Abstrak

Dalam studi ini, tetrandrine-loaded kationik padat nanopartikel lipid (TET-CNP) dan lipid padat
nanopartikel (TET-NP) disusun oleh emulsi penguapan-pembekuan dengan metode pada suhu
rendah. Ukuran partikel, potensi zeta, dan efisiensi penjeratan TET-CNP dan TET-NP yang
ditandai. Hasil penelitian menunjukkan bahwa TET-CNP dan TET-NP memiliki rata diameter
(15,29? 1,34) nm dan (18,77? 1,23) nm dengan potensi zeta (5.11? 1.03) mV dan (? 8.71 ?? 1.23)
mV dan efisiensi penjeratan (94,1? 2,37)% dan (95,6? 2,43)%, masing-masing. Studi in vitro rilis
menunjukkan bahwa TET-CNP dan TET-NP dipertahankan obat entitas yang lebih baik daripada
solusi oftalmik tetrandrine (TET-SOL). Dalam studi farmakokinetik, nilai-nilai AUC TET-CNP
dan TET-NP yang 1,96 kali lipat dan 2,00 kali lipat lebih tinggi dari TET-SOL (P50.05); nilainilai Cmax dari TET-CNP dan TET-NP yang 2,45 kali lipat dan 2,53 kali lipat lebih tinggi dari
itu dari TET-SOL (p50.05), masing-masing. Penelitian sitotoksisitas menunjukkan bahwa TETCNP dan TET-NP memiliki tidak ada toksisitas yang signifikan pada konsentrasi rendah. Flow
cytometry studi dan confocal microscopy analisis menunjukkan bahwa Calcein berlabel NP (CANP) serapan oleh SRA 01/04 sel jauh lebih tinggi dibandingkan Calcein berlabel CNP (CA-CNP)
dan solusi Calcein (CA-SOL).
Pengantar
Dalam pemberian obat mata, kendala fisiologis yang dikenakan oleh mekanisme pelindung mata
biasanya mengakibatkan bioavailabilitas obat mata rendah dan kemudian efek terapinya sedikit.
Ketika obat dimasukkan ke dalam mata, efektif merobek drainase dan adanya tindakan berkedip
mata meneybabkan 10 kali lipat pengurangan konsentrasi obat dalam 4-20 min 1. Keteerbatasan
permeabilitas kornea juga berkontribusi terhadap penyerapan obat mata yang buruk. Karena
drainase air mata ini, sebagian besar dosis yang diberikan lewat melalui duktus nasolakrimalis ke
saluran GI, yang dapat menyebabkan efek samping. Eliminasi yang cepat dari diberikan tetes
mata sering menyebabkan durasi pendek dari efek terapi membuat rejimen dosis sering
diperlukan. Terapi mata secara signifikan akan meningkatkan jika,Waktu tinggal obat pre-kornea
meningkat. Dikontrol dan berkelanjutan sistem pengiriman, seperti liposom, emulsi, dan
biodegradable nanopartikel telah terbukti memperpanjang retensi obat pada surface okular dan
kemudian meningkatkan mereka penetration kornea. nanopartikel lipid padat (SLN) telah
diusulkan sebagai calon pembawa obat systems4. Salah satu keuntungan dari SLN adalah

