrada en ninguna otra
familia excepto Nocardia (altamente enriquecida con cidos miclicos y componentes creos que
se tie muy difcilmente - responde a Gram+), se necesitan colorantes con alta capacidad
tintorial
para
su penetracin;
una
vez
teidos
son
altamenteresistentes
a
la decoloracin cida (AAR+ o acido alcohol resistencia positivo) lo que les diferencia del resto
de microorganismos; son muy distribuidos en la naturaleza, pueden sersaprofitos del agua y
suelo y puede provocar infecciones graves al hombre y en ocasiones crnicas como la lepra;
necesita
gran
cantidad
de
oxigeno
para
sobrevivir
(aerobias
estrictas).
Las especies mas importantes del genero Mycobacterium (3 importantes grupos):
(1) Bacilos de Mycobacterium cultivables en medios artificiales, de crecimiento lento(>1semana
hasta 3 semanas); en funcin de los cuadros clnicos se subdividen en 2 grupos:
a. especies que producen tuberculosis al hombre y a los animales (Mycobacterium
tuberculosis y Mycobacterium
bovis).
b.
especies
de micobacterias atpicas de
crecimiento
lento, podran presentar un
poder patgeno para el hombre distinto al de la tuberculosis y la lepra (Mycobacterium
avium y Mycobacterium
marinum).
(2) Micobacterias de crecimiento rpido (<1semana); no tiene inters clnico (no son patgenos)
para
el
hombre.
(3) Bacilos de Mycobacterium no cultivables sobre medios artificiales y patgenos para el
hombre (Mycobacterium leprae) y ciertos roedores (Mycobacterium lepraemurium)

Los micobacterias tambin se pueden clasificar en funcin de la produccin de pigmentos, de

las morfologas de las colonias y de la velocidad del crecimiento.

Accin patgena e inters clnico

Mycobacterium
tuberculosis - responsables
de
tuberculosis
en
el
hombre
Muy rica en componentes lipdicos en su pared celular dotndole un carcter tintorial
especifico AAR+ que servir para
su identificacin y clasificacin;
contiene protenas que
provocan la formacion de Acs (reaccin de la tuberculina /test de Mantoux); es capaz decrecer en
el interior de las celulas que constituyen el sistema retculo endotelial, se multiplican dentro de
ellas sin ser destruida; en el frotis de baciloscopia se puede observar forma
cordones microscpicos.
Llega al hombre por inhalacin (excepcionalmente por ingestin de alimentos contaminados con
Mycobacterium o a traves de las heridas de la piel); produce una lesin primaria en el pulmn y
mas
concretamente
a
nivel
de
los alvolos pulmonares,
provocando
unaintensa reaccin inflamatoria que da lugar a exudacin; estos bacilos pueden llegar hasta los
vasos linfticos y
de aqu a
los
ganglios,
retornando
a
la circulacin venosa
y
originandofocos metstasis en distintos rganos; sin tratamiento se va desarrollando
evolucionando hacia una necrosis "caseosa" (parecida a queso de caverna); despus de 6
semanas o mas va evolucionando hacia una destruccin y desintegracin de las celulas
pulmonares con la formacin de una masa solida, homognea, parecida al queso (caverna
tuberculosa); provocara fiebres mas o menos variables, sudoracin por la tarde, adelgazamiento
progresivo, tos dbil o intensa (a veces con esputos muco-purulentos) y en fases mas
avanzada,hemoptisis; en general cualquier parte del organismo podra verse afectada a causa de
diseminacin
(gastrointestinales,
genito-urinarias,
pericrdicas,
etc.)
Mycobacterium
leprae - productoras
de
la
lepra
en
el
hombre
Se multiplica con extraordinaria lentitud y su clnica es bastante insidiosa y no ha podido ser
cultivado
en ningn medio
in
vitro,
por
lo
que
se
conocen
poco
sus caractersticas microbiolgicas; su nico reservorio
es
el
hombre
con
autentica predileccin por las terminaciones nerviosas; es un bacilo inmvil, rectilneo, se tie
con Zhiel-Nielssen (AAR+); suelen encontrarse en la mucosa nasal, en la dermis y en biopsias de
lesiones
en
individuos
con
lepra;
La va de entrada es a traves de lesiones en la piel, se propagan a los nervios
superficiales prximos, concretamente a las celulas de Schwam; de aqu propagarse
via linftica al sistema venoso y disemina a otros rganos (lepra lepromatosa); se multiplica
mejor en las partes mas fras del organismo (la cara, extremidades) invadiendo los nervios mas
superficiales; el bacilo se multiplica en el interior de los macrfagos de la piel y las celulas de

Schwam, originando inflamacin y perdida de sensibilidad; en estado grave tambin aparece

en rganos mas profundos y su pronostico es mas complicado; su periodo de incubacin es
muy difcil de determinar, puede durar muchos aos; su periodo de invasin es muy
insidioso, sintomas raros y no asociables a lepra (picor, hormigueo y perdida de sensibilidad en
las
manos/pies;
a
partir
de aqu, de
forma
lenta
y
progresiva
aparecen
lesiones cutneas (maculas prominentes en extremidades y cara); su periodo durara toda la
vida y su evolucin mas o menos grave depender del grado de inmunidad del husped; tto =>
ATB
sistemico.
Micobacterias atpicas - producido por Mycobacterium avium y Mycobacterium marinum
Las
micobacterias atpicas son m.o.
patgeno
para
el
hombre,
frecuentemente
de carcter pulmonar,
a
veces confundido
con Mycobacterium
tuberculosis ya
que
la sintomatologa es
similar
=>
tras
una invasin,
se
producen formacin de tubrculos y consiguiente necrosis
caseosa con formacin de
cavernas, diseminacin y cuadros de fibrosis pulmonar con rara aparicin de focos extrapulmonares; la gravedad de lesiones depende del estado inmunolgico del paciente;
los grmenes invadir especialmente individuos inmunodeprimidos; la va de entrada es muy
variable (respiratoria o mucosas).

Aislamiento
caracteres bioqumicos diagnostico
a)Aislamiento
de Mycobacterium
tuberculosis
- Muestras puede proceder de esputo, aspirado bronquial, aspirado gstrica; LCR e orina; la
muestra
de
esputo
han
de
someterse
a
una descontaminacin, homogenizacin y concentracin (mediante
centrifuga)
previa
al
cultivo; LCR, orina, etc. se puede sembrar directamente, pero lo mejor seria centrifugar-lo antes.
- Se realizara un examen microscpico del frotis previa tincin de Zhiel-Nielssen
(AAR); tambin se pueden utilizar tinciones fluorescentes (auramina, rojo de tiacina, naranja de
acridina), cuando se sospecha que hay pocos bacilos (todo se trabaja bajo la campana de flujo
laminar).
Para
aislar
el
bacilo
de
Koch
de muestras estriles (LCR,
orina) se

utilizaramedios lquidos como

Proskauer-Beck;
si
pretendemos
hacerlos
crecer en
medios slidos (esputo), existe medios especficos como Lowenstein-Jensen o Coletsos, que
contienen huevo, aminocidos,
sales
minerales
y
verde
malaquita (inhibe
los grmenes contaminantes) cuyo crecimiento es lento (2-4 semanas); tambin existe agar
Middlebrook que se suele emplear junto con el anterior para completar su identificacin;
Micobacterias son muy exigentes en su crecimiento => incubar a 37C, en la oscuridad, en el
ambiente con CO2 de 5-10% (en 1 semana) y en atmsfera normal a partir de la 2 semana; los
tubos desenroscados hasta que se evaporen el agua (sin secar el medio); la mayora tardan entre
3-6 semanas en crecer (algunos aun mas); si hay crecimiento, se har la identificacin de
su morfologa mediante tincin de
Zhiel-Nielssen
y
pigmentos.
- Pruebas bioqumicas => la mas importante es la prueba de la niacina+ (todas las micobacterias
producen cido nicotnico durante su crecimiento; M.tuberculosis no metabolizan el cido
nicotnico y por ello lo acumulan y es excretada al medio, sobre todo en medios con base de
huevo, del cual puede ser extrada y detectada); es nitratasa+ y catalasa+(solo algunas cepas de
Mycobacterium tuberculosis no tienen la catalasa; en general tienencatalasa termolbil (a
temperatura
alta
no
tienen
catalasa).
- Pruebas serologcas => la mas utilizada es la tcnica ELISA; actualmente la identificacin se
hace
con
el PCR,
posteriormente
se
realiza
la hibridacin con
las
sondas genticas (ADN) de M.tuberculosis marcadas.
- Pruebas de alergia /la prueba de la tuberculina (Mantoux); tuberculina es un extracto proteico
de bacilo tuberculoso; es solo toxico para individuos que han estado en contacto con dicho
germen, originando una reaccin intradrmica en la cara anterior del brazo intensa; este
eritema endurado (ppula de >10mm es positivo) se debe leer hacia 48-72 horas (se mide
la ppula no la zona roja); despus de las 4-6 semanas posteriores al contacto, la prueba del
Mantoux dar de
por
vida
positiva.
b)Aislamiento
de Mycobacterium
leprae
- Muestras a partir de heridas sospechosas en piel y otras localizaciones.
Se
realiza
una tincin de
Zhiel-Nielssen
o
AAR,
que deber dar
positiva
- No podr ser
cultivada en
medios
de
cultivo
- Se realizara un diagnostico serolgico (un estudio de la inmunidad celular y humoral del
individuo)
- Pruebas cutneas: (depende del resultado, se hace los 3 pruebas o solo algunos).
1. reaccin de la lepromina => para conocer el tipo de lepra que posee ese individuo (prueba de
intra-dermorreaccin /Ag de bacterias inactivadas); Las personas que no tienen lepra tendrn
poca o ninguna reaccin de la piel al Ag. Los pacientes con un tipo particular de lepra, llamado
lepra lepromatosa, no tendrn ninguna reaccin de la piel al Ag; una reaccin positiva de la piel
se puede observar en pacientes con lepra tuberculoide y lepra dimorfa tuberculoide.
2. test de pilocarpina => para buscar la ausencia de sudoracin de la piel lesionada despus de
una inyeccin de clorhidrato
de
pilocarpina.
3. test de la histamina => inyectar histamina de tal forma que en una piel sana aparecer una
reaccion alrgica caracterstica, mientras que en las lesiones lepromatosas esto no sucede debido
a que los nervios perifricos estn lesionados y no aparecer ninguna reaccin alrgica.
c)Recogida

Aislamiento
de
muestra
de

los

de
lugares

Micobacterias atpicas
sospechosos
en
total
asepsia

- Tincin de Zhiel-Nielssen (positiva); tincin fluorescencia con auramina, rojo de tiacina,

naranja
de
acridina.
- Cultivos en medios Lowenstein-Jensen, Coletsos o caldo Middlebrook, donde se puede observar
el aspecto de las colonias, su velocidad de crecimiento y la presencia de pigmentos.
- Pruebas bioqumicos: niacina- (la diferencia de Mycobacterium tuberculosis), catalasa+,
nitratasa+.
Pruebas serologcas de
ELISA
Actualmente en grandes laboratorios, se utilizan medios de cultivos radiomtrico (Bactec TB)de
deteccion mas rapida que contiene liquido de soporte (agar Middlebrook) con ATB para inhibir
los demas grmenes y el sustrato marcado con un istopo del carbono C14; las micobacterias al
crecer metabolizan el sustrato y liberan gas CO2 marcado radioactivamente que
es detectada automticamente por el Bactec y una vez que se ha detectado crecimiento en alguno
de los medios, se realiza la tincin de Ziehl-Neelsen para ver si lo que ha crecido son BAAR o no.

Baciloscopias - las extensiones para baciloscopias se deben hacer previamente a

la descontaminacin (CHNa 2-4%) de las muestras y homogenizacin (N-acetil cisteina) ,
posteriormente su concentracin por centrifugacin; la preparacin del frotis del esputo ha de
hacerse seleccionando la parte mas purulenta que es donde hay mas micobacterias; cuando se
lleva acabo la tincin de los frotis, se debe evitar el contacto fsico entre las portas para
evitar contaminacin cruzada; es importante cuantificar el numero de bacilos encontrados ya
que esta directamente relacionado con el grado de contagiosidad del paciente y con la
gravedad de la infeccin.

El genero Nocardia - corresponde a actinomicetos aerobios que forman micelio vegetativoque

tiende a fragmentarse originando estructuras bacilares o coco-bacilares; Gram+ inmovil,aerobios
estrictos y AAR+ (tiene caractersticas anlogas al Mycobacterium) poseen gran cantidad de
acidos micolicos de cadena larga en su pared bacteriana; poseen ademas glicolpidos y
fosfolpidos que sirve para su identificacion y diferenciacin; algunas especies
son patgenas para
el
hombre.
Accin patgena e inters clnico
Gran parte de nocardiosis son infecciones de carcter oportunista; no produce toxinas, pero
contiene en su pared bacteriana alta proporcin de lpidos que le confiere una resistencia a los
sistemas de defensa (macrfagos, linfocitos, etc.); tiene capacidad de crecer y multiplicarse en el
interior de los tejidos (macrfagos) como parsito intracelular y solo crece cuando las defensas
del individuo se encuentran bajas; las manifestaciones clnicas mas frecuentes son:
A. Nocardiosis pulmonar - causada sobretodo por Nocardia asteroides que produce lesiones
pulmonares con abscesos, inflamacin diseminada semejante a la tuberculosis; pueden
surgir reas de necrosis y diseminarse por sangre a otros rganos provocando septicemia.
B.
Micetomas
(lesiones
granulomatosas) de carcter crnico originadas
en
eltejido subcutneo donde se producen tumefaccin, abscesos y pstulas y/o ndulos que al
abrirse presentan exudados sero-sanguinolentos; generalmente causados por Nocardia
brasiliensis y es frecuente en las extremidades inferiores y superiores; presenta periodos
de remisin y es caracterstico de climas tropicales;

Tema 23 - Bacterias anaerobias

(patologa e identificacin)
Anaerobias - todas aquellas bacterias incapaces de crecer y/o mantenerse en contacto con O2 a
la presion atmosfrica; presentan un metabolismo anoxibitico => incapaz de utilizar O2 de
la atmsfera como aceptor final de electrones; en su lugar utilizan sustratos orgnicos como
aceptores finales de electrones(respiracin anaerbica /fermentacion); la presencia de O2
puede ser (1) bactericida /toxica /letal directa o bacteriosttico (crecern de nuevo cuando las
condiciones son favorables); (2) inhibir ciertos sistemas enzimticos o la funcin reguladora
primordial del metabolismo celular; (3) generan producto txicos al interaccionar sus
componentes propios con O2; los anaerobios son las bacterias predominantes en la flora normal

humana y en algunas partes p.ej. boca o intestino estn en proporcin de 1000:1 con respecto a
la flora aerobia, por tanto, la mayora de la infeccin que provoca los anaerobios son endgenas;
dentro de los anaerobios se distingue => anaerobios estrictos y anaerobios aerotolerantes/microaeroflicos (puede
crecer
a
2-8%
de
O2).
Genero Clostridium - bacterias anaerobias esporuladas; son bacilos Gram+, anaerobios
estrictos, forman esporas a nivel terminal o subterminal, presentan flagelacin pertrica, mviles,
no presentan capsulas excepto Clostridium perfringes; ampliamente distribuidas en el suelo,
agua, etc. y altamente resistente a medios externos; responsable de infecciones e intoxicaciones
muy
graves
(ttanos,
botulismo,
gangrena
gaseosa,
etc.);
las
especies
mas patgenos actan mediante
la formacin de
toxina
con
poder
toxico
sobre
el husped; algunos podran formar parte de la flora normal del hombre y animales.

