FARMACOGNOZIE I BOTANIC FARMACEUTIC

ANALIZA SAPONOZIDELOR IZOLATE DIN SPECIA SOLIDAGO CANADENSIS L.

Anatolie A.Nistreanu1, Natalia Cuciuc2
Catedra Tehnologia medicamentelor1
Catedra Farmacognozie i Botanic farmaceutic2
Summary
The analysis of isolated saponins from species Solidago Canadensis L.
The triterpenic saponins were identified by specific reactionis, foamy test, and
chromatography. Izolation and dosage of saponins from vegetal drugs were effectuated by
gravimetric method.
Rezumat
Prin reacii de identificare, proba de spumificare, cromatografiere s-a identificat prezena
saponozidelor triterpenice. Izolarea i dozarea saponozidelor din produsele vegetale s-a efectuat
prin metoda gravimetric.
Actualitatea temei
Genul Solidago cuprinde circa 100 de specii, rspndite mai ales n America, iar cteva n
Eurasia [2]. De menionat c cercetri asupra acestor specii de Solidago s-au efectuat n Romnia
la UMF Trgu Mure de ctre prof. G.Racz [ 4 ] care a demonstrat efectul hipotensiv i sedativ al
unui extract de S. virgaurea i la UMF Cluj-Napoca de ctre prof. M.Tma, care a efectuat
studii preliminare asupra flavonozidelor, saponinelor i a proprietilor lor diuretice i saluretice [
5 ].
Actualitatea speciilor genului Solidago n fitoterapie este reflectat i de numeroasele
preparate fitoterapeutice existente azi pe piaa farmaceutic a altor ri i care conin extracte
fluide sau uscate obinute din pri aeriene.
Deoarece n Republica Moldova nu sunt suficiente resurse naturale ale acestei specii [ 6 ],
folosind metoda filogenetic se poate de nlocuit specia S. virgaurea cu S. canadensis, care
este i mai uor de cultivat.
Obiectivele lucrrii
Identificarea i dozarea saponozidelor din produse vegetale, colectate n urmatoarele faze
de vegetaie: butonizare ; nceputul nfloririi ; nflorire deplin; nceputul fructificrii; sfritul
vegetaiei ( rdcini ).
Materiale i metode
Analiza calitativ a saponozidelor s-a realizat prin reacii de identificare, proba de
spumificare, cromatografie pe strat subire [1,3]. Pentru reaciile calitative s-a preparat o infuzie
1: 10, nclzind produsul vegetal mrunit la baia de ap timp de 10 min. Dup rcire infuzia s-a
filtrat i s-a folosit la reaciile necesare. Analiza cromatografic pe strat subire a saponozidelor :
pregtirea plcii cromatografice (faza staionar): silicagel de 13x18 cm i 0,25 mm grosime;
soluia de analizat: 2 g produs vegetal se extrag cu 10 ml etanol 70%, timp de 10 minute, la
reflux. Filtratul se concentreaz la 5 ml; soluia etanolic: soluie metanolic de saponin Merck;
faza mobil: cloroform : metanol : ap (70: 44: 10); cantitatea aplicat: 20 l din prob i 10 l
din soluia etalon; identificare: reactiv Liebermann- Burchard i apoi nclzire la etuv la 110 C
timp de 5 minute. Dozarea saponozidelor din produsele vegetale s-a efectuat prin metoda
gravimetric.

72

Rezultate i discuii
Solidago canadensis L. plant originar din America de Nord. n Europa a fost introdus
i cultivat pentru ornament. Evadnd din cultur, crete subspontan n ntreaga ar, cunoscut
n cultur i ca plant decorativ. Uneori se ntlnesc tufiuri spontane de Solidago.
Pentru studiu planta a fost ntrodus n cultur n Centrul de cultivare a plantelor
medicinale a USMF Nicolae Testemianu. Tulpina plantei este erect, puin nclinat,
ramificat sau neramificat, uor pubescent. Prile subterane rizom cu rdcini adventive.
Frunze simple, alungit-lanceolate, acut-serate, cu nervuri paralele i uor pubescente. Flori mici, galbene, grupate n calatidii.
Fructe achene mici cu papus. Recoltarea produsului
vegetal s-a efectuat n diferite faze de vegetaie.
Saponozidele s-au identificat prin mai multe metode, i anume: reacii de culoare ( reacia
Sakowscki, Kobert, Liebermann-Burchard, Lafon, soluie de nitrit de sodiu i acid sulfuric
concentrat), precipitare (acetat de plumb, soluie alcoolic de cholesterol), proba de
spumificare (n flori sunt prezente saponine triterpinece, iar n tulpini saponine sterodice) i
identificare cromatografic. Cromatograma obinut n condiiile experimentale menionate mai
sus este prezentat n figura 1.

