PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE OPERACIÓN (PNO)

Datos generales del PNO

EQUIPO 5
Nombre del PNO: Hemocultivo
Contenido
Elaboración y/o actualización del PNO:
Fecha de emisión: sábado, 11 de
Responsable: analista
diciembre de 2010
Frecuencia: anual

Vigente a partir de: lunes, 13 de diciembre de

Departamento ó Área Bacteriología
2010

Frecuencia de aplicación del PNO: Cada que

Próxima revisión: martes, 13 de
se recibe y procesa una muestra para
diciembre de 2011
hemocultivo

página
CONTENIDO............................................................................................................................................................................................1
1.0 Autorizaciones.........................................................................................................................................1
2.0 Objetivo.....................................................................................................................................................2
3.0 Alcance.....................................................................................................................................................2
4.0 Responsabilidades..................................................................................................................................2
5.0 Definiciones. Se obtuvieron de una única fuente bibliográfica (10.2.2).............................................4
6.0 Seguridad..................................................................................................................................................5
7.0 Equipo, materiales y reactivos...............................................................................................................6
PROFESIONAL ANALISTA.............................................................................................................................................................................9
PROFESIONAL ANALISTA ............................................................................................................................................................................9
PROFESIONAL ANALISTA.............................................................................................................................................................................9
9.0 Criterios de aceptación.........................................................................................................................11
10.0 Referencias bibliográficas..................................................................................................................11
11.0 Formatos y anexos..............................................................................................................................12
11

1.0 Autorizaciones

Elaboró:

Nombre: Puesto: Firma: Fecha:

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N° de revisión:
“Hemocultivo ” Bacteriología

Antonio de Jesús lunes, 13 de diciembre

Estudiante
Solórzano Calvario de 2010

Revisó y Aprobó:

Nombre: Puesto: Firma: Fecha:

Q.F.B. Juan Antonio Profesor de la Materia lunes, 13 de diciembre
Flores Cornejo control de calidad de 2010
farmacéutico y biológico

Revisó y Autorizó:

Nombre: Puesto: Firma: Fecha:

Responsable del
lunes, 13 de diciembre
MQC. Lorena Laboratorio de vinculación
de 2010
Berenice Godoy Mejía Análisis clínicos y
Bacteriológicos

MQC. Ma. Dolores Responsable del area de lunes, 13 de diciembre

Díaz de León Bacteriología. de 2010

2.0 Objetivo
Indicar los métodos adecuados para la correcta toma y procesamiento de muestras para
Hemocultivo. Describir la técnica de siembra de hemocultivo para el aislamiento de bacterias
causantes de infecciones del torrente sanguíneo.

3.0 Alcance
Se aplica para el aislamiento bacteriano a partir de hemocultivos en el diagnóstico bacteriológico
de infecciones del torrente sanguíneo. Método para la toma de la muestra, conservación y
transporte de la misma.

4.0 Responsabilidades
4.1 Es responsabilidad del jefe del laboratorio:
4.1.1 Planificar las acciones, organizar, controlar y capacitar al personal para cumplir las
disposiciones contenidas en el presente PNO
4.1.2 Asegurar el control interno de la calidad, la idoneidad del personal, equipos, materiales,
reactivos e instalaciones.
4.1.3 Asegurar la correcta disposición de los RPBI´s
4.1.4 Asegurar la confiabilidad de los resultados emitidos por los analistas

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“Hemocultivo ” Bacteriología

4.2 Es responsabilidad del profesional analista encargado, prestadores de servicio social y

practicantes profesionales:
4.2.1 Seguir los pasos y recomendaciones indicados en este PNO al realizar un hemocultivo
4.2.2 Trabajar con higiene y cuidado para evitar contagios innecesarios
4.2.3 Manejar con precaución las muestras biológico-infecciosas
4.2.4 Mantenerse actualizado y capacitado en la realización de un hemocultivo

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5.0 Definiciones. Se obtuvieron de una única fuente bibliográfica (10.2.2)

