UNAM 1

FACULTAD DE ESTUDIOS
SUPERIORES ZARAGOZA
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA II

TÉCNICAS DE COLECTA Y TINCIÓN DE

PARÁSITOS

EQUIPO: 3
Barrientos Hernández Fernando
García Flores Eduardo
Romero Medina Luz Elena
Que el alumno aprenda a colectar
material parasitario de animales de
experimentación y domésticos.
Que el alumno utilice y practique las
diferentes técnicas de tinción,
utilizadas en parasitología.
Que el alumno aprenda a conocer
las preparaciones, de diversos
parásitos colectados por él.
 MÉTODO
A los animales
solicitados se les sacrifica
en una forma rápida y los
menos dolorosa posible,
se les toma sangre y se
realiza lo siguiente:
 Materia fecal: Frasco limpio de boca ancha
lejos del calor y el frío.
 Muestra de orina: 1ª parte de la micción de
preferencia en tubo de ensayo e hisopo.
 Muestra sanguínea: Punción o extracción en
tubo.

Los embases deben estar completamente

limpios y secos antes de usarse.

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 IMPORTANCIA DE LA
COLECTA .

Radicará en el mantenimiento
del parásito en condiciones
apropiadas, en donde se
asegure la integridad de este,
para el desarrollo de un
diagnóstico apropiado.
 Conservación:

Puede ser física: Temperatura

Puede ser química : Soluciones

químicas
 IMPRONTA
Impregnación que se
produce al ejercer presión
con un portaobjetos sobre
el tejido que va a ser
examinado.

Se fijan y se tiñen como un

frotis sanguíneo.
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 I) SANGRE
a) Técnica
de gota
gruesa
b) Frotis o extensión fina de sangre:

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Fijación:
Los procedimientos químicos son los
más utilizados para matar y fijar
parásitos.

El objetivo de la fijación es detener los

procesos metabólicos.

Los fijadores conservan indefinidamente

la muestra.
 Schaudinn
Glicerol
gelatina PVA

FIJADORES
For- MIF
malina

AFA PAF
 Tinción MIF
 Composición ya
 Útilpara diferentes antes
formas mencionada, se
parasitarias toman 2 o 3 gotas
 Estas se colorean
de MIF más
en verde-amarillo heces, ya antes
o marrón tratadas y se pone
en un porta
objetos limpio.
Formalina

 Fijador de quistes, Formula

protozoarios,huevos,  Formaldehído
helmintos.  Soloucion salina 0.85%
 Se recomienda calentar la Proporcion de uso
formalina a 60 grados C al
 3 partes de formalina por
usarse para huevos de
helmintos (inhibe su una parte de materia fecal
desarrollo infectivo)
 PVA (Alcohol polivinilico)

 Fijador de trofozoitos  PVA

y quistes  Etanol 95%
(combinación  HgCl2
Shaudinn más resina)
 Ácido acetico
glacial
 Glicerina
 Proporción 1:3
(muestra/fijador)
 Tinción:

Las tinciones pueden realizarse en dos

formas:
Progresivas: son aquellas en las que el
material se coloca en colorante diluido,
durante el tiempo necesario para lograr la
tinción hasta la intensidad deseada.
Regresivas: son las tinciones en las que el
material o preparaciones se colocan en
colorante concentrado hasta lograr una
sobre tinción y posteriormente decolorar
hasta lograr la intensidad deseada.
 TIPOS DE TINCION
 SU FORMA DE ACCION

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 Para que los productos tomen el color
de un colorante, ya sea uno a uno o
mezclados adecuadamente a veces es
necesario la acción de un mordente;
generalmente se utiliza una sal
compuesta de aluminio o hierro o bien
un ácido, ya sea antes del colorante, o
adicionado a la solución de tinción.
Para procesos contrastantes es
necesario utilizar más.
Montaje:

Los especimenes ya aclarados , se montan con

bálsamo de Canadá o resina sintética. Para
piezas grandes como proglótidos de cestodos
o trematodos como F. Hepática, se requiere un
medio de montaje espeso, mientras que para
frotes debe estar diluido para posteriormente
hacer una buena observación con objetivos de
inmersión.
Identificación de parásitos de
carácter uni o pluricelular para
la realización de un diagnostico
confirmativo.
 Ectoparásitos
Parásitos
de Ciclo
Endoparásitos Vectores
Importancia biológico
Médica
Hemoparásitos

Enfermedades
MANIPULACIÓN DEL VECTOR

› Mantener la integridad del capturador.

› Mantener vivo e integro al vector hasta la
recolección del parásito.
› El parásito debe ser recién extraído.
› Debe ser representativo a la enfermedad
que produce.
› Representa la magnitud de la enfermedad
en el paciente y en la población.
 Colorante Unicelulares.
Fresco de Extremar
contras precaución
Parásito te Aun patógeno
representati
vo
Fijación
Aseguramiento de la Pluricelulares Aclaración de
eliminación de la tejidos y
patogenicidad
tinción
 Tipos de Cuidados de la Técnicas Parásitos
muestra muestra
• Heparina •Hemoparásitos
• Azida de •Gota gruesa intra/extra
sangre sodio •Gota fina eritrocitarios
• Recién
extraída
ectoparásito vivo •Sacrificado •garrapata
•Fraccionado
•Frasco boca Parásitos
Heces fecales ancha limpio y Varios procesos intestinales
seco ausencia de
orina y rotulado
Cerradas( evitar •Cps Huevos y/o
sólidas desecación) y •Flotación quistes
refrigeradas •concentración nemátodos
2grados C
 37 grados C Observación Trofozoitos y
líquidas recién en fresco quistes
obtenidas
frascos con Varios
tejidos fijador procesos T. solium
•formalina
Frascos
limpios, Observación
•Orina secos, boca en fresco y/o Trichomonas
ancha. Tubo tinción de vaginalis
•exudados con sol’n exudado
salina
isotónica
 Obtención
 Fijación
 Conservador
 Tinción
 Montaje
 Observación
 Identificación
 TINCIONES

