UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA

DE MXICO

LABORATORIO DE BIOQUMICA CELULAR Y DE

LOS TEJIDOS I

Informe:

CURVA ESTNDAR DE PROTENAS

Objetivos


Desarrollar y analizar una curva estndar

Determinar la concentracin de albumina en la clara de huevo por el

mtodo de Lowry.

Introduccin
La curva estndar es una curva de referencia que est construida a partir de
cantidades conocidas de una sustancia (la protena albumina en este caso) que es
analizada para determinar la cantidad de la misma sustancia pero en una muestra
problema (la clara de huevo para esta prctica), apoyada en los mtodos de
espectrofotometra, como la ley de Lambert y Beer para conocer una
concentracin y as como en el mtodo de Lowry para poder hacer que la protena
sea cuantificable.

Resultados
En la grfica 1 se muestra la absorbancia en funcin de la concentracin de la
solucin patrn de la protena albumina obtenida de la tabla 1. Esta grfica se
ajusta a un modelo lineal de la forma y = mx + b quedando as la siguiente
ecuacin: y= 4.2375x + 0.0003 siendo 4.2375 la pendiente y 0.0003 la ordenada al
origen, x el valor de la concentracin y y la absorbancia. Con una R 2 de 0.9998.
En la tabla 2 se muestran los valores de concentracin en funcin de la
absorbancia en las tres muestras de la solucin problema de protenas albumina
en la clara de huevo. Con un promedio de concentracin de 8.088102261g y una
desviacin estndar de 0.09824972244g.

Concentracin (mg)
0
0.01
0.02
0.04
0.08

Absorbanci
a
0
0.04
0.087
0.172
0.338

Tabla 1valores de absorbancia y concentracin en mg de la solucin patrn de albumina

Curva estandar de la albumina

0.4
0.35
f(x) = 4.24x + 0
R = 1

0.3
0.25

concentracin

0.2
0.15
0.1
0.05
0

0.01

0.02

0.03

0.04

0.05

0.06

0.07

0.08

0.09

Absorbancia

Grafica 1 curva estndar de la albumina donde se muestran las absorbancias de la solucin

patrn en funcin de diferentes concentraciones de albumina en los tubos de ensaye

Tubo
Muestra 1 Muestra 2 Muestra 3
Absorbancia
0.174
0.171
0.17
Concentracin
0.0409787 0.040270 0.040034
(mg)
67
2
01
Concentracin
8.1982300 8.056637 8.009439
(g/100mL)
09
168
528
promedio 8.088102261g
desviacion estandar : 0.09824972244g
Tabla 2: se muestran las absorbancias obtenidas en las muestras problemas as como las
concentracin en miligramos al interpolar con la funcin lineal resultante de la grfica 1 adems
de la concentracin en gramos por cada 100mL de clara de huevo

Demostracin de la realizacin de los clculos de concentracin en gramos

de las muestras problema partiendo de la concentracin en mg resultantes
de la interpolacin con la ecuacin de la curva estndar.

Tubo
Soluci
n
proble
ma de
proten
as (mL)
Soluci
n
patrn
de
proten
as (mL)
H2O
destila
da
(mL)
Reactiv
o3
(mL)
Reactiv
o4
(mL)

Blanco
-

1
0.5

2
0.5

3
0.5

4
-

5
-

6
-

7
-

0.1

0.2

0.4

0.8

2.0

1.5

1.5

1.5

1.9

1.8

1.6

1.2

1.0

1.0

1.0

1.0

1.0

1.0

1.0

1.0

0.1

0.1

0.1

0.1

0.1

0.1

0.1

0.1

Tabla 3 : se muestran la composicin en mL de cada tubo de ensaye con diferentes cantidades

de reactivos

Anlisis de Resultados
De acuerdo a la tabla 3, en los tubos 1, 2, 3 se agreg un volumen de 0.5 ml de
solucin problema ya que este volumen se encuentra dentro del rango de los
valores de los valores de concentracin en mg de la protena Albmina en la
curva estndar (0.01 mg a 0.08mg). De acuerdo al siguiente esquema se explica
cmo se determin la concentracin terica de protenas de la solucin patrn y
en la solucin problema.
Se sabe que en promedio en la clara de huevo hay 11g/mL de protena albumina.
Esto es lo mismo que 11000mg/100mL.

La grfica 1 de la curva estndar muestra la relacin lineal de los datos de la

absorbancia en funcin de la concentracin, y se observa que a mayor
concentracin, mayor absorbancia de acuerdo a la ley de Lambert y Beer la cual
dice que la absorbancia es directamente proporcional a la concentracin. Por
regresin lineal de los datos de concentracin y absorbancia, se obtuvo un valor
de R2 de 0.9998 lo que dice que estos datos se ajustan a un modelo lineal.
y=4.2375 X +0.0003 se obtuvieron los valores
Utilizando la ecuacin linealizada
de concentracin de las tres muestras que contenan a la clara de huevo,
despejando x se obtuvo la concentracin real (en mg) mostrada en la tabla 2,
resultando as un promedio de 8.088102261g de Albmina en 100 ml de clara de
huevo que de acuerdo a la literatura es de 11 g/100ml. Al comparar las
concentraciones de Albmina en la clara de huevo difieren en 3g menos, debido a
que esto puede atribuirse a diferentes factores, uno de ellos, la maduracin y peso
del huevo1.
Conclusiones
La realizacin de una curva estndar es esencial para la cuantificacin de
sustancias (en este caso la protena albmina) por un mtodo de
espectrofotometra.
La correcta medicin mediante micropipetas ayuda a que los resultados sean
fiables en volmenes de muestra muy pequeos. Adems de que una buena
realizacin de la disolucin patrn ayuda a que la curva estndar proporcione
fiables.

Referencias

Alais C, Linden G. Manual de Bioqumica de los Alimentos. Espaa: Editorial

Acribia; 1992

Ayres G. Anlisis Qumico Cuantitativo. Mxico: HARLA; 1970

Forbes S. Diagnostico Microbiolgico; (virginia) Estados Unidos. 12 Edicion.

Editorial Panamericana; 2007