Universidade Federal de Santa Catarina

Centro de Cincias Fsicas e Matemticas

Departamento de Qumica

AVALIAO DA TOXICIDADE DE PLANTAS

ORNAMENTAIS FRENTE AO TESTE COM Artemia
salina Leach.

Relatrio Referente ao Estgio de

Concluso de Curso Qumica
Habilitao Bacharelado

Aluna: Karina Zaia Machado

Orientadora: Profa. Dra. Ins Maria Costa Brighente

Florianpolis, julho de 2003.

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Universidade Federal de Santa Catarina
Centro de Cincias Fsicas e Matemticas
Departamento de Qumica

AVALIAO DA TOXICIDADE DE PLANTAS

ORNAMENTAIS FRENTE AO TESTE COM Artemia
salina Leach.

Relatrio Referente ao Estgio de

Concluso de Curso Qumica
Habilitao Bacharelado,
realizado no LQPN no perodo de
maro a julho / 2003

Karina Zaia Machado

aluna

Ins Maria Costa Brighente

orientadora

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SUMRIO
1. RESUMO

2. INTRODUO

3. REVISO BIBLIOGRFICA

3.1. Histrico

3.2. Plantas Txicas

3.2.1. Plantas Txicas Estudadas

3.3. TESTE DE TOXICIDADE FRENTE A Artemia salina
4. OBJETIVOS

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4.1. Objetivos Gerais

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4.2. Objetivos Especficos

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5. MATERIAIS E MTODOS

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5.1. Equipamentos

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5.2. Substncias utilizadas

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5.3. Coleta e Identificao das Espcies Vegetais

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5.4. Obteno do Extrato Hidroalcolico Bruto

21

5.5. Teste de Toxicidade Frente a Artemia salina

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5.6. Investigao Qumica Preliminar

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5.7. Estudo Fitoqumico do Extrato de Zantedeschia aethiopica

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6. RESULTADOS E DISCUSSO
6.1. Anlise do Bioensaio Utilizando Artemia salina
6.2. Anlise dos Ensaios Qualitativos para a Determinao das Classes de
Produtos Naturais Presentes no Extrato, Atravs de Marcha Analtica
6.3. Anlise do Estudo Fitoqumico do Extrato de Zantedeschia aethiopica

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7. CONCLUSO

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8. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

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9. ANEXOS

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1. RESUMO
Plantas txicas podem causar srios danos a seres humanos e animais, com
prejuzos significativos a sade pblica e a pecuria. Segundo o Centro de Informao
Toxicolgica do estado de Santa Catarina (CIT-SC), um nmero restrito de plantas
ornamentais est relacionado com a maioria das intoxicaes, sendo que comigo-ningumpode responde sozinho por 30% dos casos. Outras plantas como aroeira, arruda, copo-deleite, coroa-de-cristo, espada-de-so-jorge e espirradeira, que sero estudadas neste
trabalho, seguem a lista das principais plantas txicas. O bioensaio que utiliza A. salina
apresenta boa correlao com ensaios de toxicidade em geral e anti-tumorais. Sendo assim,
este trabalho utiliza o bioensaio de A. salina na avaliao do grau de toxicidade de algumas
plantas ornamentais, notoriamente txicas. Por este bioensaio, toma-se como base para
considerar uma planta txica, o valor de DL50 < 1000 ppm.
As espcies ornamentais foram identificadas no Departamento de Botnica-UFSC.
O material botnico foi submetido a secagem com posterior macerao em etanol. Os
extratos obtidos foram concentrados em evaporador rotativo e avaliados quanto a
toxicidade frente a A. salina em concentraes de 50-1000 ppm. Os testes foram feitos em
triplicata, com dez larvas por tubo de ensaio, utilizando K2Cr2O7 como controle positivo
(DL50 = 2040 ppm). Aps 24 hs, foi determinado a % de mortalidade para cada
concentrao e a DL50 foi calculada atravs do grfico de % de mortalidade em funo do
logartmo da concentrao.
Das onze plantas testadas, as que apresentaram maior toxicidade foram Ruta
graveolens (arruda), Sansevieria trifasciata (espada-de-so-jorge), Zantedeschia aethiopica
(copo-de-leite), Hedera helix (hera) e Nerium ollander (espirradeira), sendo que os demais
extratos no apresentaram toxicidade, segundo este bioensaio. Porm, para os extratos
inativos, a toxicidade pode estar relacionada com compostos termo- ou foto-sensveis, que
no foram detectados por este mtodo.
Finalmente, no extrato de Zantedeschia aethiopica foram feitos alguns estudos
fitoqumicos prvios.

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2. INTRODUO
A toxicologia das plantas, relacionada espcie humana, assume aspectos variados
e importantes, interessando diferentes campos, entre os quais destaca-se a medicina,
biologia, botnica e qumica. A intoxicao aguda, quase sempre por ingesto acidental de
uma planta ou de alguma de suas partes txicas, de incidncia preponderante no grupo
peditrico. Embora de incidncia universal, este tipo de intoxicao possui distribuio e
intensidade nitidamente regionais. Entre os adultos, a intoxicao por plantas muito pouco
freqente, e quando ocorre, quase sempre devida a ingesto de uma espcie txica que
confundida com alimento, ou ento conseqente a atividades industriais ou agrcolas, sendo
nesse caso, mais um problema alrgico ou fsico do que toxicolgico propriamente dito. A
intoxicao crnica conseqente ingesto continuada, acidental ou propositada de certas
espcies vegetais, responsvel por distrbios clnicos muitas vezes complexos e graves.
Assim, as principais medidas preventivas para diminuir o risco de intoxicao com
plantas so: divulgar o mximo possvel e por todos os meios de comunicao, as espcies
txicas mais comuns; recomendar a necessidade de orientao mdica ao se utilizar algum
preparado vegetal para fins medicinais, e finalmente educar a populao sobre a
inconvenincia de ingerir ou manusear qualquer espcie vegetal desconhecida. Portanto,
necessrio conhecer as plantas perigosas da regio, da casa e do quintal, conhec-las pelo
aspecto e pelo nome (Schavartsman, 1992).
Neste trabalho pretende-se aplicar o teste de toxicidade frente a Artemia salina, a
fim de avaliar o grau de toxicidade de uma variedade de plantas ornamentais,
reconhecidamente txicas. A. salina (Artemiidae) um microcrustceo que tem sido usado
com sucesso como teste alternativo para determinao da toxicidade de produtos qumicos
e naturais (Sam, 1993; Meyer et al., 1982). Sabendo-se que a utilizao de plantas
ornamentais que possuem algum efeito txico ao homem e animais muito grande,
objetivou-se inicialmente o estudo de onze espcies txicas, entre estas, algumas
registradas como causadoras de intoxicao pelo Centro de Informao Toxicolgica em
SC (CIT-SC).

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3. REVISO BIBLIOGRFICA
3.1. HISTRICO
Ao longo do tempo, plantas txicas foram consideradas de modo muito diverso. Nos
primrdios da sua origem e evoluo, o homem percebeu que as plantas tinham alm da
capacidade de alimentar e curar, a de poder matar.
Ampla utilizao referida na Idade Mdia, com fins polticos, militares ou
pessoais, como recurso em envenenamentos intencionais. Na Grcia antiga, onde a
produo de gneros alimentcios era escasso, o governo estabeleceu medidas drsticas para
impedir a fome utilizando-se da "cicuta". Por este motivo indivduos com mais de 60 anos,
eram eliminados sumariamente, sendo a "cicuta" (Conium maculatum L.) o meio usado
para exterminao das pessoas j alquebradas e inaptas para o trabalho. Scrates um dos
maiores filsofos da histria, quando condenado morte pelo Sindrio, teve como agente
da sua sentena, a "cicuta".
Muitas plantas venenosas, como a beladona (Atropa belladona) e a digital ou
dedaleira (Digitalis lanata), fornecem substncias, que quando usadas na dosagem correta,
possui grande valor teraputico ou medicinal.
Em pocas remotas, e tambm no sculo XX em algumas regies, plantas txicas
exerceram papel importante para prover alimentao, atravs do uso como veneno de
flechas na caa ou como veneno para peixes. Os caboclos brasileiros usam as espcies do
grupo dos timbs, sapindceas e leguminosas para envenenar a gua dos rios e assim matar
peixes. Esse tipo de pesca, apesar de predatrio, permite, com pouco esforo, resultados
imediatos dos mais compensadores.
Os ndios por sua vez, envenenavam suas flechas com o curare. Esse extrato, obtido
de certas plantas do gnero Strychnos e de Chondrodendron tomentosum, tem ao
paralisante e mortfero, por atacar os msculos inspiratrios.
Mais recentemente, ao fim do sculo XIX e incio do sculo XX, plantas txicas
exerceram importante papel como fonte de substncias ativas capazes de propiciar modelos
moleculares para o desenvolvimento de frmacos.
O homem aprendeu sobre as plantas pelo processo da tentativa e erro. Hoje vivemos
num mundo em que existe certo conhecimento sobre os transtornos que as plantas podem

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acarretar ao homem. As plantas ornamentais so as que se encontram mais prximas e de
fcil acesso, plantas essas que embelezam e podem trazer sensaes agradveis ao homem
pela sua beleza exterior. Entretanto, elas trazem tambm danos irreparveis, pois por trs de
tanta beleza, pode conter na sua constituio qumica, elementos no apropriados a espcie
humana e dos animais, com prejuzos significativos sade pblica e pecuria.