Fig. 1. CSS-

saponine n
12-

lumina ultraviolet:
Saponin Merck
Solidago canadensis

n urma analizei cromatogramei se observ c culoarea spoturilor variaz de la violet-roz la

brun-cenuiu.Toate saponinele analizate dau aceeai reacie de culoare ca i saponina Merck. n
tabelul de mai jos sunt date valorile Rf i culoarea spoturilor pentru saponin i extract.
Specia
Saponina Merck

Rf
Culoarea
0,2
Violet
0,23
Violet
Extract din Solidago canadensis
0,15
Cenuiu
0,21
Brun-violet
0,33
Violet
0,42
Violet
Pentru determinarea coninutului de substane lipofile (clorofil, ceruri, uleiuri vegetale
.a.) i nlturarea lor, produsul vegetal s-a degresat la Soxhlet cu solveni nepolari. Diferena
73

dintre valorile final i iniial a patronului cu produs vegetal prezint masa substanelor lipofile,
care costituie 5,8%.
Dup degrasarea produsului vegetal saponozidele triterpenice se extrag cu metanol, de dou
ori cu cte 400 i respectiv 200 ml de metanol 70% la reflux, pe baie de ap, timp de 3, respectiv
1,5 ore. Soluiile extractive reunite se concentreaz la rotovapor (50C) pn la eliminarea
complet a metanolului. Reziduul se dizolv n 50 ml metanol i se toarn n fir subire, agitnd
continuu, peste 500 ml aceton. Se las n repaus la rece circa 30 min, apoi se decanteaz.
Precipitatul se spal cu 125 ml eter, se filtreaz, se redizolv n metanol i se repet precipitarea
n eter. n final se filtreaz prin plnia Buchner la vid. Precipitatul se usuc n exicator de vid, pe
clorura de calciu. Saponina brut este alb-glbuie n eter, formnd un precipitat floconos, dar
dup filtrare i uscare devine brun-glbuie. Dup uscare, pulberea se cntrete i rezultatul se
exprim procentual. Coninutul procentual de saponozide s-a evideniat la nceputul nfloririi
(partea de sus a plantei) i este de 9,03%.
Indicele de spumificare este un parametru care se bazeaz pe proprietatea saponinelor de a
forma o spum persistent in soluie apoas. Din rezultatele analizelor efectuate putem conchide
c indicele de spumifiere are valoarea cea mai mare (1428,57) l nceputul nfloririi, deci i
cantitatea de saponozide n aceast faz e maxim.
Concluzii
Din analiza rezultatelor cercetrilor experimentale chimice, efectuate asupra speciei de
Solidago canadensis, am desprins urmtoarele:
- saponozidele au fost analizate calitativ prin reacii de identificare,
proba de spumificare ,
cromatografie n strat subire.
- dozarea saponozidelor prin metoda gravimetric a artat coninutul maxim de flavonozide
pentru nceputul nfloririi.
Bibliografie
1. Analiza chimic a plantelor medicinale. Universitas. Chiinu, 1993, p.83.
2. Avram R., Andronescu E., Fuzi I, Botanic farmaceutic. Ed. Didactic i Pedagogic,
Bucureti, 1981, p. 457-458.
3. Farmacopeea Romn ediia a X-a. Editura medical. Bucureti, 1993, p.334-335.
4. Racz G.,Racz-Kotilla E., Hipotensive activity-a possible pharmacotaxonomic character of
Solidago L., Herba Hungarica 19, (1)1980, p.15-17
5. Votinaru O., Tma M. Studiul comparativ al aciunii diuretice a unor plante medicinale.
Cluj-Napoca, 2007, pag.7.
6. .. .
- , , 1975, . 477.

STUDIUL ANTOCIANILOR DIN SPECIA CENTAUREA CYANUS L.

Tatiana Chiru, Anatolie Nistreanu
Catedra Farmacognozie i Botanic farmaceutic
Summary
The study of the anthocyanins of Centaurea cyanus L.
The current work presents the anthocyanins study of C. cyanus L. The research has been
realised in comparison with blue and purple inflorescences. The qualitative (TLC) and
quantitative (spectrophotometry) methods have been used.