5.1 Absceso: Acumulación localizada de pus en un tejido u órgano.
Aeróbico: Un organismo que requiere oxígeno o aire atmosférico para su crecimiento y
5.2
reproducción.
Aglutinación: Reacción por la que se provoca la agrupación de partículas, bacterias y
5.3
células suspendidas en un medio líquido.
5.4 Aislamiento primario: Desarrollo inicial de microorganismos a partir de una muestra clínica
5.5 Antimicrobiano: Agente biológico o químico que inhibe el crecimiento de microorganismos
5.6 Asepsia: Desinfección de un tejido vivo o piel.
Bacteria: Microorganismo unicelular microscópico perteneciente a los procariotes que se
5.7
multiplica por fisión binaria y carece de clorofila. Se diferencian por la coloración de Gram.
Bacteria Gram negativa: Aquellas bacterias que no retienen el colorante primario (violeta
5.8 de genciana o cristal violeta) en el método de Gram son decoloradas por el alcohol y toman
el color del colorante contraste (safranina o fucsina) dando un color rojizo.
Bacteria Gram positiva: Aquellas bacterias que retienen el colorante primario del método
5.9 de Gram, resisten la decoloración por el alcohol y no son coloreadas por el colorante de
contraste reteniendo el color azul púrpura inicial.
Bacteriemias: presencia de bacterias en la sangre. Las bacteriemias no demostradas son
frecuentes y por lo general desaparecen espontáneamente. El diagnóstico se realiza por
5.10
hemocultivo; cuando se instaura el tratamiento antibiótico debe ser específico para el
organismo detectado y para la localización de la infección de comienzo.
Bioseguridad: Conjunto de medidas preventivas para proteger la salud y la seguridad
5.11 humana y del ambiente frente a diferentes riesgos producidos por agentes biológicos,
físicos, químicos o mecánicos.
Cepa bacteriana: Cultivo puro de bacterias formada por los descendientes de un solo
5.12
aislamiento.
Colonia: Crecimiento visible de microorganismos, generalmente en medios sólidos,
5.13 originado por la multiplicación de un solo organismo. Todos son la progenie de una única
bacteria preexistente.
Coloración Gram: Método de tinción basado en la propiedad de retener o no el colorante
5.14 cristal violeta en la pared celular bacteriana debido a su composición bioquímica después
de ser sometido a un tratamiento de decoloración
Desinfección: Destrucción de las formas vegetativas de las bacterias en objetos
5.15 inanimados. Se realiza con agentes químicos en estado líquido o con agua a temperaturas
superiores a 75 °C.
5.16 Desinfectante: Agente químico utilizado para el proceso de desinfección.
Esterilización: Proceso validado que permite la eliminación de toda forma de vida
5.17 microbiana incluyendo endosporas bacterianas. Puede conseguirse por medio de métodos
químicos, físicos o gaseosos.
Hemólisis: Presencia de restos de eritrocitos lisados alrededor de una colonia desarrollada
5.18
en una placa de sangre de carnero.

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Hemólisis alfa: Las colonias están rodeadas por una destrucción parcial de los eritrocitos y
5.19 pérdida de algo de hemoglobina en el agar lo que resulta en una coloración verde
(hemólisis incompleta).
Hemólisis beta: Las colonias están rodeadas por una zona de hemólisis completa (clara,
5.20
transparente) debido a una destrucción total de los eritrocitos.
Incubación: Mantenimiento de cultivos bacterianos en condiciones favorables para su
5.21
desarrollo y multiplicación.
Infección: Invasión y multiplicación de microorganismos en un huésped, pudiendo
5.22 progresar hacia una enfermedad. El término enfermedad infecciosa se aplica cuando
aparecen signos y síntomas como resultado de la infección.
Medio de cultivo: Medio artificial de sustancias nutritivas necesarias para el crecimiento y
5.23 multiplicación de las bacterias in vitro, que puede encontrarse en estado sólido, semisólido
o líquido.
Metabolismo: Proceso de degradación y biosíntesis enzimática que tiene lugar dentro de
5.24
una célula y por medio del cual se mantienen las actividades nutricionales y funcionales.
Micraerofílico: Organismo que crece y se reproduce mejor en la presencia de una tensión
5.25
del 5% de oxígeno, 10% de anhídrido carbónico y 85% de nitrógeno.
5.26 Microorganismo viable: Es aquel que es capaz de reproducirse.
Septicemia: infección sistemática caracterizada por la aparición de patógenos en sangre
circulante procede de una infección localizada en cualquier parte del organismo. Se
5.27
diagnostica por hemocultivo y debe tratarse energéticamente con antibióticos. Típicamente
la septicemia produce fiebre, escalofríos, postración, dolor, cefalea, náuseas o diarrea.
Siembra primaria: Inoculación de una muestra a un medio de cultivo simple, selectivo o de
5.28
enriquecimiento.
Subcultivo: Pasaje de bacterias viables derivadas de otro cultivo a un medio de cultivo
5.29
nuevo.
5.30 UFC: Unidad formadora de colonia.

6.0 Seguridad
6.1 Medidas de seguridad
6.1.1 Observar las precauciones universales al manejar muestras de sangre.
6.1.2 Usar guantes al manejar cualquier fluido corporal.
6.1.3 Si es posible hacer todo el procedimiento en cabinas de bioseguridad, o, en su defecto,
utilizar una pantalla transparente para manipular la muestra.
6.1.4 Descartar las jeringas, agujas y otros objetos punzantes contaminados en un recipiente
especial.
6.2 Equipo de seguridad
6.2.1 Cubre boca
6.2.2 Cofia
6.2.3 Guantes de látex estériles
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6.2.4 Lentes de seguridad

6.2.5 Bata

7.0 Equipo, materiales y reactivos

7.1 Equipo
7.1.1 Incubadora
7.1.2 Mechero Bunsen o Cabina de flujo laminar

8.0 Desarrollo del procedimiento

8.1 Fundamento
El hemocultivo es un procesamiento bacteriológico que se practica en los casos de septicemia, y
que trabajado en forma adecuada suele ser de gran ayuda en el diagnóstico de algunas
enfermedades de origen bacteriano.

