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CREATININA

MÉTODO COLORIMÉTRICO PARA LA DETERMINACIÓN DE CREATININA EN SUERO CON


DESPROTEINIZACIÓN Y EN ORINA

SIGNIFICACIÓN CLÍNICA: material Jaffé reactivo de los eritrocitos, la muestra


de suero puede conservarse hasta 24 horas a 4 ºC.
La determinación de niveles séricos de creatinina, * ORINA: obtener en recipiente limpio orina de 24
producto de degradación de la creatina, se utiliza horas, guardandola en la heladera durante la
como índice de funcionalismo renal, dado que su recolección. Medir la diuresis, tomar una alícuota y
eliminación se efectúa a través del riñón y casi efectuar una dilución 1/50 de la misma (1+ 49).
exclusivamente por filtración. Si se trabaja con una diuresis de 2 horas multiplicar
el volumen de diuresis por 12 para calcular la
FUNDAMENTOS DEL METODO: cantidad de creatinina eliminada durante 24 horas.

El método se basa en la reacción de Jaffé, TÉCNICA OPERATORIA:


aprovechándose también al ácido pícrico como 1-Desproteinización: (para suero)
desproteinizante. Se mide fotocolorimétricamente a En un tubo de centrífuga colocar 0.75 ml de suero y
510 nm la absorbancia del cromógeno formado por 3.75 ml de Acido pícrico. Mezclar por inversión, dejar
la reacción entre la creatinina y el picrato alcalino reposar durante 10 minutos y centrifugar como
previa desproteinización con ácido pícrico. mínimo 5 minutos a 3000 rpm.
2- Reaccion de color:
REACTIVOS PROVISTOS:
Desprot Orina
Estos reactivos son para USO IN VITRO y estan Blanco . (dil.)
listos para usar. Standard Suero
♦ Acido Picrico: solución de ácido pícrico 0.040 Desprot. --- --- 3.0 ml ---
mol/l. Standard --- 0.50 ml --- ---
♦ Hiróxido de sodio: solución de hidróxido de sodio H2O dest. 1.25 ml 0.75 ml --- 0.75 ml
1 mol/l. Orina dil. --- --- --- 0.50 ml
♦ Standard: solución acuosa de creatinina de 20 Ac.Pícrico 1.75 ml 1.75 ml --- 1.75 ml
mg/l. Sol.NaOH 0.50 ml 0.50 ml 0.50 ml 0.50 ml
Mezclar por inversión y dejar los tubos a 25 ºC durante
PRESENTACION: 20 minutos. Leer en espectrofotómetro en las siguientes
condiciones:
Este equipo se presenta para 120-200 - Long. de onda: 510 nm o filtro verde (500-540).
Determinaciones, conteniendo: - Cero de absorbancia: agua destilada.
# 440 ml de Acido Pícrico.
# 100 ml de Hidróxido de sodio. Microtécnica: puede trabajarse si se desea con menor
# 10 ml de Standard. cantidad de muestra, desproteinizando 0.4 ml de suero con
2 ml de sol. de ácido pícrico. Del sobrenadante se toman
ESTABILIDAD: 1.5 ml y se le adicionan 0.25 ml de sol. de hidróxido de
sodio. El blanco y el standard se procesan en forma
Estos reactivos son estables a temperatura habitual.
ambiente (< 25 ºC), y al abrigo de la luz , hasta la
fecha de vencimiento indicada en la caja. Se CALCULO DE RESULTADOS :
recomienda no exponer los mismos a temperaturas
*En suero:
elevadas (> a 35 ºC) durante tiempos prolongados.
creatinina mg/l = 20 mg/l . Amuestra
Astandard
MUESTRA:

creatinina umol/l = 177 umol/l . Amuestra


* SUERO: la determinación debe efectuarse sobre
Astandard
suero fresco, nunca sobre sangre total, debido al

SOCIEDAD DE BIOQUÍMICOS DE SANTA FE. AVENIDA URQUIZA 2657-3000 SANTA FE.TE/FAX (0342) 455-2708.

e-mail: sbstafe@ceride.gov.ar
*En orina: BIBLIOGRAFÍA :
creatinina en
orina g/24 horas = 0.020 g/l . 50 . V . Amuestra • Henry, R.J. Química Clínica. Bases y Técnicas.
Astandard 1980.• Biggs, H.G., Cooper, J. Clin. Chem. 7:6
Donde : - 50 es el factor de dilución. (1961).
- V es la diuresis expresada en litros/24 • Antoñanzas, J., Laboratorio, 33:66.(1978).
horas.

creatinina en
orina mg/l = 20 mg/l . 50 . A muestra
A standard

*Aclaramiento de creatinina o depuración de


creatinina endógena:
D.C.E. ml/min = creat. en orina (mg/l) . Diuresis 24 hs
(ml)
creat. en suero (mg/l) . 1440 min

VALORES DE REFERENCIA :

En personas adultas:
* suero: 7-14 mg/L ó 62 a 124 umol/l.
* orina: 0.9- 1.5 g/24 horas ó 8 a 13 mmol/24 hs.
* D.C.E: 80-140 ml/min ó 1.33 a 2.33 ml/s.

RENDIMIENTO ANALITICO:

* Linealidad: se verifica hasta 40 mg/l, cuando se


supere este valor, diluir la solución coloreada final
1:2 con el blanco de reactivos.
* Reproducibilidad: se observan para replicados de
una misma muestra coeficientes de variación del
orden de 1.8%.
* Especificidad: no interfiere la hemólisis ligera o
moderada. De haber aceto -acetato en la muestra,
debe procederse a su eliminación calentando a
ebullición durante 5 minutos, una vez agregado el
ácido pícrico (antes de centrifugar).

OBSERVACIONES :

* La reacción es muy sensible a al temperatura,


razón por la cual debe mantenerse la misma lo más
cercana posible a los 25 ºC.
* Si después de realizar la desproteinización con
el ácido pícrico se observan escasas partículas en
el sobrenadante, las mismas no interfieren en la
determinación.

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