74

Rezumat
Studiul antocianilor din specia C. cyanus L. s-a realizat comparativ la inflorescene de
culoare albastr i purpurie, prin utilizarea reaciilor de identificare, cromatografiei n strat
subire i spectrofotometriei.
Actualitatea temei
Antocianii reprezint o important grup de flavonoide, cu rol de pigmeni vegetali, ce
coloreaz n rou, violet sau albastru florile, tegumentele seminelor, fructele i unele frunze. Din
punct de vedere structural sunt derivai ai 2-fenilbenzopiranului [3]. Sunt considerate alturi de
flavonozide ca factori P (deminu permeabilitatea i cresc rezistena capilarelor). Mresc
acuitatea vizual prin mrirea sintezei de rodopsin. Scad permeabilitatea barierei
hematoencefalice pentru substanele toxice; acioneaz ca antioxidani i captori de radicali
liberi, inhib agregarea plachetar i favorizeaz retracia cheagului etc [2,3].
C. cyanus L. este o plant originar din Sicilia, Tesalia (Grecia). Culoarea inflorescenelor
a speciei C. cyanus L. ce crete spontan este albastr. n procesul evoluiei, cultivrii,
ntroducerii n horticultur, datorit mutaiilor spontane, lucrului selecionarilor considerabil s-a
mrit spectrul acestui caracter. n prezent se ntlnesc plante de C. cyanus L. cu inflorescene de
culori diferite: de la alb i bej, pn la toate nuanele de roz, rou, albastru-violet. n calitate de
produs vegetal se utilizeaz florile marginale de culoare albastr, efectul lor diuretic, coleretic,
antiinflamator fiind datorat antocianilor [5]. Motivaia cercetrii a constituit-o faptul c
inflorescenele de culoare purpurie de C. cyanus L. conin o cantitate mare de antociani, iar n
lucrrile de specialitate datele referitoare la compoziia chimic a acestora sunt reduse.
Continund cercetrile noastre anterioare [4] efectuate asupra florilor de diferite culori de
albstri, ne-am propus studiul comparativ al antocianilor din flori de culoare albastr i
purpurie.
Obiectivele lucrrii
Analiza calitativ i cantitativ comparativ a antocianilor din specia C. cyanus L. cu
inflorescene de culoare albastr i purpurie.
Materiale i metode
Materialul vegetal a fost reprezentat de inflorescene purpurii i albastre de C. cyanus L.,
recoltate n a.2007 (produsul vegetal provine din Basarabia de sud, Ismail), fructe de aronie i
afin.
Uscarea produselor vegetale s-a realizat imediat dup recoltare, apoi au fost pulverizate.
Dozarea totalului de antociani s-a efectuat prin metoda Markakis [2], bazat pe
cunoaterea absorbanei molare specifice a fructelor de afin la 535nm. Extragera s-a petrecut la
rece (40C), timp de 24 ore cu 100 ml amestec de alcool etilic acid clorhidric 1,5N (85:15).
Tehnica utilizat pentru analiza calitativ a fost cromatografia pe strat subire [1], soluii
etalon servind extractele antocianice de fructe de afin i aronie. Extractele supuse analizei au fost
obinute prin adugarea la 2 g produs vegetal a soluiei metanolice acidulate (metanol acid
acetic ap, 19:19:2); antocianii s-au separat de restul flavonoidelor cu etilacetat.
Cromatografia pe strat subire de silicagel s-a realizat n urmtoarele condiii
experimentale:
- faza staionar plci de silicagel;
- faza mobil (mediul de solveni) butanol acid acetic ap (6:1:2);
- identificare n lumina vizibil i UV.
Rezultate i discuii
Analiza cromatografic pe strat subire a relevat prezena cianidinei (Rf=0,35) i
pelargonidinei (Rf =0,42) n probele de analizat.
Rezultatele determinrii totalului de antociani din probele analizate sunt nsumate n
tabelul 1.

75

Tabelul 1
Produsul vegetal
C. cyanus L.

Vaccinium
myrtillius
Aronia
melanocarpa

inflorescene purpurii
inflorescene albastre
flori marginale albastre
flori marginale purpurii
fructe

Totalul de antociani,
mg/100g
503
92
318
1734
281
818

fructe

Comparnd valorile obinute, constatm c la inflorescenele i florile marginale albastre

i purpurii de albstri exist diferene semnificative n ceea ce privete totalul de antociani. n
inflorescene de culoare albastr totalul antocianilor este de 92 mg/100g, n inflorescene purpurii
de cca 5 ori mai mult 503 mg/100g. Cantitatea cea mai mare de antociani s-a obinut de la flori
marginale purpurii 1734 mg/100g, ceea ce depete de 5 ori totalul din flori marginale de
culoare albastr (318 mg/100g). Valorile obinute pentru fructe de aronie i afin sunt comparabile
cu cele din literatura de specialitate [2].
Concluzii
Prin metoda cromatografiei pe strat subire au fost identificate n inflorescene de culoare
purpurie i albastr urmtoarele substane: cianidina i pelargonidina.
Coninutul maximal al totalului de antociani s-a stabilit n flori marginale de culoare
purpurie de C. cyanus L. (1734 mg/100g).
Bibliografie
1. Kornaga T., Zyzak D. Genetic and biochemical characterization of a lost unstable flower
color phenotype in interspecific crosses of Nicotiana, South Carolina.
2. Tama M., Oniga I., Crisan G. Recherches sur quelques produits avec des anthocyans,
Proceedings of the XV-th edition of Balkan medical days Iai-Romnia april 28-30 1999,
Iai, 2000, p. 202-210.
3. Istudor V. Farmacognozie, fitochimie, fitoterapie, Bucureti, 1996, p.110-115.
4. Nistreanu A., Chiru T. Centaurea cyanus L. surs de diveri compui fenolici, Analele
USMF Nicolae Testemianu, ediia VIII-a, vol.2 Chiinu, 2007, p.271-274.
5. . Asteraceae. -, 1993, . 8393.