3.2. PLANTAS TXICAS

As plantas so seres vivos complexos, e como tais apresentam um extraordinrio
metabolismo, que leva produo de uma grande variedade de substncias qumicas.
Algumas destas substncias como, por exemplo, protenas, lipdios, carboidratos e cidos
nuclicos, originrias do metabolismo primrio, so comuns a todos os seres vivos, sendo
usadas no crescimento, na reproduo e na manuteno do vegetal. No entanto, um grande
nmero de compostos qumicos produzidos pelos vegetais serve a outros propsitos. Os
pigmentos (flavonides, antocianinas e betalanas) e os leos essenciais (monoterpenos,
sesquiterpenos e fenilpropanides) atraem polinizadores, enquanto algumas outras
substncias como os taninos, as lactonas sesquiterpnicas, os alcalides e os iridides, alm
de apresentarem sabores desagradveis, podem ser txicas e irritantes para outros
organismos. Estas substncias, originadas a partir de rotas biossintticas diversas, e que
esto restritas a determinados grupos de organismos, so produtos do metabolismo
secundrio (Vickery & Vickery, 1981). Elas protegem as plantas contra predadores e
patgenos (Poser & Mentz, 2001).
Vrias destas substncias txicas podem causar graves envenenamentos em seres
humanos ou em animais domsticos quando plantas que as contenham so ingeridas, ou
quando entram em contato com a pele. No entanto, a simples presena destas substncias
em uma determinada espcie vegetal parece no ser suficiente para qualific-la como
txica. O primeiro requisito para suspeitar da possvel toxicidade de uma planta, o relato
de uma pessoa que tenha desenvolvido um quadro clnico aps a ingesto ou o contato com
a espcie em questo. Todavia, pode acontecer de uma outra pessoa (ou animal nos casos
veterinrios) ter o mesmo tipo de contato com a espcie, e no ser observada
sintomatologia aparente. Isto pode ser conseqncia de um, ou da associao de vrios

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fatores, tornando incerta a condio de planta txica admitida anteriormente. Sendo assim,
para a qualificao de uma planta como txica ou no txica, necessrio ter em mente as
seguintes variveis (Schvartsman, 1992): i) Diferentes partes de uma mesma planta (raiz,
caule, flores, frutos e sementes) freqentemente contm diferentes concentraes de
substncias qumicas; ii) A idade da planta e o estado de amadurecimento dos frutos
contribuem para a variabilidade das concentraes das substncias; iii) Clima, solo e
estao do ano alteram a sntese de alguns compostos; iv) Variedades da mesma espcie
podem apresentar constituies qumicas diferentes; v) Patologias vegetais como ataques de
fungos, ataques de bactrias e at mesmo a predao por herbvoros, podem induzir o
vegetal a produzir substncias que normalmente no produz; vi) Indivduos diferentes
apresentam diferentes taxas de sensibilizao a certas substncias vegetais; vii) A
intoxicao pode estar limitada quantidade de vegetal ingerido, ou maneira de ingesto
(bem ou mal mastigado).
A descrio botnica da planta, com fotografia detalhada, nomes vulgares e
cientficos e de algumas, at sinnimos estrangeiros, visa ajudar rapidamente os
responsveis por vidas, como mdicos e veterinrios, a identificar a planta tida como
txica, pois em alguns casos o tempo fator vital. fcil saber se a planta uma erva,
arbusto, rvore ou trepadeira; se apresenta ltex ou no, pelos urticantes, espinhos; qual tipo
de folha, cor das flores e forma dos frutos, etc. caractersticas estas teis para a
identificao, pois em casos de emergncia as plantas parecidas sempre so da mesma
espcie ou do mesmo gnero, ou, ainda, da mesma famlia.
O conceito de substncias txicas bastante relativo, pois depende da dosagem e do
indivduo. H substncias altamente txicas que, em dosagens mnimas, entram na
composio de vrios remdios.
Na grande maioria das intoxicaes por plantas sempre ocorre, em alguma fase de
sua evoluo, distrbios digestivos, incluindo no apenas manifestaes gastrintestinais,
tais como vmitos, clicas abdominais e diarria, como tambm comprometimento
heptico, que usualmente de difcil diagnstico, alm dos distrbios do trato digestivo
superior, incluindo boca e faringe. A ocorrncia de distrbios gastrintestinais pode ser
devida a vrios tipos de agentes txicos existentes na planta, entre os quais podem ser
citados: protenas txicas, glicoalcalides, saponinas, resinas, entre outros.

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Em algumas obras clssicas (Hoehne, 1978; Kingsbury, 1964), centenas de plantas
so citadas como txicas. No entanto, a margem de certeza sobre a toxicidade de uma
planta limitada por uma srie de fatores. Para ocorrer a intoxicao, seja por ingesto de
uma dose txica, seja pelo contato atravs da pele, devem ser vencidos, no processo, os
mecanismos prprios de defesa da cada organismo. Assim, uma planta pode ser
potencialmente txica, e apesar disso, no provocar a intoxicao, determinando, nesse
caso, a convico equivocada de ausncia de toxicidade (Simes et al., 1999).
A verificao da toxicidade depende principalmente de experimentos em animais,
que nem sempre reproduzem a toxicidade em seres humanos, ou de relatos sobre
intoxicaes acidentais. Infelizmente, a maior parte destes relatos no acompanhada de
informaes quanto a quantidade ou parte do vegetal ingerido, ou ainda, quanto
identificao da planta atravs de nomes cientficos.

3.2.1. PLANTAS TXICAS ESTUDADAS

Alamanda
Allamanda cathartica, planta disseminada por todo pas, pertence famlia botnica
das Apocynaceas, apresenta-se popularmente sob vrios nomes como por exemplo,
Alamanda, Alamanda-amarela, Dedal-de-dama, Orelia, Quatro patacas

amarela, Santa

Maria (Correa, 1984).

Trata-se de uma trepadeira arbustiva e lactescente, semi-lenhosa, vigorosa, de folhas
variveis, brilhantes e espessas, apresentando flores amarelas em forma de funil, freqente
em jardins (Schvartsman, 1992). Figura 1.
Todas as partes desta planta so consideradas de potencial toxicidade, especialmente
o ltex resinoso (Simes et al., 1999).
Estudos fitoqumicos realizados por alguns autores revelaram a presena de
esterides e triterpenos (Gupta et al., 1969). Akah & Offiah (1992) isolaram do extrato das
folhas substncias farmacologicamente ativas capazes de estimular os movimentos
peristlticos. Anlises cromatogrficas deste extrato revelaram a presena de alcalides,

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saponinas, flavonides e carboidratos, mas seus papis especficos nos efeitos purgativos
no foram estudados. Porm, possvel que as saponinas contidas no extrato possam elevar
os efeitos txicos, devido s suas propriedades emolientes ou estimulantes (Akah & Offiah
1992). Coppen (1983) e Abdel-Kader et al. (1997) isolaram iridides de A. cathartica,
sendo que o primeiro cientista relacionou a atividade algicida observada, presena de
iridides glicosdicos.
O extrato etanlico de folhas e galhos de A. cathartica apresentou moderada
neutralizao do efeito hemorrgico do veneno de cobras da espcie Bothrops atrox (Otero
et al., 2000). Allamadin, um iridide lactnico com atividade antileucmica isolado desta
planta teve sua estrutura elucidada por Kupchan et al. (1974). Plumieride, um outro iridide
glicosdico, apresentou forte fungitoxicidade contra alguns dermatfitos causadores de
micose em animais e seres humanos (Tiwari et al., 2002).
A ingesto desta planta pode ocasionar distrbios gastrintestinais intensos, com
nuseas, vmitos, clicas e diarria (Simes et al., 1999). O tratamento deve ser iniciado
com lavagem gstrica, levando-se em considerao as propriedades custicas do vegetal.
As manifestaes digestivas exigem apenas tratamento sintomtico, complementado por
correo adequada dos distrbios hidreletrolticos, que so complicaes relativamente
freqentes (Schvartsman, 1992).
Popularmente, esta planta usada como purgativa quando em dose mnima, e
tambm no tratamento contra a sarna (Correa, 1984).
Aroeira
Conhecida popularmente pelos nomes de aroeira-vermelha, aroeira-da-praia e
aroeira-mansa, a espcie Schinus terebinthifolius Raddi pertence famlia botnica
Anacardiaceae, sendo muito utilizada em arborizao de ruas e parques.
Trata-se de uma rvore de at 10 metros de altura. Possui folhas compostas,
imparipenadas, com pecolos cilndricos na parte inferior e mais ou menos alados; fololos
oblongo-elpticos ou obovados, estreitos na base e obtuso ou agudo ou provido de um
pequeno dente no pice, cerrados, membranceos, glabros; flores amarelo plidas pequenas,
dispostas em pancolos de 5 a 10 cm de comprimento; fruto globoso vermelho plido
luzidio (Correa, 1984). Figura 2.