Las
especies
mas
importantes
A. Clostridium que originan toxinas cuyo mecanismo de accin es neuro-toxico =>Clostridium
tetanii - el agente etiolgico de ttanos y Clostridium botulinum - agente etiolgico del
botulismo.
B. Clostridium
que
originan
toxinas
que actan sobre
tejidos
provocando histotoxicidad =>Clostridium perfringes - agente etiolgico de la gangrena gaseosa; para
su penetracin en
el
organismo
se
requieren
lesiones
previas.
C. Clostridium que originan toxinas que actan sobre el tracto digestivo (clostridios enterotoxicos) => Clostridium difficile - responsable de trastornos gastrointestinales no graves.
D. Clostridium responsables de cuadros purulentos (clostridios pigenos) => Clostridium
perfringes; es frecuente la presencia ademas, de otras bacterias anaerobias.
Accin patgena e inters clnico
A. Clostridium que ejercen accin neuro-toxica sobre las personas (C.tetanii y C.botulinum)
Clostridium tetanii - es un bacilo Gram+ pequeo, formadora de esporas (aspecto de tambor
o cerilla), habitan la tierra y el intestino del hombre y animales; produce 3 toxinas responsables
del
cuadro tpico del ttanos que
son transportadas va sangunea o
humoral
hasta
SNC bloqueando la liberacin de neurotransmisores, originan hiperactividad de las neuronas
motoras que da lugar a convulsiones y parlisis espstica o espasmo muscular a
nivel perifrico; se ve alterado el sistema muscular variando el ciclo de contraccin-relajacin de
forma que este entra en fase de contraccin y no se recupera (rigidez tetnica / episttonos).
Para que se produzca el ttanos es necesario una serie de condiciones tales como que el
microorganismo germine (condiciones adecuadas de anaerobiosis); tras una herida profunda
(cortante, punzante, mordeduras, araazos, partos, abortos, quemaduras, ulceras por decubito) o
herida superficiales (rozaduras) se pueden infectar y formar costra que facilita

la infeccin anaerobia; en las condiciones favorables de anaerobiosis, las esporas deClostridium

tetanii en el ambiente pasan a la herida, germinan y tras un periodo de incubacin (5-7 das), se
origina su accin patgena; es rara que se produzca de forma local en la zona de entrada; la
forma generalizada es mas habitual y mas grave; es importante la deteccin precoz y
medidas profilcticas (vacunacin se renueva cada 10 aos).

Clostridium botulinum - bacilos Gram+ anaerobios estrictos, grandes, mviles por

su flagelacin y presentan esporas; es capaz de formar neuro-toxinas peligrosas y potentes sobre
las personas que originan parlisis o debilidad muscular; las esporas son distribuidas
ampliamente en el aire, suelo, ciertos alimentos (conservas, pescados, etc.); si las condiciones en
el ambiente son de anaerobiosis, germinaran; su accion patgena sobre el organismo seraneuroparalizante y con una dosis de 10 elevado a -8 (10 nanogramos) de su toxina es suficiente para
causar la muerte (es el veneno mas potentes hasta ahora), que solo se producen en condiciones
adecuadas de anaerobiosis, temperatura en torno a 30C, pH neutro o ligeramente acido y
permiten que germine la espora; sus toxinas son de carcter proteico y termolbiles (se
destruyen a temperatura 100C durante 5 minutos o 70C de 30-60 minutos).
El mecanismo de accin de las toxinas botulnicas => a traves de los alimentos
contaminadosllega esta neuro-toxina al tubo digestivo del hombre y producir toxinfeccin
alimentariainicialmente;
de aqu via sangunea y linftica llega
hasta
sistema
nervioso perifrico donde acta en las terminaciones nerviosas, originando parlisis en el
musculo esqueltico y otras manifestaciones neurolgicas como visin borrosa, fotofobia,
sequedad de boca, lengua y faringe, disfagia, disartria (dificultad al hablar), debilidad de los
musculos (flacidez) incluyendo los respiratorios que puede llegar mortal por fallo respiratorio y
arritmias cardacas (depende de la cantidad de toxina o del germen); su periodo de incubacin en
torno 18-36 horas despus de la ingestin del alimento contaminado y los cuadros mas graves se
originan
en
un
periodo
de incubacin inferior
a
24
horas.
B.
Clostridium
que
ejercen accin histo-toxica
en mltiples tejidos
Clostridium perfringes - ejercen un efecto toxico importante pero no actan sobre SNC; son
Gram+, anaerobia estricta, la nica especie capsuladas, ampliamente distribuida en el suelo;
de aqu a traves de heridas profundas, puede pasar al hombre produciendo gangrena
gaseosa; tambin puede encontrarse en la flora intestinal; capaz de formar toxinas
que actan sobre
los
tejidos,
entero-toxina,
hemolisina,
neuroaminidasa.
El mecanismo de accin => tras la va de entrada (heridas) en condicin anaerobiosis adecuadas,
germinan las esporas y proliferan; es frecuente que se contaminen con otro tipo de bacterias

aerobias que consiguen agotar el oxigeno aumentando las condiciones de anaerobiosis, se

disminuye el pH aumentando el acido lctico y facilitando la liberacin de las
enzimas proteolticas y sustancias toxicas; se producirn los efectos lesivos y graves sobre los
tejidos extendindose a los vecinos, se rompern las estructuras celulares a nivel de sus
membranas, se destruirn las celulas hemticas, las celulas endoteliales, las membranas de las
celulas musculares originando procesos de dermo-necrosis con dao tisular (gangrena).
Ademas de provocar la gangrena gaseosa a traves de heridas infectadas, C.perfringes
es tambin el agente etiolgico de una toxo-infeccin alimentaria producida por la ingestin de
carne contaminada provocando cuadros diarreicos y dolor abdominal leve; existen otros casos
mas excepcionales y graves que da lugar a cuadros diarreicos muy acuosos y
sanguinolentos, vmitos y estado de shock producido por C.difficile.

Aislamiento
caracteres bioqumicos diagnostico
- Toma de muestra representativa, adecuada y estril en medios especficos de transporte
anaerobiosis con sustancias reductoras (bolsas generadoras de CO2) que crean atmsferas sin
O2
o
en una
jeringa
sin
aire (tapando
la
aguja).
- Se har un examen directo (tincin de Gram) donde se pueden apreciar las formas de esporas
(palillos
de
tambor); tambin se
puede
realizar tincin de
esporas.
- Se cultivaran en medios de cultivos especficos como ASA (agar sangre anaerobio); incubacin a
37C en 48 horas en condicin anaerobisis, utilizando unacampana con un sobre generador de
gas CO2, da lugar a la liberacin de H y CO2; el O2 que existe en el anterior de la campana, se
une al H, forman H2O que se depositan en forma de gotitas en las paredes, tambin hay que
introducir
un indicador
de
anaerobiosis
(una
tira
reactiva).
- Pruebas bioqumicas => cuando existe crecimiento en el medio anaerobio, se monta
directamente el API en un recipiente/ una caja, tambin anaerobio.

Bacterias anaerobias no formadoras de esporas - crecen en ambientes de bajo potencial

oxido reductor o ambientes microaerfilos; son ampliamente distribuidos en la naturaleza y

muy pocas capaces de producir cuadros patgenos graves al hombre; gran parte de ellos forman
parte de la flora gastrointestinal, vaginal o bucal del hombre, no ejerciendo
efecto patgeno alguno.
Las
especies
mas
importantes
A.
Bacilos
Gram+ no
esporulados:
- Lactobacillus => microaerfilos, crecen mejor en anaerobiosis; son flora habitual de laboca,
vagina e intestino del hombre; son de gran utilidad a nivel industrial (produce acido lctico para
los
yogures);
no
intervienen
en ningn proceso patgeno para
el
hombre.
- Propionibacterium => son anaerobios, pueden crecer en ambientes microaerfilos; forman
parte
de
la
flora
normal intestinal,
tracto
urinario
y
piel.
- Bifidobacterium =>
es
flora intestinal del
hombre
y
no
son patgenos.
B.
Bacilos Gram- no
esporulados:
- Bacteroides => son flora intestinal, vaginal y bucal del hombre y se ha asociado en ocasiones
a procesos gastrointestinales, especialmente Bacteroides fragilis que acta comooportunista.
- Fusobacterium =>
solo
la
especie Fusobacterium
nucleatum se
asocia
a
algunosprocesos patgenos en el aparato respiratorio y tracto genital femenino,
de carcter oportunista.
C.
Cocos
Gram+ no
esporulados:
- Ciertos Streptococcus anaerobios que se encuentran frecuentemente en la
floragastrointestinal
y
bucal;
no
son patgenos.
- Peptococcus =>
no
produce
efecto patgeno sobre
el
hombre
D.
Cocos
Gram- no
esporulados:
- Veillonella => forma parte de la flora intestinal y bucal y no son patgenos para el hombre.
Accin patgena e inters clnico
Salvo excepciones, no son relacionados con procesos patgenos y la patogenicidad que pudiera
desencadenar
alguno
de
ellos
depende
sobre
todo
de
las
circunstancias
del husped (oportunistas); pueden producir infecciones post-quirrgicas, complicaciones de
escaras
o
ulceras
por
decubito,
complicaciones
de
herida
en
general.
Aislamiento
caracteres bioqumicos diagnostico
Toma
de
muestra
en
condiciones
adecuada
(anaerobiosis)
Examen
directo
(tincin de
Gram)
- Se aislaran en medios anaerobiosis (ASA/ANA - agar sangre anaerobio)
Pruebas bioqumicas se
realiza
con
API
en condicin anaerobia

Tema 24 - Espiroquetas (Treponema, Borella y

Leptospira); patologa e identificacin
La familia Espiroquetaceas (con inters clnico para el hombre) - Treponema, Borrelia y
Leptospira; corresponden a especies bacterianas cuya morfologa es filamentosa, helicoidal o

espiral con filamentos axiales relacionados con su movilidad; presenta una pared celular fina y
flexible de lipo-polisacrido y lipo-proteica donde se encuentran la mayora de Ags especficos de
estas; son Gram- (difcilmente se tie), tambin se pueden visualizar por el microscopio de
contraste de fases; presentan un metabolismo oxidativo y/o fermentativo(aerobias o anaerobias
facultativas); difundidas en las aguas, el suelo y como agentescomensales en las mucosas del
hombre
y
animales.
La
familia
Espiroquetaceae
se
divide
en
5
generos:
- Genero Espiroqueta => espiroquetas mas grandes y no existen especies patgenas para el
hombre.
- Genero Cristispira => son de tamao algo menor que el Espiroqueta y no es patgeno para el
hombre.
- Genero Treponema => son espiroquetas muy helicoidales, muy finas, pequeas y mviles;
son microaeroflicas y presentan un metabolismo fermentativo; existen especies patgenas para
el
hombre
- Treponema
pallidum (el
agente etiolgico de
la sfilis).
- Genero Borrelia => son espiroquetas mas grandes que Treponema; son microaeroflicas y
presentan pocas espiras que son amplias e irregulares; su metabolismo es fermentativo y
son difciles de cultivar en medios artificiales; pueden provocar fiebres recurrentes al hombre
transmitido
por artrpodos.
- Genero Leptospira => son espiroquetas largas, muy finas y con numerosas espiras, profundas y
regulares; es difcil su visualizacin aunque se suele utilizar microscopia de contraste de fases;
son aerobias con un metabolismo oxidativo; se cultivan con facilidad en medios artificiales;
ampliamente distribuidas en la naturaleza, especialmente en las aguas; pueden parasitar al
hombre provocando leptospirosis.

Genero Treponema - son espiroquetas pequeas, finas con un numero de espiras entre 520 distribuidas de forma regular, con gran movilidad; se tie difcilmente con Gram y se tie
mejor con Giemsa o tincion de plata y se visualiza con la microscopia de campo oscuro y de
contraste de fases; no crece en medios de cultivo in vitro y requiere un medio de cultivo in vivo
para crecer (testculo de conejo); crece bien en situaciones de bajo potencial oxido-reductor
(microaerofila), presentando en ocasiones una respiracin anaerobia y un metabolismo
fermentativo; el especie patgena para el hombre es Treponema pallidum que transmite
la sfilis por contacto directo; existen dentro del genero Treponema especies comensales de las
mucosas, tracto urinario, vaginal, tubo digestivo, etc. que no son patgenos para el hombre y se
pueden
cultivar.

Treponema pallidum es la especie mas importante por su difusin cosmopolitana; es el

agente causal de sfilis; no son capaces de vivir fuera del organismo humano, ya que mueren
por desecacin; su transmisin es por contacto directo (va sexual) y si no se detecta a
tiempopuede
durar
toda
la
vida;
mecanismo
de accin:
- Periodo primario de la sfilis => comienza tras un primer contacto con lesiones ricas en
treponemas presentes en las mucosas; periodo de incubacin 10-90 das (termino medio
de 21 das) aparece en la zona genital un chancro primario con abundantes treponemas, se
van diseminando va hemtica
y linftica a
otras
localizaciones convirtiendo-se
en
unaenfermedad sistmica; es frecuente su multiplicacin en ganglios prximos a la zona genital
originando pequeas tumoraciones (adenopatias); transcurrido un tiempo corto de 2-6 semanas
estos
signos
desaparecen espontneamente y
entra
en una
fase
silente.
- Periodo secundario o sfilis florida => surge despus de un tiempo entre 2 meses y 2
aos de la fase silente; de forma sbita se produce una espiroquetemia en general muy florida
por las manchas en la piel y en las mucosas, muy ricas en treponemas y altamente
infecciosas; tambin puede surgir excepcionalmente una forma eruptiva como lesiones en
otros rganos, fiebre en ocasiones, pstulas o ppulas muy ricas en treponemas; este
cuadro clnico de carcter sistmico remite a las pocas semanas (2-6 semanas), volviendo a
entrar
en
una nueva
fase
de
latencia.
- Periodo terciario o sfilis terciaria => surge tras la fase de latencia entre 3-30 aos, una
forma muy grave con mal pronostico; el numero de treponemas en sangre es muy escaso y muy
abundante en ganglios, bazo, huesos, sistema nervioso (neuro-sfilis) y aparato cardiovascular; es
frecuente la formacin de granulomas, necrosis, gomas, parlisis general progresiva, aneurisma
artico,
etc.
Resumen de la evolucin de sfilis => Incubacin 10-90 das (termino medio 21 das) Periodo primario (2-6 semanas) - fase silente (2 meses - 2 aos) - Periodo
secundario/ sfilis florida (2-6 semanas) - fase latente (3-30 aos) - Periodo terciario/ Neurosfilis forma
muy
grave
con
mal
pronostico.
Aislamiento - caracteres bioqumicos - diagnostico del genero Treponema pallidum
- Treponema pallidum se asla muy difcilmente, no crece en medios in vitro, solo lo hace en
medios in vivo (testculos de conejo) y el diagnostico de la infeccin se establece durante los
periodos primario y secundario mediante muestras de exudados, condilomas, etc.
- Examen directo al microscopio de campo oscuro o microscopio de contraste de fases o
microscopio de fluorescencia de una tincin de Giemsa o tincin Nitrato de plata (sales de plata;
es una tcnica difcil de efectuar, reservada a los laboratorios especializados, til en la deteccin
de
Pneumocytis
carinii,
Legionella,
Treponema,
hongos,
Rickettsias).
- Pruebas serologcas => se realiza la prueba de la presencia de Acs anti Treponema pallidum en
el suero del paciente con Ags especficos de Treponema pallidum que presentan una sensibilidad
y fiabilidad del 100%; los resultados dependen del periodo de sfilis en el que se
encuentre; tambin se incluyen las inmunofluorescencia indirecta, as como las de hemoaglutinacin pasiva partiendo de hemates tratados con Treponema pallidum que es muy
sensible y econmica.

