‫الختبارات الكيموحيوية للتعرف على البكتريا‬

‫‪Biochemical tests of bacteria‬‬

‫كما هو معلوم أن البكتريا من أكثر الكائنات الحية تنوع ًا وذلك يكون له علقة بالنشاط الكيموحيوى لكل منها والذى هو مرتبط بالساس‬
‫بنوعية النزيمات التى تحتويها تلك البكتريا بداخلها و التى تفرزها فى البيئة‪.‬‬
‫ولذلك إذا ما أردنا التعرف على بكتيرة مجهوله لدينا فإننا يمكننا التعرف عليها بتتبع النشاط الحيوى التى تقوم به تلك البكتيرة‪.‬وذلك بعمل‬
‫بعض الختبارات الكيموحيوية والتى صممت لها بعض البيئات لتسهيل تتبع تلك التفاعلت فى البكتريا ‪ ،‬وفيما يلى سيتم شرح عدد من تلك‬
‫الختبارات وكيفية إجرائها‪.‬‬

‫–‬ ‫‪-1‬‬
‫‪)Methyl Red and Voges-Proskauer Tests (MR-VP‬‬

‫هذين الختبارين التخمريين يستخدما للتفرقة بين عدد من البكتريا المعوية التى تسمى الكوليفورم‪. Coliforms‬‬
‫البيئة المستخدمة فى هذا الختبار هى بيئة ال ‪ Dextrose phosphate broth‬وهى تحتوى على الدكستروز كمصدر وحيد‬
‫للكربون ‪.‬‬
‫بعض الكوليفورم بكتيريا تستطيع تخمير الدكستروز إلى نواتج حامضية والتى تسبب إنخفاض ال ‪ pH‬لنقطة أقل من ‪pH= 5‬‬
‫وهذا يسمى تخمر حامضى مختلط ‪. mixed acid fermentation‬‬
‫فى إختبار الميثيل ريد يتم إضافة دليل الميثيل ريد للبيئة بعد تلقيحها وتحضينها وهذا الدليل يتحول لونه للحمر تحت ‪pH = 4.4‬‬
‫والذى يدلل على نوع التخمرالذى حدث ‪.‬‬
‫هناك أفراد أخرى من الكوليفورم تستطيع تخمير الدكستروز وتحويله لنواتج أخرى أقل حامضية مثل اليثانول أو البيوتانديول‬
‫‪ butandiol‬تلك البكتريا تكون سالبة لختبار الميثيل ريد ‪ ،‬وللكشف عن هذا النوع يجرى إختبار الفوجس بروسكاور‪.‬‬
‫فى إختبار الفوجس بروسكاور ‪ :‬يتم الكشف عن ال ‪ butandiol fermentation‬عن طريق الكشف عن ال ‪acetoin‬‬
‫‪ ((acetyl methyl carbinol‬والذى هو ال ‪ precursor‬لل للبيوتانديول‪.‬‬
‫البيئة المستخدمة فى هذا الختبار هى نفسها المستخدمة فى إختبار الميثيل ريد وكل الختبارين قد يجريا فى نفس الوقت‪ .‬وفى هذا‬
‫الختبار يضاف جواهر تسمى ‪( barritt's reagents‬ألفا نافثول – هيدروكسيد بوتاسيوم( وهذين الجوهرين يضافا إلى مزرعة‬
‫عمرها ‪ 48‬ساعة ثم ترج النابيب لحدوث تهوية جيدة وظهور لون بنفسجى إلى أحمر بعد الرج يدلل على أن التفاعل موجب لنتاج‬
‫البيوتانديول‪.‬‬
‫‪:‬‬
‫‪ -1‬لقح أنبوبة إختبار تحتوى على ‪ 10‬مل من بيئة الدكستروز فوسفات بروث بواسطة البكتريا المراد إختبارها ‪.‬‬
‫‪ -2‬حضن لمدة ‪ 48‬ساعة على ‪ 37‬درجة مئوية ( يجب عمل إنبوبة كنترول بدون تلقيح(‪.‬‬
‫‪ :‬بعد إنتهاء مدة التحضين انقل ‪ 1‬مل من البيئة إلى أنبوبة إختبار نظيفة‬ ‫**‬
‫لجراء إختبار الفوجس بروسكاور‪.‬ثم أضف عدد من النقاط من دليل الميثل ريد لنبوبة المزرعة الصلية ثم أخلط المكونات وسجل‬
‫النتائج‪.‬‬
‫‪ :‬أضف ‪ 0.5‬مل من جوهر اللفا نافثول إلى النبوبة ثم ‪0.5‬مل من‬ ‫**‬
‫هيدروكسيد البوتاسيوم وأخلط جيدًا لعمل تهوية جيدة وذلك لمدة ساعة تقريباً لحين ظهور لون أحمر او بنفسجى‪.‬‬
 ‫)‪:‬‬ ‫(‬ ‫‪-2‬‬
‫قدرة الميكروبات على عمل تحلل مائى لبعض الحماض المينية وإنتاج ناتج نهائى محدد تستخدم كوسيلة للتعرف على البكتيريا‪.‬‬
‫التربتوفان كمثال يتحلل مائياً إلى إندول وبيروفيك أسيد وامونيا بواسطة إنزيم التريبتوفانيز ‪. tryptophanase‬‬
‫البيروفيك قد يمثل غذائياً بعد ذلك وينتج عنه كمية كبيرة من الطاقة ‪.‬والمونيا تستخدم فى عمليات تخليق الحماض المينية‪.‬‬
‫الندول ممكن الكشف عن وجوده بواسطة جوهر ‪ kovac‬أو ‪( ehrlich‬بارا داى ميثيل أمينو بنزالدهيد مذاب فى كحول( الذى‬
‫يعطى لون أحمر فى وجود الندول‪.‬‬
‫‪:‬‬
‫‪-1‬لقح أنبوبة تحتوى على بيئة ‪ (tryptone broth(1%‬بواسطة الميكروب المختبر‪.‬‬
‫‪ -2‬حضن لمدة ‪ 48‬ساعة على ‪ 37o‬م ‪.‬‬
‫‪ -3‬أضف ‪ 10‬نقاط من جوهر ‪ . kovac‬ظهور لون أحمر فى طبقة الكحول (الطبقة العليا( يعبر عن أن الميكروب المختبر موجب‬
‫لنتاج الندول‪.‬‬