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Esta espcie bastante utilizada na medicina popular. Contudo, trata-se de uma
espcie txica, que deve ser usada com muita precauo.
Segundo Morton (1978), crianas que ingeriram alguns frutos verdes ou maduros
sofreram distrbios gastrintestinais e, o contato com os frutos, pode originar alergias que
afetam mos, braos e rosto.
O quadro toxicolgico caracteriza-se por dermatite, apresentando eritema, ppulas e
vesculas com prurido intenso. A hipersensibilizao pode decorrer do contato direto da
planta com a pele ou, em muitos casos, apenas pela proximidade do vegetal, devido
presena de substncias alergizantes volteis (Simes, 1999). O tratamento pode ser feito
utilizando antisspticos de ao local e, nos casos mais graves, recomendada a
administrao de corticides e anti-histamnicos (Simes, 1999).
Os frutos de S. terebinthifolius possuem efeito inibitrio sobre a fosfolipase A2
(Jain et al., 1995), podendo assim, ser til no controle de processos inflamatrios tal como
artrite reumatide, asma e psorase (Waite, 1987; Wong & Dennis, 1990).
Arruda
Planta originria da Europa e comumente cultivada em nossos jardins, a Ruta
graveolens, bastante conhecida desde a antiguidade principalmente por estar ligada s
supersties populares. Pertencente famlia Rutaceae, conhecida popularmente pelos
seguintes nomes vulgares: Arruda-comum, arruda-dos-jardins, arruda-fedorenta, ruta, rutade-cheiro-forte, arruda-domstica, erva-arruda.
Apresenta-se como sub-arbusto, de cheiro forte e desagradvel, ramificado desde a
base, possui folhas alternadas e flores verde-amarelas (Correa, 1984). Figura 3.
Esta planta usada desde a antiguidade para proteger as pessoas de mau-olhado.
Com os seus ramos asperge-se gua benta sobre as multides. Muitas pesquisas
fitoqumicas foram desenvolvidas com R. graveolens.
Toda a planta, principalmente os brotos terminais e as flores, possuem entre outras
substncias, albumina vegetal, inulina e um leo voltil, rutina, amarelo-esverdeado,
espesso, amargo, de cheiro forte e desagradvel, ao qual so atribudas em grande parte as
suas virtudes medicinais (Correa, 1984).

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R. Graveolens considerada txica. Administrao oral de 5g/Kg de peso corporal
de folhas desta planta a caprinos causou tremor, dispinia, diurese frequente,
descoordenao de movimentos, ataxia e paralisia com morte aps 1 a 7 dias (Agraa et al.,
2002). Foi reportado que R. graveolens causou dermatite fototxica. Os componentes
fototxicos pertencem ao grupo de furano-cumarina e furano-quinolina (Schempp, et a.,
1999). O extrato de ter de petrleo de R. graveolens mostrou um significativo efeito
citotxico. Neste extrato foi encontrado biflavonides (Trovato, et al., 1996). Conway &
Slocumb (1979) descreveram que esta planta usada como emenagoga e abortiva.
Esta planta pode ser perigosa quando ingerida em grandes quantidades, mas possui
tambm propriedades medicinais. Ruta graveolens uma espcie promissora na produo
de furano-cumarinas, muito usadas na dermatologia (Milesi et al., 2001).
Ruta graveolens faz parte da composio de alguns fitoterpicos na forma de
infuso, sendo usado para normalizao das funes do ciclo menstrual, fragilidade dos
capilares sanguneos, combate a calvcie, ansiedade e insnia, incontinncia de urina e
priso de ventre. A extrao dos princpios ativos com azeite comestvel origina um extrato
oleoso que usado como vermfugo. Para combater a sarna e piolhos, usada na forma de
tintura e para aplicar nas varizes e sarar flebites, usada na forma de cataplasma
(http://www.Plantastoxicas.cjb.net)
Comigo-ningum-pode
Comigo-ningum-pode o nome popular dado a duas espcies do gnero
Dieffenbachia: D. picta Schott e D. seguine Schott, ambas pertencentes flora Amaznica.
As duas so polimorfas e dificilmente distinguveis na prtica. De modo geral, apresentam
caule espesso e ereto, folhas grandes, oblongas, vistosas, pecioladas, verde-escuras, com
manchas esbranquiadas de vrios aspectos (Schvartsman, 1992). Figura 4.
Rizzini & Occhioni (1957, apud Scavone & Panizza,1980), relatam as seguintes
caractersticas distintivas: 1- as folhas de D. picta apresentam mculas numerosas, muitas
vezes confluentes, espalhadas por toda a superfcie; 2 D. seguine geralmente apresenta
folhas completamente verdes, e suas nervuras so mais proeminentes.

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Estas espcies so freqentemente cultivadas como ornamentais, principalmente na
decorao de ambientes interiores devido a sua resistncia baixa luminosidade (Simes et
al., 1999). Esta uma das folhagens mais populares e um poderoso amuleto contra inveja e
mau olhado.
A natureza qumica das substncias responsveis pela toxicidade de Dieffenbachia
ainda no foi completamente esclarecida. Essas plantas, assim como outras da famlia
Araceae, tm como uma das caractersticas anatmicas a presena de um grande numero de
cristais de oxalato de clcio, na forma de agulhas, denominadas rfides, e esto contidos
dentro de clulas injetoras denominadas idioblastos (Carneiro et al.,1985).
O mecanismo da reao alrgica foi estudado experimentalmente, tendo sido
demonstrado que a ao desencadeada no apenas mecnica, mas sim mediado pela
presena de substncias de natureza lipdica constitudas de cidos graxos insaturados que
atuariam como substncias irritantes juntamente com os cristais de oxalato de clcio
(Carneiro et al., 1989). Foi apontado a presena de enzimas proteolticas envolvidas no
mecanismo de intoxicao (Rauber, 1985).
Os casos de intoxicaes mais freqentes ocorrem com crianas, devido ingesto
ou contato com a mucosa oral. Os sintomas se desenvolvem rapidamente, ocorrendo
irritao com sensao de queimadura, salivao intensa, edema dos lbios, lngua e
garganta, podendo dificultar ou impedir a fala e causar distrbios respiratrios. O contato
com a seiva do vegetal, de forma direta ou indireta, pode provocar severa irritao da pele
ou inflamao ocular, acompanhada de edema e fortes dores, as quais podem durar at
algumas semanas. Algumas vezes, ocorrem distrbios gastrintestinais, com clicas
abdominais, nuseas e vmitos (Simes et al.,1999).
O tratamento sintomtico, com administrao de lquidos gelados (guas, chs,
sucos) ou emolientes (leite, gelatina), para proporcionar alvio. Caso necessrio, so
administrados analgsicos, antiinflamatrios e anti-histamnicos, para combater a dor e o
edema. No recomendado fazer lavagem gstrica nem provocar vmito, devido
presena das microagulhas (rfides). reas irritadas por contato, como pele e olhos, devem
ser lavadas com grande quantidade de gua corrente e utilizao de colrios antisspticos,
no caso dos olhos (Simes et al., 1999).

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Figura 1 Allamanda cathartica

(alamanda)

Figura 3 Ruta graveolens

(arruda)

Figura 2 - Schinus terebinthifolius

(aroeira)

Figura 4 Diefembachia spp.