UNELE ASPECTE STRUCTURALE I FITOCHIMICE ALE SPECIEI

CYNARA SCOLYMUS L. DIN COLECIA CENTRULUI DE CULTIVARE A
PLANTELOR MEDICINALE A USMF NICOLAE TESTEMIANU
Tatiana Calalb, Elena Chian
Catedra Farmacognozie i Botanic farmaceutic USMF Nicolae Testemianu
Summary
Some Structural and Phytochemical Aspects of Cynara scolymusL.
from the Centre of Cultivation of Medicinal Plants Collection
of SMPhU Nicolae Testemianu
Globe artichoke plant Cynara scolymus L. (Asteraceae) was introduced in the collection
of the Center of Cultivation of Medicinal Plants of SUMF Nicolae Testemitanu in 2003 year.
The macroscopical description of the plant and microscopical investigation of the leaves have
76

been effectuated. The diagnostic microscopical characteristics of leaves have been determined.
Lamina is dorso-ventral, amphystomatic with anomocytic stomata. Epidermis develops
protective and glandular hairs. Mechanical tissues collenchyma and sclerenchyma are present in
lamina and petiole.
The phenilpropanic derivates of C.scolymus was examinated. The caffeic and the
chlorogenic acids were determined qualitatively by using of chromatografic method. The total of
phenilpropanic compounds (0,2410,348 mg/ml) was determined spectrophotometrically.
Rezumat
Anghinaria C.scolymus L. (Asteraceae) a fost introdus n colecia Centrului de Cultivare
a Plantelor Medicinale a USMF Nicolae Testemianu n 2003. S-a efectuat descrierea
morfologic a plantei i studiul microscopic al frunzelor de anghinarie. S-au determinat
caracteristicile microscopice diagnostice: limb foliar de tip dorso-ventral, amfistomatic cu
stoamte de tip anomocitic; epiderma dezvolt peri tectori i glandular; esutul mecanic de tip
colenchimatic i sclerenchimatic prezent n lamin i peiol.
Compuii fenilpropanic de tip C6-C3 din anghinarie au fost studiai. Prezena acizilor
clorogenic i cafeic a fost determinat prin metoda cromatografic n strat subire. Totalul
compuilor fenilpropanici a fost determinat spectrofotometric (0,2410,348 mg/ml).
Actualitatea lucrrii
Anghinaria a fost cultivat nc la romani pentru frunzele utilizate n medicina
tradiional i n consum n calitate de aliment. Frunzele erau antrenate n mod empiric n
tratamentul hepatitelor, hiperglicemiei, obezitii, deranjamentelor dispeptice etc. Numeroasele
studii chimice i clinice, axate pe aceast plant, au confirmat potenialul terapeutic al acestei
plante. Constituenii chimici principali ai plantei sunt compuii fenolici ca: cinarina, acizii cafeic
i clorogenic, luteolina, cinarozida i scolimozida (7). Constituenii respectivi au un spectru
extrem de vast de aciune: hepatoprotector i hepatostimulator (1,10), coleretic (1,3), contribuie
la reducerea nivelului de colesterol i zahr n snge (2,6) i activitii dispeptice (4), la
dizolvarea i evacuarea calculelor din vezica biliar (2), au o aciune excitant asupra secreiei
biliare, sporesc potena de regenerare a celulele hepatice, amelioreaz pofta de mncare n cazul
lipsei (2), posed aciune antifungic (8) i antimicrobian (9), manifest aciune antioxidant
pronunat (10). Graie acestor virtuii terapeutice i culinare incontestabile a frunzei de
anghinarie, astzi planta este cultivat n multe ri europene, iar n ultimii trei ani a fost
introdus n Colecia Centrului de Cultivare a Plantelor Medicinale a USMF Nicolae
Testemianu. Reieind din faptul ca pn n prezent C. scolymus n-a fost cultivat i studiat la
nivel naional, ne-am propus iniierea unui studiu morfo-anatomic i fitochimic asupra acestei
valoroase plante medicinale.
Scopul i obiectivele lucrrii
Studiul unor aspecte structurale i fitochimice ale anghinariei cu obiectivele:
- determinarea criteriilor morfo-anatomice diagnostice ale frunzelor de anghinarie;
- identificarea calitativ i determinarea totalului compuilor fenilpropanici n pri
aeriene (frunze, calatidii, tulpini) a speciei C. scolymus.
Material i metode de cercetare
Surs de material botanic pentru cercetare au servit frunzele, tulpinile, calatidiile
plantelor de anghinarie recoltate n lunile iulie-august 2004-2007 din Colecia Centrului de
Cultivare a Plantelor Medicinale al Universitii de Stat de Medicin i Farmacie Nicolae
Testemianu.
S-au analizat preparate superficiale ale epidermelor i seciuni transversale prin frunze,
efectuate conform tehnicilor clasice. Acestea au fost supuse unui proces de clarificare, utiliznd
soluie de hipoclorit de potasiu. Colorarea seciunilor a fost efectuat cu soluie de iod n caliu
iod.