Diagnostico serolgico de las sfilis - existe 2 tipos de pruebas (no treponmicas y

treponmicas)
a) No treponmicas => son de gran sensibilidad y fcil de hacer; se usa para prueba de
screening y si resulta (+), hay que confirmar con pruebas treponmicas; tambin se utiliza como
un seguimiento de la enfermedad; se le llama tambin prueba de WASSERMANN; consiste
en enfrentar el suero del paciente con sustancia lipdica "cardiolipina" que no es Ags
treponmicos; si existen Acs anti Tp en el suero, reaccionaran con la cardiolipina (+); pero al no
ser la cardiolipina un Ags treponmicos, puede dar lugar falsos positivo con otras
enfermedades; 2 tipos de pruebas => VDRL (Venereal Disease Research Laboratory)
y RPR (reagina
plasmtica
rpida)
son
pruebas
de aglutinacin con partculas de carbn (darn grumitos
grises).
b)
Treponmicas =>
se
utilizan
como prueba
confirmativas con
varias tcnicas: (1) FTA(tcnica fluorescencia de Acs anti Tp) enfrentando Ags de Tp con
posibles Acs anti Tp en el suero del paciente; (2) FTA abs donde previamente se absorben
posibles Acs naturales anti Tp saprofitos; (3) TPHA (Tp Haemagglutination Assay) que tiene
como base hemaglutinacin y
sencillo
de
realizar (no
se
necesita
microscopio
fluorescencia); (4) tambin se puede utilizar pruebas de ELISA para detectar IgM y IgG; todas
son pruebas muy especificas; no se utilizan para el seguimiento, porque sera siempre resulta (+).
Genero Borrelia - son espiroquetas de mayor tamao con espiras mas amplias e irregulares
con extremos afilados y son mviles; las especies patgenas para el hombre y los
animales,originan
fiebres
recurrentes endmicas y epidmicas;
es microaeroflica con
un metabolismo fermentativo; se tien con facilidad de Gram- y se puede cultivar in vitro, pero
requiere medios muy especficos; las especies mas importantes del genero Borrelia, se
transmiten
por
piojos
y
por
garrapatas.
Accin patgena e inters clnico - las fiebres recurrentes son una enfermedad muy
cosmopolita, en ocasiones endmica a condiciones de salubridad muy baja; tras la picadura del
vector, ya sea garrapata o piojo, pasan las borrelias a la sangre del husped, ayudadas por el
rascado que provoca el aplastamiento del piojo /garrapata, que dar lugar a micro-traumas en la
piel y facilitan el paso de dichas borrelias; despus de unos7 das de incubacin se
originan fiebres, dolores musculares, cefalea, etc; clnica que dura unos 10 das y luego
desaparecer, produciendo posteriormente recurrencias; no es una enfermedad grave y es fcil de
tratar, especialmente con tetraciclinas.

Genero Leptospira - son espiroquetas muy finas con espiras regulares, muy numerosas y
apretadas, con sus extremos ligeramente incurvados y mviles; se tien dbilmente con
Gram, tambin se pueden teir con Giemsa; su metabolismo es oxidativo (crecimientoaerobio);
existe en la naturaleza leptospiras saprofitas y parsitas; puede originar de forma
casual leptospirosis en el hombre con cuadros febriles; el reservorio son animales, consideradas
como zoonosis.

Tema 25 - Rickettsias, Chlamydias y Micoplasmas

(patologa e identificacin)
Genero Rickettsia - son parsitos celulares estrictos (porque su dotacin enzimtica es muy
escasa) de los artrpodos (crecen muy bien en el citoplasma); son coco-bacilos Gram-; producen
en el hombre enfermedades transmitidas por piojos, garrapatas, pulgas y caros.
Especies mas importantes de la familia Rickettsiaceae - hay 3 gneros importantes
=>Rickettsia, Rochalimaea y Coxiella (Coxiella burnetti es coco-bacilo Gram+ que origina
la fiebre
Q).
Accin patgena e inters clnico:
(1) Tifus exantemtico epidmico - producido por R.prowazekii; mediante la picadura de
piojo; tras el periodo de incubacin de 1-2 semanas, aparecen escalofros, fiebres altas (40C),
cefaleas, dolores generalizados, ndulos inflamatorio de los capilares, arteriolas, vnulas, la piel
y musculos (dificulta la corriente sangunea y en casos graves puede provocar gangrena en las
extremidades); es frecuente la formacin de maculas rosadas y posteriormente ppulas y
petequiales.
(2) Tifus murino o endmico - producido por R.typhi mediante la picadura de la pulga,
garrapatas y caros; tras el periodo de incubacin de 4-15 das, se produce fiebres altas, cefaleas,
artralgias y mialgias generalizadas con un cuadro clnico leve sin complicaciones ni
recidivas como
el
tifus exantemtico.
(3) Fiebres manchadas de las montaas rocosas - producida por R.rickettsiitrasmitidas
por las garrapatas; tras el periodo de incubacin de 3-6 das, aparecen fiebres altas, mialgias
generalizadas y una mancha negra en la zona de la picadura; en Espaa la especie mas

extendidas es R.conorii, el agente de la fiebre botonosa o exantemtica mediterrnea,

transmitida al hombre por la garrapata (sobre todo del perro); tras el periodo de incubacin de
2-6 das provoca una mancha negra a modo de botn en el lugar de la picadura, fiebre, artralgias,
mialgias generalizada y manchas maculo-papulosas; no se suelen complicar y responden bien al
tratamiento.
(4) Fiebre Q - producida por Coxiella burnetii mediante inhalacin de esta u otras(presencia
de artrpodos), la va de entrada no se conocen hasta la fecha; tras el periodo de incubacin de 3
semanas, se produce un estado febril con mialgias generalizadas ycuadro clnico leve.
Aislamiento
caracteres bioqumicos diagnostico del
genero Rickettsia
Se toma 2 muestras de sangre en estadios febriles (cuando hay mas Rickettsia):
- La 1 se centrifuga para obtener un sedimento sanguneo (concentracin alta de Rickettsia); se
usa para realizar varias tinciones p.ej. May-Grunwald-Giemsa (las rickettsias aparecen de color
purpura), tincin Gram (resulta negativo para Rickettsia y positiva para Coxiella
burnetii), tincin inmunofluorescencia y estudios de microscopia electrnica (para observar); el
sedimento tambin se usa para sembrar en medios de cultivo celular o embriones.
- De la 2 se obtiene sueros para pruebas serologcas (buscando ttulos de Acs), con tecnicas
inmunofluorescencia, seroaglutinacin o ELISA.

Genero Chlamydia se
consideran mas prximos a
virus
que
a
bacterias;
son parsitos intracelulares estrictos (carecen de mecanismo biosinttico auto-suficiente) del
hombre y animales; son cocos pequeos de Gram-, inmviles; poseen ADN y ARN y
su multiplicacin es por divisin binaria (a diferencia de virus); es capaz de vivir en medios
intracelulares durante mucho tiempo sin presentar una sintomatologa clara lo que facilita
la cronificacin de
procesos
infecciosos.
Especies
mas
importantes dentro
de
la
familia Chlamydiaceae:
- Chlamydia psittaci => parsito intracelular de animales y excepcionalmente del
hombre(tras la inhalacin de heces de pjaros infectados), provocando brotes neumnicos de

distinta
gravedad.
- Chlamydia
trachomatis => parsito intracelular
del
hombre,
provocandoinfecciones sistmicas o locales de distinta gravedad y afectando especialmente a los
genitales
y
a
los
ojos.
Accin patgena e inters clnico - se multiplican en el citoplasma de la clula que parsita,
presentando un
ciclo
con
2
tipos
celulares
diferentes:
- En 1er periodo formara una clula densa o corpsculo elemental con gran resistencia a la
sequedad,
lo
que permitir la dispersin de Chlamydia;
es
la forma
infectiva.
- En 2nd periodo formara una clula mas grande de menor densidad o corpsculo reticulado,
que es responsable de la divisin binaria y por tanto de crecimiento clamidias.
El proceso del ciclo => la forma infectiva (corpsculo elemental) penetra en la clula que va a
parasitar ayudado por los Ags especficos, se produce infeccin celular, se forma
una vescula citoplasmtica que bloqueara los mecanismos de defensa de la propia clula; a
partir de aqu este corpsculo elemental aumenta su tamao, su pared se hace mas fina y
permeable permitiendo el paso de complejos enzimticos, ATP y otras sustancias que van a
necesitar de la clula que parasitan; el citoplasma de la clamidia se hace mas denso y esponjoso y
aparece la segunda forma, donde comienza a multiplicarse por divisin binaria.
Cuadros clnicos de Chlamydia
trachomatis:
- Tracoma => tras un contacto directo se produce una infeccin crnica en el epitelio conjuntival
y corneal, siendo frecuentes las recadas y sobre infecciones con evolucin lenta hacia la ceguera;
frecuente
en
edades
infantiles.
- Conjuntivitis neonatal => aparece entre la primera y la segunda semana despus del
nacimiento; surge una conjuntivitis purulenta al neonato, asociada a infecciones genitales por
clamidias en la madre; puede evolucionar positivamente o hacia lesiones anlogas al Tracoma.
- Linfogranuloma venreo => es una infeccin que se trasmite por contacto venreo.
Aislamiento
caracteres bioqumicos diagnostico del
genero Chlamydia
Debido al elevado riesgo de infeccin en el laboratorio al manipular clamidias se suelen
utilizar metodos indirectos (serolgicos) a veces tambien se realiza examenes citologicos en
cultivos especficos.
Se
toman
muestras
de
secreciones
oculares
y/o
genitales
- Se realiza un examen directo que incluyen una tincin de Giemsa y de Gram.
Se
realizan tcnicas citolgicas
- Se realizaran exmenes indirectos mediante tcnicas serologcas (la mas frecuente ELISA) que
son mas seguras y fiables; existe un kit para buscar clamidias.

Genero Micoplasma - es uno de los microorganismos mas pequeos existentes

en bacteriologa y
se
caracteriza por
no
contener
pared
celular => sensible
a
la presin omotica del medio (se lisan facilmente), su morfologa es pleomorfismo y resistente a
ciertos antibiticos cuya mecanismo de accin se establece en la pared bacteriana; se dividen
por divisin binaria y vivir de forma independiente y crece bien in vitro a partir de medios
artificiales enriquecidos; se encuentra extendidos en la naturaleza; son comensales de la mucosa
del hombre; existe especies patgenas como Micoplasma pneumoniae que afecta al aparato
respiratorio.
Especies
mas
importantes dentro
de
la
familiaMicoplasmataceae estn los gneros Micoplasma y Ureaplasma; solo unas 10
especies pueden producir algn efecto patgeno en las membranas celulares de las mucosas orofarngeas y uro-genitales;
la
mas
importante
para
el
hombre
es Micoplasma
pneumoniae(produce neumonas); el Ureaplasma urealyticum es otra especie patgeno que se
asocia
a
ETS
junto
con
el Micoplasma
hominis.
Accin patgena e inters clnico
- Su infectividad se relaciona con su adherencia (debido a una glicoprotena especifica) a los
epitelios de las mucosas; su pleomorfismo puede adoptar formas filamentosas y alargadas
que aumenta la superficie de contacto a las estructuras epiteliales a las que se une; una vez
adherida, los cilios de las celulas epiteliales que tapizan la mucosa se paralizan y provoca
alteraciones metablicas en
dichas
celulas
epiteliales.
- Cuadros clnicos => cuadro pulmonares y mas raramente cuadros genitales o uro-genitales,
siendo Micoplasma pneumonia es mas importante como el agente causal mas frecuente de
las neumonas atpicas.
- En casos excepcionales se han podido aislar Micoplasma hominis y Ureaplasma
urealyticum en procesos uretrales y genitales como salpingitis, vaginitis, prostatitis, cervicitis,
etc.
(son
casos
muy
raros)
Aislamiento
caracteres bioqumicos diagnostico
- Se toman muestras de la mucosa farngea, secreciones uretrales, exudados, muestras de esputo,
de
sangre,
etc segn la patologa.
- Se realiza un frotis de la muestra que se puede observar en campo oscuro con nigrosina, al
microscopio de contraste de fases o con la tincin de Giemsa (se tie dbilmente).
- Se siembra en medios especficos y con un alto grado de humedad para evitar la desecacin.
- Se realiza pruebas bioqumicas => fermentacion de glucosa, prueba de arginina, ureasa, etc.;
existe
un
kit
de
la deteccin micoplasmas.

- Metodos serolgicos son mas rpidos, mas fiables y mas utilizados en la actualidad
(inmunofluorescencia y ELISA).

Genero Campylobacter - son bacilos Gram- cortos con forma de coma, espiral o alas de
gaviota (en cultivos jvenes); son microaeroflicos, mviles por un nico flagelo polar; no
fermentan los carbohidratos, oxidasa+ y catalasa+; habitan el tracto gastrointestinal de muchos
animales; en el hombre se asocian a infecciones gastrointestinales (via de entrada oral/
digestiva), fundamentalmente, y cada vez en mayor grado a infecciones extraintestinales (meningitis, endocarditis, artritis sptica), especialmente en pacientes con SIDA.
Especies clnicamente importantes
para
el
hombre - C.jejuni, C.coli y C.
laridis sonagentes etiolgicos de diarrea; C.fetus subsp. fetus produce septicemia en pacientes
inmuno-suprimidos.
Aislamiento a partir de "heces" - la siembra inmediata en medios selectivos a la toma de
muestra; si se tiene que posponer, se utilizaran medios de transporte especiales (Cary-Blair o
Campy-Thio) donde se mantiene viables; el cultivo de campylobacter tiene que cumplir 3
requisitos =>
(1) empleo de medios selectivos p.ej. "Campylosel" contiene sangre de cordero con ATB
y antifngico o
"Skirrow"
contiene
sangre
de
caballo
con
ATB
(2) uso de atmsfera reducida de O2/ microaeroflica se consigue mediante sistema
de evacuacin-reemplazo hasta lograr 5% de O2, 10% de CO2 y 85% de N2 o campanas
anaerobios
con
sobres
comerciales
que
generan
la atmsfera deseada.
(3) temperatura de 42C en aislamiento inicial entre 24-48 horas (para inhibir la flora fecal
acompaante), despus pasa a 37C el 3 da; las placas han de incubar hasta 72 horas antes de
descartarse como negativas; a esta temperatura se consigue el mximo aislamiento deC.jejuni y
C.coli.
Si pretende aislar otras especies de campylobacter distintas a C.coli y C.jejuni => ha de emplear
medios
selectivos
sin
cefalosporinas, incubacin a
37C, atmsfera microaeroflica,
incubacin de
7 das.

Identificacin - los campylobacter termoflicos dan lugar a colonias grises, incoloras, mucosa y
no hemolticas; se les hace una tincin Gram (bacilos Gram- con forma de S en cultivo joven y en
cultivo viejo pueden dar formas cocoideas); se monta un fresco para observar la movilidad; son
oxidasa y catalasa positivos; para diferenciar entre las especies se puede montar un API o se
realizan varias pruebas => (1) crecimiento a distintas temperaturas, (2) sensibilidad al acido
nalidixico y a la cefalotina (3) hidrlisis del hipurato (se introduce una tableta dentro de un tubo
inoculado, dar +
si
cambia
a
color
amarillo).
Campylobacter jejuni => crecimiento a 42C, hipurato+, sensibilidad a Nalidixico y resistente a
Cefalotina
Campylobacter coli => crecimiento a 42C, hipurato-, sensibilidad a Nalidixico y resistente a
Cefalotina
Campylobacter fetus => no crecen a 42C, hipurato-, resistente a Nalidixico y sensible a
Cefalotina
Campylobacter laridis => crecimiento a 42C, hipurato-, resistente a ambos Nalidixico y
Cefalotina
Patogenia y patologia - C.jejuni es la especie con mayor frecuencia se asocia a infeccion en el
hombre (gastroenteritis con eliminacin de sangre en heces), se adquiere por via oral (comida y
bebidas contaminadas) o por contacto con animales infectados; sensible a pH gstrico (debe
ingerirse una concentracin elevada de ellos para que se produzca infeccion); se multiplica en el
intestino delgado, invade el epitelio y produce inflamacin; en ocasiones puede pasar al torrente
circulatorio y desarrollarse un cuadro de fiebre entrica; la diarrea acompaada de dolor
abdominal agudo, dolor de cabeza y fiebre; la infeccin es autolimitada resolviendose en una
semana sin necesidad de ATB; los casos graves se trata con eritromicina.

