CICLO ESTRAL

La mayoría de los mamíferos tiene una temporada específica para aparearse y

cuando una hembra acepta al macho y copula se dice que está en calor o en estro. El
tiempo de duración y las manifestaciones externas del estro difieren en las diversas
especies animales, pero un hecho común es la disponibilidad de la hembra para
aceptar al macho.

En los mamíferos domésticos el estro suele coincidir con la ovulación (la vaca es
una excepción, ya que la ovulación ocurre de 10 a 11 horas después que el estro ha
terminado), para asegurar que los ovocitos y espermatozoides estén presentes a un
mismo tiempo para mantener una tasa alta de fertilización, ya que la vida del ovocito
después de la ovulación y del espermatozoide dentro del tracto reproductor femenino es
corta. La duración del ciclo estral y del estro varía en cada especie. Muchos animales
además, despliegan cambios en sus patrones conductuales y características físicas
externas.

El periodo durante el cual el tracto genital presenta una serie de cambios

morfológicos y funcionales, determinados por la influencia de hormonas hipofisiarias
(FSH y LH) y ováricas (estrógenos y progesterona), han permitido distinguir las fases
del ciclo estral: Proestro, estro, metaestro y diestro.

En algunos casos (vaca, cerdo, rata, ratón) los ciclos suelen suceder
ininterrumpidamente mientras no haya preñez, estos animales son poliestrales
continuos. En otros, los estros tienen relación con periodos o estaciones de
reproducción y presentan dos, tres o cuatro ciclos en cada periodo de reproducción, a
éstas especies se les conoce como poliestrales estacionales. Los que sólo tienen un
ciclo en cada periodo de reproducción son monoestrales estacionales. En ambos los
periodos de reproducción están separados por una fase llamada anestro, durante la
cual no se presenta el ciclo estral y se caracteriza por el predominio de leucocitos en el
frotis vaginal.

En mamíferos rumiantes, algunos ungulados y perisodáctilos, el epitelio vaginal

no refleja la actividad ovárica.

La determinación de la fase del ciclo estral se lleva a cabo mediante la toma de

un frotis vaginal, donde es posible observar los cambios citológicos de las células de
descamación de la vagina.

En la rata podemos encontrar tres tipos de células: Células epiteliales

superficiales queratinizadas, células epiteliales basales y leucocitos polimorfonucleares.
 Representación esquemática de las fases del ciclo estral en la rata, donde se señalan
algunas características distintivas de cada fase (Tomado de Hafez, 1970).

Durante el proestro el epitelio de la vagina se engrosa, como resultado de la

proliferación de las capas profundas, siendo las capas superficiales aún nucleadas,
mientras que por debajo de éstas aparecen células con gránulos de queratohialina.

En el estro el epitelio vaginal engrosado se queratiniza en sus capas más

superficiales y las células tienen una apariencia cornificada. Este periodo se caracteriza
por la aceptación del macho por la hembra.

Si el animal no copula entra en metaestro. Durante este periodo el epitelio

vaginal se adelgaza, desaparece la membrana basal y los leucocitos
polimorfonucleares invaden el epitelio.

En la etapa siguiente, el diestro, el epitelio vaginal aún es delgado y los

leucocitos llegan hasta las capas superficiales del epitelio vaginal.

OBJETIVO
Determinar las etapas del ciclo estral en la rata por medio de frotis vaginal.

MATERIAL
Ratas o ratonas sexualmente maduras
Solución salina isotónica
Solución de lugol
Pipeta Pasteur o puntas de micropipeta
Bulbos
Portaobjetos y cubreobjetos
Microscopio óptico
PROCEDIMIENTO
I. Localiza el orificio vaginal e introduce en la vagina la punta de una pipeta Pasteur con
aproximadamente 0.15 ml de solución salina.
Presiona el bulbo para introducir la solución
salina y permite que el bulbo recobre su forma
original para que de esta manera se reabsorba la
solución (No debes introducir aire durante el
procedimiento, ya que esto puede causar
infecciones, ni estimular mucho la vagina porque
se puede producir pseudopreñez).