Temporales Supravitales
Fijas
•Lugol •Hematoxilina
•Giemsa •Azul de cresilo
Férrica
•Eosina 5% •75% solución
•Tinción indica
 SHAUDIN
 Fijador de quistes, Solución concentrada
trofozoitos, huevos,  HgCl2
larvas  Agua destilada
Solución de trabajo  Etanol
más muestra ( no se
almacena) Solución de trabajo
Proporción 1:3  Solución
(muestra/fijador) concentrada
 Acido acetico glacial
 MIF (Merthiolate-yodo-
formaldehído)
 1) Agua destilada
 Fijador y Tintura de
conservador de merthiolate,
casi todos los formaldehído y
elementos glicerol
parasitarios  2) Lugol
 Porción 14 mL de
1) más 1mL de 2)
más 2g de
muestra
 PAF (Fenol-alcohol-formaldehído)

 Preserva quistes y  Fórmula

trofozoitos, además  Fenol
de huevos y larvas  Solución salina
de helmintos
 Etanol 95%
 Formaldehído
 Proporción 1:5
(muestra /fijador)
AFA (Alcohol-formaldehído-ácido acético)

 Fórmula
 Preservador de
 Etanol 95%
trematodos y
cestodos  Formaldehído
 Agua destilada
 Ácido acético
glacial
 Glicerina-gelatina

 Formulación
 Gelatina
 Preparaciones
permanentes  Agua
de nematodos destilada
 Glicerina
 Fenol
 TINCIONES PARA PROTOZOARIOS
Tinción de negro E de clorazol.
Hematoxilina ferrica Heidenhain
Tinción tricomica
Hematoxilina tungstica de Dobell
Hematoxilina molibdica de Dobell
Tinción de Hematoxilina y eosina
Tinción de Noble
Colorante de Mann
Tinción para Cryptosporidium ssp e isospora spp
Coloración de Giemsa
Técnica de tinción para Trichomonas vaginales
Coloración para parásitos sanguíneos
Tinción Wright
Tinción tricromica (modificada por Cerva), para amibas
de vida libre.
Hematoxilina:
colorante básico para
teñir estructuras
(núcleos celulares).
Existen distintas lacas
alumínicas de
hematoxilina:
Hematoxilina de
Harris: Por su
estabilidad (se
conserva entre 6-12
meses). Es de fácil
manejo.
Coloración regresiva,
se elimina el exceso
de colorante con
alcohol.
 Como agente oxidante se utiliza el
óxido de mercurio.
Tiñe los núcleos de color azulado.
Hematoxilina de Mayer: Es un tipo de
coloración progresiva (no requiere lavado
posterior). Se usa el yodato de sodio
como agente oxidante.
Tiñe los núcleos de azul suave.
Hematoxilina ácida de Erlich.
Hemalumbre de Delafield: Utilizada en
técnicas histoquímicas e inmunológicas.

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 Tinciones para
helmintos
 Coloración para platelmintos.
 Tinción con alumbre carmín.
 Hematoxilina Dalafield.
 Tinción de Reynold.
 Tinción de carmín acético de Semichon.
 Tinción con hemateína de Roudabush.
 2) Busqueda y estudio de
ectoparácitos.
a) Localice o obtenga los parásitos que se
encuentran sobre los animales asignados.
b) Sacrifique los ectoparásitos.
c) Haga observaciones de diferentes
porciones del artrópodo
d) Realice diversas preparaciones, ya sea
para sangre en solución salina, se utiliza
colorantes de contrastes.
3) Obtención de protozoarios
y helmintos.

Los pasos a seguir

son:

 Obtención fijación
 conservación
 Tinción
 Montaje
 Observación
 Identificación
 TRATAMIENTO PARA ANIMALES Y
VÍSCERAS
a) Al animal que se sacrifico se le hace una
incisión a lo largo de toda la línea media
ventral
b) Una vez abierto el animal se busca en la
superficie de los órganos internos y las
membranas serosas la presencia de
quistes.
c) A continuación se va extrayendo órgano
por órgano, estos se colocan en placas
con solución salina.
a) Los órganos huecos se abrirán con tijeras y
los esponjosos se desmenuzaran en busca
de helmintos, el contenido del intestino se
observara al microscopio en busca de
protozoarios y helmintos
b) A los helmintos encontrados se les quitara
el moco y el resto de tejido
c) A los helmintos limpios se les conservara
en AFA y se les fijara posteriormente con
alguna de las técnicas que se sugieren en
anexo de la practica.
 BIBLIOGRAFÍA
Manual de biología medica; Facultad de
Estudios Superiores Zaragoza; QFB
Manual de técnicas para el diagnostico
morfológico de las parasitosis; Paz María
Salazar S. Irene de Haro A.; Ed. Francisco
Méndez Cervantes.