Helicobacter Pylori - se aislaron por 1 vez (1982) del estomago de pacientes con
lesiones gstricas y ulcera pptica; son bacilos curvados Gram- con forma de espiral y gran
actividad ureasa; se les denomino Campylobacter pyloridis, posteriormente se rectifico a
Campylobacter pylori y cuando demostraron que difera morfologicamente del genero
Campylobacter, se propuso la creacin de un nuevo genero Helicobacter que se incluyo la especie
de Helicobacter pylori; se trata de una especie de reciente descubrimiento, implicada en
procesos
de infeccin gstrica.
Metodos
de deteccin de H.pylori
- Metodos directos => las muestras mas idneas para el aislamiento de H.pylori son las

biopsias de las zonas pliegues de la mucosa gstrica del antro, cuerpo y fundos;
se remitirn directamente al laboratorio para proceder a su cultivo inmediato en
medios especficos para H.pylori; una porcin de la biopsia se invertir en la realizacin de un
frotis
para
la tincin Gram
o
Giemsa.
- Incubacin => las placas deben incubarse en condiciones reducidas de O2 (5%), de 10% CO2
y 85% N2. Se consigue mediante sistema de evacuacin-reemplazo o usando jarras de anaerobios
con sobres comerciales que generan dicha atmsfera; la temperatura optima es de 37C (no se
desarrolla a 25C, 30C ni 42C); en aislamiento primario, es conveniente incubar las placas
hasta 7 das; Las colonias son de 1-2 mm de dimetro, translucidas y poco hemolticas.
- Identificacin => son oxidasa+, catalasa+, ureasa+, hipurato- (algunas cepas son capaces de
virar la urea de Christensen en minutos); es sensible a la cefalotina y resistente al
nalidixico (algunas cepas pueden ser sensibles); no son fermentadora de carbohidrato; crece a
37C.
Metodos
indirectos:
- Prueba de la urea rpida (de Christensen) => un trozo de biopsia se inocula en un medio con
alta concentracin de
urea
y
un
indicador
de
pH.
- Prueba de la urea respiratoria => el paciente ingiere urea marcada y tras un periodo de tiempo
se mide el nivel de CO2 espirado; se puede emplear urea marcada con C13, que se detecta con
un espectrofotmetro de masas y urea marcada con C14 detectada con un contador de centelleo
(un mtodo diagnostico rpido y no invasivo, pero requiere un equipo especial par al lectura).
- Prueba serologa =>
para
detectar
Acs
utilizando
la tcnica de
ELISA.
Patologa existen
pruebas
claras
de
que H.pylori esta implicado
en
diversas patologas gstricas, pero se cuestiona como la causa de dichas infeccin; parece claro
que es agente etiolgico de gastritis aguda; se piensa que tambin pueda tener un papel en la
gastritis crnica activa; en las ulceras ppticas se asla 100% de pacientes con ulcera duodenal y
77% de ulcera gstrica; parece ser que su presencia no es suficiente para desarrollar la ulcera; no
esta claro el papel que desempea en la dispepsia no ulcerosa, en el reflujo gastro-esofgico y en
el carcinoma gstrico; hasta 50% de la poblacin adulta de >60 aos es portadora de este
microorganismo; se desconoce su modo de transmisin; se ha propuesto una
posible adquisicin del
mismo
por
contacto
con
animales, regin periodontal
y transmisin persona-persona
(ninguno estn demostrados)
Sensibilidad antibitica - H.pylori es sensible in vitro a un gran numero de ATB, pero, el
tratamiento in vivo es difcil; nunca se emplea mono-terapia porque no es eficaz, suelen
administrarse varios frmacos juntos y aun as no se consigue erradicar al m.o. por lo que son
frecuentes las recadas tras la supresin de la terapia.

Tema 26
- VIROLOGA CLNICA (caractersticas generales de
los virus)
Introduccin - virus es un parsito intracelular estricto que requiere infestar una clula para
sintetizar sus componentes y ensamblar nuevos viriones; son de muy pequeos tamaos
(filtrables) y se caracteriza por su mecanismo de replicacin, organizacin y
composicion; virologa clnica se remonta al siglo XX y la composicion de un virus fue
determinada por Schlesinger en 1933; en los ltimos aos se han descubierto otros agentes
infecciosos mas simples como los viroides y los priones;
- los viroides => moleculas circulares de ARN de bajo Pm sin cubierta proteica que causan
enfermedades a las plantas, infectar a los hombres y animales;
- los priones => son protenas que parecen estar codificadas por genes celulares y actan como
seales reguladoras en las celulas que invaden, resistentes a los procesos fsico-qumicos que
inactivan a los virus y no producen respuesta inmune o inflamatoria en el husped; provocan
prurigo lumbar de las ovejas y cabras (scrapie), encefalopata espongiforme en las vacas y
enfermedades neuro-degenerativastransmisibles en el hombre (p.ej. CreutzfeldtJacob /encefalopata espongiforme progresiva y sndrome de Gerstman-Straussler-Streinker y
el kuru); la patogenia (de todas) se caracterizan por desordenes progresivos como ataxia
(dificultad motrica), demencia, deterioro cognitivo y motor; tras un periodo de incubacin largo
(meses o aos), aparecer los sintomas clnicos; el tropismo de la infectividad es SNC, seguido
por el bazo y ndulos linfticos; en el cerebro se detecta acumulacin anormal de protenaprion en el genoma del husped; los priones son resistentes a las proteasas e induce
una degeneracin neuronal.

Concepto de virus - es un bloque de material gentico (ADN o ARN) rodeado de una

cubierta protena (cpside) que le sirve como vehculo para su transmisin; algunos presenta
membrana lipdica (envuelta) que se adquieren de la membrana citoplasmtica de
la clula infectada durante el proceso de salida; los virus envueltos tienen un matriz proteica que
sirve como puente entre la nucleocpside y la envoltura; carecen de organelas citoplasmticas
para crecer y multiplicarse, por lo que necesitan la maquinaria de una clula husped, pero
si poseen algunos enzimas (nucleasas, transcriptasas, etc.); virines la partcula viral completa
(genoma + nucleocpside); se clasifican por el tipo de husped que parasitan (virus animales,
vegetales, bacterifagos)

Estructura y morfologa de los virus - son de tamao entre 20-25 nm hasta 200-300
nm; su observacin requiere un microscopio electrnico.
- Estructura del genoma => ADN o ARN mono-catenario o bicatenario; la mayora de virus
ARN tienen genomas mono-catenaria excepto los reovirus/rotavirus (bicatenario); los virus ADN
suelen ser bicatenario, excepto parvovirus (mono-catenario); los genomas (core o ncleo)
pueden ser moleculas lineales o circulares nicas o segmentadas en varios fragmentos.
- Estructura de la cpside => su funcin es de proteger el genoma del medio extracelular y
facilitar la entrada al interior de la clula; estn compuestas de subunidades proteicas repetidas
(capsmeros) que a su vez estn compuestas de moleculas proteicas
(protmeros); segn la disposicin que adopten los capsmeros /la cpside, se clasifican en virus
de simetra helicoidal (normalmente son virus ARN), icosaedrica (20 caras triangulares y
12 vrtices) y compleja.
- Estructura de la envoltura => los lpidos de la envoltura es lipoprotica y procede de la
membrana clula infectada, pero las protenas suelen ser virales desplazados a
las protenas celulares originales; en algunos casos, las protenas incluyen una matriz
(protena M) que contacta/ engancha con la nucleocpside; los virus envueltos tienen estructuras
glucoproticas (espculas) importantes para los procesos de adsorcin y penetracin al interior
de la clula.

Ciclo vital de los virus - las estrategias de replicacin varan dependiendo de la estructura del
virus y de su material genmico, pero en general conlleva pasos de => adsorcin/ adherirse
- penetracin - decapsidacin - replicacin - ensamblaje - liberacin.
- Adsorcin => la unin de la partcula viral a la superficie de la clula; no requiere energa y no
depende de la temperatura; intervienen moleculas proteicas de la superficie
del virin (protenas de unin) y protenas de la superficie de la membrana de la clula diana
(protenas receptoras); en los virus envueltos, la protena de adherencia viral son las espculas de
la capa externa de la envoltura.
- Penetracin => tras ser adherido, se penetra el virin completo o solo el genoma y las
polimerasas entran en el citoplasma celular, esto se lleva a cabo por 3
mecanismos: penetracin directa, endocitosis o fusin; penetracin directa => la membrana
solo permite la entrada del genoma viral (ocurre en virus sin envuelta p.ej. fagos); endocitosis=>
los viriones adsorbidos, quedan rodeados por la membrana citoplasmtica de
la clula husped formndose una vescula endosmica (mecanismo mas utilizados de losvirus
sin envuelta); fusin => utilizado por los virus envueltos; existen 2 maneras de fusin: en
los paramyxovirus, su envuelta se fusiona con la membrana citoplasmtica directamente y
la nucleocpside se libera al interior del citoplasma; en el resto de virus envueltos, la envoltura
viral se fusiona con la membrana celular formndose una vescula endosmica que
posteriormente libera la partcula viral hacia el citoplasma.
- Decapsidacin => se degrada la cpside viral para que el genoma viral pueda liberarse e

iniciar la transcripcin y la traduccin; en la mayora la penetracin y la decapsidacin se

produce a la vez.

- Replicacin => es la fase donde se produce la sntesis de todas las macro-moleculas virales;
la clula husped debe proporcionar la energa y los medios suficientes que a veces puede afectar
su propio metabolismo celular, pero en otros casos apenas se alteran; es esencial que
los ARNm transcriban la informacin viral y la replicacin de la informacin gentica y que
posteriormente mediante los componentes celulares se traducen para fabricar protenas que se
necesitan.
a. Replicacin de virus ADN bicatenario => tras la adsorcin y la penetracin, el ADN
viral es liberado y penetra en el ncleo + ARN polimerasas celulares => ARNm transcrito y
traducido para la sntesis ADN viral; para el proceso de traduccin => ARNm emigra al
citoplasma celular y es traducido para formar las protenas de la cpside => que posteriormente
son transportadas al ncleo para ensamblar el virin completo que sern liberados por lisis
celular; la excepcin dar al virus ADN poxvirus (grande y de simetra compleja) que realiza el
proceso de transcripcin y traduccin en el citoplasma celular utilizando su propia ARN
polimerasa dependiente del ADN viral, ya que no pueden utilizar ARN de la clula husped que
se localiza en el ncleo.
b. Replicacin de virus ADN mono-catenario (fagos, parvovirus) => necesitan un
intermediario replicativo para formar ADN bicatenario que puede transcriben el ARNm (ARN
polimerasa celular necesita como plantilla una ADN bicatenario); como resumen: ADN monocatenario + ADN polimerasas de la clula husped => produce ADN bicatenario + ARN
polimerasas celulares => forma ARNm
c. Replicacin de virus ARN mono-catenario de polaridad (+) => ARN viralpenetrado
en el citoplasma de la clula husped es reconocida de inmediato como ARNm por los ribosomas,
los cuales la captan e inician su traduccin a protenas virales y tambin un enzima RNA
polimerasa (transcriptasa); RNA polimerasa producida + ARN viral (se utiliza como molde)
=> replicacin del ARN viral (todo ocurre en el citoplasma independientes del ADN
del husped).
d. Replicacin de virus ARN mono-catenario de polaridad (-) => su ARN de polaridad
(-) complementa el ARNm que es de polaridad (+); mediante su propio ARN polimerasas

sintetizara el ARNm que despus le servir de molde para la sntesis de nuevo ARN de polaridad
(-) y tambin para la traduccin de sus protenas utilizando la maquinaria celular.
e. Un caso especial de Retrovirus => virus ARN mono-catenario de polaridad (+)
queposeen un enzima transcriptasa de reversin (transcriptasa inversa / retro-transcriptasa); su
genoma ARN + retro-transciptasa => produce ADN de polaridad (-) + (la misma)
retrotranscriptasa => origina ADN bicatenario que se integran al ADN celular y permanece alli
durante tiempo prolongado; En un momento dado el ADN integrado se reactiva y es transcrito a
ARNm vrico por la polimerasa del husped y entonces, se completa el ciclo replicativo.

- Ensamblaje y liberacin => se puede producir tanto en el ncleo como en el citoplasma,

tras la replicacin del genoma viral y la transcripcin de las protenas virales, los viriones se
ensambla y se libera de la clula husped; consiste en la unin ordenada del acido nucleico y de
las protenas para formar la nucleocpside, dando lugar a un virin viable; la liberacin de los
virus sin envuelta (desnudos) se produce por lisis celular; en caso de virus envueltos, salen al
exterior por gemacin de una zona de la membrana nuclear o citoplasmtica (depende si son
virus ADN o ARN); la zona de la membrana por donde
se producir la gemacin, adquiere primero las espculas y las protena de la matriz (codificadas
por el virus), que atrae a la nucleocpside, fusionndose a la membrana, formndose la envuelta
y liberndose el virin al exterior; en caso de poxvirus(mas grandes y complejos), estos pueden
sintetizar sus propias envueltas; en caso deretrovirus, el virus no se libera de la clula sino que se
integra en su genoma y permanecer as largo tiempo o de por vida; el proceso de ensamblaje
y liberacin es a veces ineficaz, formndose partculas no infectivas.

Taxonoma vrica - los virus se dividen en familias, genero, especie o tipo y segn su forma del
genoma, tamao, forma, estructura, sintomatologa clnica que producen, tropismo celular,
etc; segn el tipo de genoma que contienen y su estructura => se clasifica en virus ARN y virus
ADN.
Virus ARN
1. De simetra cubica o icosaedrica sin envuelta - mono-catenario de polaridad (+)
que utiliza su propio ARN como mensajero (pueden ser inmediatamente traducidos por la clula
husped ya que no se necesita transcribir ARNm) con la excepcin de Reoviridae(bicatenarios)
que utilizan su propia ARN polimerasa para transcribir ARNm; todos se ensamblan en el
citoplasma de la clula husped y son resistentes al ter.
- Familia Reo-viridae => tamao intermedio (60-80 nm de dimetro), los nicos bicatenarios; el
mas importante para el hombre es el Rotavirus (provoca problemas diarreicos), tiene forma
redonda.

- Familia Calici-viridae => son pequeos (35-39 nm), tienen poca importancia en
microbiologa clnica; el mas importante /patgeno para el hombre es el virus de
Norwalk(productor de gastroenteritis) y el virus de Hepatitis E (su inclusin no es definitiva)

- Familia Picorna-viridae => son pequeos (20-30 nm); los gneros mas importantes son
losEnterovirus (>70 enterovirus que incluyen el Poliovirus, Echovirus, Cosxackievirus y el
virus de la hepatitis A) y los Rhinovirus (>100 rhinovirus).

2. De simetra cubica o icosaedrica con envuelta - mono-catenario de polaridad (+),

todos se ensamblan en el citoplasma de la clula husped y son sensibles al ter.
- Familia Retro-viridae => son grandes +/- 100nm, de elevado Pm, contienen trazas de ADN
y poseen transcriptasa inversa (retro-transcriptasa) en su dotacin; adquieren su envoltura en la
membrana citoplasmtica de la clula husped; se engloban todos los virus ARN tumorales; se
divide 3 subfamilias: Oncoviridae (causan tumores y
canceres), Spumaviride yLentiviridae (dentro de esta estara VIH).

- Familia Toga-viridae => son de 40-70 nm y adquieren su envoltura en la

membrana citoplasmtica; se incluyen la mayora de los arbovirus (transmitidos
por artrpodos - los arbovirus pertenecen a numerosas familias como Togaviridae, Flaviviridae,
Arenaviridae, Reoviridae); se incluyen tambin los no arbovirus: Alphaviruscon virus
Sindbis su principal tipo, Pestivirus con el virus de la diarrea mucosa como su principal tipo
y Rubivirus con rubeolavirus su principal tipo.

- Familia Flavi-viridae => son de 40-50 nm y adquieren su envoltura en las membranas intracitoplasmticas (antes se incluyen dentro de la familia Togaviridae y los han separado por su
menor tamao y por el lugar de su ensamblaje que ocurre en el retculo endo-plasmtico);
incluyen 2 gneros de importancia clnica: (1) Flavivirus (antes llamados arbovirus del grupo
B) que destaca el virus de la fiebre amarilla y del dengue; (2) virus de la Hepatitis C;
actualmente se incluye de manera no definitiva al virus de la hepatitis G.

3. De simetra helicoidal - todos son envueltos, mono-catenario de polaridad (-) que utiliza
su propia transcriptasa (ARN polimerasa) para transcribir ARNmensajero; se ensamblan en el
citoplasma y son sensibles al ter.
- Familia Rhabdo-viridae => de forma bala o bastn; el dimetro del cilindro +/- 70nm con
longitud de 175nm; adquieren su envuelta en la membrana citoplasmtica; el genero mas
importante es virus de la rabia.

