Ingeniera de Biorreactores

Curva de Calibracin para azcares reductores

Mtodo del cido dinitrosaliclico para determinar azcares reductores (DNS)
Preparacin del reactivo DNS:
1. En un vaso de precipitados de 250 mL coloque en 50 mL de agua destilada.
2. Aada 20 mL de hidrxido de sodio 2N.
3. Agreque 1 g de Ac. 3,5-dinitrosaliclico.
4. Despus de que todo el material se ha disuelto, agregue 30 g de tartrato doble de
sodio y potasio y agite hasta que se disuelvan.

5. Vierta cuantitativamente en un matraz aforado de 100 mL.

6. Afore con agua desionizada a 100 mL
7. Guarde en frasco mbar para proteger de la luz.
Diluciones para la curva de calibracin

1. Prepare una solucin de glucosa con una concentracin de 1g/L.

2. En tubos de ensaye perfectamente etiquetados coloque 0, 1, 2, 3,, 10 mL de esta
solucin y complete a 10 mL con agua destilada.
3. Someta cada una de las diluciones al mtodo del DNS para la determinacin de
azcares reductores.

Tcnica del DNS:

1. En tubos de ensaye perfectamente etiquetados, colocar 1 mL de la solucin de
muestra.
2. Agregue 1 mL del reactivo DNS.
3. Desarrollar la coloracin, colocando los tubos en un bao de agua en ebullicin por
5 minutos exactamente.
4. Enfriar los tubos en un bao de agua fra y agregar 10 mL de agua desionizada.
5. Determinar la absorbancia del color obtenido a 540 nm, contra un blanco de agua
destilada, tratado de igual forma que las muestras.
6. Se prepara una curva de calibracin con estndares de glucosa con
concentraciones desde 0 a 1 g/L.
Conc.
g/L

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

0.7

0.8

0.9

1.0

A@
540 nm

Curva de calibracin para biomasa

Diluciones para la curva de calibracin

1. Prepare una suspensin de levadura de panificacin con una concentracin de 1 g/L
en medio de cultivo estril y fro
2. En tubos de ensaye perfectamente etiquetados coloque 0, 1, 2, 3,, 10 mL de esta
suspensin y complete a 10 mL con medio de cultivo estril y fro.
3. Mida la absorbancia de cada dilucin a 650 nm utilizando el medio de cultivo estril y
fro como blanco.
4. Grafique concentracin de biomasa vs absorbancia y obtenga la ecuacin de la curva
de calibracin.

Conc.
g/L
A@
650 nm

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

0.7

0.8

0.9

1.0