08/09/2011

BIOQUMICA
ENZIMAS

Prof. Dra. Ana Carolina S. Siquieroli

Instituto de Gentica e Bioqumica

BIOQUMICA I - MEDICINA

Contedo de Enzimas:

Conceito de catalisadores biolgicos, substrato, stio

ativo, co-fatores, coenzimas, vitaminas
Cintica enzimtica: Equao de Michaelis-Menten,
conceito de Km, Vm, Kcat, Kcat/Km
Tipos de catlise enzimtica
Inibidores enzimticos
Regulao enzimtica

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Enzimas - Catalisadores Biolgicos

Enzimas so um grupo de
substncias
orgnicas
de
natureza normalmente protica
* com atividade intra ou
extracelular e que tm funes
catalisadoras,
catalisando
reaes qumicas que, sem a
sua
presena,
dificilmente
aconteceriam.

* RNAs tambm podem atuar como enzimas,

chamadas ribozimas

Enzimas - Catalisadores Biolgicos

Catalisador toda e qualquer substncia que

acelera uma reao, diminuindo a energia de
ativao, diminuindo a energia do complexo ativado,
sem ser consumido, durante o processo.
Um catalisador normalmente promove um caminho
(mecanismo) molecular diferente para a reao.
Energia

CO2 + H20

enzimas

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Enzimas - Catalisadores Biolgicos

As enzimas promovem o abaixamento da energia de

ativao necessria para que se d uma reao
qumica, resultando no aumento da velocidade da
reao e possibilitando o metabolismo dos seres
vivos.

A capacidade cataltica das enzimas torna-as

adequadas para aplicaes industriais, como na
indstria farmacutica ou na alimentar.

ENZIMAS

Apresentam uma eficincia cataltica extraordinria:

Tem um alto grau de especificidade por seu substrato

Aceleram as reaes qumicas de maneira formidvel

Funcionam em solues aquosas, sob condies muito

suaves de temperatura e ph.

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ENZIMAS

So fundamentais para qualquer processo biolgico

Agindo em sequncias organizadas elas:

catalizam centenas de reaes sucessivas

pelas quais as molculas nutrientes so degradadas,
a energia qumica conservada e transformada
as macromolculas biolgicas so sintetizadas a partir
de molculas precussoras livres.
No so consumidas durante a reao

E+P

E+S

ENZIMAS

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ENZIMAS

Importncia prtica:

Em algumas doenas ocorre uma deficincia ou mesmo

ausncia total de uma ou mais enzimas
Ou at mesmo pode ocorrer excessiva atividade de uma
enzima

Quantificao da atividade de algumas enzimas no

plasma sanguneo, eritrcitos ou amostras de tecido
so importantes no diagnstico de vrias doenas.

Muitas drogas exercem seu efeito biolgico por meio

de interaes com as enzimas.

ENZIMAS

Fenilcetonria: doena causada pela incapacidade

do organismo em produzir a enzima fenilananina-4monoxigenase, que converte o aminocido
fenilalanina em tirosina.

Como resultado da falta da enzima, ocorre o acmulo da

fenilalanina, que pode causar danos ao sistema nervoso.

Esse um dos motivos pelos quais os fenilcetonricos

devem ingerir quantidades mnimas do aminocido
fenilananina

A doena pode ser detectada ainda cedo com a

realizao do teste do pezinho.

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ENZIMAS - Histrico

As enzimas foram descobertas no sculo XIX, por Pasteur, que

concluiu que a fermentao do acar em lcool pela levedura
catalisada por fermentos. Ele postulou que esses fermentos eram
inseparveis da estrutura das clulas vivas do levedo.

Em 1878, Wilhelm Khne empregou pela primeira vez o termo

"enzima" para descrever este fermento,

Em 1897, Eduard Buchner descobriu que os extratos de levedo

podiam fermentar o acar at lcool e provou que as enzimas
envolvidas na fermentao continuavam funcionando mesmo
quando removidas das clulas vivas. Esta descoberta valeu-lhe o
premio Nobel de Qumica em 1907.

ENZIMAS - Histrico

Restava determinar qual a natureza das enzimas. Em 1926, James

B. Sumner purificou e cristalizou a urease, mostrando tratar-se de
uma protena pura, e fez o mesmo, em 1937, para a catalase.