(comigo-nigum-pode)

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Copo-de-leite
Em funo do quadro toxicolgico e quimiotaxonomia, idntico ou semelhante s
espcies Dieffenbachia, essa espcie ser sumariamente descrita a seguir.
O copo-de-leite originrio do sul da frica e cultivado como ornamental,
ocorrendo tambm como espontneo em locais encharcados (Simes et al., 1999).
Conhecida cientificamente por Zantedeschia aethiopica, uma planta ornamental
muito apreciada pela sua inflorescncia. Possui espata muito branca irregularmente
campanulada, espdice cilndrico e amarelo. Grandes folhas cordiformes-sagitadas
(Schvartsman, 1992). Figura 5.
Toxicidade, formas de intoxicao, efeitos clnicos potenciais e tratamento so
semelhantes aos descritos para comigo-ningum-pode.
A partir do extrato acetato de etila e metanlico de Z. eathiopica foram isolados dois
triterpenos cicloartane, 10 esterides com o ncleo colesteno, trs lignanas e dez
fenilpropanides. Ensaios anti-alga mostraram boa atividade para alguns dos compostos
aromticos (Della Greca et al., 1998).
Coroa-de-Cristo
A espcie Euphorbia milii, conhecida pelos nomes populares coroa-de-cristo,
martrio, coroa-de-espinhos, colcho-de-noiva, dois irmos, bem casados martrios, muito
cultivada no Brasil, como ornamental e como cerca viva.
Apresenta grande nmero de esptulas rgidas e pontiagudas e pequenas flores de
colorao avermelhada. Produz uma seiva abundante e muito leitosa (Schvartsman, 1992).
Figura 6.
As espcies do gnero Euphorbia, apresentam potencial efeito moluscicida.
Teoricamente estas plantas podem ser uma soluo de baixo custo e ecologicamente correta
no controle de vetores da esquistossomose (Oliveira-Filho & Paumgartten, 2000). Porm,
as propriedades txicas inviabilizam o uso destas espcies (Cruz et al., 1996).
Das partes areas do vegetal foram isolados diterpenos denominados miliaminas de
A a I, responsveis pela ao irritante (Uemura & Hirata, 1973). Esse grupo de compostos
foi bastante estudado em funo da sua ao co-carcinognica (Marston & Hecker, 1983).

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Os casos de intoxicao mais freqentes so devido ao contato do ltex com a pele e
mucosas, podendo causar srias irritaes. As leses caracterizam-se inicialmente por
edema e eritema, evoluindo para a formao de vesculas e pstulas, normalmente
pruriginosas e doloridas. O contato do ltex ou dos dedos contaminados com os olhos,
pode provocar conjuntivite e, em casos mais graves, cegueira temporria (Simes et al.,
1999). O tratamento sintomtico.
Espada-de-so-jorge
Sansevieria trifasciata pertence a famlia Agavaceae. Herbcea rizomatosa perene
da frica, de 70-90 cm de altura com folhas espessas. So cultivadas diversas variedades de
folhas com margens creme-amareladas, de folhas curtas com manchas verde-claro
transversais, de folhas acinzentadas com manchas amareladas nas margens, entre outras.
Inflorescncias longas com flores pequenas de importncia secundria. cultivada em
vasos, no sol ou a sombra. Resiste bem a solos ridos e multiplica-se por diviso de
touceiras. Figura 7 (Byrd, 1995; Lorenzi & Souza, 1981).
Entre os supersticiosos, acredita-se que esta planta traga felicidade e fartura a quem
a cultiva.
A macerao das folhas em lcool eficaz em frices contra o reumatismo.
Cortando-se suas folhas em pedacinhos e levando-as a fervura, obtm-se uma soluo para
lavar os cabelos o que provoca uma melhor circulao do sangue no couro cabeludo. Ainda
pode ser usada para banhar o corpo todo, causando ao benfica sobre a pele (Krbes,
1995). Contudo o uso desta planta no indicado para fins medicinais principalmente
domsticos, pois trata-se de uma planta reconhecidamente txica.
Anlise fitoqumica da planta inteira resultou no isolamento de quatro glicosdeos
pregnnicos (Mimaki et al., 1997). Estes mesmos autores isolaram tambm, doze saponinas
esteroidais (Mimaki et al., 1996). Gonzlez et al. (1972) isolaram ainda, do extrato
etanlico no hidrolisado de S. trifasciata, -sitosterol e cinco sapogeninas espirostano.
Apesar destes estudos fitoqumicos, so poucos os estudos farmacolgicos para esta
espcie. A espcie S. glauca foi considerada txica a A. salina no teste de toxicidade frente
a A. salina (Franssen et al., 1997).

17
Espirradeira
Espirradeira, Oleander, Loandro, Loandro-da-ndia, Loureiro-rosa, Flor-de-so-jos,
so alguns nomes populares conhecidos para a espcie Nerium oleander L. da famlia
Apocynaceae.
Planta herbcea que chega a atingir 2 a 4 m de altura; caule cilndrico com ramos
cinzentos acastanhados; folhas opostas, pecioladas, lanceoladas, nervura principal impressa
na face superior e saliente na face inferior; inflorescncias terminais, flores geralmente
rosadas, corola grande vistosa. Frutos contendo numerosas sementes revestidas de plos
(Schvartsman, 1992). Figura 8.
Entre as vrias plantas extremamente venenosas conhecidas e que se acham em
ntimo contato com o homem e os animais domsticos, esta ocupa lugar saliente por ser
vivaz e rstica, sem maiores exigncias de clima e solo, constituindo o ideal das plantas
ornamentais, por associar a elegncia do porte, a abundncia da florao e o perfume
agradvel das flores (Correa, 1984).
As propriedades txicas desta planta so conhecidas h sculos, desde a poca dos
hebreus e egpcios. Todas suas partes so venenosas para o homem, sendo seus efeitos mais
importantes devido presena de numerosos glicosdios, alguns cardioativos (Siddiqui et
al., 1986), como a oleandrina, rosagenina, neriina D, neriina F, cortenerina, etc..
Rosagenina, extrada da casca, considerada extremamente txica, de propriedades
semelhantes s da estricnina. Da planta foram extrados tambm leos volteis, vitamina C
e glicosdies cianognicos (Schvartsman, 1992).
Oleandrina, de frmula C31H48O9, tem estrutura qumica semelhante s dos
glicosdios digitlicos e encontrada no vegetal na proporo de 0,08% (Schvartsman,
1992). Smith et al. demonstraram que o glicosdeo cardiotnico, oleandrina, eficaz em
inibir o cncer de prstata, in vitro.
O quadro txico inicia-se com manifestaes gastrintestinais incluindo nuseas,
vmitos, clicas abdominais, diarria. Distrbios neurolgicos precedem ou so
concomitantes aos cardacos e compreendem tontura, alteraes do equilbrio, midrase,
sonolncia, torpor e coma. O bito pode ocorrer por parada cardaca em sstole.

18

Figura 5 - Zantedeschia aethiopica

(copo-de-leite)

Figura 7 Sansevieria trifasciata

(espada-de-so-jorge)

Figura 6 Euphorbia milli

(coroa-de-cristo)

Figura 8 Nerium ollander

(espirradeira)

19
Hera
Originria da Europa, Norte da frica, sia e Ilhas das Canrias, Hedera helix L.
pertencente a famlia Araliceae conhecida popularmente pelo nome de hera. Seu maior
valor ser uma preciosa planta de adorno, graas sua aderncia s rochas, aos muros,
paredes e rvores, tornando-se muito empregada na jardinocultura. Estende-se pelo cho
cobrindo-o com sua densa folhagem ou prende-se aos muros e rvores por meio de razes
adventcias. Possui folhas alternas, lustrosas, verde-escuras ou manchadas de brancoacinzentado; flores pequenas, verde-amareladas; o fruto uma baga preta (Schvartsman,
1992). Figura 9.
A hera est includa no grupo das plantas produtoras de saponinas (Bedir et al.,
2000), substncias que de um modo geral tem efeitos irritantes, produzem leses celulares e
modificam a permeabilidade celular. A absoro intestinal lenta e difcil, por isso so
pouco freqentes as manifestaes sistmicas, caracterizadas principalmente por hemlise
eritrocitria (Schvartsman, 1992).
Da hera extrai-se um glicosdeo especfico hederina (Guiraud-Dauriac et al.,
1997), que particularmente abundante nos frutos e tem efeito, em pequenas doses, como
vaso-constritora e como hemoltico.
As folhas podem ser usadas, internamente, contra o catarro crnico das vias
respiratrias entre outras aplicaes medicinais (Correa, 1984). Tintura preparada a partir
do extrato seco de H. helix usada para vrias doenas do trato respiratrio, tal como
infeces crnicas e agudas e ainda para aliviar a tosse (Trute & Nahrstedt, 1994).
Os frutos so notoriamente venenosos e ingeridos em certa quantidade provocam
febre, com forte aceleramento do pulso, delrio (Correa, 1984).
Jibia
A espcie Scindapsus pictus, bastante cultivadada como planta ornamental. uma
planta semi-herbcea vigorosa, ascendente das Ilhas Salomo, com folhas espessas,
coriceas, variegadas de amarelo ou branco, grandes nas folhas idosas. Nas plantas ainda
jovens, de ramagem fina, as folhas so pequenas, sem variegao, o mesmo acontecendo
quando crescendo na sombra. As folhas jovens podem atingir de 8-10 cm, enquanto as

20
adultas podem alcanar 60 cm de comprimento. Costuma ser cultivada apoiada em
suportes, a pleno sol e como forrao em locais sombreados. Nesta ltima situao, mantm
as folhas pequenas. Dado o seu crescimento impestuoso, se apoiada em palmeiras, pode
sufoc-la, levando-as a morte. Multiplica-se facilmente por estacas que enrazam mesmo na
gua (Lorenzi & Souza, 1981). Figura 10.
Poucos estudos fitoqumicos foram feitos com esta planta. Em algumas espcies de
Scindapsus foi encontrado flavona C-glicosdeos, quercetina (flavonol) e chrysoeriol
(flavona) (Williams et al., 1981).

