VÍRUS VERMES

Avaliação dos
mecanismos
efetores
“Técnicas imunológicas”
 Avaliação da resposta de linfócitos B:
- Especificificidade, quantidade, isótipo dos
anticorpos
VÍRUS VERMES

Avaliação da resposta de linfócitos T:

- Produção de citocinas e ação sobre outras
células
Estrutura da molécula de imunoglobulina
Anticorpos como ferramenta
 Teste de ELISA

VÍRUS VERMES
 Teste de ELISA

VÍRUS VERMES
 Imuno-histoquímica

VÍRUS VERMES
 Imunofluorescência

VÍRUS
VERMES
 Imunofluorescência

VÍRUS
VERMES
 Citometria de fluxo - FACS

VÍRUSVERMES
As células são incubadas com anticorpos fluorescentes
específicos para estruturas de superfície.
Os anticorpos fluorescentes aderem especificamente
à superfície celular.
Os anticorpos que não interagem com as estruturas de
superfície são eliminados por lavagens sucessivas.
A intensidade de fluorescência de cada célula é
quantificada em um citômetro de fluxo.
Verde
(FL1)

Vermelho
(fL2)
P
r
o
Violeta c
(FL3)
e
Fonte laser s
Tamanho
s
(FSC)
a
d
Granulosidade
o
(SSC) r
VÍRUS VERMES
Os valores obtidos são avaliados com o auxílio de um
programa de análise.
CD8+ CD8+CD4+

CD8 (FL3)
Grnulosidade (SSC)

CD4+

Linfócitos
CD4 (FL2)

CD45R+ CD45R+CD4+

CD45R (FL1)
Tamanho (FSC)
CD4+

CD4 (FL2)
 CELL SORTER
A
C57BL/6 IL-12p40KO

CD45R
VÍRUS VERMES

CD11b

Pan NK
CD4 and CD8
 Avaliação da resposta de linfócitos B:
- Especificificidade, quantidade, isótipo dos
anticorpos
VÍRUS VERMES

Avaliação da resposta de linfócitos T:

- Produção de citocinas e ação sobre outras
células
 CITOCINAS
A- Citocinas intracelulares por citometria de
fluxo (avaliação das células produtoras)

TCD4 TCD8
VÍRUS VERMES

1.80 3.50 0.35 1.50

IFN-γγ
IFN-γγ

CD4 CD8
 B- ELISA de captura
(Quantificação da produção)

VÍRUS VERMES Anticorpo

secundário

Anticorpo de
captura
 Ação dos linfócitos T sobre
outras células:

VÍRUS VERMES
Th1
IFN-γ
IL-12
MHC II
NO O.2
B7
O.2 NO

CD40
FcγR
 CITOTOXICIDADE

VÍRUS VERMES Tc

Na2CrO4 Na2CrO4 Na2CrO4

Na2CrO4
 Utilização de animais
imunodeficientes
60
*

Parasitemia (%)
50
40
*
VÍRUS VERMES 30
20 *
* *
10 * *
*
0
0 5 10 15 20
Days after infection

Densidade óptica Densidade óptica

0.5 IgG2c
0.4
0.3
0.2
0.1
0
20 30 40 50 60 70
0.5 IgG1
0.4
0.3
0.2
0.1
0
20 30 40 50 60 70
Dias pós-infecção
 C57Bl/6
IL-12p40K0

VÍRUS VERMES
WT

(-)

IL-12p40KO