kenyataan bahwa matriks lipid terbuat dari lipid fisiologis yang kompatibel, dari alam atau
sintetis sumber, yang meminimalkan bahaya toksisitas akut atau kronis. Karena nonirritant dan
properties4 tidak beracun, SLNs dianggap sebagai salah satu operator yang paling cocok dalam
pengobatan mata. terus-menerus dan sifat pelepasan obat terkontrol dari SLN dapat bermanfaat
untuk persiapan tetes mata. Kemampuan SLN untuk meningkatkan waktu retensi pre-kornea
dapat membantu untuk meningkatkan bioavailabilitas obat mata bila dibandingkan dengan
konvensional mereka solusi mata.
Tetrandrine, terisolasi dari ramuan obat Cina Radix Stephania tetrandrae S, adalah
alkaloid bisbenzylisoquinoline yang telah digunakan secara klinis untuk mengobati kekeruhan
lensa posterior kapsul, glaukoma, retinopati dan inflammations5-7 okular. Tetrandrine praktis
tidak larut dalam air tetapi larut dalam alkohol, dengan berat molekul dan titik leleh dari masingmasing adalah 622,76 dan 215-217oC,
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengembangkan lipid padat tetrandrine
nanopartikel untuk sistem pengiriman obat tetes mata. tetrandrine yang SLN yang ditandai
dengan analisis ukuran partikel, zeta analisis potensi, efisiensi enkapsulasi obat, pemuatan obat,
DSC, X-ray, in vitro pelepasan obat dan in vivo farmakokinetik belajar. Sitotoksisitas dan
serapan seluler studi tetrandrine SLN dievaluasi menggunakan SRA 01/04 sel.
Bahan dan metode
bahan
Tetrandrine (TET) dibeli dari Nanjing Zelang Farmasi Perusahaan Teknologi (499%, Jiangsu,
Cina). Soya Fosfolipid SL-100 diakuisisi dari Lipoid (Ludwigshafen, Jerman). Gliseril behenate
(Compritol 888 ATO) dibeli dari Gattefosse (St Priest, Prancis).Stearylamine dan PEG (40)
stearat (Myrj 52) yang dibeli dari Tianjin Utara Tianyi pabrik bahan kimia. Lidocaine injeksi
hidroklorida diperoleh dari Shanghai Hefeng Pharmaceutical Co Ltd (Shanghai, Cina). ofloxacin
tetes mata Solusi diperoleh dari Hubei Qianjiang Farmasi Industri (Qianjiang, Cina). Calcein
dibeli dari Sigma (St. Louis, MO). Dulbecco Modifikasi Elang Medium (DMEM), serum janin
sapi, penisilin dan streptomisin yang diperoleh dari HyClone (Logan, UT). Sel Menghitung Kit-8
adalah dibeli dari Dojindo Laboratories (Kumamoto, Jepang). Linear probe microdialysis (LM10, membran 10mm) diperoleh dari Bioanalytical Systems Inc (West Lafayette, IN). Sebuah

CMA 402 pompa jarum suntik dibeli dari CMA (Solna, Swedia). Semua bahan kimia lainnya dan
reagen yang kelas analitis.
hewan
kelinci putih Selandia Baru beratnya 2,5-3,0 kg disediakan oleh Chinese Academy of Medical
Science of Radiation Research Lembaga. Hewan, bertempat di kandang standar dalam
lightcontrolled kamar di (19 1) oC dan (50 5)% R.H., diberi standar diet pelet dan ad libitum
air. Semua studi yang dilakukan sesuai dengan Prinsip Laboratorium Perawatan Hewan (NIH
publikasi no. 92-93, direvisi pada tahun 1985) dan telah disetujui oleh Departemen Research
Laboratory Animal di Tianjin University of Pengobatan Tradisional Cina. prosedur yang
melibatkan hewan tersebut dan disetujui oleh Komite Etik hewan di Tianjin University of
Traditional Pengobatan Cina.
Persiapan tetrandrine nanopartikel lipid padat
Sebuah tetrandrine-loaded kationik nanopartikel lipid padat (TET CNP) disiapkan oleh
emulsi penguapan-pemadatan di Metode suhu rendah. Proses persiapan adalah sebagai berikut: 5
mg tetrandrine, 20 mg stearylamine dan 110 fosfolipid kedelai mg SL-100 dilarutkan dalam 5
mL etanol, 80 mg gliseril behenate dilarutkan dalam 1 mL kloroform dan kemudian dua fase
organik dicampur dan disimpan dalam bak air (SCZL-4B, Henan, Cina) pada 70 oC. Fase berair
dibuat dengan melarutkan 600 mg Myrj 52 di 18 ml air suling pada 70 o C. bahan organik yang
dihasilkan cepat disuntikkan melalui injeksi jarum ke dalam fase air bawah pengadukan kontinyu
pada 500 rpm. Suspensi yang dihasilkan terus diaduk pada 70 C selama 4 jam dengan
menggunakan pengaduk listrik (D2010W Listrik Stirrer, Shanghai, China). Setelah pelarut
organik diuapkan dari dispersi, nanoemulsion tembus dibentuk, dan cepat disimpan pada 4 C.
Sebuah tetrandrine-loaded padat lipid nanopartikel (TET-NP) adalah disusun dengan
menggunakan teknik yang sama dijelaskan di atas tanpa penambahan dari stearylamine ke fase
organik. Semua batch disiapkan setidaknya dalam rangkap tiga.
Calcein berlabel nanopartikel kationik (CA-CNP) dan noncationic nanopartikel (CA-NP)
juga disusun dengan menggunakan yang sama Metode yang dijelaskan di atas, tetapi mengganti