- Familia Paramyxo-viridae => de tamao 150-300nm,

son pleomrficos predominandoformas esfricas rugosas y filamentosas; adquieren su envuelta
en la membrana citoplasmtico; se incluyen 3 gneros: Paramyxovirus (virus de
la parotiditis/paperas, parainfluenza tipos 1,2,3,4A,4B...), los Morbilivirus (virus
del sarampin, entre otros) y losPneumovirus (virus sincitial respiratorio - causan
bronquiolitis en nios pequeos).

- Familia Orthomyxo-viridae => morfolgicamente semejante a la familia Paramyxoviridaepero

mas pequeos 80-120nm, parecidos tambin a la familia Rhabdoviridae (los 3 proceden de un
ancestro comn); adquieren su envoltura en la membrana citoplasmtica; se
incluyen2 gneros: los virus de la influenza o de la gripe tipos A, B y C.

- Familia Arena-viridae => de tamao 50-300nm, adquieren su envoltura de la

membrana citoplasmtica; algunos producen infecciones virales "lentas"; el mas importante
es virus de la fiebre de Lassa (en Africa).

- Familia Bunya-viridae => de tamao 80-100nm, de forma esfrica, adquieren su envoltura en

el aparato de Golgi; la mayora de los gneros son arbovirus.

- Familia Corona-viridae => de tamao 80-130nm, morfolgicamente se parecen a

Orthomyxovirus, pero sus proyecciones en la superficie a modo de ptalos o "corona solar";
adquieren su envoltura en las membranas intra-citoplasmticas; la mayora de
los gneros son virus respiratorios de vas altas.

Virus ADN
a. De simetra cubica o icosaedrica sin envuelta - su genoma es ADN bicatenario
con excepcin de Parvo-viridae (mono-catenario); todos se ensamblan en el ncleo y
sonresistentes al ter
- Familia Adeno-viridae => de tamao mediano 70-90nm; se conocen 34 tipos que afectan al
hombre y mucho de ellos afectan el tracto respiratorio.

- Familia Parvo-viridae => de tamao muy pequeo 18-26nm con genoma ADN mono-catenario;
la mayora no tienen importancia clnica, excepto parvovirus B19, pertenece al
genero Parvovirus que causa eritema infeccioso.

- Familia Papova-viridae => son de tamao pequeos 45-55nm con ADN de tira circular; el
genero mas importante es el Papilomavirus o virus de las verrugas con 66 tipos
depapilomavirus humanos (PVH); los Papovavirus en general producen enfermedades latentes
y crnicas y algunos son oncognicos.

b. De simetra cubica o icosaedrica con envuelta - son bicatenarios y todos se ensamblan

en el ncleo con excepcin de Irido-viridae que se ensamblan en el citoplasma.
- Familia Herpes-viridae => de tamao medio +/-100nm, adquieren su envoltura en la
membrana nuclear y son sensibles al eter; de los 80 virus que existen, solo 8
tienen inters clnico para el hombre y se divide en 3 subfamilias:
(1) Alphaherpesviridaecon gneros importantes el virus Herpes simples tipo 1 y 2 y el
virus Varicella-zoster; (2)Betaherpesviridae con gneros Citomegalovirus al citomegalovirus
humano (Herpesvirus humano tipo 5) y al Herpesvirus humano tipo6, y al
genero Roseolovirus con elherpesvirus humano tipo 7; (3) Gammaherpesvirus que
incluyen virus de Epstein-Barr(herpesvirus humano tipo 4) que provoca enfermedad de Beso,
pertenece al generoLimphocriptovirus.

- Familia Hepadna-viridae => de tamao 40-50nm, adquieren su envoltura en el citoplasma,

son resistentes al ter y poseen un genoma ADN parcialmente bicatenario; el mas importante es
el virus de la hepatitis B.

- Familia Irido-viridae => de tamao grande 130-300nm, sensibles al ter, adquieren su

envoltura en la membrana citoplasmtica y tambin se ensamblan en el citoplasma (a diferencia
de otros); no tienen importancia clnica para el hombre, pero si en veterinariacomo el virus de la
fiebre porcina africana.

c. De simetra compleja
- Familia Pox-viridae => son virus animales mas grandes 230x400nm de forma ladrillo o ovoide;
se caracteriza como la nica familia de virus ADN que se replica y ensambla en el citoplasma,
pues contienen una RNA polimerasa ADN dependiente (no necesita la maquina nuclear), de
hecho su replicacin es posible en celulas a-nucleadas (sin ncleo); sonresistentes al ter y
poseen una doble envuelta (una la adquieren en el aparato Golgi y la otra en la
membrana citoplasmtica; los mas importante son virus de la viruela, virus de la vacuna
o vaccinia y virus del molluscum contagiosum.

Principales familias de virus de inters clnico

1. Virus ARN (mono-catenario)
1.1. Familia Reo-viridae (tamao mediano 60-80nm - icosaedrico - sin envuelta - se
ensamblan en el citoplasma) - contiene 6 gneros, nicamente cabe destacar Rotavirus)
Rotavirus (forma de rueda - el nico bicatenario) => descubiertos en 1973 en nios con
gastroenteritis; el nico con importancia clnica (agente causal
degastroenteritis espordica y epidmica en lactantes y nios; la infeccin suele
ser asintomtica en neonatos; afecta principalmente a nios entre 6-24 meses; la
prevalencia mxima en invierno y raramente en verano; periodo de incubacin 1-3 das,
precediendo los vmitos a la diarrea que suele mantenerse de 4-5 das; el virus se detecta en
heces (dura bastante horas fuera del husped)
1.2. Familia Calici-viridae (pequeos 35-40 nm - icosaedrica - sin envuelta - de polaridad+) se ensamblan en el citoplasma) => tiene poca importancia en clnica, posibles agentes causales
de gastroenteritis en cualquier da del ao y a cualquier edad; es el agente Norwalk (virus que
causan gastroenteritis en EEUU) que ahora esta dentro de Parvovirus - Parvoviridae; se
incluye de forma no definitiva el virus de Hepatitis E.
1.3. Familia Picorna-viridae (virus muy pequeos 20-30nm - icosaedrica - sin envuelta - de
polaridad+) - es una familia importante y una de las que mayor numero de virus presenta,
destacando 2 gneros Enterovirus y Rhinovirus.
Enterovirus - se asocian con distintos sndromes clnicos como parlisis, meningitis asptica,
encefalitis, miocarditis, pericarditis, pleurodinia, herpangina, infecciones agudas del tracto
respiratorio y fiebre aftosa; son habitantes transitorios del tracto digestivo humano; existen >70
sero-tipos, siendo el tipo 72 es el virus de la Hepatitis A; todos se diseminan por va fecal-oral y
la mayora son asintomticas; los mas importantes sonPoliovirus, Echovirus y Coxsackievirus;
- Los virus de poliomielitis /Poliovirus son tres (tipos 1,2 y 3), mas temidos normalmente por
la parlisis flcida (de cintura para-bajo) y deformidades aunque
son complicacin infrecuente; la vacuna es de Sabin (virus atenuados), tambin Salk (virus
inactivados); la vacuna de poliomielitis se administra a los nios de 2-4-6-18 meses.

- Los virus Echo y Coxsackie tienen distintas manifestaciones (muy ubicuo/ de todo tipo).
Para el diagnostico debe recurrirse al cultivo; el aislamiento de un enterovirus de heces o de
faringe no indica necesariamente una relacion causal con el cuadro clnico, y deben descartarse
otras causas; por el contrario si se trata de LCR.
Rhinovirus - agentes etiolgicos mas frecuentes del resfriado comn (rinitis agudas); existen
>100 tipos
1.4. Familia Toga-viridae y Familia Flavi-viridae (toga=envuelta - icosaedrica - de
polaridad+ - se ensamblan en el citoplasma); ambos son de forma icosaedrico, virus de RNA
mono-catenario con envuelta; se incluyen la mayora de los arbovirus;
losv.Togaviridae (pequeo 40-70 nm, adquiere su envuelto en la membrana citoplasmtica de
la clula mientras los v.Flaviviridae (40-50 nm, lo adquieren de retculo endo-plasmtico; dentro
de Togaviridae estn los arbovirus y los gneros no arbovirus
como Alphavirus(sindbis), Pestivirus y Rubivirus (rubeola) dentro de Flaviviridae esta el virus
Hepatitis C y otros que producen enfermedades como fiebre amarilla, dengue, de
genero flavivirus que pertenecen a los arbovirus tipo B (transmitidos por artrpodos).
Virus de la Rubeola del genero Rubivirus (no es un arbovirus) - descrito hace >200 aos;
consta la importancia como agente causal de malformaciones congnitas desde la epidemia
de 1940 en Australia (un oftalmlogo australiano constato un elevado numero
decataratas congnitas y ceguera asociados a esta enfermedad); la infeccin suele ser benigna
y auto-limitada; sintomas => procesos respiratorios superiores leves, erupcin eritematosa
y linfadenopata sub-occipital y retro-auriculares; en adultos se puede complicar con artritis
transitoria o artralgias; rara vez produce encefalitis o purpura trombocitopnica; muy
importante la infeccin en gestantes por posibles aparicin de sordera neuro-sensitiva,
alteraciones cardacas, cataratas, retraso del crecimiento y sintomas encefalticos;
la incubacin dura 14-21 das; diagnosticopor mtodo serolgico (tcnica de ELISA) para
detectar IgG y sobre todo IgM en las embarazadas y un resultado positivo
indica inmunizacin frente al virus; actualmente es poco frecuente debido a la vacuna
obligatoria que se incluye en latriple vrica (paperas, sarampin y rubeola) que se pone a los
nios de15 meses (suele dar inmunidad permanente) y una dosis de recuerdo a los 6 aos (solo
las nias); a los 11 aos solo se dan vacuna de varicela.
Clnica de Rubeola => empieza con eritema en la cara y se extiende hacia abajo (es un

eritema maculo papuloso); es menos llamativo que de la sarampin; dura +/- 3 das y puede
haber enantema palatino.

1.5. Familia Retro-viridae (de tamao grande +/- 100nm - icosaedrica - con envuelta - de
polaridad+ - se ensamblan en el citoplasma) => poseen enzima transcriptasa inversa / retrotranscriptasa; a esta familia pertenece el virus de la inmuno-deficiencia humana VIHque se
estudia aparte.
1.6. Familia Orthomyxo-viridae (de tamao 80-120nm - helicoidal - envuelta - de polaridad
(-) y se ensamblan en el citoplasma) - en1918 tras la Guerra Mundial, mato mas personas que la
propia guerra; esta compuesta por los distintos tipos de virus influenza/ Gripe (tipo A, B y C).
Virus Influenza /la gripe espaola (empez en Espaa) - causan gripe, infeccin respiratoria
aguda epidmica normalmente durante mes de noviembre-abril; la va de transmisin es area,
periodo de incubacin 1-4 das, seguido de clnicas tipo respiratorias superior, mas grave en los
ancianos; se realizan campaas de vacunacin todos los aos (sobre todo a los ancianos y
pacientes bronco-pulmonares), ya que presentan gran variabilidad antignica segun el
serotipo que causa la epidemia (tiene gran poder mutagnico); existe 3 tipos => A, B y C (A y B
causan epidemias de importancia); los influenza A se subdividen segn la diferente
composicion antignica (en la envoltura) de la hemaglutinina y la neuraminidasa; el diagnostico
es clnico; recientemente se introduce metodos de diagnostico de
muestras clnicas de antgenos virales; el de mayor importancia clnica es virus respiratorio
sincitial (VRS); para el diagnostico rpido se usa la inmuno-fluerescencia directa en aspirados
naso-faringeos, esputos o biopsia de pulmn;existe un kit con Ags virales para detectarlos.
1.7. Familia Paramyxo-viridae (de tamao grande 150-300nm - helicoidal - envuelta - de
polaridad (-) y se ensamblan en el citoplasma) => morfolgicamente parecida al de anterior/
Orthomyxoviridae; todos ellos son causas importantes de enfermedad respiratoria en los nios;
se incluyen 3 gneros Paramyxovirus (virus de la parotiditis/paperas y
parainfluenza), Morbilivirus (virus del sarampin), Pneumovirus (virus sincitial respiratorio)
Virus Parainfluenzae (VPI) del genero Paramyxovirus - los 5 tipos de VPI producen
infecciones del tracto respiratorio, siendo el 1 y el 2 los principales causantes de laringotraqueobronquitis, el 3 de bronquiolitis y neumnia en nios (segundo agente despus del VRS),
el 4 y el 5 causan infecciones mas suaves; el diagnostico es clnico.

Virus respiratorio sincitial (VRS) del genero Pneumovirus - es la causa mas importante
de neumnia y bronquiolitis en nios y recin nacidos; produce un amplio espectro de
infecciones, siendo la mas frecuente es el resfriado comn con abundante rinorrea; VRS esmuy
contagioso y se manifiesta en forma de brotes invernales; la inmunidad no es completapor lo que
se dan las re-infecciones (mas suaves); Es importante que la excrecin de virus se mantenga
durante 2 o 3 semanas (mas tiempo para los inmunodeprimidos), por lo que al ingresar un nio
en el hospital durante 1 o 2 semanas, puede ser contagioso todava (es el agente mas frecuente
de infeccin nosocomial en pediatra); las infecciones graves se trata con la
ribavirina (inhibe la sntesis del ARN viral); el diagnostico rpido es la inmunofluorescencia en
secreciones respiratorias.
Virus del Sarampin - causa una enfermedad aguda, febril, exantemtica, de gravedad
variable que afecta a nios de 5-9 aos, se contagia por va respiratoria y
conjuntival;sintomas clnico => los primeros das como un catarro naso-oculo-faringolaringeo, luego aparece fiebre, cara rubicunda, congestin de mucosa y a los 3-4 das aparece
"manchas Koplik" (manchas blanquecinas diminutas delante del 1 y 2 molar) dura un par
de das; empieza aparecer exantema, primero retro-auricularmente, despues se extiende a todo el
cuerpo, las palmas y las plantas de los pies mas tenue en zonas distales, sube a la fiebre y el
exantema tenue se hace muy eritematoso; tras 2-3 das mejora bruscamente y desapareciendo los
signos en el orden del aparecimiento (dar inmunidad permanente); el diagnostico es por
metodos serolgicos.

Virus de la parotiditis - es una enfermedad endmica con incidencia todo el ao; es rara en
nios < 1 ao, gracias a la inmunidad de la madre; afecta a nios de 5-14 aos, se transmite
por va area y por objetos introducidos a la boca (dar inmunidad permanente); clnica => tras
24horas de clnica inespecifica, aparecern dolor y tumefaccin de retro-parotidia y odo,
aumento de fiebre, puede haber afectacin de nervio facial leve y bilateral; complicacin =>
meningitis, orquitis, pancreatitis o artritis; diagnostico es por va serolgico; el diagnostico es por
metodos serolgicos.

1.8. Familia Rhabdo-viridae (de tamao grande en forma de bastn, dimetro 70nm y
longitud 175nm - helicoidal - con envuelta - de polaridad (-) y se ensamblan en el citoplasma) =>
caracterstica tpica de su morfologa es forma de "bala"; el mas importante es el causante de la
rabia o hidrofobia (se atraganta con el agua).
Virus de la rabia - causa enfermedad infecciosa aguda del SNC, de gran
importancia histrica por los trabajos de Pasteur; existe la obligacin de vacunar todos los aos a
perros y gatos, ya que es una zoonosis en la que el hombre es un eslabn irrelevante; existen 2
formas epidemiolgicas => urbana (lo adquieren perros y gatos no inmunizados)
y salvtica (los zorros); normalmente el virus esta presente en la saliva de animales
rabiosos, transmitindose por mordeduras (son fuentes de infeccin humana); el
diagnostico sola realizarse postmortem, mediante la observacin de los cuerpos de Negri
(cerebro); tambin se pueden cultivar en laboratorio; clnica de animales => cambian
de carcter, se vuelven caprichosos, pierden apetito, ingerir objetos no engullibles autllan con
ronca, irritabilidad creciente y muerden a personas y animales; mueren en 2
semanas; clnica de humanos => la incubacin 1-3 meses depende del lugar de la
mordedura; el virus se propaga por los nervios a una velocidad 1mm/hora; comienza con
la alteracin del sueo, dolor de la mordedura, tambin parestesias/ hormigueos de la zona,
trastornos respiratorios (en la voz), posteriormente aparece espasmos farngeos tras
la ingestin de lquidos o solo de verlo (hidrofobia), salivacin espumosa y espasmos en las
extremidades (basta con pequeos estmulos de luz o ruidos, para provocar lo); las personas
suelen morir por parlisis en pocas horas tras la afectacin de bulbo-raqudeo; el cuadro normal
es de 3-6 das, despus mueren.