77

Aspectele morfologice ale frunzelor s-au evaluat prin urmtoarele criterii: tipul frunzei,
dimensiunile, forma limbului, gradul de ptrundere a inciziilor, aspectul suprafeelor, culoarea,
tipul nervaiunii.
Studiu histo-anatomic s-a realizat n baza criteriilor: conformaia epidermei superioare,
ct i inferioare (forma i dimensiunile celulelor; conturul pereilor laterali; prezena, tipul i
densitatea perilor; prezena, tipul i densitatea stomatelor); prezena elementelor mecanice;
structura i tipul mezofilului; fasciculelor libero-lemnoase i localizarea lor.
Analiza compuilor fenilpropanici calitativ i cantitativ s-a efectuat conform metodicii
(5). Reacia de identificare calitativ const n tratarea extractului etanolic analizat cu 1 ml
soluie de acid clorhidric 0,5 N, 1 ml reactiv Arnow i 1 ml soluie de hidrohid de sodiu 1 N.
Identificarea compuilor fenilpropanici s-a realizat prin metoda cromatografiei n strat
subire de silicagel. Ca soluii etalon au servit soluiile metanolice de acid cafeic i clorogenic.
Faz mobil - sistemul de solveni: acetat de etil acid acetic acid formic ap (100:11:11:26).
Cromatogramele s-au analizat n lumina vizibil i UV.
Determinarea totalului compuilor fenilpropanici s-a efectuat spectrofotometric.
Principiul metodei are la baza proprietatea fenolilor de a forma cu acidul azotos nitrozoderivai
ce se izomerizeaz n oxime i datorit caracterului lor slab acid, se dizolv n soluii alcaline,
rezultnd coloraii roii.
Extincia soluiilor analizate se citete la lungimea de und de 500 nm, fa de un amestec
preparat din: 0,5 ml soluie A, 1 ml acid clorhidric 0,5 N, 1 ml hidroxid de sodiu 1 N i ap pn
la 10 ml. Calcularea concentraiei de compui fenilpropanici se determin cu ajutorul unei curbe
etalon, ca substan de referin servind acidul cafeic.
Rezultate i discuii
Investigaii morfo-anatomice
Morfologia. Anghinaria reprezint plante ierbacee, perene, robuste cu tulpinile
ramificate suriu-tomentoase, nlimea de 1,5 2,0 m. n primul an de vegetaie planta dezvolt
frunze bazale, mari cu lungimea pn la 80 cm, dispuse n rozet. Frunzele au un peiol puternic,
crnos de culoare argintie i limbul penat sectat sau fidat, cu 5-8 perechi de lacinii lanceolate,
mucronate, pe partea inferioar alb-tomentoase i superioar glabre. Frunzele tulpinale, alterne i
aproape sesile. Spre apexul tulpinii dimensiunile frunzelor se micoreaz. Tulpina aerian apare
n cel de-al doilea an, este erect, viguroas, ramificat de la baz i dezvolt un aspect tomentos.
La vrful tulpinilor se dezvolt florile unite n inflorescene de tip calatidiu globulos (antodiu)
cu diametru 6-8 cm. Bracteele involucrului sunt crnoase la baz cu apex acut sau obtuz,
nepungente, aranjate acropetal n jurul calatidiului. Pe discul receptaculului crnos sunt dispuse
florile tubulate, bisexuate, iar marginal florile sterile, ambele de culoare roie-violacee. Fructele
reprezint achene brune, uor comprimate, nsoite de papus de culoare galben.
Microscopia frunzei. Pe seciuni tangenial-superficiale epidermele att superioar ct i
inferioar sunt alctuite din celule poligonale, mpachetate compact. Celulele epidermei
superioare cu perei drepi ce trec n uor sinuoi la cei anticlinali, pe cnd celulele celei
inferioare se caracterizeaz prin perei puternic sinuai. Stomatele de tip anomocitic pe
ambele epiderme, dar mult mai fercvente pe cea inferioar. Dou tipuri de peri se dezvolt
din abunden tot pe epiderma inferioar:
peri tectori n form de sfichi (sfrc) de bici cu baz uniserat din celule de
dimensiuni mici i apex filamentos subire i sinuos, preponderent pe nervuri,
ncoltcindu-se ese un aspect tomentos;
peri tectori mai puin numeroi, uniserai, alctuii din 4-6 celule globuloase sau
ovoide i vrful uuor teit.
Peri relativ mari glandulari sunt din abunden pe ambele epiderme ale laminei. Ei
consatau dintr-un picioru scurt format din 1-2 celule i o gland sferic cu coninut de culoare
brun.
Mezofilul laminei pe seciuni transversale este de tip dorso-ventral cu un rnd de celule
palisadice sub epiderma superioar. Aceste celule sunt poligonale, bine mpachetate i cu numr
78