Ubicación del orificio vaginal que se encuentra en

posición posterior al orificio anal (Tomada de Hafez,
1970).

Deposita una gota de la solución que ha lavado

la vagina sobre un portaobjetos perfectamente limpio, agrega una gota de lugol y coloca
un cubreobjetos perfectamente limpio (Evita tocar con los dedos la punta de la pipeta y
los cubreobjetos, ya que las células que se descaman de nuestra piel pueden interferir
en la interpretación del frotis).

Finalmente, observa al microscopio y determina la fase con ayuda del esquema

donde se aprecian cada una de las etapas.

II. Cuestionario:
1. ¿Qué son los ciclos reproductivos?
2. ¿Qué factores afectan las temporadas reproductivas?
3. Elabora un cuadro comparativo donde se muestren ejemplos de temporadas
reproductivas para las distintas clases de vertebrados.
4. ¿Qué tipo de folículo debe estar en relación con la etapa observada en el frotis?¿Por
qué?
5. ¿Qué diferencias existen entre el ciclo estral y el ciclo menstrual?
6. ¿Explica cuál es la importancia de conocer el ciclo estral en mamíferos no primates?

BIBLIOGRAFÍA
• Austin C. R. y Short, R. V. 1982. Células germinales y fertilización. La Prensa
Medica Mexicana, S. A.
• Hafez, E. S. 1970. Reproduction and breeding techniques for laboratory animals.
• Van, Tienhoven A. 1983. Reproductive physiology of vertebrates.
 ANÁLISIS SEMINAL

El plasma seminal en el cual se encuentran los espermatozoides durante la

eyaculación provee de nutrientes, capacidad amortiguadora y actúa como un vehículo
fluido para la transferencia de espermatozoides del aparato reproductor masculino al
femenino. Es una mezcla de secreciones de las glándulas accesorias. Su volumen y
composición son variables entre las diferentes especies de vertebrados.

Posición de las glándulas

sexuales accesorias.

Los fluidos seminales son una solución fisiológica, la cual estimula tanto la
movilidad como el metabolismo del espermatozoide salido del epidídimo. También tiene
capacidad amortiguadora para combatir la condición ácida de la vagina, la presencia de
prostaglandinas por ejemplo, puede generar contracciones en el aparato reproductor
femenino para ayudar al transporte de espermatozoides. El pH del plasma seminal es
alrededor de 7.0, debido a la presencia amortiguadora del bicarbonato, ácido cítrico,
proteínas y aminoácidos.

Algunos animales como las aves, producen poco plasma seminal (0.3 ml) con
una alta concentración de espermatozoides (7x106/µ l). El toro generalmente eyacula 4
ml o más, pero la densidad de espermatozoides es baja (1x106/µ l). El volumen
promedio en el humano es de 3 ml, con una densidad ligeramente por debajo de 100
000 células/µ l.

Una característica única de los espermatozoides eyaculados u obtenidos del

epidídimo de mamíferos, es que no son capaces de fertilizar a un ovocito, debido a que
necesitan ser capacitados en el tracto reproductivo de la hembra. La capacitación
involucra la pérdida de proteínas de superficie y depende de la composición del
ambiente del tracto reproductivo de la hembra.
 Características de los
espermatozoides durante su
paso por el epidídimo humano

OBJETIVO
1. Conocer las características del semen humano
2. Observar los cambios en la movilidad espermática de gametos en epidídimo de ratón