tetrandrine obat dengan Calcein. Calcein (nonincorporated di CA-CNP dan CA-NP) dipisahkan
oleh technique ultrafiltrasi sentrifugasi.
Karakterisasi nanopartikel lipid padat
Munculnya nanopartikel lipid padat diperiksa oleh metoda noda negatif. Setetes sampel
diaplikasikan ke Film-dilapisi jaringan tembaga. larutan asam fosfotungstat kemudian jatuh ke
grid. sampel bernoda diperiksa oleh mikroskop elektron transmisi (TEM, JEOL, Tokyo, Jepang).
Diameter rata-rata dan zeta potensial dari SLN ditentukan oleh Zetasizer (Nano-ZS, Malvern
Instrumen, Malvern, UK). Setiap batch dianalisis dalam rangkap tiga. TET (nonincorporated di
TET-NP dan TET-CNP) adalah dipisahkan oleh technique sentrifugasi ultrafiltrasi. Secara
singkat, 0.5ml dari nanopartikel solusi koloid ditempatkan di ruang atas dari tabung centrifuge
dilengkapi dengan ultrafilter (Amiconultra, Millipore Co, Billerica, MA, MWCO 10 kDa) dan
disentrifugasi selama 20 menit pada 4000 rpm. Dan untuk isi obat Total di solusi nanopartikel
koloid, 0.5ml dari formulasi dilarutkan dan diencerkan dengan tepat dengan etanol anhidrat.
Hasil yang dihasilkan dianalisis dengan kinerja tinggi liquid chromatography (HPLC) analisis
sistem (Shimadzu LC-10ATvp, Kyoto, Jepang). Fase gerak terdiri dari asetonitril dan air
deionisasi yang mengandung 0,1% (w / v) asam fosfat (20:80) pada panjang gelombang deteksi
280 nm. Laju aliran itu 1,0 mL / menit dan suhu kolom dipertahankan pada 35 C. Kurva standar
untuk kuantifikasi TET adalah linear selama rentang 0,103-4,120 mg / mL dengan koefisien
korelasi dari 0,9995. Efisiensi enkapsulasi (EE) dihitung dengan menggunakan persamaan
berikut:

Obat muatan (DL) juga dihitung dengan menggunakan berikut Persamaan:

DL (%) (berat total obat - berat obat bebas) /Berat total bahan lipid x 100.
Dalam rangka untuk memeriksa akumulasi potensi TET di membran ultrafiltrasi, 0.5ml
solusi TET pada konsentrasi dari 0,503 mg / mL, 1,006 mg / mL dan 2,502 mg / mL yang
ditempatkan di ruang atas dari tabung centrifuge dilengkapi dengan ultrafilter (Amiconultra,

Millipore Co, Billerica, MA, MWCO 10 kDa) dan disentrifugasi selama 20 menit pada 4000
rpm. yang dihasilkan solusi dianalisis dengan HPLC. Dan tingkat permeasi (PR) dihitung
menggunakan persamaan berikut: PR (%) Abefore / Aafter x100, di mana Abefore adalah area
puncak solusi TET sebelum menyerap membran ultrafiltrasi dan Aafter adalah daerah puncak
larutan TET setelah menyerap membrane10 ultrafiltrasi. Dan tingkat perembesan tetrandrine
melalui ultrafiltrasi tersebut membran pada konsentrasi masing-masing 0,503 mg / mL, 1,006 mg
/ mL dan 2,502 mg / mL yang 99,50,06%, 99,7 0,01% dan 98,7 0,04%,.
Differential scanning kalorimetri (DSC) dan difraksi sinar-X analisis analisis
DSC dilakukan menggunakan Perkin-Elmer Pyris 1 DSC diferensial scanning kalorimeter
(Perkin Elmer-Analytical Instrumen, Norwalk, CT) dan dianalisis dengan perangkat lunak Pyris.
Untuk nanopartikel kosong analisis DSC, tetrandrine, beku-kering, beku-kering TET-CNP, bekukering TET-NP dan fisik campuran nanopartikel kosong beku-kering yang digunakan: tetrandrine
(5: 1) sampel secara terpisah disegel dalam panci aluminium dan diatur dalam aparat Perkin-Jade
DSC antara 30 dan 270C. Panas Analisis dilakukan pada tingkat pemanasan dipertahankan pada
10 C per min dalam suasana nitrogen pada laju alir 50 mL / menit.
Dalam studi X-ray, X-ray difraktometer otomatis (Rigaku D / max 2500V / pc, Tokyo,
Jepang) dilengkapi dengan PW R18 X-ray generator yang digunakan. radiasi Cu-KA1 nikeldisaring memiliki panjang gelombang 1.54056 beroperasi pada 40kW dan 200 mA digunakan
dalam kisaran (2) dari 3 60 . Tetrandrine, freezedried nanopartikel kosong, TET-CNP bekukering, TET-NP beku-kering dan campuran fisik nanopartikel kosong beku-kering: tetrandrine
(5: 1) dievaluasi.
Pelepasan Obat In Vitro
Pelepasan obat dari nanopartikel dievaluasi menggunakan dialisis teknik tas difusi (cut-off 5
kDa, milipore). Itu medium disolusi adalah buffer fosfat baru disiapkan di pH 6,5. Sebuah
volume 2 mL larutan tetrandrine (TET-SOL), TET-CNP dan TET-NP yang akurat dipipet ke
dalam tas dialisis dan ini jumlah yang sedikit media pembubaran ditambahkan, yang kemudian
disegel di kedua ujungnya. Dialysis tas ditempatkan di medium disolusi 200ml dipertahankan
pada (35 1) C menggunakan Tester Obat Pembubaran (ZRS-8G, Tianjin, Cina) dengan rotasi
dayung dari 100 rpm. Sampel, masing-masing 1mL dalam volume, ditarik pada 0,5, 1, 2, 3, 4, 6,