‫‪:‬‬ ‫‪-3‬‬
‫بعض البكتريا قد تكون قادرة على إستخدام المركبات العضوية الخرى غير السكريات كمصدر وحيد للكربون فى البيئة‪ .‬القدرة على‬
‫الستفادة من السترات كمثال يكون مفيد فى التفرقة بين ال ‪. Enterobacteriaceae‬‬
‫بيئة ال ‪ simmons citrate agar‬هى بيئة تحتوى على السترات كمصدر وحيد للكربون وأملح المونيا كمصدر وحيد للنيتروجين‬
‫‪ .‬الميكروبات التى تستطيع الستفادة من السترات وأملح المونيوم تنتج المونيا فى البيئة والتى تتسبب فى رفع ال ‪. pH‬وهذه البيئة‬
‫تكون محتوية على دليل البروموثايمول بلو كدليل‪ .‬هذا الدليل عند التعادل يكون لونه أخضر ويكون لونه ازرق داكن عند ‪ pH‬أعلى من‬
‫‪ .7.6‬وبالتالى لو تغير لون البيئة من الخضر إلى الزرق يكون هذا دليل على قدرة الميكروب المختبر على الستفادة من السترات‬
‫كمصدر وحيد للكربون‪.‬‬

‫‪:‬‬
‫‪-1‬بإستخدام أبرة تلقيح معقمة خطط الميكروب المختبر على سطح البيئة المحضرة فى صورة أجار مائل‪.‬‬
‫‪-2‬حضن على ‪ 37‬درجة مئوية لمدة ‪ 48‬ساعة‪.‬‬
‫‪-3‬أختبر النمو ‪.‬وهل هناك تغير فى لون البيئة والدليل ام ل؟‬
 ‫‪:H2S‬‬ ‫‪-5‬‬
‫نشاط بعض البكتيريا على الحماض المينية الكبريتية عادةً ينتج عنه إنطلق لغاز كبريتيد الهيدروجين‪.‬وهذا الغاز عادةً ما يختبر‬
‫بتكوينه أملح الرصاص سوداء اللون عند تعرض ورقة مشبعة بخلت الرصاص لهذا الغاز‪ .‬والقدرة على إنتاج هذا الغاز أيضاً إحدى‬
‫الوسائل للتعرف على البكتيريا والتفرقة بينها‪.‬‬

‫‪:‬‬

‫‪-1‬لقح البيئة الساسية (بيئة ماء ببتون مدعمة ب ‪ %0.01‬سستئين او سستين( بواسطة المزرعة موضع الختبار‪.‬‬
‫‪-2‬أدخل شريط من ورق الدليل ‪ INDICATOR PAPER‬بين زجاج أنبوبة الختبار والسدادة القطنية مع مراعاة أن يكون‬
‫طرف الورقه فوق مستوى البيئة‪( .‬ورقة الدليل هى شريط من ورق الترشيح المشبع بواسطة محلول خلت الرصاص ثم‬
‫يجفف ثم يعقم(‬
‫‪-3‬حضن على ‪ 37‬درجة لمدة ‪ 5-2‬أيام‬
‫‪-4‬أنتاج وإنطلق غاز كبريتيد الهيدروجين يسبب تكون أملح الرصاص السوداء على ورقة خلت الرصاص‪.‬‬