1.9. Familia Corona-viridae (de tamao 80-130nm - helicoidal - envuelta - de polaridad (-) y
se ensamblan en el citoplasma) => adquieren su envoltura (con proyecciones a modo de ptalos/
corona solar) en las membranas intra-citoplasmticas; escasa
importanciaen patologa, nicamente causan el resfriado comn y pueden estar involucrados en
cuadros de gastroenteritis.
2. VIRUS ADN (bicatenario)

2.1. Familia Parvo-ridae (de tamao muy pequeo 18-26nm - icosaedrico - sin envuelta - se
ensamblan en el ncleo - resistentes al eter) => son de tamao muy pequeo y sonlos nicos que
presentan ADN de una sola hebra (mono-catenario); algunos tienen importancia en veterinaria y
solo destaca uno como patgeno humano (Parvovirus B19).
Parvovirus B19 (estaban incluidos en virus Norwalk) - fue vinculado al eritema infecciosoen
1983; es benigna y afecta nios en edad escolar; presentan una erupcin eritematosa en las
mejillas (cara enbofetada) y un exantema en extremidades y tronco (respeta a las palmas, las
plantas y los labios); los adultos son propensos a artropata asociada, que se resuelve en 2-4
semanas; diagnostico por mtodo serolgico y metodos de ELISA.

2.2. Familia Papova-viridae (de tamao pequeo 45-55nm - ADN de tira circular icosaedrico - sin envuelta - se ensamblan en el ncleo - resistente al ter) => son unos viruses
oncognicos (efecto cancergeno), producen enfermedades latentes y crnicas, causantes
verrugas genitales o condilomas (se asocian a carcinoma de crvix) y papilomas(Papilomavirus/
virus Papiloma humano); el diagnostico es de tipo clnico y serolgico; prevencin => se vacunan
a las nias de < 14 aos.
2.3. Familia Adeno-viridae (de tamao mediano 70-90nm - icosaedrico - sin envuelta - se
ensamblan en el ncleo - resistente al ter) => producen principalmente patologa al tracto
respiratorio, ocular y gastroenteritis; las infecciones respiratorias solo son significativas en nios
<6 aos; el diagnostico se realiza mediante clnicas y tcnicas serologcas.
2.4. Familia Hepadna-viridae (de tamao pequeo 40-50nm - ADN parcialmente
bicatenario - icosaedrico - envueltos - se ensamblan en el ncleo - resistentes al ter) => su
envuelta se adquiere en la membrana citoplasmtica y se ensamblan en el ncleo; en esta familia
se encuentra virus hepatitis B que se estudiara a parte.
2.5. Familia Herpes-viridae (de tamao medio +/-100nm - icosaedrico - envueltos - se
ensamblan en el ncleo - sensibles al ter) => adquiere su envuelta de la membrana nuclear y se
ensamblan en el ncleo; destaca 3 subfamilias => Alphaherpesviridae (VHS 1y2, virus
Varicella-Zooster), Betaherpesviridae (CMV y Roseolovirus), Gammaherpesvirus
(VEB/Limphocriptovirus); todos los virus producen infecciones latentes, capaces de reactivarse.
Virus Herpes Simple (VHS) - producen infecciones latentes que se reactivan con o sin
lesiones que sirven de fuente de infeccin para individuos susceptibles (los virus de Herpes no se
cura, solo se acantona y se puede reactivar); existen 2 tipos => VHS-1 (tropismo por
lesiones por encima de la cintura y suele ser leve) y VHS-2 (se encuentra principalmente en los
genitales, transmitindose por va venrea); cada individuo tiene un tropismo estable;suele ser
bucal, comienza con hormigueo y luego aparecen vesculas, costra y desaparece en +/- 1

semana; VHS-1 se transmite por secrecin oral, infeccin a nivel peri-oral, tambin otras zonas
como los ojos; VHS-2 normalmente daran infeccin genital y se contrae por va sexual; en EEUU
en ciertas capas sociales, es la enfermedad venrea mas frecuente; en mujer gestante se puede
transmitir al bebe va placenta o canal de parto o en los primeros das de vida; en general estos
virus tienen capacidad oncognicos como VEB (virus Epstein-Barr), puede
producir cncer cervical; el diagnostico se realiza mediante la tincin de Giemsa de celulas
raspadas de lesiones herpticas, para observar las caractersticas de las celulas gigantes multinucleadas; tambin se cultivan en SHELL-VIAL.

Citomegalovirus (CMV) - producen infeccin asintomtica, pero con gran importancia

en huspedes inmuno-comprometidos; las infecciones se pueden clasificar en congnitas, perinatales o pos-natales (antes o despus del parto); es la causa mas frecuente
de infeccin congnita; el CMV se ha detectado en saliva, orina, leche materna, semen, por lo que
su transmisin es variada; tambin se transmite por transfusiones o trasplantes; en pacientes
inmuno-competentes, normalmente son asintomtica, si da clnica va a ser semejante
a mononucleosis infecciosa (virus Epstein-Barr), comofiebre, adenopatias,
hepatomegalia; en paciente inmunodeprimidos es diferente, en general dar fiebre, neumonitis,
colitis, esofagitis, hepatitis, infeccin congnita y perinatal, puede dar retraso mental, ictericia y
sordera; el diagnostico => por serologa buscando Acs anti CMV (metodos ELISA), cultivo
en SHELL-VIAL (artificial) ya que no se pueden cultivar en celulas vivas.
Virus Varicela-Zster (VVZ) - la varicela y el herpes zster representan diferentes
manifestaciones clnicas de un mismo virus; la varicela es mas frecuente en nios y se caracteriza
por fiebre y exantema vesicular generalizado; es una infeccin primaria mientras su reactivacin producir el herpes zster, aparece normalmente en adultos (cuando hay
una disminucin de la inmunidad) que consiste en una erupcin dolorosa circunscrita de
lesiones vesiculares, acompaada de inflamacin de las races dorsales de los nervios raqudeos o
de los ganglios sensitivos craneales; los estadios son => macula - ppula - vescula umbilicacin - costra; caractersticamente existe estados evolutivos todos mezclado a la vez y
prurito sobre todo en el tronco y cara (menos en las extremidades); el diagnostico sera
tipo clnico y tambin por los distintos metodos en laboratorio => examen directo
previa tincin Giemsa por microscopio electrnica, por serologa (ELISA) y por cultivo celular.

Virus de Epstein-Barr (VEB) - es uno de los virus humanos mas ubicuos, linfotrpico y
oncognico; la infeccin primaria suele pasar en la infancia, aumentando su sero-prevalencia 6070% en jvenes y 80-90% en adultos; el sndrome clnico mas frecuente es lamononucleosis
infecciosa (enfermedad de beso) que presenta fiebre, adenopatias, faringitis y linfocitosis con
linfocitos atpicos; VEB tambin se ha asociado a carcinoma naso-farngeo y al linfoma de
Burkitt; diagnostico => la prueba de Paul Bunnell es la deteccin de Acs heterofilos
y tambin por mtodo de ELISA.

Herpesvirus Humano 6 (HHV-6) - es un virus de muy reciente aparicin, se ha aislado

en sndromes linfo-proliferativos y se ha vinculado al exantema sbito (elevacin brusca de la
temperatura hasta 40C de 2-4 das, seguida de un descenso rpido que coincide con
la aparicin de un exantema maculo-papular que persiste 1-2 das; el diagnostico
sera clnico y serolgico.
Herpesvirus Humano 7 - se descubri en 1989 (reciente); tiene tropismo por los linfocitos T,
provocando exantema sbito; se investiga si tiene relacion con sndrome de fatiga crnica (que lo
padecen sobre todo mujeres mayores).
2.6. Familia Pox-viridae (ADN bicatenario - doble membrana) - son de tamao grande 230400nm, con forma de ladrillo, se replica en citoplasma y se ensamblan en el citoplasma;el mas
importante es el virus de la viruela, virus de Moluscum Contagiosum y virus de la Vaccinia;
- Viruela se contagia por inhalacin y tras 15 das aparece fiebre, mialgias
y erupcin ppula vesicular dura y luego evoluciona a pstulas y a la curacin; a veces puede
provocar muerte por exantema hemorragica o una sobre infeccin bacteriana.

- Virus de la Vaccinia es muy prximo al virus de la viruela; en individuos inmunodeprimidos

puede provocar complicaciones, pero en los inmuno-competentes es auto-limitado; es
importante en los principios de la vacunacin (Jennen); ltimamente se investiga
su utilizacin como vector para actuar como vacuna contra virus de Hepatitis B, Herpes simple y
VIH, ya que su genoma es susceptible de poder insertarle secuencias de genes que
codifiquen protenas de otros virus y que se expresaran posteriormente cuando el virus se
replique, con lo cual tendramos Acs contra estos virus.

- Virus de Moluscum Contagiosum - provoca enfermedad cutnea benigna,

contagiosa que pueda adquirir por compartir objetos o contacto sexual; aparece en
epidermis lesiones nodulares blancas de aspecto nacarado de 2-10 mm que son indoloras;
cualquier traumatismo provoca su contagio; desaparece entre 2 meses y 1 ao.

Esquema de Virus Respiratorio

HEPATITIS VIRAL - es una enfermedad sistmica que afecta fundamentalmente el Hgado; se

conocen 7 virus de la hepatitis, denominados A,B,C,D,E,F y G que pertenecen cada uno a familias
y gneros distintos, pero que tienen todos un tropismo heptico (no tienen relacin taxonmica);
existen adems otros virus que producen hepatitis, comoCitomegalo virus y el virus de EpsteinBarr; se pueden clasificar segn la principal va de transmisin y la tendencia a la cronicidad en 2
grandes grupos(1) transmisin fecal-oral y no cronifican: VHA, VHE y
VHF (2) transmisin parenteral y pueden cronificar: VHB, VHC, VHD y VHG.
Virus de la Hepatitis A (VHA) - aislado en 1973, pero se sospech mucho antes; virus ARN
de la familia Picornaviridae (de pequeo tamao 20-30nm, icosadrica, sin envuelta,
polaridad+) dentro del gnero Enterovirus, el tipo 72; la mayora de infecciones son aguda sin
cronificarse (<1% fulminante); se encuentra en las heces durante el periodo de incubacin(hasta
2 semanas).
Transmisin - se disemina por la ruta fecal-oral (estrecho contacto persona-persona) con la
implicacin de agua y alimentos que pueden causar brotes epidmicos; la mayor excrecin del
virus en heces se da en las semanas previas a la aparicin de la ictericia, sobre todo en la fase
tarda de la incubacin; otras vas de transmisin del virus son posibles pero poco probables;
existe casos durante todo el ao, con un pico en otoo.
Sintomatologa clnica suele ser menos grave que la hepatitis B; en general, la infeccin
es asintomtica y la gravedad aumenta con la edad; el periodo de incubacin 20-45 das, a
continuacin suele aparecer fiebre, mialgias, fatiga, ictericia, anorexia, dolor de cabeza o dolor en
epigastrio y aumento de las transaminasas (GPT, GOT) y hepatomegalia.
Diagnostico requiere la confirmacin del laboratorio; se observ el virus por la primera vez
por Feinstone en 1973 y es cultivable, pero se utiliza la serologa basada en la respuesta
inmunitaria; el mtodo ms utilizado es ELISA detectando Acs IgMVHA en su fase aguda;
tambin se pueden detectar Ags virales en heces (detectar Acs total de IgG y IgM no tiene

utilidad clnicamente); IgM suele durar 6 meses; IgG confiere inmunidad y la mayor parte de
nuestra poblacin de >40 aos los tienen; hasta la fecha no se han descrito casos de cronicidad.
Prevencin las medidas ms importantes son la higiene personal, lavado y desinfeccin de
manos y objetos contaminados; no es necesario el estricto aislamiento del paciente mientras se
mantiene las medidas de desinfeccin-esterilizacin, cloracin y nivel higinicosanitarias; inmunizacin pasiva => se dispone una inmunoglobulina eficaz tanto paraprofilaxis
pre-exposicin (se estudia la relacin coste-eficacia antes de utilizarla/ solo si viajan a zonas
endmicas) como post-exposicin; inmunizacin activa => existe una vacuna con buenos
resultados (virus inactivados) que se pone al mes, 6 meses y al ao (3x).

Virus de la Hepatitis B (VHB) es un virus ADN de la familia Hepadnaviridae (ADN

parcialmente bicatenario, icosadrica con envuelta, resistentes al ter), de gran importancia
socio-sanitaria y distribucin mundial (250 millones portadores asintomtico 1%
desarrollan cirrosis heptica o carcinoma hepato-celular que son complicaciones ms
importantes); primeros casos se describieron en 1833 en Bremen (Alemania), por la
administracin de la vacuna de la viruela que contiene suero humano, pero hasta los aos 40-50
no se distingui de la hepatitis A; en 1965 Blumberg descubri el Ag Australia y se identific el
virus.
Estructura se distinguen una serie de estructura del virus que dan lugar a los marcadores
serolgicos:
-Ag de superficie => HBsAg o Ag Australia (marcador de infecciosidad, codificado por el gen S)
que induce a la formacin de HBsAc o anti-HBs que confiere inmunidad.
-Ag del core o nucleo-cpside => HBcAg codificado por el gen C que no se detecta en sangre pero
si su HBcAc (marcador epidemiolgico que se mantiene de por vida); IgM-HBcAc se detecta
como marcador ms fiable de hepatitis B aguda.
-Ag soluble => HBeAg que induce al HBeAc (HBeAg es el marcador de pronstico de la
enfermedad, ya que se correlacionan con el nivel de replicacin del virus; HBeAc es unmarcador
de buena evolucin).
-Adems se distinguen su genoma ADN y una polimerasa.
- El virin completo se denomina partcula de Dane, ya que existen formas incompletas en
sangre (como p.ej. HBsAg).
Infeccin por VHB la mayora son sub-clnicas/ asintomtica (50-80%) y solo se detectan
en controles serolgicos; la mayora de las infecciones sintomticas son auto limitadas y se
resuelven en menos de 6 meses (Hep.aguda); la lesin heptica puede ser nula o leve o llegar a

casos de hepatitis fulminante (> de 6 meses se pueden cronificar); lasintomatologa clnica es

similar a la de Hepatitis A; un periodo de incubacin es de 1-6 meses; entre 5-10% de las
infecciones se hacen persistentes y se mantiene de por vida (como portador asintomtico o
sintomtico); en la mayora de ocasiones la funcin heptica y la histologa son normales, pero
en otras ocasiones dan lugar a sndromes hepatitis crnica persistentes (HCP) y hepatitis crnica
activa (HCA); HCP es menos progresiva que HCA (puede ser ms grave y desembocar en
cirrosis).

Epidemiologia existen reas hiper-endmicas, endemia media y baja (Espaa est en

baja); el nico reservorio importante es el hombre que transmite el virus por contacto ntimo (va
sexual, parenteral y vertical-perinatal) y mediante objetos personales o materiales de
hospitales (familiares y personal sanitario corre un mayor riesgo); la existencia de HCP presenta
un reservorio estable para el virus y asegura su supervivencia indefinida que se detecta en
lquidos corporales (sangre, heces, orina, bilis, lagrimas, semen, leche materna, sudor,
secreciones vaginales, LCR, liquido sinovial y sangre de cordn);
Marcadores en la infeccin aguda auto-limitada (en el orden de aparicin):
-HBsAg (aparece antes del 1 mes y desaparece antes de 6 mes)
-HBeAg (aparece el 1 mes y desaparece antes del 3 mes)
-DNA viral (aparece despus del 1 mes y desaparece al 3 mes)
-Anti HBc (aparece entre 1-2 mes; Anti-HBc IgM desaparece antes del 5 mes => Hepatitis
aguda)
-Anti HBe (aparece al 3 mes)
-Anti HBs (aparece antes del 7 mes)
Prevencin es la medida ms eficaz para combatir la infeccin; es un virus muy contagioso
cuando hay exposicin parenteral; existe inmunizacin pasiva (gammaglobulina hiper-inmune
eficaz en situaciones de pre y post-exposicin ) y inmunizacin activa (vacuna de HBsAg que se
administra universalmente a 0-1-6 meses que produce respuesta inmunitaria de 90-95%).