Figura 9 Hedera helix L.

(hera)

Figura 10 Scindapsus sp.

(jibia)
Mamona

Originria da sia Meridional e facilmente encontrada em todo o Brasil, a espcie

Ricinus communis que pertence a famlia Euforbiaceae bastante conhecida como planta
venenosa. chamada popularmente de mamona, mamoeiro, Carrapateiro, Palma-cristi.
Trata-se de um arbusto com cerca de 2m de altura, possui caule nodoso, ramificado,
folhas alternas, palmatiformes, longamente pecioladas, inflorescncias terminais, alternas,
parecendo feixes de filetes reunidos. O fruto uma noz redonda, geralmente espinhosa que
aloja as sementes (Correa, 1984). Figura 11.

21
O leo de mamona ou leo de rcino, devido a alta viscosidade e estabilidade, tem
amplo emprego industrial e tambm utilizado em alguns medicamentos como purgante
drstico (Simes et al., 1999). A semente contm uma toxalbumina, a ricina que contm
duas cadeias polipeptdicas presas por uma ligao de dissulfeto, e um corpo cristalino
nitrogenado, de frmula C8H8O2N2, chamado ricinina, que tem algumas caractersticas dos
alcalides (Schvartsman, 1992). A ricina possui diversos efeitos txicos nas clulas de
diferentes rgos viscerais. Esta protena induz o stress oxidativo, provocando toxicidade
renal (Kumar et al., 2003).
A ricina muito estvel em condies normais, no se deteriorando aps meses,
mas por ao do calor ou da luz sua ao txica diminui. Aps ingesto da semente
mastigada, a ricina rapidamente absorvida. Seu metabolismo ainda no bem conhecido.
(Schvartsman, 1992).
A intoxicao por ingesto das sementes caracteriza-se por vmitos, diarria, clicas
violentas, leses renais, distrbios neurolgicos, letargia, apnia e coma (Simes et al.,
1999). O tratamento deve ser rpido e enrgico. A estimulao de vmitos e lavagem
gstrica deve ser imediata, seguida da administrao de eletrlitos, grande quantidade de
lquidos, controle renal, sanguneo e das funes hepticas. Se necessrio, transfuso
sangunea (Simes et al., 1999).

Figura 11 Ricinus communis L.

(mamona)

22
2.3. TESTE DE TOXICIDADE FRENTE A Artemia salina
O teste de letalidade in vivo em organismos animais simples, tal como o teste de
letalidade contra Artemia salina, desenvolvido por Meyer et al. (1982), pode ser usado para
determinar a toxicidade de diferentes produtos qumicos e naturais. Este bioensaio geral
detecta uma ampla faixa de atividades biolgicas e uma diversidade de estruturas qumicas.
Artemia salina Leach um microcrustceo marinho comumente conhecido por
larva de camaro ou nauplius, pertence subclasse Branchiopoda, ordem Anostraca. Os
ovos deste crustceo podem ser facilmente adquiridos em lojas de animais marinhos, e as
larvas desenvolvem-se rapidamente em gua salgada artificial, constituindo uma facilidade
para a cultura do organismo.
Este bioensaio baseia-se na premissa de que compostos bioativos so txicos em
altas doses. Devido a grande sensibilidade de A. salina, este bioensaio est estreitamente
relacionado com a atividade biolgica geral, pois todo o composto que possui alguma
atividade, tambm apresenta certa toxicidade. Alm disso, este mtodo tem boa
reprodutibilidade e apresenta boa correlao com ensaios de citotoxicidade e antitumorais,
servindo tambm de pr-screen antitumoral (Hamburger & Hostettmann, 1991). O
bioensaio apresenta ainda correlao com testes de atividades larvicida e inseticida
(McLaughlin, 1991), antifngica, viruscida e antimicrobiana (MacRae et al., 1988),
parasiticida (Sahpaz et al., 1994) e tripossomicida (Zani et al., 1995), podendo ento, ser
usado como pr-screen para monitorar o fracionamento de extratos potencialmente
txicos, com a vantagem de no requerer tcnicas asspticas, podendo ser realizado no
prprio laboratrio de fitoqumica.

23
4. OBJETIVOS

4.1. OBJETIVO GERAL

Este projeto visa o estudo de uma variedade de plantas ornamentais, notoriamente
txicas, a fim de avaliar o grau de toxicidade frente ao bioensaio utilizando A. salina.

4.2. OBJETIVOS ESPECFICOS

i)

Fazer uma pesquisa bibliogrfica envolvendo plantas ornamentais txicas;

ii)

Coletar e identificar o material vegetal;

iii)

Obter o extrato bruto de cada planta coletada por macerao em etanol;

iv)

Realizar o teste de toxicidade frente a A. salina nos extratos obtidos, a fim de

avaliar o grau de toxicidade (valores de DL50) das diversas plantas;

v)

Realizar ensaios qualitativos para a determinao das classes de produtos

naturais presentes no extrato, atravs de marcha analtica;

vi)

Analisar atravs de estudos fitoqumicos o extrato de Zantedeschia

aethiopica (copo-de-leite).

24
5. MATERIAIS E MTODOS
5.1. Equipamentos
Para o bioensaio utilizou-se de garrafas plsticas e transparentes de refrigerante,
bombinha de aqurio, placas para os testes e pipetas automticas com as seguintes
capacidades: 5-50 L e 50-200 L.
J para o fracionamento, utilizou-se a vidraria adequada e o auxlio de um
rotaevaporador.
5.2. Substncias utilizadas
Os solventes utilizados, como o etanol e dimetilsulfxido (DMSO) entre outros, e o
tween 80 (polioxietilensorbitano monooleato), foram obtidos comercialmente.
O sal usado no controle positivo, dicromato de potssio, de grau de pureza P.A.. O
sal marinho utilizado para a produo do mar artificial foi obtido na loja de aqurios
Botiqurio. Juntamente com o sal marinho, adquiriu-se os cistos de Artemia salina, que
foram armazenados em local seco temperatura ambiente.
5.3. Coleta e identificao das espcies vegetais
As espcies aqui em estudo, foram coletadas em Florianpolis, entre os meses de
maio e dezembro de 2002, e identificadas no Departamento de Botnica da Universidade
Federal de Santa Catarina - UFSC, pelo professor Daniel de Barcellos Falkenberg.
5.4. Obteno do Extrato Hidroalcolico Bruto
Para a obteno dos extratos hidroalcolicos brutos foram utilizados cerca de 500 g
de material vegetal picado e macerado em lcool etlico de grau comercial, e
acondicionados em frascos de vidro temperatura ambiente durante quinze dias. O
macerado foi filtrado e evaporado em evaporador rotatrio sob presso reduzida

25
(temperatura ~ 65 C ). Os extratos brutos obtidos foram conservados em cmera fria
inferior a 4C e protegidos da luz.
5.5. Teste de toxicidade frente a Artemia salina
Como meio de cultura utilizou-se uma soluo de sal marinho ou salina (cerca de 20
g de sal marinho por litro gua destilada), onde filtrava-se a soluo a fim de se obter a
soluo saturada de salina.
Para a ecloso dos cistos utilizou-se uma garrafa plstica e transparente de
refrigerante com o fundo cortado, como aqurio e outra, como suporte. Fez-se uso tambm
de uma bombinha de aqurio, Figura 12. Em um litro de salina colocou-se meia colher de
caf de cistos. As larvas encontravam-se prontas para os teste de toxicidade 72 horas aps
os cistos serem colocados em meio aquoso.
Os teste de toxicidade frente a Artemia salina seguiu a metodologia de Meyer
(1982) com pequenas modificaes.

Figura 12 Sistema simulando o ambiente marinho da Artemia salina.

