UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER

PRACTICAS DE BIOLOGIA MOLECULAR TALLER ADN RECOMBINANTE ____________________________________________________

TALLER
ADN RECOMBINANTE
El objetivo del siguiente taller es aplicar los conocimientos adquiridos durante los cursos de gentica y
biologa molecular vistos durante la carrera. Vamos a encontrar preguntas bsicas y aplicadas, donde el
estudiante comprender la importancia de la biotecnologa en diferentes reas, como medicina, industria,
agricultura, entre otras.
PREGUNTAS
1. Qu es la Biotecnologa? D qu conocimientos se sirve?
2. Qu entiendes por Ingeniera Gentica? Cules son los principales problemas qu debe resolver la
Ingeniera Gentica
3. En qu se diferencian la Biotecnologa y la Ingeniera Gentica? Razona la respuesta.
4. Qu es una enzima de restriccin? Cul es su actuacin?
5. Dada la secuencia de ADN siguiente:
...ATGCGAATTCCCGCCAGGTTATGCAATTCATG...
...TACGCTTAAGGGCGCTCCAATACGTTAAGTAC...
Cuntos y cules seran los fragmentos que originara si se corta con la restrictasa EcoRI?
Cuntos y cules seran los fragmentos que originara si se corta con la restrictasa EcoRII?
En el siguiente cuadro tienes las secuencias de reconocimiento de estas enzimas.

6. Dado el siguiente fragmento de ARNm:

... U U A C G U U A A G C U A U A G ...
Cul sera el ADN formado por retrotranscripcin o ADN complementario?
Sera cortado por la restrictasa EcoRI? En caso afirmativo indica qu fragmentos originara.

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7. Qu es un vector en Ingeniera Gentica? Qu funcin cumple y cules son los principales vectores
empleados?
8. Qu es la clonacin gnica?
9. Qu condicin es necesaria para insertar un fragmento de ADN en un plmido, o en el genoma de un
virus o un csmido?
10. 10.Qu es una sonda de ADN?. De qu est formada y en qu propiedades se basa para la
localizacin de segmentos de ADN?
11. Qu razones justifican que la clonacin se realice muy frecuentemente en clulas procaritas?
12. Qu ventajas presenta E. coli para ser el organismo ms utilizado como hospedador en la clonacin de
genes?
13. Para introducir vectores de clonacin en clulas animales y vegetales se emplean habitualmente dos
tcnicas:

Una consiste en introducir el ADN directamente en las clulas, a travs de un capilar de dimetro muy
pequeo. Esta tcnica se denomina ..............................
Otra tcnica consiste en someter a las clulas suspendidas en una solucin de ADN a impulsos
elctricos de alto voltaje, que alteran la membrana hacindola ms permeable al paso de ADN. Esta
tcnica se denomina .................................

14. Los vectores de clonacin deben llevar adems del gen clonado, otro gen al que se le denomina "gen
marcador" de fcil deteccin fenotpica. Qu tipo de genes podran emplearse como marcadores?
15. Explicar las ventajas de utilizar la ADN-polimerasa de bacterias termfilas en la tcnica del PCR?
16. Disea un vector de clonacin para clonar el gen de la insulina humana en una bacteria. Comprueba
posteriormente si la clonacin se ha conseguido con xito.
17. Las endonucleasas de restriccin EcoRI y HhaI producidas por dos especies bacterianas, E. coli y
Haemophilus haemolyticus respectivamente reconocen las siguientes secuencias y cortan por los
puntos indicados con las flechas. Cuntas bases tendrn en cada caso los extremos cohesivos
generados?

18. Lee con atencin el siguiente texto y contesta las preguntas que se formulan:
El DAS, en colaboracin con la Universidad, planea crear un banco de datos de ADN con el fin especfico
de lograr la identificacin de personas desaparecidas. El proyecto ser financiado por nueve fundaciones
que aportarn 356 millones.

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El banco de datos se crear con muestras de material gentico, por ejemplo, sangre, cabellos, que
proporcionen los familiares de las personas desaparecidas, lo que permitir realizar el perfil gentico de
stas.
S, posteriormente, se encuentra un cadver cuya identidad se desconoce, se proceder a hacer un cotejo
con los datos existentes en el archivo de ADN, y en caso de estar fichado, se lograr identificar
plenamente el fallecido.
Qu tcnica se utiliza para comparar diferentes muestras de ADN?.?En qu se basa esta tecnologa?
Tras la lectura del texto anterior, qu problemas de carcter tico crees que se pueden derivar de la
creacin de bancos de datos de ADN humano? Dnde crees qu se deberan situar los lmites?
19. Explica los efectos nocivos que pueden tener algunos alimentos transgnicos y a qu podran deberse.
20. Comenta brevemente qu dos estrategias se utilizan para introducir genes "deseables" en las plantas.
21. Cita los mecanismos que conozcas para introducir fragmentos de ADN en una clula eucariota y
clonarlos.
22. Por qu se dice que la bacteria Agrobacterium tumefaciens es un ingeniero gentico de la naturaleza?
23. Por qu y para qu se incorporan marcadores genticos en los vectores de clonacin?.
24. Qu condiciones debe reunir una clula hospedadora para considerarla adecuada en un proceso de
clonacin?
25. Los genomas de algunos virus bacterianos o fagos se emplean frecuentemente como vectores de
clonacin. Por qu no se pueden emplear como vectores de clonacin en Sacharomyces cerevisae?
26. 26.De qu forma se utiliza la PCR en la identificacin de un criminal?.
27. Actualmente, los diabticos se inyectan insulina humana; sin embargo, hasta hace unos aos se
empleaba la insulina del cerdo, que difiere de la humana solamente en un aminocido. De qu modo
ha influido la Biotecnologa en este cambio?
28. Explica cmo se obtienen las vacunas recombinantes y pon algn ejemplo.
29. Qu funcin desempean las bacterias en la clonacin de genes?.
30. Qu son las endonucleasas de restriccin y para qu se emplean en ingeniera gentica.
31. 31.Por qu y para qu se incorporan marcadores genticos en los vectores de clonacin?.
32. Actualmente existen "bancos" de genes, tambin conocidos como "genotecas", tanto en empresas
comerciales como en departamentos de Universidades, que venden los genes que ya han sido
aislados y que se necesitan para la realizacin de determinadas investigaciones o incluso para la
realizacin de procesos industriales. Imagina que eres un ingeniero gentico y quieres obtener la
protena "Sabrosa".
Qu pasos deberas dar para obtenerla mdiante manipulacin gentica?