Virus de la Hepatitis D (VHD) descubierto en 1977; es un virus ARN incompleto

/defectivo que requiere HBsAg para su replicacin (adquieren su envuelta del virus B y si no hay
infeccin de por VHB no la hay por VHD).
Tipos de infeccin:
1-Coinfeccin => infeccin simultneamente por ambos virus (VHB y VHD); el curso natural de
VHB no se modifica; al resolverse la infeccin de VHB, re resuelve tambin la de VHD;
clnicamente la hepatitis es ms grave y la tasa de hepatitis fulminantes es mayor (hasta 20%).
2-Sobreinfeccin => cuando el VHD sobre infecta a portadores crnicos de VHB; aqu si se
modifica el curso natural de VHB y la mayora de las sobreinfecciones (70%) desembocan en
hepatitis crnica y acaban en cirrosis entre 15-20 aos.
El pronstico de VHD depende de marcadores de replicacin del virus (anti-HBe) => puede
acabar en hepatitis crnica o cirrosis; cuando no hay marcadores de replicacin => puede
evolucionar a la curacin.

Virus de la Hepatitis C (VHC) es de reciente descubierto (1988 - aunque se sospech desde

hace mucho tiempo) del que quedan an muchos interrogantes por resolver; en actualidad se
sabe que VHC es responsable del 80-90% de los casos de hepatitis post-transfusional y del 2050% de los hepatitis espordica; es un virus del tamao medio dentro de la familia Flaviviridae
(virus ARN icosadrica pequeo de tamao 40-50nm con envuelta, de polaridad+ y sensibles al
ter); se distingue regiones para la envoltura (E), el core (C) y otras no estructurales (NS).
Infeccin por VHC se diseminan fundamentalmente por la va parenteral; es la causa ms
frecuente de hepatitis post-transfusional, hepatitis espordica y ampliamente distribuido entre
ADVP (adicto a la droga de va parenteral), pacientes en dilisis y hemoflicos; se puede
transmitir por contacto sexual o convivencia con portadores (menor importancia que Hep.B);la
clnica es similar a la de la hepatitis B; 25% cursan con ictericia y la tasa de mortalidad es <1%; el
curso es indolente y prolongado; el inicio no es muy brusco, es frecuente las recurrencias, 5070% tienden a cronificar y 20-25% acaban desarrollando cirrosis.
Prevencin tratar todo tipo liquido corporal como potencialmente infeccioso; todava no se
dispone inmuno-profilaxis; un paciente con VHC negativa no significa que no lo padece, porque
la sensibilidad de las tcnicas ms utilizadas no es 100% fiable; si se sufre un accidente en el

laboratorio o en la prctica clnica con sangre anti-VHC+, se debe realizar un protocolo de

seguimiento serolgico de la persona; existen evidencias de que VHC puede estar implicada en
cncer heptico.

Virus de la Hepatitis E (VHE) se descubri en 1983 y es responsable de la epidemias por

transmisin fecal-oral en India, Paquistn, frica del Norte y Mjico (pases de baja salubridad);
el curso es corto y parece ser que se puede transmitir parenteralmente, pero no transfusionalmente; el virus todava no est catalogado, se parece ms a los calcivirus da lafamilia
Calciviridae (virus ARN icosadrica de tamao pequeo 35-40nm sin envuelta, de
polaridad+); clnica => aunque no se cronifica al igual que VHA, tiene un pronstico peor (la
mortalidad 1-2%), ms grave en gestantes del 3 trimestre del embarazo (mortalidad de 20%); la
habitual va de transmisin es a travs del agua de bebida.

Virus de la Hepatitis G (VHG) se transmite por va parenteral; esta relacionado con virus
de la familia Flaviviridae (virus ARN icosadrica de tamao pequeo 40-50nm, con envuelta de
polaridad+); provoca aisladamente un cuadro benigno, pero puede dar una coinfeccin con el
VHB y VHC con mayor tendencia a la cronicidad.
Virus de la Hepatitis F (VHF) se transmite por va entrica (fecal-oral)
SEROLOGIA DE LAS HEPATITIS VIRICAS (1993)
Marcadores serolgicos para el diagnstico de la hepatitis A la mayora de
infecciones son aguda sin cronificarse (<1% se fulmina); se encuentra en las heces durante el
periodo de incubacin (hasta 2 semanas); su deteccin con fines diagnsticos no se emplea
rutinariamente.
-Ac Anti-VHA IgM => siempre es positivo en el inicio de la sintomatologa clnica (hasta 3-6
meses); se usa como marcador de infeccin aguda; en Ag viral es detectado solamente en el
hgado y no se utiliza para el diagnstico.

-Ac Anti-VHA IgG => su presencia demuestra un contacto previo con el virus (se mantiene
durante largos periodos de tiempo).
Marcadores serolgicos para el diagnstico de la hepatitis B la evolucin clnica es
variable (desde asintomtica y anictrica hasta una enfermedad aguda que se puede complicar
hacia la cronicidad, la cirrosis o forma fulminante fatal); es evidente su relacin con el carcinoma
hepato-celular; la determinacin cualitativa y cuantitativa de ciertas protenas virales (Ags) y de
los Acs nos sirve para evaluar la situacin actual y pronosticar el futuro de la infeccin.
-Ag de superficie HBs Australia (HBsAg) => se sintetiza en el citoplasma del hepatocito; debido a
que los hepatocitos fabrica un exceso de estos, una parte es liberada a la sangre y puede ser
detectada durante el periodo de incubacin (es el 1 marcador que aparece, incluso 2-6 semanas
antes de que aparezca los sntomas, aunque pueda haber de 5-10% de hepatitis aguda sin este
marcador), en la fase aguda de la enfermedad y en el estadio crnico; si la evolucin es favorable
desaparecer a los 3-6 meses de la enfermedad; por el contrario, si se mantiene ms de 6-8
semanas despus o si no existe una disminucin significativa de su ttulo, es indicio de mal
pronstico y de evolucin a la cronicidad.
-Ac anti-HBs => es el indicador de recuperacin de la enfermedad y el ultimo en aparecer(+/- a
los 3 meses de su evolucin); persiste durante mucho tiempo neutralizando al virus y confiriendo
proteccin; en los individuos vacunados es el nico marcador presente.
- Ac anti-HBc => Ag HBc pertenece a la cpside y no se detecta serolgicamente, ya que no se
encuentra libre, sino en el virus entero; solo se detecta Anti-HBc; es el 1 Ac que aparece en la
enfermedad, detectable con los primeros sntomas de la enfermedad en la fase aguda y en la
crnica (entre 3-5 semanas despus de Ag Australia y es el 4 marcador en hacerse positiva);
puede significar una infeccin pasada o curada dada la larga persistencia de estos Acs en el suero
(su positividad confirmada en solitario no asegura la proteccin frente a la enfermedad).
-Ag e (HBeAg) => es parte del Ag core; proteolticamente degradado y antignicamente
diferente; es el 2 marcador, detectable en la fase aguda y en algunas formas de enfermedad
crnica en las que histolgicamente se corresponde con hepatitis crnica activa (HCA); su valor
clnico se funda en su excelente correlacin con la presencia de replicacin viral y viremia; la
sangre con HBeAg (+) se debe considerar como infecciosa; su estudio es obligatorio en todos los
sueros de HBsAg (+).
-Ac anti-HBe => es el 5 marcador; su aparicin indica buena evolucin y una baja infectividad
del paciente; en la mayora de los casos es detectable poco antes de que desaparezca HBsAg,
pudiendo encontrarlo (+) durante varios aos despus de la infeccin.
-DNA viral libre (VHB-DNA) => es el 3 marcador; su deteccin en el suero mediante la
hibridacin no es una tcnica de rutina, a pesar de tratarse de un marcador muy sensible tanto
de la presencia del virus como de su actividad replicativa; el VHB-DNA es positivo en un elevado
nmero de pacientes HBeAg (+).

Marcadores serolgicos para el diagnstico de la hepatitis D

1- Antgeno delta (HDcAg) => aparece fugazmente en sangre en la primo infeccin y su utilizad
clnica es muy limitada.
2- Anticuerpos Anti-Delta (Anti-HD IgM) => es el marcador ms importante que aparece
despus de la aparicin del Ag y se mantiene positivo a bajos ttulos a un tiempo limitado si la
evolucin es favorable; persistir su positividad a ttulos altos en casos que evolucionan a la
cronicidad.
3- Anticuerpos Anti-Delta IgG (Anti-HD IgG) => aparecen ms tarda y se mantiene positivo
durante largos periodos de tiempo; su deteccin indica solamente contacto con el virus.
Esquema evolutivo:
-Coinfeccin de VHB y VHD = Ag Australia (+), Anti-HBc IgM (+) y AntiHD IgM (+)
-Sobre infeccin de VHD en paciente con VHB = Ag Australia (+), Anti-HBc IgM (-) y Anti-HD
IgM (+)
4- RNA Viral (HD-RNA) => la positividad por tcnicas de hibridacin o PCR indica presencia
del virus.
Marcadores serolgicos para el diagnstico de la hepatitis C
-Anticuerpos Anti-VHC => se detecta empleando Ags sintticos o recombinantes; pruebas
confirmatorias de Acs Anti-VHC => se detectan por mtodo Western Blot para ver las bandas.
-RNA viral (VHC-ARN) => no se suele hacer porque la epidemia es corta.
Marcadores serolgicos para el diagnstico de la hepatitis E se estn comercializando
pruebas que detectan Ag y Acs especficos (IgG y IgM) mediante tcnica de ELISA.
DIAGNOSTICO DE LA INFECCION
A-Hepatitis Aguda
Marcadores de rutina (los que se suelen pedir al laboratorio):
VHA => anti-VHA IgM
VHB => HBsAg o Ag Australia y HBc IgM
VHC => anti-VHC (totales)
VHD => anti-VHD IgM (en pacientes ADVP)
Criterios generales de interpretacin:
-La presencia de anti-VHA IgM => es diagnostica de infeccin aguda por VHA.
-La presencia de HBsAg y anti-HBc IgM => es diagnostica de infeccin aguda por VHB;
-La presencia simultnea de anti-VHD IgM y anti-HBc IgM asociada a hepatitis aguda => se
considera diagnostica de coinfeccin aguda por ambos VHB y VHD; la presencia de anti-VHD
IgM y HBsAg en ausencia de anti-HBc IgM => indica sobre infeccin por VHD en un portador
crnico de VHB. En cualquier caso, dada la situacin epidemiolgica actual en Espaa, no parece
recomendable la bsqueda rutinaria de la infeccin delta en pacientes ADVP.
-La seroconversin de anti-VHC es un criterio fiable para un diagnstico de infeccin aguda por
VHC (cambio de negativo a positivo); la seroconversin suele retrasarse mas de 3 meses desde el
comienzo de los sntomas, por lo que requiere el estudio de muestras de seguimiento al menos
hasta el 6 mes; no se ha demostrado que la deteccin de anti-HVC IgM sea de utilidad en el
diagnstico de la hepatitis C aguda.

Criterios de interpretacin en pacientes ADVP las tasas de seropositividad para VHB

(anti-HBc total) y VHC (anti-VHC) en individuos ADVP superan el 80%; entre los ADVP
crnicamente infectados por VHB (positivos para HBsAg), la seropositividad para VHD (antiVHD total) se aproxima a dicho porcentaje; es frecuente que los ADVP se hallen crnicamente
infectados por uno o ms de dichos agentes en un episodio de hepatitis aguda, resultando
imposible precisar su etiologa.

B-Hepatitis Crnica
Marcadores de rutina:
VHB => HBsAg y anti-HBc total (IgM + IgG)
VHD => anti-VHD total (en pacientes ADVP positivos para HBsAg)
VHC => anti-VHC
Criterios de interpretacin:
-La presencia de HBsAg y anti-HBc total asociada a hepatitis crnica => es diagnostica de
hepatitis B crnica; la presencia adicional de anti-VHD total => indica una sobre infeccin
crnica por ambos VHB y VHD.
-La presencia de anti-VHC asociada a hepatitis crnica => es altamente indicativa de hepatitis C
crnica, aunque no es un diagnostico seguro; la deteccin de ARN viral en suero mediante PCR
ayuda a establecer el diagnostico, pero un resultado negativo aislado no lo descarta, ya que la
viremia es intermitente en muchos casos; dado el alto costo de mtodos de confirmacin de antiVHC, se considera que una re comprobacin del resultado positivo mediante un segundo mtodo
de cribado (mtodo screening con tcnica de ELISA) que utilice Ags obtenidos por tecnologa
diferente, es suficiente para establecer la presencia de anti-VHC en pacientes con hepatitis
crnica.
VIH o SIDA
Descubrimiento del virus se sospech desde 1981 en 5 casos de neumona
porPneumocystis carinii en varones homosexuales previamente sanos y va aumentando el
nmero de casos y se fue asociando esta inmunodeficiencia adquirida al sarcoma de Kaposi; en
junio de 1982 se contabilizaron 439 casos y en EEUU se emite un informe para definir los casos
de SIDA; en febrero del mismo ao Montagnier expone la hiptesis de un retrovirus linfotropico
pudiera ser el agente causante del sndrome; en Mayo de 1983 se aislo por primera vez el virus
por Montagnier en Francia a partir de un ganglio linftico de un paciente con linfadenopatia
persistente (LAV) y Gallo en EEUU de un enfermo de SIDA (HTLV-III).

El virus es un virus ARN de la familia Retroviridae, subfamilia Lentiviridae (=incubacin

lenta >10 aos) con tipos 1 y 2; esta familia de virus se caracteriza por sintetizar ADN a partir de
ARN viral, mediante una retro-transcriptasa; consta de nucleo-cpside y envoltura; es muy
sensible a los agentes qumicos y calor; sus principales genes son:
a) Estructurales:
-Gen GAG (Core) => protenas 24
-ENV (Envoltura) => glicoprotenas 41, 120 y 160
-POL (Polimerasa) => es importante
b) Reguladores => genes que regulan la replicacin viral y el papel de todos ellos no est
completamente dilucidado

Patogenia en la infeccin aguda, el virus se une principalmente a receptores CD4 gracias a

gp41 y gp120; por lo tanto, sus clulas diana fundamentalmente son los linfocitos T4 (aunque
tambin se unir a los linfocitos B que tiene CD4, a los macrfagos, a las clulas cerebral, y a los
precursores de hemates); este episodio se manifiesta como un cuadro pseudogripal; es
importante saber que la respuesta inmunitaria en forma de Acs frente al virus se puede demorar
6-8 semanas (periodo de ventana +/- 3 semanas); a continuacin el ARN se copia a ADN por
accin de la transcriptasa inversa, se pone en circulacin y se integra en el ADN de la clula
(periodo de latencia); latencia o crecimiento es clave de la patogenia de la enfermedad;
normalmente la fase de latencia se prolonga durante periodos largos de tiempo (2-8 aos incluso
ms), pero en un momento dado puede progresar la enfermedad con un progresivo deterioro de
la inmunidad hasta desarrollar el SIDA; el ciclo biolgico se resumen=>
Entrada de virus transcripcin de ARN al ADN integracin en la genoma de T4 formacin
de nuevos viriones tras periodo de latencia (al salir, el virin tomara en su salida parte de la
membrana celular para utilizarla como su envuelta, esto hace que se destruye los T4, se paraliza
el sistema inmunolgica y acaba provocando el SIDA.