26
Os extratos brutos eram dissolvidos em solventes apropriados, a fim de se obter uma
concentrao final de 10.000 ppm, ento, diluies eram feitas com o objetivo de se obter a
concentrao desejada para o teste.
Em uma placa contendo 24 pocinhos colocava-se 1 mL da salina com 1% (v/v)
tween 80 em cada pocinho e de 7 a 10 larvas, que eram coletadas do meio salino utilizando
pipeta automtica. Para facilitar a coleta das larvas era aproximado uma fonte luminosa
devido ao fototropismo das mesmas.
Inicialmente, cada extrato bruto era testado nas seguintes concentraes, 100, 500 e
1000 ppm (g/mL). Para cada concentrao fazia-se trs repeties e estas eram
acompanhadas do controle positivo e negativo. Depois da anlise destes dados preliminares
as concentraes eram ajustadas conforme a necessidade. Cada extrato era testado pelo
menos duas vezes para que o resultado fornecido fosse mais confivel.
A leitura dos testes sempre foi feita 24 horas aps o incio dos mesmos. As larvas
mortas foram contadas com ajuda de uma lupa em oposio a um fundo escuro. A
concentrao letal para matar 50% das larvas aps 24 hs de exposio, a DL50 crnica foi
determinada atravs de um grfico de mortalidade (%) em funo do logartimo da dose.
O controle negativo consiste em aplicar, na mesma concentrao que o extrato
testado, apenas o solvente utilizado na dissoluo da amostra. J o controle positivo foi
feito com um sal de metal pesado, dicromato de potssio (K2Cr2O7), cuja toxicidade est
entre 20 e 40 ppm (Sam, 1993).
Utilizou-se o mtodo descrito por Reed-Muench (Ipsen e Feigl, 1970; Miya et al.,
1973), para calcular a DL50 com intervalo de confiana de 95%. Este mtodo assume que
um animal que sobrevive a uma determinada dose tambm sobreviver a uma dose menor,
conseqentemente, um animal que morre com uma certa dose tambm morrer com uma
dose maior. Assim, as informaes de uma dada concentrao podem ser somadas aos
dados de outra dose testada, mostrando que existe uma relao entre a dose testada e a
mortalidade, no sentido de quanto maior a dose, maior ser a letalidade das larvas.
Este mtodo permite o uso da frmula para a estimativa do erro padro, SE DL50.
SE DL50 = (0,79.h.R/n)1/2

27
Onde h = mdia dos intervalos entre as doses (usando o logaritmo da dose). R =
faixa interquartlico (DL75 DL25) e n = mdia do nmero de animais. O
confiana de 95% pode ser derivado da seguinte frmula:

limite

de

log DL50 2xSE DL50

5.6. Investigao qumica preliminar

Atendendo ao estudo dos possveis princpios ativos presentes nas espcies aqui em
estudo, foram realizados os ensaios qualitativos preliminares, a partir dos extratos brutos,
seguindo a marcha analtica (Domnguez, 1973; Matos, 1988; Souza, 1991), conforme
Figura 13. Esta marcha analtica permite detectar classes de metablitos secundrios de
plantas como alcalides, flavonides, terpenos, entre outros.

Identificao de alcalides:

Meyer: Dissolve-se 1,36 de cloreto de mercrio em 60 mL de gua destilada. Depois,

adiciona-se a uma soluo de 5,0g de KI e 10 mL de gua destilada. Completa-se a 100
mL com gua.

Dragendorff: Dissolve-se 8,0g de subnitrato de bismuto BI(NO3)3.5H2O em 20 mL de

HNO3 e 27,2 g KI em 50 mL de gua. Misturam-se as duas solues e deixa-se
repousando por 24 horas, completa-se com 100 mL de gua destilada.

Beltrand: Dissolve-se 5,0g de cido slico-tungstico so dissolvidos em uma soluo de

cido sulfrico 6N de 100 mL.
Estes ensaios do reaes positivas, quando se observa a formao de um precipitado

ou turbidez no tubo de ensaio.

28
Identificao de esterides, fitoesterides, glicosdeos esteroidis e triterpnicos:

Prova de Liebermann-Burchard: Mistura-se 1,0 mL de anidrido actico com 1,0 mL de

clorofrmio, resfria-se e adiciona-se uma gota de cido sulfrico concentrado. A reao
positiva quando aparece uma colorao laranja.

Prova de Rosenheinn: Uma soluo clorofrmica da substncia se pe em contato com

cido tricloroactico 90% em gua destilada. positivo para colorao violeta intensa,
que depois de 20 minutos muda para azul.
Identificao de flavonides e flavonides glicosdeos:

Os extratos alcolicos incolores ou ligeiramente amarelos de um vegetal, se tratados

com limalhas de magnsio e trs gotas de cido clordrico concentrado, observa-se
imediatamente uma colorao laranja, roxo-azulado ou violeta.
Identificao de taninos:

Cloreto Frrico: Adiciona-se 1 gota de FeCl3 1% dissolvidos em gua destilada sobre

0,2 mL de soluo aquosa da substncia (em tubo de ensaio). A reao positiva, se
aparecer uma colorao verde, azul ou pardo escuro.
Identificao de sesquiterpen-lactonas:

Prova de Baljet: Prepara-se 2 solues de volumes iguais, misturadas antes de usar.

Soluo A (1,0g de cido pcrico em 100 mL de etanol) e soluo B (10g de hidrxido
de sdio em 100 mL de gua destilada). Para 2-3 mg de composto adiciona-se 3 a 4
gotas do reativo. A reao positiva ao observar a formao de colorao laranja ou
vermelho escuro.

29
Identificao cumarinas:

Aplica-se uma gota da soluo etrea sobre um papel filtro, onde o mesmo exposto
luz ultravioleta (365nm). O teste considerado positivo com o desenvolvimento de
fluorescncia.
Identificao de leucoantocianidinas:

A 0,2 mL da soluo a se analisada adiciona-se 2-3 gotas de HCl concentrado e levase a ebulio em bico de Bunssen. A reao positiva com o aparecimento de uma
colorao vermelha.
Identificao de cidos orgnicos:

Evaporar 10 mL de soluo at a secura e adicionar 5 mL de gua destilada.

Determinar o pH da soluo, se for cido confirma-se a presena de cidos orgnicos.
Identificao de grupos fenlicos:
A 2 mL da soluo aquosa obtida acima, adiciona-se 2 gotas de soluo de FeCl3

1%. O desenvolvimento de colorao azul ou vermelha confirma a presena de fenis

5.7. Estudo fitoqumico do extrato de Zantedeschia aethiopica (copo-de-leite)

O extrato bruto de Z. aethiopica foi submetido a cromatografia em coluna de slica
gel onde utilizou-se 5 g de extrato bruto, que foi dissolvido com um mnimo de acetona e
misturado com 10 g de slica gel para formar uma pastilha contento todo o material
adsorvido slica. A eluio da coluna foi realizada utilizando o seguinte sistema de
eluentes em ordem crescente de polaridade, hexano / acetato de etila / etanol, conforme
tabela 1. As sub-fraes foram coletadas e concentradas em um evaporador rotativo sob

30
presso reduzida e transferidas para frascos menores. As fraes foram analisadas por
cromatografia em camada delgada.
As fraes que apresentaram precipitado, receberam um tratamento diferenciado, na
tentativa de isolamento dos possveis compostos. Estas fraes foram estudadas pela anlise
conjunta de dados espectroscpicos, tais como infravermelho (IV), cromatografia gasosa
(CG), ressonncia magntica nuclear de prton (RMN 1H) e carbono 13 (RMN 13C).