MATERIAL
Bata
Guantes
Semen fresco obtenido en un frasco limpio
(después de un periodo de abstinencia de 3-6 días)
Epidídimo de ratón o rata
Pipetas Pasteur
Pipetas de 1 ml
Pipeteador
Bulbos
Portaobjetos y cubreobjetos
Papel seda
Papel indicador de pH
Micropipetas
Puntas para micropipeta de 200 y 1000 µ l
Formaldehído al 3.5%
Eosina amarillenta al 2% en PBS (0.1M pH 7.9)
Aceite de inmersión
Cámara incubadora a 37°C
PBS 0.1 M pH 7.9
Cámara de Neubauer
2 Microscopios ópticos por equipo
Jeringa de plástico de 10 ml sin aguja o probeta de 10 ml
Hipoclorito

PROCEDIMIENTO
I. Examen macroscópico inicial:
Antes de iniciar algún procedimiento con las muestras los integrantes del equipo
deberán ponerse guantes. Las muestras se incuban a 37°C hasta su licuefacción, ya
que inmediatamente después de su obtención éste se coagula, para posteriormente
realizar el análisis seminal. Los parámetros a valorar son: volumen, color, movilidad,
concentración, morfología y viabilidad.

Volumen: Con una jeringa o una probeta mide la cantidad de semen obtenido.

Observa el color de la muestra y determina el pH con ayuda del papel indicador de pH.
Observa bien el aspecto de la muestra (si existe o no la presencia de sangre o color
diferente al normal, demasiados grumos, etc.)

Determina la consistencia: Con ayuda de una aguja determina la filancia, esto es, jala la
muestra para formar un hilo.

Licuefacción: Si es posible determina el tiempo de aparición del coágulo desde el

momento de obtener la muestra.

II. Examen microscópico:

Movilidad espermática: Analiza una alícuota de 10 µ l de semen, puesta directamente
en un portaobjetos, coloca un cubreobjetos de 22x22 mm. Valora 100 espermatozoides
para obtener el porcentaje de cada grado.
Movilidad normal, si la movilidad total es mayor del 60% (Grados A y B)
Grado A ó movilidad progresiva rápida, comprende a los que atraviesan el campo con
movimientos de traslación rápidos y lineales.
Grado B ó movilidad progresiva lenta, incluye a los espermatozoides con movimientos
lentos o aquellos que pese a moverse rápidamente no progresan en su movilidad.
Grado C ó con movilidad no progresiva, aquellos que se mueven en su lugar.
Grado D, comprende a los inmóviles que a través de estudios de viabilidad se pueden
diferenciar de los muertos.

Viabilidad: Coloca 10 µ l de muestra y 10 µ l de eosina amarillenta al 2% en PBS 0.1M

pH 7.9, en un portaobjetos. Cuenta 100 espermatozoides y diferencia los vivos sin teñir
de los muertos teñidos.

Recuento de espermatozoides o concentración

espermática: La cuenta de espermatozoides se
realiza mediante la lectura en la cámara de
Neubauer bajo el microscopio con el objetivo
40x utilizando diluciones de la muestra original
(1:10, 1:100) en formaldehído al 3.5%, para
fijarlos y evitar que se muevan durante el
conteo, asegurando así que la lectura sea más
precisa. El volumen de la cámara es de 0.0001
ml en la parte central de los recuadros
pequeños. Se cuentan las cabezas únicamente
de los espermatozoides dentro de los cuatro
cuadros marcados en la figura, que no estén
entre dos cuadros. El valor obtenido de
espermatozoides se multiplica por 5 para saber
cuantos hay en 0.0001. Realiza el cálculo de cuantos espermatozoides hay en 1 ml,
considerando las diluciones hechas.

Volumen= Area x Altura

Volumen= 1mm2 x 0.1mm=0.1mm3

0.1mm3= 0.0001 ml

Aspecto de la Cámara de Neubauer

Morfología: De los espermatozoides fijados (utilizados en el parámetro anterior), coloca

10 µ l de muestra en un portaobjetos y observa al microscopio con el objetivo 100x.
Valora 100 espermatozoides y clasifícalos en normales, con defectos de la cabeza,
defectos de flagelo y defectos de la pieza intermedia, para obtener los porcentajes de
morfología.

