UNIVESIDAD MICHOACANA DE SAN NICOLAS DE

HIDALGO
FACULTAD DE QUIMICO FARMACOBIOLOGIA

ANTÍGENO “H” FLAGELAR DE

SALMONELLA ENTÉRICA
 INTRODUCCIÓN
Salmonella pertenece a la familia Enterobacteriaceae, formado por bacilos
gramnegativos, anaerobios facultativos, con flagelos perítricos y que no
desarrollan cápsula (excepto la especie S. typhi) ni esporas.
Son bacterias móviles que producen H2S. Fermentan glucosa, pero no lactosa,
y no producen ureasa. Tiene una estructura antigénica con tres tipos
de antígenos:
1. Antígeno somático (O)
2. Antígeno flagelar (H) o (d)
3. Antígeno capsular o de envoltura (Vi) o (K)
(específico para Salmonella typhi, dublin, y
paratyphi C)
 FUNDAMENTO
ANTÍGENOS PARTICULADOS
 AGLUTINACIÓN
Los principios son los mismos que en la precipitación, la
diferencia radica en que en este caso el Ag no es soluble sino
particulados.

La formación de las redes dará como consecuencia agregados en

forma de grumos
El Ag no en el en
se encuentra fondo del tubo.
solución sino en
suspensión y al ser una partícula grande, se
formen o no los agregados, sedimentará; la
diferencia entre una reacción negativa, donde lo
que vemos en el sedimento es sólo el Ag y una
positiva, donde se forman los complejos, esta
dada por la característica visual del sedimento
que, en el primer caso será un botón homogéneo
de células y en el segundo serán grumos.
 SEMICUANTITATIVA
Esta técnica se realiza normalmente en microtubos o placas de
fondo en U y consiste, al igual que en el caso de la precipitación,
en colocar concentraciones constantes de uno de los reactivos en
contacto con concentraciones variables del reactivo a determinar.
 Recordemos que…
Las reacciones antígeno-anticuerpo tienen diversas consecuencias y
existen varios tipos de reacciones:

Relación de Aglutinación
 En las reacciones de aglutinación, un anticuerpo puede unirse a la vez
a dos antígenos, asimismo cada antígeno puede unirse a varios
anticuerpos y formar un entramado de complejos antígeno-anticuerpo.
TÉCNICAS
 AGLUTINACIÓN EN
MICROPLACA
Sirve para determinar el titulo de anticuerpos.
Todos los pocillos contienen una suspensión
antigénica celular. En las diferentes filas(A-H) se han
añadido volúmenes iguales de diluciones dobles
seriadas del suero problema. Si existen anticuerpos
suficientes como para aglutinar las células, el
entramado cae al fondo del pocillo a modo de
película. NUMERO DE POCILLO DILUCION
1 1:2
2 1:4
3 1:8
4 1:16
5 1:32
6 1:64
7 1:128
8 1:256
9 1:512
10 1:1024
11 Testigo antisuero
12 Testigo antígeno
 AGLUTINACIÓN EN TUBO
Es una prueba lenta, ya que luego de mezclar en el tubo la suspensión del
antígeno con el suero, debe incubarse en estufa a 37°C durante 48 hrs.

CONSIDERAR QUE: todos los tubos tienen el mismo volumen de antígeno y que las
diluciones del suero son: ½ ,1/4, 1/8, 1/16…1/1024. Si se observa un aglutinado en el fondo
del tubo y liquido claro es una reacción negativa.
METODOLOGÍA
 PREPARACIÓN DEL ANTÍGENO
FLAGELAR
* Inocular 100 ml de caldo de
soya tripticasa con la cepa
de Salmonella entérica
incubar (37°C / 18-24 hrs.)
*Agregar formaldehido a una
concentración final del
0.3%. (T°Amb. 24-48 hrs.)
*Cosechar el cultivo por
centrifugación a 3000 rpm/
30 min.
 PREPARACIÓN DEL ANTÍGENO
FLAGELAR
*Desechar sobrenadante y
resuspender el sedimento
bacteriano en sol. Salina
formalinizada al 0.3%
(igualar la turbidez con el
tubo No.3 del nefelómetro de
Mcfarland).
*Probar la esterilidad del
producto biológico. (Sembrar
en caldo de soya tripticasa).
Incubar a 37°C /24 hrs.
*En vasar la suspensión en un
frasco ámpula esteril y
mantenerlo en refrigeración.
OBTENCIÓN DEL SUERO
TESTIGO
INMUNIZACIÓN DEL CONEJO

Se realiza en las
venas, las cuales
están
representadas en
el borde exterior
de la oreja del
conejo, se tiene
varias opciones Aplicación Dias Fecha Dosis
para poder 1 0 5/10/2010 0.5 ml
inocularlo. 2 4 10/10/2010 1 ml
3 8 14/10/2010 2 ml
4 12 18/10/2010 3 ml
5 16 27/10/2010 3 ml
Sangrado 18 3/11/2010 10 ml
OBTENCIÓN DEL ANTISUERO

*Obtener de 10 a
50 ml de sangre
del corazón
*Separar suero
(centrifugar a
3000rpm/10´).
*Utilizar el
antisuero para
realizar la
titulación
correspondiente
OBSERVACIONES Y
RESULTADOS
 REACCIONES DE AGLUTINACIÓN
EN TUBO
DILUCION
1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512 1:1024 TESTI Testigo
GO antigen
antisue o
ro
SOLN. 0.2ml 0.2ml 0.2ml 0.2ml 0.2ml 0.2ml 0.2ml 0.2ml 0.2ml 0.2ml 0.2ml 0.2ml
SALIN
A

ANTIS 0.2ml 0.2 ag

UERO bact

Incubar a 37ºC por 24 hrs. Y refrigerar por otras 24 hrs mas

Reportar el titulo de suero hasta el ultimo tubo que se forme la malla en el
fondo. los títulos mayores a 1:64 se consideran representativos.
SE OBTIENE….

TUBO 1 TUBO2
 AGLUTINACIÓN EN
MICROPLACA

SE REALIZA EL MISMO PROCEDIMIENTO, SÓLO CAMBIA LA

CANTIDAD: 50 MICROLITROS.
MICROPLACA
 REFERENCIAS
• http://books.google.com.mx/books?
id=MfW3TuHLa4gC&pg=PA226-IA15&lpg=PA226-
IA15&dq=aglutinacion+en+microplaca&source=bl&ot
s=4m69MJRSyG&sig=PcNlDVsc19Zqulvu1mtfzhc5D
Uo&hl=es&ei=7cDmTM3aH5K24Ab5pt34Ag&sa=X
&oi=book_result&ct=result&resnum=3&sqi=2&ved=0
CCYQ6AEwAg#v=onepage&q&f=false
• http://www.revistaapi.com/2%20edicao%202006/pdfs/
mat%2006.pdf
• http://www.salonhogar.com/ciencias/organismos/inmun
idad.html
PRESENTARON:
GUTIERREZ FRAZCO ELVIA MARIA
MADRIGAL BEDOLLA SELENE YUNUÉN
MALDONADO CIANCA PAULINA
OCAMPO CATALAN LILIBET
PEREZ CEBALLOS ELIZABET

CICLO ESCOLAR AGOSTO 2010-FEBRERO

2011