A prova final foi feita por Northrop e Stanley em 1930, com o

estudo de trs enzimas digestivas, a pepsina, a tripsina e a
quimotripsina, pelo que receberam o Prmio Nobel da Qumica em
1946.

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ENZIMAS - Estrutura

As enzimas so protenas, e podem ter tamanhos

variados
A atividade das enzimas so determinadas pela sua
estrutura quaternria.

ENZIMAS Modelo Chave-fechadura

As enzimas exibem uma elevada especificidade

Emil Fischer (1894): alto grau de especificidade das

enzimas originou o modelo Chave-Fechadura, que
considera que a enzima possui sitio ativo
complementar ao substrato.

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ENZIMAS Modelo de Encaixe Induzido

Em 1958, Daniel Koshland sugeriu uma modificao

ao modelo de chave-fechadura:

uma vez que as enzimas exibem estruturas flexveis, elas

podem alterar a sua forma de maneira continuada
atravs de interaes com o substrato, enquanto esse
mesmo substrato vai interagindo com a enzima.

ENZIMAS - Estrutura

A maioria das enzimas so maiores do que o

substrato sobre o qual atuam, e s uma pequena
poro da enzima (cerca de 3-4 aminocidos) est
envolvida na catlise.

A regio que contm estes resduos catalticos, que

se liga-se ao substrato e que desempenha a reao,
denominada de stio ativo.

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ENZIMAS - Estrutura

stio ativos, ou stios catalticos:

consistem basicamente em encaixes, onde se ligaro

sustncias especficas chamadas substratos que so os
reagentes em uma reao biolgica.

Note que o stio ativo das enzimas geralmente

especfico para somente um tipo de substrato, ligase somente a ele, e no a vrias outras molculas
distintas

stio ativo

Ligao de um substrato ao stio ativo de uma enzima, devido complementaridade entre ambos. STRYER, et al., 2002.

ENZIMAS - Estrutura

As enzimas tambm podem ter stios onde se ligam cofatores, que so necessrios s reaes catalticas.

Vrias enzimas consistem apenas da cadeia

polipeptdica, todavia, outras requerem a ligao desses
co-fatores para que possam funcionar (tornarem-se
ativas) exercendo seu papel de catalisadoras biolgicas.

O co-fator ento a poro no protica da enzima. Nos

casos em que h a necessidade de co-fatores, a parte
protica da enzima, inativa, chamada apoenzima, e ao
conjunto apoenzima mais o co-fator, sendo este conjunto
ativo, d-se o nome holoenzima.

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ENZIMAS
Estrutura
Enzimtica

Holoenzima

Protena

Apoenzima ou
Apoprotena

Co-fator

Pode ser:
on inorgnico
molcula orgnica

Coenzima

ENZIMAS

De forma geral, os co-fatores mais comum so:

ons metlicos, como:

o Cu+2, Mg+2, Zn+2, Fe+2, Fe+3
Vitaminas.
Neste caso, quando o co-fator outra molcula orgnica,
d-se a ele o nome de coenzima.

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ENZIMAS

As coenzimas so pequenas molculas que transportam grupos

qumicos de uma enzima para outra.

Alguns destes compostos qumicos, como a riboflavina, a tiamina e o

cido flico, so vitaminas, compostos que no so sintetizados no
organismo e que tm de ser assimilados atravs da dieta.

Os grupos qumicos transportados incluem o on hidreto (H-)

transportado pelo NAD ou NADP+, o grupo acetil transportado pela
coenzima A, os grupos metil transportados pelo cido flico

As coenzimas sofrem regenerao e as suas concentraes so

mantidas a um nvel estvel dentro da clula.

Por exemplo, o NADPH regenerado atravs da via das pentoses-fosfato

ENZIMAS

Algumas enzimas tambm podem ter stios de

ligaes para pequenas molculas, que so
produtos ou substratos, diretos ou indiretos, da
reao catalisada.

Estas ligaes servem para aumentar ou diminuir a

atividade da enzima, providenciando um meio de
regulao por feedback.

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ENZIMAS

A atividade enzimtica influenciada por:

pH;

temperatura;

concentrao das enzimas;

concentrao dos substratos;

presena de inibidores.