8, 10, 12, 14 jam dan diganti dengan volume yang sama dari media reseptor. Jumlah tetrandrine
dalam sampel ditarik dianalisis dengan HPLC.
Studi Farmakokinetik
Kelinci (n=3) diobati dengan ofloksasin 0,3% tetes mata solusi selama 4 hari sebelum operasi.
Hewan-hewan itu dibius dengan injeksi lidokain hidroklorida. Sebuah LM dirancang khusus 10
microdialysis probe ditanamkan ke dalam ruang anterior setiap mata seperti sebelumnya
dilaporkan oleh Lnnroth et al. Untuk menggambarkan sebentar, penyelidikan inlet dan outlet
garis yang terowongan bawah konjungtiva, di bawah kelopak mata bagian atas, dan keluar antara
telinga. Lead dilindungi dengan saku sarung tangan lateks ditempelkan di atas kepala. probe
diperkenalkan sebagai sebelumnya dijelaskan method12. anchor itu dijahit ke sklera dengan 7-0
Vicryl, dan konjungtiva dijahit atas jangkar. Bagian luar permukaan luka diobati dengan 0,3%
ofloksasin mata larutan. Percobaan pada hewan yang dilakukan setelah periode pemulihan 2 hari.
Celah-lampu (YZ2, Changzhou, Cina) mata Pemeriksaan itu diambil setelah pemulihan untuk
memperkirakan pembentukan fibrin dan kondisi mata sebelum penggunaan kelinci di
eksperimen. Kelinci sadar (n=3) ditempatkan di restrainers kelinci yang diizinkan pergerakan
bebas kepala. Setelah 1 jam periode equilibrium dengan perfusi larutan garam melalui Probe,
pemulihan in vivo dari setiap probe ditentukan. Berbeda konsentrasi larutan garam standar
tetrandrine (0.51, 1.02, 1.53, 2.04, 3.06 dan 4.08 mg / mL) yang perfusi melalui probe pada
tingkat 3 mL / menit, dan dialisat dikumpulkan selama 10 menit setelah 30 menit perfusi. Sebuah
20 mL aliquot dari masing-masing fraksi adalah dianalisis dengan HPLC. Sebuah grafik linear
(C in- C out) dibandingkan C out adalah diplot, (di mana C in adalah konsentrasi larutan standar
dan C out, konsentrasi dialisat) dan kemiringan grafik garis memberi pemulihan (R). Setelah
pembersihan larutan standar dengan perfusi dari garam solusi melalui probe, 100 mL 0,1% (w /
v) TET-SOL, TET CNP setara dengan 0,1% (w / v) tetrandrine, dan TET-NP jugasetara dengan
0,1% (w / v) tetrandrine, yang diadministrasikan ke dalam mata kelinci. Sampel dialisat
dikumpulkan setiap 0,5 jam sampai 8 jam. Pada akhir percobaan, hewan-hewan itu eutanasia
oleh anestesi yang mendalam dengan suntikan intravena sodium pentobarbital melalui telinga
vena marginal.