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Qu sorpresa se te podra presentar si hubieras llegado hasta la produccin industrial de esta protena y
se te hubiera olvidado instalar el marcador al gen especfico?.

33. En 1993, la prensa britnica nos sorprenda con la siguiente noticia: "...Diez nios han muerto en
Francia de la encefalopata de Creutzfeldt-Jakob (enfermedad de las "vacas locas" humana ) y
veinticinco estn condenados como consecuencia de la administracin de hormona de crecimiento
infectada por priones".
El Instituto Pasteur de Pars haba extrado la hormona de crecimiento de hipfisis procedentes de pases
del este de Europa, sin suficiente control sanitario. Inmediatamente, las autoridades sanitarias espaolas
tranquilizaron a la poblacin mediante un comunicado en el que se indicaba. "La hormona de crecimiento
que se suministra en Espaa se obtiene por ingeniera gentica".
Por qu podemos estar seguros de que la hormona del crecimiento obtenida por ingeniera gentica no
transmitir dicha enfermedad?. Razona la respuesta.
34. Explica en qu consiste la "manipulacin gentica". Expn una posible aplicacin en Agricultura.
35. Desde el punto de vista tico, propn un argumento a favor y otro en contra de la manipulacin
gentica en los seres vivos.
36. La aplicacin de tcnicas de gentica molecular ha permitido la mejora de calidad, duracin, etc., de
algunos productos agrcolas que consumimos. Explica con cierto detalle alguna de estas tcnicas.
37. Explica por qu las vacunas recombinantes resultan ms seguras que algunas vacunas fabricadas por
mtodos tradicionales.
38. El esquema que se representa corresponde a un gel de secuenciacin por el mtodo del didesoxi.
Cul es la secuencia del ADN objeto de estudio?

39. Una molcula lineal de ADN de 1000 pb de longitud es digerida con las siguientes enzimas de
restriccin, obtenindose los siguientes resultados:
Enzimas de restriccin
EcoRI
Bgl II

Fragmentos de restriccin
400 pb, 600 pb
250 pb, 750 pb

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EcoRI+Bgl II
250 pb, 350 pb, 350 pb
.
Dibuja el mapa de restriccin que se puede deducir de estos resultados.
40. Una pareja tienen un hijo con el sndrome de Down (trisoma del par 21). Se realiza un anlisis de
RFLP con una sonda de cromosoma 21 en los tres individuos (padres e hijo) y el resultado del gel es
el que se muestra en la figura. Qu se puede concluir acerca del origen de la enfermedad del nio?

41. Crees qu deberan etiquetar en una marca de margarina fabricada con aceite de soja transgnica el
origen del aceite usado. Razona la respuesta.
42. Te gustara saber con antelacin de varios aos que vas a padecer una enfermedad?
43. Consideraras tico que un mdico patentara clulas de un rgano tuyo extirpado sin tu conocimiento
porque se considera que ya no es de tu propiedad?
44. En la escena de un crimen se encuentra entre las uas de la vctima unos pocos pelos. A los dos das
se detiene a un sospechoso de haber cometido dicho crimen. Se realiza por orden del juez, la prueba
del ADN que se muestra. Es el sospechoso autor del crimen de que le acusan?

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45. Imagina que eres un cientifico al que le encargan que procure que no desaparezca una especie de
planta en peligro de extincion. Que estrategias utilizarias?
46. La oveja Dolly es una oveja clonica y transgenica obtenida en 1997. Que procesos han llevado a su
obtencion?
BIBLIOGRAFIA

AYALA & KIGER. 1984. Gentica moderna. Editorial omega

GRIFFITHS A.J.F, GELBART W.M., MILLER J.H. y LEWONTIN R.C. (1999) Gentica Moderna.
McGraw-Hill/Interamericana
KLUG W.S. y CUMMINGS M.R. (1999). Conceptos de Gentica. 5 Ed. Prentice Hall Iberia, Madrid.
Genes V VI VII Lewin, B., Oxford University Press.
Molecular cloning. (vols. 1, 2 y 3). Sambrook and Russell
PUERTAS. M. J. 1999. Gentica, fundamentos y perspectivas. Editorial Interamericana.
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WEB
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http://www.cellbio.com/
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http://www.biology.arizona.edu/molecular_bio/molecular_bio.html
http://www.rothamsted.bbsrc.ac.uk/notebook/