Morfología espermática: A) Alteraciones de la cabeza, B) Alteraciones de la pieza

media, C) Alteraciones de la cola del espermatozoide (Tomado de Pomerol y Arrondo,
1994).

III. Movilidad de los espermatozoides en el epidídimo:

Para determinar cambios de movilidad de espermatozoides obtenidos de las diferentes
partes del epidídimo de ratón, hazlo conforme al primer punto del apartado II.
Parámetros normales
La espermatobioscopia se divide en dos partes, examen microscópico y macroscópico.

Los valores normales del análisis macroscópico inicial son:

ASPECTO: Gris-opalescente y homogéneo, la presencia de hilos sanguinolentos y otro
color indican probables infecciones venéreas o uretrales.
LICUEFACCION: En algunos casos completa en 60 minutos, menos de 30 anormal (Sin
presencia de coágulo, problemas de glándulas accesorias)
VOLUMEN: En población mexicana 2-4.4 ml, normal.
CONSISTENCIA: Goteo con jeringa forma un hilo de no más de 2 cm, normal (Mayor a
este valor, demasiada viscosidad con probables problemas infecciosos o prostáticos).
pH: Normal entre 7.2 y 7.8 (Medir antes de una hora). Un pH menor indica
azoospermia, mayor a este rango probable infección.

Examen microscópico:
CONCENTRACIÓN: Normal 20 x106, aunque se puede considerar normal arriba de
50x106 por mililitro.
VIABILIDAD: 75% ó más espermatozoides vivos.

ANÁLISIS CELULAR:
Tipos de células presentes: La presencia de células de la línea espermática inmaduras,
leucocitos (más de 1x106/ml), eritrocitos, neutrófilos o eosinófilos, bacterias, células
epiteliales, es anormal y sugiere la presencia de probable infección de glándulas
accesorias.
Presencia de aglutinación: Espermatozoides pegados por la cabeza, cola con cola,
pieza intermedia con pieza intermedia u otras combinaciones, puede indicar la
existencia de alguna causa de infertilidad.
Morfología: Es normal un 30% ó más con morfología normal. El porcentaje de
malformaciones no debe exceder el 2%, un mayor porcentaje puede indicar problemas
genéticos o farmacológicos en la línea espermática o en la espermatogénesis.
(Datos tomados del Manual de laboratorio de la OMS para el examen del semen
humano. Ed. Panamericana, 3ª edición, Buenos Aires, Argentina.)
 Formulario de registro de muestra para análisis de semen
Aspecto
1. Normal 2. Anormal
Licuefacción
1. Normal 2. No hay licuefacción
Consistencia
1. Normal 2. Anormal
Volumen (ml)
pH
Motilidad (100 espermatozoides)
a) Progresión lenta a)
b) Progresión lineal lenta o no lineal b)
c) Motilidad no progresiva c)
d) Inmóviles d)
Viabilidad (%vivos)
Concentración de espermatozoides por ml
Morfología
Cabeza
% normales
% ovales grandes
% duplicados/dobles
% amorfos
% redondos
% en alfiler
Pieza intermedia
% normales
% gota citoplásmica
Cola
% normales
% anormales (cola doble, enrollada)
Células germinales inmaduras

IV. Cuestionario:
1. ¿Cuál es la importancia de hacer un análisis seminal?
2. ¿Qué importancia tiene la capacitación espermática?
3. Elabora los esquemas necesarios para observar todas las estructuras internas y
externas de un espermatozoide.
4. ¿Qué es la licuefacción del semen?
5. ¿En qué sitios puede ocurrir la inseminación en los vertebrados?

BIBLIOGRAFIA
• Hing-Sing Yu. 1994. Human Reproductive Biology. CRC Press, Inc.
• Mann T. Y Lutwak-Mann C. 1981. Male reproductive function and semen.
• Pomerol Monseny, J. M., Arrondo Arrondo, J. L. 1994. Práctica Andrológica.
Ediciones Científicas y Técnicas, S. A.