Penelitian Kultur Sel

Manusia lensa sel epitel (SRA 01/04) digunakan untuk mengevaluasi penyerapan tetrandrine
yang diserap oleh lensa mata manusia. SRA 01/04, diperoleh dari Institut Sel Academia Sinica
(Shanghai, Cina), dikultur dalam DMEM media yang ditambah dengan 20% serum janin anak
sapi (FCS), 50 U / mL penisilin G, 50 U / mL streptomisin dan dipelihara dalam suasana lembab
yang mengandung 5% CO2 pada 37 C.
Uji sitotoksisitas
viabilitas sel ditentukan dengan menggunakan Sel Menghitung Kit-8 (CCK-8) assay 13. SRA
01/04 sel dipindahkan ke 96-baik piring pada 1x10 5 sel per juga 24 jam sebelum pengobatan.
Medium kultur tersebut kemudian diganti dengan 100 ml media mengandung konsentrasi yang
berbeda dari TET (0,05, 0,5, 5, 50 dan 500 mg / mL), kosong dan dimuat nanopartikel yang
mengandung berbeda konsentrasi total bahan lipid (8, 80 dan 800 mg / mL). Berikutnya inkubasi
24 jam di bawah 5% CO2 pada 37C, sel-sel dicuci dua kali dengan PBS. 10 mL CCK-8
kemudian ditambahkan ke setiap baik, dan piring diinkubasi selama 0,5 jam di bawah 5% CO2
di 37? C. viabilitas sel ditentukan dengan mengukur absorbansi masing-masing dengan baik pada
panjang gelombang 450 nm pada piring otomatis reader (Flexstation 3 Molecular Devices,
Sunnyvale, CA) 14.
Arus cytometry analisis
Untuk percobaan mengikat, Calcein solusi (CA-SOL), Calcein berlabel CNP (CA-CNP) dan NP
(CA-NP) yang digunakan. SRA 01/04 Sel-sel dicuci dua kali dalam PBS dan 1x10 6 sel yang
disuspensi kembali dalam 1mL medium DMEM. Campuran itu diinkubasi selama 2 jam pada
37? C dengan CA-CNP dan CA-NP, masing-masing. Sel-sel kemudian dicuci tiga kali dengan es
dingin PBS dan dianalisis dengan aliran cytometer (AccuriC6 aliran cytometer, BD Biosciences)
di eksitasi dan panjang gelombang emisi 480 nm dan 540 nm, masing-masing. Percobaan
dilakukan di triplicates dan 10 000 sel dihitung di setiap percobaan. Data dianalisis dengan
menggunakan program perangkat lunak FAC Station.

serapan intraselular SLN dengan mikroskop confocal analisis

SRA 01/04 sel (5? 104 sel / mL) diinkubasi dengan CASOL, CA-CNP dan CA-NP selama 1 jam
di bawah 5% CO2 pada 37 C, dicuci tiga kali dengan PBS, tetap di paraformaldehyde 4% untuk
20 menit, dan dianalisis dengan mikroskop confocal (Zeiss LSM 710, Oberkochen, Jerman) di
eksitasi dan emisi panjang gelombang 480 nm dan 540 nm, masing-masing.
Analisis statistik
Data yang diperoleh dinyatakan sebagai mean? SD. Eksperimental Data dianalisis dengan SPSS
software 17,0 (SPSS Inc, Chicago, IL). Perbedaan dianggap signifikan pada p50.05. hasil dan
Diskusi
Sifat fisikokimia SLN
Photomicrographs dari mikroskop elektron transmisi jelas menunjukkan bahwa bentuk TET-CNP
dan TET-NP yang bulat dan bahwa partikel berada di kisaran nanometer (Gambar 1).
Tabel 1 menunjukkan bahwa rata-rata ukuran, potensi zeta rata, efisiensi penjeratan dan
pemuatan obat TET-CNP dan TET-NP yang 15,29 1,34 nm dan 18,77 1,23 nm, 5.111.03mV
dan

DSC dan difraksi sinar-X (XRD) analisis

DSC dan X-ray penelitian yang digunakan untuk mengevaluasi kristal

Sifat dari obat murni serta formulasi obat-loaded.

thermograms DSC dari tetrandrine, beku-kering nanopartikel kosong,
beku-kering TET-NP, beku-kering TET-CNP dan fisik
campuran nanopartikel kosong beku-kering: tetrandrine (5: 1) adalah
disajikan pada Gambar 2. termogram untuk tetrandrine murni
(Gambar 2A) menunjukkan puncak endotermik tajam pada 230? C dengan
entalpi leleh 93,31 J / g yang berhubungan dengan
titik leleh untuk tetrandrine. Dalam termogram untuk kosong
nanopartikel lipid padat (Gambar 2B), hanya ada pencairan
puncak untuk padat lipid inti serta puncak endotermik di
188 C untuk lyoprotectant digunakan dalam beku-kering. thermograms
untuk kedua TET-NP dan TET-CNP (Angka 2C dan 2D) adalah serupa
karena fakta bahwa sifat mencairnya nanopartikel
terutama ditentukan oleh material 15 lipid inti padat dan
tidak ada puncak lebur untuk tetrandrine di kedua nanopartikel
persiapan. Hal ini mungkin sebagai akibat dari tetrandrine kehilangan nya
bentuk kristal dan yang tersebar dalam bentuk amorf saat
dimasukkan ke dalam nanoparticles16 lipid. Hasil yang sama yang
diamati oleh Yang dan Zhu17. Ketika mereka dimasukkan camptothecin
ke nanopartikel asam stearat, mereka melaporkan perubahan
camptothecin dari kristal untuk amorf dan hilangnya