mare de cloroplaste cu poziie preponderent parietal. Celulele mezofilului lacunos de form

sferic-lobat i spaii intercelulare mari vin n contact cu epiderma inferiooar.
Nervaiunea este bine pronunat pe faa inferioar a laminei. n seciuni tzransversale pe
nervuri sub ambele epiderme se observ fii de esut mecanic de tip colenchim. Un fascicol
vascular bine dezvoltat n nervura principal i mai mici n nervurile secundare (laterale),
aranjate n arcurile anurilor (rilelelor) de pe faa superioar. Fasciculul de conducere este
nconjurat de un strat de celule periciclice cu angrenare dens n lungul fascicului, formnd o
teac fibroas, uor lignificat. n seciune transversal cea mai mare parte a suprafeei fascicului
ocup liberul, format din celule vii cu perei celulozici. Aria lemnului n fascicul este mai redus,
alctuit din trahei, traheide i parenchim lemnos, nconjurat de o teac ngust de fibre lemnoase
cu pereii lignificai, care contacteaz cu periciclul lignificat.
Investigaii fitochimice
Studiul calitativ a compuilor fenilpropanici de tip C 6-C3. Prezena compuilor
fenilpropanici a fost identificat prin colorarea n rou n rezultatul aplicrii soluiei de HCl 0,5
H, 1 ml rectiv Arnow i 1 ml soluie de NaOH 1H (5). Extractele analizate s-au colorant n rou
de diferite intensiti n descretere: frunzele, calatidiile, tulpinile de anghinarie.
Analiza calitativ a compuilor fenilpropanici de tip C6-C3 pe cromatograme n strat
subire de silicagel, bazat pe compararea Rf-rilor spoturilor extractelor analizate cu Rf-rile
substanelor martor a scos n eviden prezena acidului cafeic (Rf 0,95) i clorogenic (Rf 0,6) de
culoare brun n lumina vizibil i cu fluorescena brun-albastr n lumina UV n toate probele
analizate. Alte spoturi neidentificate apar cu: Rf 0,5 lumina vizibil spot brun, fluorescena
violet n UV; Rf 0,73 - lumina vizibil culoare albastr, fluorescen violet-crmizie UV,
Rf 9,1- lumina vizibil spot brun, fluorescena crmizie UV.
Dozarea acizilor cafeic i clorogenic. S-a efectuat prin metoda spectrofotometric, iar
calculul concentraiei compuilor fenilpropanici s-a determinat cu ajutorul unei curbe etalon, ca
substan de referin servind acidul cafeic.
Totalul acizilor fenilpropanici a variat, n acest caz, astfel: 0,348 mg/ml - n frunzele de
anghinarie; 0,274 mg/ml n calatidiile de anghinarie i 0,241 mg/ml n tulpinile de anghinarie.
Concluzii
n rezultatul efecturii studiului s-au conturat n calitate de concluzii :
a) Caractere microscopice diagnostice ale frunzei de anghinarie:
- prezena a dou tipuri de peri tectori pe epiderma inferioar: cu baza uniserat i
apex filamentos, subire n form de sfichi de bici, n abunden pe nervuri i mai
puin numeroi din 4-6 celule globulos-ovoide cu vrful uor teit;
- prezena perilor relativ mari glandulari (picioruul din 1-2 celule i glanda
unicelular cu coninut brunificat) pe ambele epiderme;
- limb amfistomatic, stomate de tip anomocitic, mult mai numeroase i mai mici pe
epiderma inferioar;
- mezofil de tip dorso-ventral;
- fascicole vasculare libero-lemnoase ntr-o teac periciclic lignificat, localizate n
rilele de pe epiderma superioar.
b) S-a pus n eviden prin metoda cromatografic prezena compuilor fenilpropanici de
tip C6-C3 i anume acizii clorogenic i cafeic n toate probele analizate;
c) S-a determinat prin metoda spectrofotometric totalul compuilor fenolici cu maximul
de acumulare n frunzele de anghinarie.
Bibliografie
1. Adzet T., Camarasa J, Laguna J. Hepatoprotective effect of polyphenolic compounds
from Cynara scolymus against CCL4 toxicity in isolated rat hepatocytes. Journal of
Natural products 1987, 50 (4), pag. 612-17.
2. Gerhardt R., Anticholestatic activity of flavonoids from artichoke Cynara scolymus L.
and their metabolits, med. Sci. Monit., 2001, 7, uppl 1, pag. 316-320.