ENZIMAS

Temperatura: o aumento da temperatura pode elevar

a velocidade da reao catalisada at certo ponto,
chamado de temperatura tima para a ao da
enzima

Isso se deve ao fato de que aumenta o grau de agitao

das molculas, e com isso, o nmero de colises
eficazes entre elas, resultando em reaes qumicas.

A partir desse ponto, o aumento da temperatura

comea a desnaturar a enzima, sendo que a perda
da estrutura tridimensional faz com que ela perca
sua capacidade cataltica.

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ENZIMAS

ENZIMAS

pH: meios muito cidos ou muito alcalinos tambm

podem afetar a atividade enzimtica ao desnatur-la.

De forma geral, as enzimas atuam em faixas de pH, o

chamado pH timo, de acordo com a localizao celular
ou o rgo.

Fora da faixa de pH timo, a atividade da enzima decai

drasticamente.

Por exemplo, enzimas como a pepsina, presente no suco

gstrico, atuam em meios cidos, ao passo que as enzimas
dos sucos pancretico e entrico atuam em meios alcalinos.

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ENZIMAS

ENZIMAS

Concentrao dos substratos:

vo

[S]

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Estudo dirigido

1.Diferencie catalisadores qumicos e biolgicos. Discutir as vantagens da presena

de enzimas nos seres vivos.

2. Defina stio ativo (ou centro ativo) de uma enzima.

3. Qual o significado do termo saturao da enzima e qual a sua relao com a

velocidade mxima?

4. O que so holoenzimas, apoenzimas, cofatores e coenzimas? Qual a relao entre

as vitaminas e as coenzimas?

5. Definir faixa de pH timo para a enzima.

6. Faa uma distino entre os modelos chave-fechadura e ajuste-induzido para a

ligao do substrato a uma enzima.

CINTICA ENZIMTICA

A cintica enzimtica analiza a velocidade da reao

e suas alteraes

A concentrao do substrato afeta a velocidade das

reaes catalisadas por enzimas?

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CINTICA ENZIMTICA

Efeito em Vo provocado pela

variao da concentrao do
substrato [S] quando a
concentrao da enzima
mantida constante

Em altas concentraes de S,
Vo aumenta cada vez menos
em resposta aos aumentos da
[S].

Finalmente atinge-se um
patamar que a Velocidade
mxima (Vmx)

Vmx

velocidade inicial Vo

Vmx

Km

[S]

CINTICA ENZIMTICA

A combinao de uma enzima com o seu substrato

para formar o complexo ES um passo obrigatrio
na catlise enzimtica:

E+S

K1

ES
K-1

Em uma segunda etapa lenta, o complexo ES se

quebra liberando a enzima livre e o produto da
reao:
K2

ES

E+P

K-2

Como esta etapa mais lenta, ela limita a velocidade

da reao, ou seja a velocidade proporcional a [ES]

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CINTICA ENZIMTICA

Em qualquer instante da reao enzimtica existe:

E livre: E

E ligada a S: ES

Em baixas [S] a maior parte da ezima est na forma E

Desta maneira, a velocidade da reao ser proporcional

a [S]

A Vmx ser atingida quando quando praticamente

todas as molculas da enzima estiverem na forma ES

CINTICA ENZIMTICA

Nestas condies a enzima est SATURADA com

seu substrato e a velocidade da reao no
aumenta mais com novos aumentos da [S].

Em seguida, o complexo ES transforma-se no

produto P e a enzima liberada para catalisar a
transformao de outra molcula de substrato.

ES

K2

E+P

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CINTICA ENZIMTICA

A curva que expressa a

relao entre [S] e Vo tem a
forma de uma hiprbole
retangular
Que pode ser expressa
matematicamente pela
equao de Michaelis-Menten

Vmx

velocidade inicial Vo

Derivaram sua equao

partindo da hiptese bsica
de que o passo limitante da
velocidade nas reaes
enzimticas seria a quebra do
complexo ES para formar P +
E livre

Vmx

Km

[S]

CINTICA ENZIMTICA

A equao de Michaelis-Menten:
Vo = Vmx[S]
Km + [S]

Termos importantes:

[S] concentrao do substrato

Vo velocidade inicial
Vmx velocidade mxima
Km constante de Michaelis
K constante de velocidade da reao