Epidemiologia las vas de transmisin del virus => por sangre, sexual y vertical-perinatal; en
Espaa la tasa de transmisin por sangre es importante (el principal grupo afectado sonlos
UDVP/ ADVP y homosexual), a diferencia de Francia o EEUU, donde los mas afectados son
homosexuales; en cuanto a las tasas de transmisin madre-hijo oscilan 15-50%, cobrando una
especial importancia en frica; la transmisin al personal sanitario o similar es 0,2% y requiere
contacto con mucosas de la sangre o liquido corporal infeccioso (o tambin de lquidos donde se
haya cultivado al virus).
Sintomatologa clnica de SIDA desde que una persona se infecta hasta que se desarrolle
la enfermedad, suele transcurrir 6-10 aos; el estudio de la evolucin de SIDA puede realizarse
por las manifestaciones clnico que van apareciendo o por marcadores bioqumicos (el descenso
de la cifra de linfocitos T4); a partir del 1996 la determinacin de la cantidad de virus circulante
en la sangre de la persona infectada (carga viral) se ha convertido en principal marcador de la
evolucin de la enfermedad.
Fases de la enfermedad
(1) fase de la infeccin aguda => la mayora de los pacientes experimentan al cabo de unas 3
semanas de haber infectado con el virus una serie de sntomas pseudogripales como fiebre,
cefalea, eritema, adenopatas y sensacin de mal estar, desaparecen despus de 1-2 semanas;
durante esta fase, el VIH se multiplica a gran velocidad; en un primer momento se produce un
descenso de la cifra de linfocitos (total), pero dentro de poco alcanzan las cifras normales en
respuesta de una activacin del sistema inmunolgico; los individuos son altamente contagiosos
durante esta fase;
(2) fase asintomtica que puede durar 10 aos o incluso mas; durante este periodo, el virus
continua replicndose, causando destruccin progresiva del sistema inmune; durante esta fase,
el recuento de los linfocitos es normal;
(3) fase sintomtica precoz, se suele iniciar el desarrollo del sntoma clnico caracterstica de la
enfermedad; apareciendo infecciones oportunistas de carcter leve p.ej. de tipo viral =>CMV,
Herpes zoster, de tipo bacterianas => Mycobacterium, Legionella, infestacin de parsitos
=> Pneumocystis carinii, Cryptosporidium, algunos hongos => Aspergillus yCndida;
(4) fase avanzada en la que aparecen infecciones y tumores, definitorios del SIDA (sarcoma de
Kaposi) que adems, puede complicarse con un cuadro neurolgico (demencia del
SIDA)con alteraciones motoras y del rea cognitiva, debido a la accin directa del virus sobre
SNC;la supervivencia media de los pacientes con la SIDA ya desarrollado suelen ser 18-125
semanas, dependiendo del tipo de infeccin que tenga; en ningn caso habr supervivencia
cuando estn en esta fase.

Diagnstico de laboratorio de la infeccin por VIH en Espaa fundamentalmente

serolgico, por la importancia y las implicaciones que conlleva; se realiza mediante tcnicas de
ELISA en primera instancia (tcnica de cribado), aplicando a los positivos, mtodos de
confirmacin => Western Blot (WB), inmunofluorescencia (IFI) o radioinmuno-precipitacion
(RIPA).
**) El Western Blot es ms utilizado y permite diferenciar los Acs frente a las distintas protenas
del virus; tiene distintos criterios para la interpretacin de los resultados (OMS, CDC, Cruz
Roja) y los resultados se clasifiquen en:
-Positivos => lo ms aceptado es que haya bandas de envoltura (g41, gp120 y gp160) y
adems bandas del core (p24, p31 y p66) o de la polimerasa o de ambos.
-Indeterminados => se detecta la presencia de alguna banda frente a alguna protena del virus
(solo algunas protenas del core en pacientes con lupus y factor reumatoide).
-Negativo => ausencia de banda o que no se corresponde a ninguna del virus (a estas personas se
hace un seguimiento durante 6 meses, para descartar que no sean falsos negativos).
La tcnica de WB consiste bsicamente en la incubacin de unas tiras de nitrocelulosa en los que
sean transferido las protenas de los virus, bsicamente las estructuras con el suero del problema
durante un tiempo que oscila 2-4 horas hasta los 18 horas; tras cual se revela la presencia de Acs
frente a diferente protenas del virus mediante diferentes tcnicas inmunoenzimticas dependiendo del fabricante; el resultado ser la aparicin de bandas coloreadas de
mayor o menor intensidad en el lugar de la tira donde estn situadas las protenas de VIH contra
las cuales existen Acs en el suero del problema; la lectura puede hacerse de manera manual,
comparando las bandas con un control (+) o de manera automatizada por densitometra;
recordar en valores absolutos, la cifra de CD4 900-1500 linfocitos/m3 de sangre (en valores
relativos 35-45%); las de CD8 600-900 linfocitos/m3 de sangre; cuando la cifra de CD4
disminuye por debajo de las 200-400 linfocitos/m3 de sangre, ser indicativo de SIDA.

*) Los mtodos de cribado (ELISA) son ms sensibles y ms especficos, siendo lo ms novedoso

los de 3 generacin con capacidad de detectar IgG e IgM, acortando el periodo de ventana.
*) Tambin existen mtodos rpidos, aplicables en situacin de urgencia como la aglutinacin
con partculas de ltex o los que utilicen Ags fijados a soportes solidos o membranas (se
llamaDot-Blot).
*) Las tcnicas de centros especializados => cultivo y PCR; la PCR es una tcnica con mucho
futuro que presenta una enorme sensibilidad y especificidad, pero no estn al alcance de la
mayor parte de los laboratorios; una importancia aplicacin de estas tcnicas es el diagnostico de
hijos y madres portadoras del VIH.
*) Marcadores de monitorizacin o seguimiento de la enfermedad (deteccin del Ag p24); en
fases tardas, se puede observar el declinar de los Acs anti p24 que se pueden utilizar con el
mismo fin.
*) De todos modos, el que ms se utiliza para un diagnstico de SIDA es el recuento celular de los
linfocitos CD4 o T4 (o el cociente respecto a los T8).
MTODOS DIAGNSTICOS EN VIROLOGA CLNICA
Objetivo de laboratorio - proporcionar el diagnstico etiolgico y orientar correctamente el
tratamiento en el menor tiempo posible; de manera simultanea se intenta practicar 2 tipos de
diagnostico =>
- D directo (visualizar o aislar el germen mediante el cultivo e identificarlo =>
en virologa clnica no es posible, por las caractersticas fsicas y biolgicas del virus, porque se ha
de hacer mediante la deteccin de sus componentes, p.ej. Ags o cidos nucleicos).
- D indirecto (la identificacin de los componentes de la respuesta inmune especifica/ Acs
generados).
Metodos de diagnostico directos:
a) Examen directo de la muestra (macroscpica /a simple vista) => aspecto purulenta (en
una infeccin viral nunca hay pus), presencia de sangre, moco, etc.
b) Microscpia => con la Microscpia ptica solo se puede identificar los cambios celulares
(efecto citoptico) sufrido por las celulas infectadas y con la Microscpia electrnica se puede
visualizar el virus (en laboratorios de experimentacin).

c) Cultivo => los virus se multiplican exclusivamente en el interior de las celulas vivas, por ello
debemos preparar previamente un soporte celular que permita su crecimiento in vitromediante
siguientes tcnicas:
- cultivo de rganos => las secciones de algunos rganos pueden ser viables varias semanas y nos
permiten cuidadosamente aislar por ej. virus sincitial respiratorio (VRS) mediante secciones
de tejido respiratorio.
- cultivo de tejidos => fragmentos de tejidos en suspensin (cultivar adenovirus en un tejido
adenoideo)
- cultivos celulares => celulas aisladas obtenidas por disociacin mecnica y con
enzimas proteolticas a partir de tejidos; las celulas disociadas y separadas se colocan en un
frasco de cristal o de plstico; las celulas se adhieren a las paredes del frasco y se cubren con
medios nutritivos para mantenerlas viables; en condiciones optimas, las celulas se multiplican
hasta que cubran la pared formando una capa continua de crecimiento sobre las que
se podrn replicar los virus del problema; tipos de cultivos celulares:
*) cultivos primarios => es el primer pase in vitro, tomados directamente de un organismo
vivo; las celulas se siembran en un frasco con medio de crecimiento, conservan el numero de
cromosomas, tienen un periodo de vida corto y permiten el crecimiento de gran variedad de virus
(p.ej. celulas del rion de conejo y mono, embrin de pollo).
*) lineas diploides => son celulas de un solo tipo (somticas) que se pueden cultivar durante
un tiempo limitado, conservan el numero de cromosomas (46) y con ventaja de quese mantiene
durante mas tiempo que cultivo primario.
*) lineas celulares continuas => se cultivan in vitro indefinidamente y tiene un cariotipo
heteroploide (numero menor que las celulas somticas); se originan de tejido maligno o
por mutacin de una clula diploide; el cultivo se multiplican de forma indefinida y suelen
presentar aberraciones en el numero de cromosomas; estas celulas se pueden mantener a -70C
o -90C indefinidamente (p.ej. lineas celulares Hep-2 y Vero).
*) Shell-vial => es una tcnica de cultivo celular que se ha desarrollado en los ltimos aos y
que permite obtener el crecimiento de numerosos virus y ciertas bacterias en un corto periodo de
tiempo (24-48 horas); sobre un vial se coloca una mono capa de celulas con 1ml de medio de
crecimiento, y sobre ello se coloca 0,2 ml de la muestra problema; el mtodo se basa en
la centrifugacin (suave) de la muestra sobre la mono capa, y tras un corto periodo
de incubacin se pone de manifiesto la expresin de los Ags virales en la mono capa
mediante tincin inmunolgica; la ventaja => la rapidez de obtencin de resultados en 24-48
horas, detectamos los Ags a las pocas horas de iniciarse la infeccin; tiene una sensibilidad
superior al cultivo celular, porque inoculamos el mismo volumen de muestra en un rea mas
pequea y mas fcil la observacin al microscopio de fluorescencia.
Identificacin del crecimiento en el cultivo celular - las mas frecuentes y disponibles en
el laboratorio:
1). Efecto citoptico - los virus al multiplicarse provocan cambios en la clula donde se replican
que se manifiesta por una modificacin en la morfologa celular que se pueden observar (p.ej.
inclusiones dentro de las celulas, hinchazn del citoplasma, formacin de celulas gigantes multinucleadas) en la clula sin teir o teidas (se ve mas detalladas); cada virus presenta un tipo de
efecto citoptico caracterstico que puede ser identificado en menos de 1 semana
(p.ej. enterovirus, herpesvirus, adenovirus o poxvirus tienen como

efecto citoptico la destruccin o lisis celular en 24-48 horas; la fusin celular/ formacin de
sincition son caracterstico de herpes virus, CMV, virus herpes zster, etc.)
2). Formacin de cuerpos de inclusin - son cambios histolgicos que se producen en las celulas
por los componentes virales o por variaciones en las estructuras celulares; pueden localizarse en
el ncleo, en el citoplasma o en ambos y se clasifican segn su tincin en eosinfilos o basfilos;
cada virus produce unos cuerpos de inclusiones caractersticos.
3). Hem-adsorcin - es la capacidad que adquieren las celulas infectadas por un virus para
adherir a su superficie los hemates de diversas especies (p.ej.aves, carnero).
4). Hem-aglutinacin - la capacidad que adquieren las celulas infectadas por el virus de aglutinar
diversos tipos de hemates, por la formacin en su membrana de este tipo de protenas, las
hemaglutininas.
5). Deteccin mediante metodos inmuno-enzimticos o por inmunofluorescencia, de los Ags
virales mediante Acs especficos para los cuerpos de inclusin celular.
Las muestras para el aislamiento de virus se deben recoger lo antes posible, no despus de los 3-7
primeros das del inicio de la enfermedad; se pueden conservar a 4C durante 24 horas y si no, se
deben congelar a -70C porque muchos virus son lbiles a -20C; las muestras que se utilizan
con mayor frecuencia son secreciones nasales, frotis farngeo, exudado
conjuntival, lquidos vesiculares, raspados de piel, heces, orina, LCR, etc.
d) Deteccin de los componentes estructurales virales - las tcnicas mas usadas que
permiten detectar Ags en suero y lquidos orgnicos (cuando existe una alta concentracin viral,
sera fcil detectarlos) son:
- Aglutinacin en ltex => a las moleculas de ltex se les une varias molculas de Acs conocidos y
cuando se pone en contacto con una solucin que contiene el Ag (la muestra problema) se origina
una aglutinacin que puede visualizarse; es una tcnica sencilla, sensible, re-producible y
barata. Su sensibilidad depender de la pureza del Ac utilizado.
- Contra-inmunoelectroforesis => esta basada en el principio de que los Ags virales (o
bacterianos en su caso) suelen tener carga (-) y los Acs (+), en medio alcalino; con este
fundamento se colocan las soluciones de Acs conocidos y del Ag problema en unas cavidades
realizadas en un gel de agarosa de tal manera que puedan difundir libremente; se colocan unas
mechas en los extremos de la capa de agarosa, que conectan con unas cubetas que contienen un
buffer con una composicion diferente dependiendo del sistema Ag-Ac; cuando se aplica una
corriente elctrica, las molculas de Ags con carga (-) migran hacia el nodo que esta en el
extremo opuesto de la placa; los Acs son arrastrados por el buffer levemente alcalino y, en el
punto en que ambas lineas se encuentran, se forma una banda de precipitacin visible; es
una tcnica de alta sensibilidad pero laboriosa, que precisa una alta concentracin de Ag y Ac.
- Enzimoinmunoensayo => se basa en la deteccin de Ags mediante el empleo de un Ac unido a
una enzima, que mantiene la capacidad de canalizar la reaccin Ag-Ac; el enzima utilizado puede
ser peoxidasa de rabano, Beta-galactosidasa o fosfatasa alcalina; la presencia del inmunocomplejo es detectada por una reaccin coloreada que se produce al aadir el sustrato; el
empleo de enzimas tiene una serie de ventajas:
*) el enzima se une al Ac pero deja libre los lugares de unin al Ag

*) el enzima no se modifica con la reaccin Ag-Ac y queda unido al inmuno-complejo junto con el
sustrato amplificando la reaccin y aumentando la posibilidad de deteccin
*) los conjugados con enzimas son muy estables
*) la lectura de la reaccin se realiza en un espectrofotmetro y la cantidad de sustrato liberado
es directamente proporcional a la cantidad de Ag fijado en la reaccin
*) la lectura tambin puede hacerse cualitativamente de forma manual, "de visu".
La reaccin tiene lugar en 2 fases => en la 1- en unos pocillos sobre los que se ha fijado un Ac
especifico; al agregarle la muestra que puede contener los Ags, se unen formando el complejo AgAc; posteriormente se hace un lavado para eliminar el resto de Ags no unidos a los Acs de la
placa y otras partculas que pudieran interferir, en la 2- se agrega un Ac marcado con un
enzima que se une a los sitios de unin del Ag y al aadirse un sustrato, da lugar a
una reaccin coloreada, que procederemos a medir en un espectrofotmetro; es una tcnica que
necesita varias horas para su realizacin.
- Radioinmunoanalisis => tiene el mismo fundamento que el ELISA, pero en vez de unir un
enzima al Ac, se le une un radioistopo, y lo que se mide en ultima instancia es
la radiactividad que estar en proporcin directa a la cantidad de Ag que haba en la muestra
problema; es una tcnica con la misma sensibilidad que el ELISA, pero es mas costosa y se
necesita trabajar con material radioactivo, lo que plantea problemas en cuanto al personal y las
instalaciones; esta tcnica se utilizo por primera vez para detectar el Ag de superficie del virus de
la hepatitis B.
- Inmunofluorescencia directa (IFD) => el Ag unido a una fase solida, en este caso un
portaobjetos, se pone en contacto con el Ac marcado con una sustancia fluorescente (p.ej.
isocianato de fluoresceina, rodamina, europio, etc.); tras un periodo de incubacin, se lava para
eliminar el exceso de Acs y se observa al microscopio de luz ultravioleta; esta tcnica nos permite
demostrar no solo la reaccin Ag-Ac, sino tambin la localizacin exacta donde se produce
(superficie celular, citoplasma, ncleo...).