dari puncak camptothecin lebur. Mencairnya endotermik

transisi dari tetrandrine masih hadir dalam termogram DSC
dari campuran fisik (Gambar 2E), namun, bergeser ke bawah
suhu leleh (226? C) dan dengan kurang entalpi peleburan
(43,48 J / g) bila dibandingkan dengan termogram untuk murni
tetrandrine. Ini bisa menjadi sebagai hasil dari beberapa interaksi
antara obat murni dan komponen dari nanopartikel kosong
terutama, lyoprotectant pada pencampuran. Hal ini mengakibatkan
pengkonversian sebagian dari kristal tetrandrine ke bentuk amorf nya
dan lebih amorf campuran, semakin rendah pencairan
enthalpy18. Pengamatan serupa dilaporkan oleh Samy et al.19 Dalam
studi mereka, mereka membandingkan thermograms dari allopurinol,
operator yang berbeda, campuran fisik dan dispersi padat.
Mereka mengamati bahwa suhu leleh allopurinol bergeser
untuk menurunkan suhu dengan kurang entalpi pencairan di kedua
campuran fisik dan dispersi padat dengan urea dan manitol sebagai
pembawa narkoba, namun tetap hampir tidak berubah secara fisik
campuran dan dispersi padat yang mengandung PVP K30, K90 dan
PEG 400.019.
Pada hasil X-ray difraksi (Gambar 3), X-ray
difraktogram dari tetrandrine (Gambar 3A), menunjukkan signifikan

puncak difraksi yang menunjukkan sifat kristal dari tetrandrine

dapat dideteksi pada 2? tersebar sudut 8.64 ?, 13.90? dan 15,64 ?,
yang dapat dilihat pada pola campuran fisik (Gambar 3E).
Namun, puncak obat dalam nanopartikel kosong, TET-NP dan
TET-CNP yang berkurang atau ditekan (Gambar 3B, C dan D),
yang juga dapat dikaitkan dengan faktor pengenceran karena tinggi
konsentrasi campuran lipid dan jebakan obat di
matriks system20.
pelepasan obat in vitro
In vitro profil pelepasan obat dari TET-NP, TET-CNP dan
larutan tetes mata tetrandrine ditunjukkan pada Gambar 4. Untuk
larutan tetes mata, hampir seluruh obat dirilis setelah 2 jam
eksposur. Sebuah laju pelepasan lambat diamati di kedua TET-CNP dan TET-NP formulasi
dengan sekitar 55% dari obat dirilis
setelah 14 jam. slow release ini menunjukkan pembubaran bahwa dari
nanopartikel itu bukan fenomena permukaan melainkan menunjukkan
bahwa banyak dari obat ini tertanam dalam inti lipid dan lambat
difusi adalah mekanisme release21. thermograms DSC
menunjukkan transisi mencair dari nanopartikel obat dimuat
tanpa obat mencair puncak dan ini mendukung saran dari
dispersi amorf dari tetrandrine di inti lipid yang mengarah ke

lebih obat-lipid interaksi yang dapat mempengaruhi rilis rate22. Data

diperoleh dari studi rilis in vitro dari TET-CNP dan TETNP
yang dilengkapi berbagai persamaan kinetik seperti urutan pertama,
Model Higuchi dan model Ritger-Peppas. Regresi linear
analisis dirangkum dalam Tabel 2. Koefisien determinasi
(R) nilai untuk TET-CNP dan TET-NP menunjukkan bahwa
Ritger-Peppas persamaan lebih sesuai cocok untuk pelepasan obat
Mekanisme dari nanopartikel.
studi farmakokinetik
Pemulihan in vivo dari probe microdialysis diperkirakan
dari plot linear dari perbedaan antara konsentrasi standar
dari perfusate, Cin dan dialisat, Cout (Cin? Cout) sebagai fungsi dari
konsentrasi perfusate, Cin seperti yang ditunjukkan pada Gambar 5. linear The
persamaan plot line adalah:? Cin Cout 0,5406 Cin0.0673,??
dengan kemiringan garis sama dengan in vivo pemulihan. Jadi in vivo
pemulihan, R probe diperkirakan 54,06? 0,68%.
Gambar 6 menunjukkan area di bawah humor aqueous concentrationwaktu kurva (AUC). AUC diperkirakan dengan linear yang
Metode trapesium dengan ekstrapolasi untuk waktu yang tak terbatas. Maksimum
konsentrasi (Cmax), waktu untuk mencapai konsentrasi maximun
(Tmax), dan terminal tingkat konstan (Ke) dihitung dengan