79

3. Li H., Xia N., Brausch I., Yao Y., Forstermann U. Flavonoids from artichoke Cynara
scolymus L. Upregulate eNOS gene expression in human endothelial cells, JPET Fast
Forward, 2003, 104. p.14-19.
4. Marakis G., Walker A.f., Middleton r.W., Booth J.C., Wright J., Pike D. J. Artichoke leaf
extract reduces mild dispepsia in an open study, Phytomedicine, 9 (8), 2002, pag. 694699.
5. Oniga I., Benedec D., Hanganu D., Bora A. Analiza Produselor Naturale Medicinale,
Cluj-Napoca, Univ. Med. Farm. Iuliu Haieganu. 2004.
6. Pittlern M.N., Ernst E. Artichoke leaf extract for serum cholesterol reduczion. Perfusion,
1998, 11, pag. 338-340.
7. Snchez-Rabaneda F., Juregui O. , Lamuela-Ravents R. M. , Bastida J. , Viladomat F.
and Codina C. Identification of phenolic compounds in artichoke waste by highperformance liquid chromatographytandem mass spectrometr, J. of Chromatography A,
Vol. 1008, Isssue 1, 2003, pag. 57-72.
8. Zgu XF., Zhang HX, Lo R. Antifungal activity of Cynara scolymus L. exstracts,
Fitoterapia, 2005, 76, p.108-111.
9. Zgu XF., Zhang HX, Lo R. Phenolic compounds of artichoke Cynara scolymus and their
antimicrobial activities, J. Agric Food Chem, 2004, 52, pag. 7272-7278.
10. Wang M.F, Simon J.E., Aviles I.F., He K., Zheng Q.Y.,Tadmor Y. Analysis of
antioxidative phenolic compounds in artichoke Cynara scolymus L., J. Agr. Food Chem.,
2003, 51, pag.601-608.

CULTURILE CELULARE I TISULARE IN VITRO SURSE DE SUBSTANE

BIOLOGIC ACTIVE
Tatiana Calalb, Sofia Dolghier
Catedra Farmacognozie i Botanic faramceutic USMF Nicolae Testemianu
Summary
The cellular and tissue culture in vitro source
of biological active substances
Plants represent inexhaustible sources of valuable chemical natural substances. During
the last years, frequiently the medicinal plants have been utilizated to produce different chemical
compounds with important therapeutical effects by cellular and tissual cultures in vitro. A system
of criteria was worked aut, such as: the systematic appurtenance of donor-plants; the donor-organ
used as a source of explant; the nature of histogen; the chemical nature of the prodused
substances; the therapeutical effects, the culture type of cultivation in vitro etc. to elaborate a
screening about vegetal chemical substances produced by culture in vitro, which can express the
present situation.
Rezumat
Plantele reprezint surse inepuizabile de substane chimice naturale valoroase. n ultimul
timp tot mai frecvent se ncearc antrenarea plantelor medicinale pentru producerea diferitor
compui chimici cu importante virtuii terapeutice prin culturi celulare i tisulare in vitro. A fost
ntocmit un sistem de criterii cum ar fi: apartenena sistematic a plantei-donator, organuldonator utilizat n calitate de surs de explant, natura histogenului, natura chimic a substanelor
produse, aciunea terapeutic, tipul microtehnicii de cultivare in vitro etc. pentru elaborarea unui
screening privind producerea substanelor chimice vegetale prin culturi in vitro, exprimnd
situaia actual.