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CINTICA ENZIMTICA

Uma importante relao numrica emerge da

equao de Michaelis-Menten no caso especial em
que Vo exatamente a metade de Vmx:
Vmx = Vmx[S]
2
Km + [S]

Dividindo por Vmx:

1
2

[S]
Km + [S]

Km + [S]

= 2 [S]

Km = [S] quando Vo = Vmx

CINTICA ENZIMTICA

Isto representa uma definio prtica e muito til para Km

constante de Michaelis

O Km equivalente concentrao do substrato onde Vo igual

metade de Vmx

velocidade inicial Vo

Vmx

Vmx

Km

[S]

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CINTICA ENZIMTICA

Kcat tambm chamada de nmero de renovao e

equivalente ao nmero de molculas do substrato
convertidas em produto por uma nica molcula da
enzima, em uma dada unidade de tempo, quando a
enzima est saturada pelo substrato.

CINTICA ENZIMTICA

Os parmetros Kcat e Km, em conjunto permitem avaliar a eficincia

cataltica das enzimas

Deve-se analisar a relao Kcat/Km para as duas reaes , tambm

denominada constante especfica
Vo = Kcat [Et] [S]
Km

Relao Kcat/Km fornece uma boa noo quanto eficincia

cataltica da enzima, uma vez que relaciona a rapidez da enzima
com sua afinidade pelo substrato.

Em termos prticos, quanto maior o valor da relao Kcat/Km maior

ser a eficincia cataltica.

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TIPOS DE CATLISE

Catlise cido-base geral:

Catlise covalente:

Refere-se a transferncia de prtons mediadas por outra

classe de molculas

formada uma ligao covalente transitria entre a

enzima e o substrato

Catlise por ons metlicos:

Metais firmemente ligados molcula da enzima

participam na catlise

INIBIDORES ENZIMTICOS

A atividade enzimtica pode ser reduzida por grande

nmero de substncias inibidores

Os inibidores podem ser constituintes normais das

clulas ou substncias estranhas ao organismo

Sua presena provoca alteraes significativas no

metabolismo reguladores importantes

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INIBIDORES ENZIMTICOS

Clnica:

A possibilidade de inibir reaes enzimticas um

campo aberto para aplicaes farmacolgicas

Muitos medicamentos utilizam-se deste princpio

Ex: sulfonamidas no combate a infeces bacterianas

Inibio de uma enzima bacteriana

INIBIDORES ENZIMTICOS

Meio ambiente:

Combate a insetos

Inibidores enzimticos
Acetilcolinesterases inibidores de acetilcolina (SN)

Detritos industriais

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INIBIDORES ENZIMTICOS
Inibidores Enzimticos

Irreversveis

Reversveis

Competitivos

No-competitivos

INIBIDORES ENZIMTICOS
Irreversveis

Reagem quimicamente com as enzimas, levando a

uma inativao praticamente definitiva

Txico para os organismos:

Devido sua irreversibilidade da sua ligao s enzimas

Devido sua inespecificidade

Ligam-se aos aminocido serina ou cistena, frequentes na

estrutura de quase todas as protenas portanto capaz de
inativar qualquer enzima

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INIBIDORES ENZIMTICOS

Clnica:

Inibidores irreversveis com propriedades

teraputicas:

Aspirina (cido acetil-saliclico) antiinflamatrio,

antipirtico e analgsico

Inibe uma enzima da via de sntese da prostaglandinas e

consequentemente ocorre uma atenuao de reaes
inflamatrias

INIBIDORES ENZIMTICOS
Reversveis
Competitivos

Competem com o substrato pelo mesmo centro

ativo da enzima

Certas molculas por apresentarem configurao

espacial semelhante do substrato, so capazes de
ligarem-se ao centro ativo da enzima

E formarem um complexo enzima-inibidor, semelhante ao

complexo enzima-substrato (ES)

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INIBIDORES ENZIMTICOS

E + Ic

EIc

Quando uma molcula de enzima liberada, ir se associar a

novas molculas de inibidores ou de substrato

com uma probabilidade que depender de suas

concentraes relativas

e das afinidades relativas entre a enzima e o substrato e a

enzima e o inibidor

Inibidores competitivos: muda o Km, mas no interfere na

Vmax.