techniques23 noncompartmental. humor aqueous individu

parameter farmakokinetik untuk setiap mata dihitung dan
disajikan pada Tabel 3 sebagai mean? SD.
Seperti ditunjukkan pada Tabel 3, nilai-nilai AUC TET-CNP dan
TET-NP yang 1,96 kali lipat dan 2,00 kali lipat, masing-masing, jauh lebih tinggi
dibandingkan dengan TET-SOL (p50.05), dan nilai-nilai Cmax dari
TET-CNP dan TET-NP dibandingkan TET-SOL yang 2,45 kali lipat dan 2.53lipat, masing-masing (p50.05). The Tmax nilai TET-CNP dan
TET-NP yang lebih lama dibandingkan dengan TET-SOL (p50.01), dan
tetrandrine masih bisa terdeteksi pada 8,0 jam setelah pemberian topikal
dari TET-CNP dan TET-NP dengan binatang, tetapi tidak bisa
terdeteksi pada 4,0 jam setelah pemberian topikal TET-SOL.
Hasil ini menunjukkan bahwa TET-CNP dan TET-NP bisa meningkatkan assay sitotoksisitas
Secara umum, sitotoksisitas tergantung konsentrasi ditemukan untuk
solusi tetrandrine seperti yang ditunjukkan pada Gambar 7.
TET memiliki aktivitas toksik yang luar biasa dari SRA 01/04 sel
pada 500 mg / mL (12,23% viabilitas sel) setelah 24 jam
masa inkubasi. Viabilitas sel SRA 01/04 sel di TET
konsentrasi 0,05 mg / mL, 0,5 mg / mL dan 5 mg / mL yang
secara signifikan lebih tinggi daripada 50 mg / mL dan 500 mg / mL
konsentrasi TET setelah masa inkubasi yang sama dari 24 jam

(P50.01).
Tetrandrine-loaded dan kosong nanopartikel kationik memiliki
aktivitas sitotoksik yang luar biasa pada SRA 01/04 sel pada 800 mg / ml
(52,44% dan 46,34 viabilitas sel% masing-masing), sedangkan tetrandrinedimuat dan kosong nanopartikel non-kation kurang
sitotoksik (96,78% dan kelangsungan hidup sel 96,08%, masing-masing) di
konsentrasi yang sama dan masa inkubasi (Gambar 8). Namun, pada
konsentrasi lain kosong atau dimuat TET-NP dan TET-CNP,
tingkat kelangsungan hidup dari SRA 01/04 sel yang lebih tinggi. Kematian sel
untuk kosong dan dimuat TET-CNP 800 mg / mL dianggap
terkait dengan stearylamine atau residu pelarut organik dari
persiapan procedure14.
Sebuah sistem nanopartikel pengiriman obat tetes mata yang menjanjikan
harus mampu memberikan tingkat kecukupan obat aktif
tanpa terdiri kelangsungan hidup sel-sel inang.
Studi ambilan dari Calcein berlabel nanopartikel
pada SRA 01/04 sel
Dalam penelitian ini, SRA 01/04 sel dipilih untuk menyelidiki
serapan seluler nanopartikel dengan sitometri dan oleh
mikroskop confocal. Aliran cytometry digunakan untuk mengukur
Total serapan nanopartikel oleh SRA 01/04 sel untuk solusi Calcein