Tabela 1 Fraes eludas atravs da coluna cromatogrfica

Hexano (%)
100
95
90
85
80
70
60
50
20
-----

Acetato de Etila
(%)
--5
10
15
20
30
40
50
80
50
---

Etanol (%)

Fraes eluidas

------------------50
100

1-2
3-5
6-12
13-25
26-31
32-35
36-37
38-59
60-63
64-69
Final de coluna

31

Extr. Bruto
Seco

1- MeOH/H2O 1:1
2- HCl pH = 1
3- Extrao c/ ter

1- HCl 1%
2- Filtrar em celite

Filtrado cido
(B)

Resduo +

Sol. etrea

1-CHCl3
2- Na2SO4
Sesquiterpenlactonas
(Prova de Baljet)

H2O

Taninos
FeCl3

NH4OH, pH=10
ext. c/ CHCl3

Sol. aq. (D)

Sol. CHCL3

Cumarinas

Extr. CHCl3

(C)

1- Na2SO4
2- Secar

c. orgnicos

Fitoesterides
Liebermann-Burchard
Prova de Rosenheim

1- Secar
2- H2O

Esterides

Fenis
Alcalides

HCl 10%
Alcalides
- Meyer
- Dragendorff
- Bertrand

PH = 2.5 - 3

Ext. c/
CHCL3:EtOH 3:2

Flavonides Glicosdeos
Leucoantocianidinas

1- Na2SO4
2- Secar

Ext. CHCl3
(E)

Sol. aq. (F)

EtOH
Glicosdeos esterides e triterpnicos
Alcalides

Figura 13 - Fluxograma da marcha analtica

Flavonides
(HCl conc. + limanhas de
magnsio)
Leucoantocianidinas
(HCl conc., ebulio)

32
6. RESULTADOS E DISCUSSO
As plantas txicas so importantes fontes de substncias ativas, pois podem causar
intoxicao em seres humanos ou em animais, com prejuzos significativos sade pblica
e a pecuria. Segundo o Centro de Informao Toxicolgica do estado de Santa Catarina
(CIT-SC), um nmero restrito de plantas ornamentais est relacionado com a maioria das
intoxicaes, sendo que comigo-ningum-pode responde sozinho por 30% dos casos.
Plantas pertencentes a famlia Araceae (copo-de-leite, jibia, costela-de-ado, antrio) e da
famlia Euphorbiaceae (coroa-de-cristo, mamona, nogueira) seguem a lista das principais
plantas txicas.
Estudou-se onze plantas ornamentais, notoriamente txicas, quanto a classificao
botnica, toxicidade frente a A. salina e pesquisa das principais classes de metablitos
secundrios encontrados. Na Tabela 2, encontram-se listadas as espcies de plantas
identificadas, seu nome popular e cientfico e a Famlia botnica a qual pertencem.
Tabela 2 - Plantas txicas estudadas.
NOME POPULAR
Alamanda
Aroeira
Arruda
Comigo-ningum-pode
Copo-de-leite
Coroa-de-cristo
Espada-de-so Jorge
Espirradeira
Hera
Jibia
Mamona

NOME CIENTFICO
Allamanda cathartica
Shinus terebinthifolius Raddi
Ruta graveolens L.
Dieffenbachia sp.
Zantedeschia aethiopica
Euphorbia milii
Sansevieria cf. trifasciata
Nerium ollander L.
Hedera helix
Scindapsus aureus
Ricinus communis

FAMLIA
Apocynaceae
Anacardiaceae
Rutceas
Araceae
Araceae
Euphorbiaceae
Agavaceae
Apocynaceae
Araliaceae
Araceae
Euphorbiaceae

6.1. Anlise do Bioensaio utilizando A. salina

O bioensaio que utiliza Artemia salina Leach um procedimento simples, de baixo
custo e apresenta boa correlao com outros ensaios biolgicos.
Os extratos estudados neste trabalho mostraram resultados interessantes quanto a
letalidade frente a A. salina, que um bioensaio usado com sucesso para detectar

33
toxicidade de compostos ou extratos de plantas. Por este bioensaio, toma-se como base para
considerar uma planta txica, o valor DL50 < 1000 ppm (Meyer et al., 1982).
Na Tabela 3 encontram-se listados os valores de DL50 e o limite de confiana de
95% das espcies estudadas, assim como a parte da planta utilizada para fazer o extrato.
Dessas plantas, as que apresentaram maior toxicidade frente ao bioensaio com A. salina,
foram

Ruta

graveolens

(arruda),

Sansevieria

trifasciata

(espada-de-so-jorge),

Zantedeschia aethiopica (copo-de-leite), Nerium ollander (espirradeira) e Hedera helix

(hera).
Tabela 3- Resultados obtidos frente ao bioensaio com Artemia salina dos extratos brutos
das plantas txicas.
Nome popular

Partes utilizadas da
planta

Valores de DL50
(ppm)

Alamanda

Folhas e caules

Superior a 1000

Limite de confiana
95%
---------

Aroeira

Folhas e caules

Superior a 1000

---------

Arruda

Folhas e caules

741,3

660,7-831,7

Comigo-ningum-pode

Folhas e caules

Superior a 1000

---------

Copo-de-leite

Flores

870,3

729,5-1039,9

Coroa-de-cristo

Folhas e caules

Superior a 1000

---------

Espada-de-so-jorge

Folhas e caules

389,0

375,8-421,7

Espirradeira

Folhas e caules

794,3

609,5-1035,1

Hera

Folhas e caules

912,0

860,1 966,3

Jibia

Folhas e caules

Superior a 1000

--------

Mamona

Folhas, caules e sementes

Superior a 1000

---------

Os extratos de Alamanda cathartica, Schinus terebinthifolius, Euphorbia milli,

Dieffenbachia sp., Scindapsus sp. e Ricinus comunis foram os que apresentaram atividade
pouco significante (DL50 > que 1000 ppm), mostrando menor toxicidade diante deste
mtodo. Isto no significa que estes extratos sejam menos txicos, pois a toxicidade pode
estar relacionada com compostos termo- ou foto-sensveis, que no foram detectados por

34
este mtodo. Um exemplo a mamona que apresenta uma protena, a ricina que exerce
intensa ao irritante sobre a mucosa gastrintestinal, e esta pode ter sofrido desnaturao
durante o processo de evaporao do solvente. A coroa-de-cristo e comigo-ningum-pode
que causam dermatite atravs do contato com a planta, tambm no se mostraram txicos
para A. salina.
6.2. Anlise dos ensaios qualitativos para a determinao das classes de produtos
naturais presentes no extrato, atravs de marcha analtica.
A marcha analtica preliminar aplicada aos extratos brutos das espcies estudadas
mostrou que a arruda e coroa-de-cristo foram as mais ricas na diversidade de compostos
secundrios. Na tabela 4 encontram-se os resultados dos ensaios qualitativos realizados
para a determinao das classes de produtos naturais presentes nos extratos obtidos.

6.3. Anlise do estudo fitoqumico do extrato de Zantedeschia aethiopica (copo-deleite).

Foi escolhido para um estudo fitoqumico preliminar, o extrato hidroalcolico das
flores do copo-de-leite, por apresentar atividade frente a A. salina e possuir pouco estudo
fitoqumico.
O fracionamento atravs de coluna cromatogrfica e anlise atravs de
cromatografia em camada delgada levou a separao das fraes 1, 6, 7, 9 e 10, as quais
foram analisadas atravs de espectroscopia de Infra Vermelho (IV), Ressonncia Magntica
Nuclear (RMN 1H e

13

C) e Cromatografia Gasosa (CG).

A frao 1, tinha uma aparncia engordurada de cor esbranquiada. Sua anlise

atravs de cromatografia em camada delgada, revelada em iodo, mostrou apenas uma
mancha, sendo assim esta seria uma frao interessante, que mereceria a realizao de
outras anlises mais detalhadas. Foi realizada anlise por cromatografia gasosa (Anexo 1), e
seu cromatograma detectou muitos picos, mostrando a presena de vrios compostos
diferentes, que podem ser hidrocarbonetos e steres de cidos graxos de cadeia longa.

35
Como o espectrmetro de Espectrometria de Massa encontra-se desativado, no ser
possvel no momento, dar continuidade ao estudo desta frao.
As fraes 6 e 7 apresentaram-se na forma de um semi-slido de cor laranja
bastante parecidas, e foram reunidas por apresentarem semelhana em suas
cromatografias em camada delgada. Esta nova frao (6+7), foi submetida anlise em
cromatografia gasosa, que detectou trs picos bem definidos que confirmam a presena
de trs compostos majoritrios, e outros pequenos picos que podem ser compostos
minoritrios ou apenas contaminao na amostra. Anexo 2.
A frao 8 tambm estava na forma de um semi-slido, porm de cor laranja mais
intensa do que as fraes 6 e 7. Esta foi analisada em cromatgrafo gasoso (Anexo 3),
onde foi detectado a presena de um composto majoritrio. Sendo assim, a frao
apresenta um grau de pureza considervel, sendo merecedora de um estudo mais
detalhado.
As fraes 9 e 10, apresentaram suas cromatografias em camada delgadas muito
semelhantes, sendo assim reunidas, originando uma nova frao (9+10). Esta foi
submetida s tcnicas de infravermelho (Anexo 4) e cromatografia gasosa (Anexo 5). O
espectro de infravermelho mostra uma absoro em 3422,82 cm-1 caracterstica da
deformao axial de O-H, parecendo existir a sobreposio de duas bandas de O-H. A
absoro em 3009,55cm-1 caracterstica da deformao axial da ligao carbono de
dupla ligao. Duas bandas intensas absorvem na regio 2856,53 cm-1 e 2928,73 cm-1,
so caractersticas de vibraes de deformao axial de C-H (CH3, CH2 e CH). A banda
em 1738,72 cm-1 indica a presena do grupo funcional carbonila que sugere a presena
de ster. H uma banda de intensidade moderada a fraca que absorve em
aproximadamente em 1630 cm-1, que corresponde a vibraes de deformao axial de
C=C de alcenos no-conjugados. As absores em 1458,81 cm-1 e 1376,10 cm-1 tambm
so caractersticas da deformao da ligao C-H. A absoro em 1170,78 cm-1
caracteriza a deformao axial da ligao C-O, que pode ser de lcool ou de ter.
Atravs da cromatografia gasosa constatou-se a presena de trs compostos majoritrios.
Esta frao (9+10), foi purificada aps ter seu sobrenadante separado, e sua
recristalizao, apresentou um precipitado de leve colorao laranja. Uma nova anlise
de cromatografia gasosa (Anexo 6), detectou no mais uma mistura de trs compostos