INIBIDORES ENZIMTICOS

Clnica:

Os inibidores competitivos tem largo emprego

teraputico:

AZT inibidor de DNA polimerase (transcriptase reversa)

necessria para a replicao do vrus HIV

Quimioterapia de tumores

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INIBIDORES ENZIMTICOS
Reversveis
No-competitivos

No possuem qualquer semelhana estrutural com o

substrato da reao que inibem

Seu efeito provocado pela ligao radicais que no

pertencem ao centro cataltico da enzima

Esta ligao altera a estrutura enzimtica a tal ponto que

invibializa a catlise

Se ligam a cadeia lateral de um aminocido de forma

bastante inespecfica

INIBIDORES ENZIMTICOS

So exemplos de inibidores no competitivo:

Metais pesados como Hg2+, Pb2+ e Ag+ que reagem

com o grupo SH das protenas

Como so pouco especficos, a ingesto direta ou

indireta (alimentao) extremamente txica

Inibidores no-competitivos: muda o Vmax, mas no

interfere no Km.

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REGULAO ENZIMTICA

Mecanismos:

1. Controle da disponibilidade de enzimas

Exercido sobre as velocidades de sntese e degradao das

enzimas, que determinam sua concentrao celular

2. Controle da atividade da enzima

Efetuado por mudanas estruturais da molcula enzimtica,

provocada pela ligao de compostos ou grupos cadeia
polipeptdica e que modificam a velocidade de catlise

Regulao alostrica ligao no covalente

Modificao covalente ligao covalente

REGULAO ENZIMTICA

O alvo da regulao alostrica e covalente so

certas enzimas-chave

Presentes nas vias metablicas enzimas

reguladoras:

Determinam a velocidade de toda a sequncia de

reaes da qual participa
Pois catalisa a reao mais lenta ou a reao limitante da
velocidade
Em muitos sistemas multienzimticos, a primeira enzima
da sequncia uma enzima reguladora

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REGULAO ENZIMTICA

Existem duas classes de enzimas reguladoras:

As enzimas alostricas:

Funcionam por meio da ligao no-covalente reversveis de

compostos reguladores chamados reguladores alostricos
Geralmente so pequenos metablicos ou co-fatores

As enzimas reguladas por uma modificao covalente

reversveis

Ambas as classes apresentam subunidades mltiplas

Stios catalticos e stios reguladores esto em

subunidades separadas

REGULAO ENZIMTICA
Zimognio

Certas enzimas, cujo local de ao extracelular

(plasma, trato digestivo)

So sintetizadas na forma de precussores inativos

zimognios

Para se tornar ativo necessrio que ocorra a

hidlise de determinadas ligaes peptdicas

Adquirem outra conformao - ativos

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REGULAO ENZIMTICA

Pepsinognio origina a pepsina na cavidade

gstrica pela remoo de 42 aa, sob a ao de ons
H+

Tripsinognio e quimotripsinognio, de origem

pancretica so transformados em tripsina e
quimotripsina no intestino delgado

1. Numa reao enzimtica, todo o stio ativo est saturado com molculas de
substrato em concentrao 10 mM. O que acontece com a velocidade da reao
quando a concentrao de substrato for 30 mM?

2. Escrever a equao de Michaelis-Menten e substituir V0 por Vmax e definir o Km.

3. A hexoquinase uma enzima que catalisa a reao de fosforilao da glicose e da

frutose no carbono 6, com valores de Km de 0,05 mM e 1,5 mM, respectivamente.
Qual o substrato que a hexoquinase apresenta maior afinidade?

4. Uma enzima foi testada frente a 3 diferentes substratos (A, B e C). Com base nos
parmetros cinticos encontrados (tabela a baixo), qual foi o substrato que a enzima
transformou com maior eficincia?

Estudo dirigido

Substrato
A
B
C

Km (mM)
15
30
25

-1

Kcat (seg )
0,14
0,06
2,80

-1

-1

Kcat/Km (mM seg )

5. Diferencie inibidores competitivos de inibidores no competitivos. Na prtica, como

possvel distingui-los?

6. Explique o mecanismo de controle por ativao de zimognios. Muitas enzimas

pancreticas, como a tripsina e quimotripsina, so secretadas na forma de
tripsinognio e quimotripsinognio. O que aconteceria com o pncreas caso esses
enzimas no fossem secretadas na forma de zimognios?

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