(CA-SOL), CA-CNP dan CA-NP. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 9, yang
tingkat Calcein seluler untuk bermuatan negatif CA-NP di SRA
01/04 sel lebih tinggi daripada kationik CA-CNP.
Luasnya internalisasi sel dari Calcein berlabel
nanopartikel dengan SRA 01/04 sel selanjutnya dievaluasi oleh
mikroskop confocal. Setelah paparan selama 1 jam, bermuatan negatif
CA-NP yang efisien diinternalisasi oleh sel-sel dan tingkat
serapan seluler secara signifikan lebih tinggi dari kationik
CA-CNP seperti yang ditunjukkan pada Gambar 10. Hasil yang diperoleh dari
flow cytometry studi dan analisis mikroskop confocal dukungan
gagasan bahwa, sulit untuk menarik kesimpulan umum tentang bagaimana
merumuskan nanopartikel untuk penyerapan sel yang optimal. dan faktor
seperti jenis sel, ukuran partikel dan sifat permukaan telah
terbukti mempengaruhi tingkat dan mekanisme uptake24,25 seluler.
Harush-Frenkel et al.26 melaporkan 2 kali lipat serapan yang lebih tinggi dari
partikel bermuatan positif melalui jalur clathrin-dimediasi
dalam sebuah penelitian pada sel tumor ovarium manusia (HeLa) menggunakan kedua
positif dan bermuatan negatif nanopartikel dengan ukuran yang sama.
Sementara sebaliknya, Nie et al.27 menunjukkan bahwa liposom anionic sel diperlakukan
disajikan sekitar fluoresensi yang sama
Intensitas sel kationik diperlakukan 4T1 sel, yang

jauh lebih tinggi dibandingkan dengan liposom netral pada 2 jam pasca perawatan.
Dan di samping itu, mereka melaporkan bahwa liposom anionik diperlakukan sel
juga menunjukkan intensitas fluoresensi tertinggi dalam semua liposom
formulasi dalam HeLa, HepG2 dan B16 cells27. Dalam penelitian kami, kami
digunakan secara negatif dan positif nanopartikel dari partikel yang sama
ukuran dan sama SRA 01/04 sel kepadatan yang tidak termasuk efek
dari ukuran partikel dan densitas sel pada hasil yang diamati. Kami kemudian
berhipotesis bahwa sifat permukaan dan komposisi kimia
Nanomaterials bertanggung jawab untuk peningkatan penyerapan tersebut
nanopartikel bermuatan negatif dan adsorpsi nanopartikel
ke permukaan sel ditingkatkan dengan interaksi elektrostatik
antara partikel bermuatan negatif dan positif langka
charges28,29 di permukaan sel dengan endositosis berikutnya bisa
telah membantu penyerapan sel meningkat. Namun, rinci
mekanisme yang terlibat dalam penyerapan selular yang lebih tinggi dari
bermuatan negatif nanopartikel, dibandingkan dengan stearylamine yang
dilapisi nanopartikel kationik tidak jelas, yang dibutuhkan
investigasi lebih lanjut.
Kesimpulan
Dalam penelitian ini, tetrandrine kationik padat nanopartikel lipid dan
anionik nanopartikel lipid padat dengan ukuran partikel yang sama yang

berhasil disiapkan oleh emulsi penguapan-pemadatan

pada metode suhu rendah. Studi in vitro pelepasan obat ditunjukkan
bahwa TET-CNP dan TET-NP dapat memperpanjang pelepasan obat. Itu
Studi farmakokinetik pada kelinci menunjukkan bahwa TET-CNP dan
TET-NP dapat secara signifikan meningkatkan bioavailabilitas tetrandrine.
Studi sitotoksisitas sel menunjukkan bahwa TET-CNP
dan TET-NP tidak memiliki toksisitas yang signifikan pada sel-sel di rendah
konsentrasi. Namun, studi aliran cytometry dan confocal
Analisis mikroskop menunjukkan bahwa bermuatan negatif CA-NP
bisa memiliki serapan seluler lebih efisien ke dalam lensa manusia
garis sel epitel SRA 01/04 jika dibandingkan dengan kation yang
CA-CNP. Hasil ini mendukung laporan sebelumnya bahwa seluler
karakteristik penyerapan nanopartikel bisa menjadi sel tertentu.
Mengingat peran epitel lensa mata manusia di mata
penyakit seperti kekeruhan kapsul lensa posterior, TETNP
bisa menjadi sistem pengiriman obat yang potensial untuk ditingkatkan
khasiat terapi tetrandrine.
Deklarasi bunga
Para penulis melaporkan tidak ada konflik kepentingan. Para penulis sendiri yang
bertanggung jawab atas isi dan menulis kertas.
Penelitian ini keuangan didukung oleh Ilmu Pengetahuan Alam Nasional

Foundation of China (81001645), didukung oleh Program untuk New Century

Bakat luar biasa di Universitas (NCET-12-1068), didukung oleh Tianjin
Yayasan Ilmu Pengetahuan Alam (12JCYBJC18700), Key Nasional
Penelitian Teknologi dan Program Pengembangan Cina
(2012ZX09304007) dan Program untuk Changjiang Scholars dan
Inovatif Tim Penelitian di Universitas (IRT0973