80

Argumentare
Plantele reprezint surse de substane chimice naturale, valoroase, aplicate n diferite
industrii: alimentar, farmaceutic, cosmetic, textil etc. Cu regret, rezervele naturale existente
nu sunt inepuizabile, iar tehnologiile tradiionale agrotehnice i de profilaxie ale plantelor sunt
anevoioase i costisitoare. Frecvent, unele plante importante sunt caracteristice unei regiuni
geografice i lucrrile pentru introducerea n cultur pe alte areale sunt de durat, costisitoare, iar
rezultatul obinut difer mult de cel scontat. n aceste cazuri sunt binevenite microtehnicile
biotehnologice de cultivare celular i tisular in vitro.
Rezultate i discuii
Progresele nregistrate n domeniul biologiei celulare i moleculare, geneticii, n deosebi
al manipulrilor genetice, ofer posibiliti avantajoase cu perspective promitoare pentru
obinerea compuilor chimici naturali cu deosebite virtuii terapeutice prin intermediul
microtehnicilor biotehnologiilor moderne de cultivare celular i tisular in vitro, n condiii
aseptice, strict controlate, ecologic pure i n flux continuu. Investigaiile tiinifice
biotehnologice axate pe plante medicinale au permis nu numai determinarea condiiilor
biologice, chimice i fizice de iniiere i acumulare a biomaselor in vitro, dar au elucidat i
factorii de dirijare a calusogenezei (vrsta ontomorfogenetic de dezvoltare a plantei i a
organului-donator, histogenul utilizat ca explant,tipul hormonilor de cretere, dozele i
combinaiile dintre ei, regimul de lumin calitatea spectral a luminii, durata de aciune; de
temperatur) care servesc n calitate de vector n iniierea, acumularea biomaselor i mbogirea
lor cu substane chimice utile. Toate acestea au servit ca criterii-reper pentru elaborarea bazelor
biotehnologice de producere a celor mai importani compui naturali utili n proporii industriale.
Ne-am propus s efectum o evaluare a investigaiilor actuale nregistrate privind
producerea substanelor biologic active cu aciune terapeutic la plante medicinale prin
intermediul biotehnologiilor moderne.
Prin microtehnicile biotehnologice moderne in vitro se produc diferite clase de substane
chimice cu valoare medicinal: alcaloizi, saponine, vitamine, flavonozide, acizi fenolici, taninuri,
cumarine, furocumarine, steroli, glicozide cardiotonice, antracenozide, uleiuri volatile,
aminoacizi etc.
Astzi industria farmaceutic beneficiaz de substane medicamentoase de origine
vegetal obinute prin biotehnologii in vitro cum ar fi: saponine din plantele de Panax ginseng,
specii a g.Agave; alcaloizi din Catharanthus roseus, Capsicum annuum, Atropa belladonna,
Datura stramonium, D.innoxia, Papaver somniferum, P.bracteatum, P.orientale, Rauwolfia
serpentina, Colchicum autumnale, Stryhnos nux-vomica, Nicotiana tabacum, Coffea arabica;
steroizi din specii a g.Digitalis, Dioscorea; flavonozide din speciile g. Polygonum, Silybum;
taninuri din speciile g. Rhus; uleiuri volatile din speciile g. Mentha, Salvia, Melisa, Citrus,
Eucalyptus [1, 2] etc.
Datele experimentale i teoretice actuale privind subiectul n discuie au fost evaluate
printr-un sistem de criterii la elaborarea cruia s-au luat in calcul diferite aspecte cum ar fi:
apartenena sistematic a plantelor-donator, organul-donator utilizat n calitate de surs de
explant, natura histogenic a explantului, natura chimic a substanelor produse, aciunea
terapeutic, tipul microtehnicii de cultivare in vitro, procedee biotehnologice aplicate, centre de
cercetare biotehnologic la plante medicinale, firme, corporaii, centre de producere n proporii
industriale a principiilor active cu efecte terapeutice. Rezultatele obinute au servit la elaborarea
unui screening privind producerea substanelor chimice vegetale prin culturi in vitro , exprimnd
situaia actual.
Studiul denot volumul substanelor chimice naturale produse prin culturi in vitro n
descretere: alcaloizi, diferite grupe de flavonozide, steroizi, saponozide, antracenozide, terpene,
cumarine, furocumarine etc.
n proporii mai mari se produc prin intermediul culturilor celulare n suspensie, mai mici
prin culturi tisulare pe medii semisolide.

81

n calitate de explant pentru generarea culturilor sunt antrenate n ascensiune: fragmente

de fructe suculente, fructe uscate, poriuni de limb sau de peiol a frunzei, fragmente de tulpini,
rdcini, esut seminal, apexul radicular, conul caulinar, muguri vegetativi, granule de polen etc.
Astzi se contureaz trei centre de cercetare biotehnologic i de producere a substanelor
chimice vegetale prin biotehnologii in vitro: asiatic (Japonia, China, Bietnam), european (Frana,
Anglia, Gemania, Suedia, Austria etc) i american (diferite state americane i Brazilia, Mexic).
Bibliografie
1. Balandrin M.F., Klocke J.A., Medical, aromatic and industrial materials from plants. In:
Biotechnology in Agriculture and Forestry 4, Medicinal and Aromatic Plants I, Ed. By
Springer-Verlag, Berlin-Heidelberg, 1988, p. 191-199.
2. Calalb T. Biotehnologiile moderne i plantele medicinale, Analele tiinifice ale
USMFNicolae Testemianu, Vol.I, Probleme medico-biologice, farmaceutice, de sntate
public i management, ediia V, Chiinu, 2004, p.318-325

82