36
majoritrios, mas uma frao de maior pureza, representada por um pico mais intenso e
bem mais definido, alm de vrios outros menos intensos. Tambm foi realizada uma
nova anlise de infravermelho (Anexo 7), que mostrou-se muito parecido ao anterior,
salvo uma maior diferena na intensidade entre a banda caracterstica de carbonila (que
sugere ser de ster, 1740,02 cm-1) e as bandas duas bandas que absorvem na regio
2854,11 cm-1 e 2927,38 cm-1, caractersticas de vibraes de deformao axial de C-H
(CH3, CH2 e CH).
A ressonncia magntica nuclear de prton, mostrou a presena de hidrognio
ligado a carbono de dupla trissubstituda em 5,36 ppm, hidrognio ligado a C-O em 3,73
ppm. Em 2,11 ppm e 2,01 ppm observa-se picos relativos a hidrognios allicos e alfacarbonlicos, respectivamente. A presena de grande quantidade de sinais na regio entre
1,53 a 0,67 ppm indicativo da presena de hidrognios de CH, CH2 e CH3 (Anexo 8).
A anlise por ressonncia magntica nuclear de

13

C (Anexos 9.1 e 9.2) mostra um

pico em 174,6 ppm relativo a carbonila de ster e no intervalo de 122,4 ppm 141,4
ppm a existncia de 8 tomos de carbono que representam carbonos com dupla ligao.
Na regio entre 62,1 ppm at 72,5 ppm aparecem cinco picos que representam o
deslocamento qumico da ligao C-O, que pode ser de ster ou lcool. Percebe-se
tambm a presena de vrios tomos de carbono do tipo CH3, CH2 e CH.
O espectro, DEPT 90 (Anexo 10), mostra a presena de 18 tomos de carbono CH,
sendo que destes, oito fazem dupla ligao e outra informao importante a presena
de trs tomos de carbonos ligados a oxignio (CH-O). O DEPT 135 (Anexo 11), mostra
a presena de trs tomos de carbono terminais ligados a oxignio (CH2-OH).
Considerando que estudos fitoqumicos realizados no extrato de Zantedeschia
aethiopica foram isolados diferentes esterides das fraes menos polares (Della Greca,
1998), as anlises espectroscpicas de IV, RMN 1H e RMN

13

C , sugerem a presena de

esteris na frao analisada. A presena do grupo CH2-OH no espectro de DEPT 135,

mostra a possvel presena de um esterol diferente dos isolados ateriormente (Della
Greca, 1998). Portanto, mais estudos so necessrios no sentido de isolar e identificar
este composto, com aplicao posterior do teste de toxicidade frente a Artemia salina.

37
TABELA 4 Resultados dos ensaios qualitativos realizados para a determinao das
classes de produtos naturais presentes nos extratos obtidos.
Classes de
produtos
naturais
Taninos
Sesquiterpenlactonas
Cumarinas
Ac.
Orgnicos
Fenis
Fitoesteris
Esterides
(CHCl3)
Alcalides
(CHCl3)
Alcalides
(aq.)
Flavonides
(aq.)
Leucoantocianidinas
(aq.)
Flavonides
Glicosdeos
(CHCl3)
Leucoantocianidinas
(CHCl3)
Glicosdeos
esterides e
triterpnicos
Alcalides
(CHCl3)

10

11

+
+

+
+

+
+

+
-

+
-

+
+

+
+

+
+

+
+

+
+

+
+

+
+

+
+

+
+

+
+

+
+

+
+
+

+
+
-

+
+
-

+
-

+
+
-

+
+
+

+
+

+
+

+
+
-

+
-

+
+
-

1 = Alamanda, 2 = Aroeira, 3 = Arruda, 4 = Comigo-ningum-pode, 5 = Copo-de-leite, 6 = Coroa-de-cristo,

7 = Espada-de-so-jorge, 8 = Espirradeira, 9 = Hera, 10 = Jibia, 11 = Mamona,
(+) = Presena, (-) = Ausncia.

38
7. CONCLUSES
O bioensaio utilizando o teste de letalidade de Artemia salina Leach, como
parmetro para a avaliao da toxicidade geral, apresentou-se vivel, barato, rpido e
simples, pois no so necessrias tcnicas asspticas, equipamentos ou treinamento
especial.
Das onze plantas submetidas a este bioensaio, apenas cinco apresentaram valor
significativo de toxicidade frente a A. salina, foram estas: Ruta graveolens (arruda),
Sansevieria trifasciata (espada-de-so-jorge), Zantedeschia aethiopica (copo-de-leite),
Nerium ollander (espirradeira) e Hedera helix (hera).
Os extratos de Alamanda cathartica, Schinus terebinthifolius, Euphorbia milli,
Dieffenbachia sp., Scindapsus sp. e Ricinus comunis, no mostraram toxicidade diante do
bioensaio com A. salina. Porm, para estes extratos inativos, a toxicidade pode estar
relacionada com compostos termo- ou foto-sensveis, que no foram detectados por este
mtodo. A inatividade pode estar associada ainda, a sazonalidade, a idade e parte usada
destas plantas.
O ensaio qualitativo, feito atravs da marcha analtica pode servir no auxlio de
posteriores anlises fitoqumicas mais avanadas dos extratos vegetais.
As anlises fitoqumicas preliminares de Zantedeschia aethiopica, em conjunto com
anlises espectroscpicas sugeriram a presena de esteris nas fraes menos polares da
cromatografia em coluna.

39

8. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
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42
9. ANEXOS

Figura 14 (anexo 1) Cromatografia gasosa da frao 1.

Condies de anlise: Coluna CBP20; temperatura da coluna: 200C; temperatura do detector:
235C; temperatura do injetor: 235C; temperaturas inicial e final: 60C 295C (10C/min.); solvente:
Diclorometano.

Figura 15 (anexo 2) Cromatografia gasosa da frao (6+7).

Condies de anlise: Coluna CBP20; temperatura da coluna: 200C; temperatura do detector:
235C; temperatura do injetor: 235C; temperaturas inicial e final: 60C 295C (10C/min.); solvente:
Diclorometano.

43

Figura 16 (anexo 3) Cromatografia gasosa da frao 8.

Condies de anlise: Coluna CBP20; temperatura da coluna: 200C; temperatura do detector:
235C; temperatura do injetor: 235C; temperaturas inicial e final: 60C 295C (10C/min.); solvente:
Diclorometano.

Figura 17 (anexo 4) Infravermelho da frao (9+10), em pastilha de KBr.

44

Figura 18 (anexo 5) Cromatografia gasosa da frao (9+10).

Condies de anlise: Coluna CBP20; temperatura da coluna: 200C; temperatura do detector:
235C; temperatura do injetor: 235C; temperaturas inicial e final: 60C 295C (10C/min.); solvente:
Diclorometano.

Figura 19 (anexo 6) Cromatografia gasosa da frao purificada (9+10) .

Condies de anlise: Coluna CBP20; temperatura da coluna: 200C; temperatura do detector:
235C; temperatura do injetor: 235C; temperaturas inicial e final: 60C 295C (10C/min.); solvente:
Diclorometano.

45

Figura 20 (anexo 7) Infravermelho da frao purificada (9+10), em pastilha de KBr.

Figura 21 (anexo 8) Ressonncia Magntica Nuclear de 1H da frao purificada (9+10), em CDCl3.

46

Figura 22 (anexo 9.1) Ressonncia Magntica Nuclear de

MHz em CDCl3.

13

Figura 23 (anexo 9.2) Ressonncia Magntica Nuclear de

MHz em CDCl3.

13

C da frao purificada (9+10), 200

C da frao purificada (9+10), 200

47

Figura 24 (anexo 10) DEPT 90 da frao purificada (9+10), em CDCl3.

Figura 25 (anexo 11) DEPT 135 da frao purificada (9+10), em CDCl3.

48