Sin duda alguna el hemocultivo constituye un importante factor diagnóstico en diversas y

numerosas infecciones que presentan bacteriemias transitorias e intermitentes, en las cuales las
bacterias se encuentran en pequeñas cantidades.
Los hemocultivos dan una proporción mas elevada de resultados positivos cuando el muestreo
cumple con ciertos requisitos; tal vez sea el procedimiento bacteriológico más exigente en lo que
representa a lo que se refiere al muestreo correcto, del cual depende grandemente el éxito del
aislamiento de los microorganismos.

Dado que la tasa de mortalidad por septicemia puede ser de 40% o más en ciertos pacientes
internados, la recuperación a tiempo de bacterias de la sangre del paciente (bacteriemia) puede
tener un gran significado diagnóstico y pronóstico.

8.2 Indicaciones

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8.2.1 Debe obtenerse la muestra antes de iniciar cualquier tratamiento con antimicrobianos.
8.2.2 La proporción entre el volumen de sangre obtenida y el volumen de caldo de cultivo
debe estar en una relación de 1:5 – 1:10.
8.2.3 Se debe seleccionar un sitio diferente de punción en cada toma de muestra.
8.2.4 Evitar sangrar de vía intravenosa o catéter arterial a menos que haya una sospecha de
sepsis por catéter.
8.2.5 El volumen de sangre dependerá de la edad del paciente; por cada venopunción se
recomienda:
Adultos: 10 – 30 mL
Niños: 1 – 5 mL
Lactantes: 1 – 2 mL
Neonatos: 0,5 – 1 mL
8.2.6 En sepsis: Se debe tomar dos o tres muestras de lugares diferentes en un lapso de diez
minutos.
8.2.7 En endocarditis aguda: Obtener tres muestras de tres lugares diferentes en un lapso de
1 a 2 horas.
8.2.8 En endocarditis subaguda: Obtener tres muestras de tres lugares diferentes a intervalos
de al menos quince minutos. Si el cultivo es negativo a las 24 horas, obtener tres
muestras más.
8.2.9 En fiebre de origen desconocido: Obtener dos o tres muestras de lugares diferentes con
diferencia de una hora o más entre una y otra muestra. Si el cultivo es negativo a las 24
horas, obtener dos a tres muestras más.
8.2.10 Pacientes con tratamiento antimicrobiano:
a) Extraer 6 muestras durante 48 horas.
b) Recolectar muestras inmediatamente antes de la siguiente dosis de antibiótico.
8.2.11 Fiebre de origen oscuro: (abscesos ocultos, fiebre tifoidea, brucelosis):
a) Obtener 2 muestras separadas al inicio. Después de 24 a 36 horas obtener 2 más
antes del aumento en la temperatura corporal.
b) Los rendimientos positivos más allá de 4 hemocultivos son mínimos.
8.2.12 El uso de la botella anaeróbica es una práctica que se recomienda cuando hay
sospecha clínica de infección por anaerobios. Según algunos autores, el uso de dos
botellas aeróbicas mas el cultivo selectivo por anaerobios puede incrementar en un 6%
el número de aislamientos clínicamente importantes.

8.3 Recomendaciones

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8.3.1 Tomar la sangre en el momento en que la temperatura del paciente se encuentra

elevada (es decir media hora antes del pico febril) u otros síntomas de infección activa,
y lo más cerca del principio clínico de la enfermedad, etapa en la que se haría el
muestreo más adecuado
8.3.2 La obtención de rutina de tres hemocultivos en 24 horas nos da como resultado un
aumento significativo de resultados positivos.
8.3.3 Tomar las tres muestras en periodos diferentes esto es antes, durante y después del
pico febril.
8.3.4 En los casos de bacteriemias de ser necesario practicar hemocultivos durante varios
días.
8.3.5 Alternativamente, las muestras pueden obtenerse de acuerdo con el caso. Por ejemplo:
• Bacteriemias continuas: en cualquier momento, ejm. Endocarditis.
• Bacteriemias intermitentes: Una hora antes del pico febril, ejm. Brucelosis.

8.4 Toma de la muestra

8.4.1 Elegir la vena palpando la piel antes de desinfectarla.
8.4.2 Limpiar la piel alrededor del lugar donde se hará la punción, en un círculo
de 5cm de diámetro haciendo la limpieza del centro a la periferia, con
alcohol al 70% y menthiolate, frotando vigorosamente.
8.4.3 Aplicar yodo al 2% círculos crecientes comenzando por el centro hasta
cubrir con yodo toda la superficie anterior. Deja actuar el yodo durante 1
minuto por lo menos. El tiempo es crítico, debe usarse un reloj o un
“timbre”.
8.4.4 Si el sitio deber ser tocado por técnico, éste debe desinfectar sus dedos en
la misma forma.
8.4.5 Insertar la aguja en la vena y extraer 10ml de sangre.
8.4.6 Una vez extraída la aguja, debe limpiarse el área nuevamente con alcohol
Profesional al 70% ya que muchos pacientes son sensibles al yodo.
analista -Transferir la sangre a los frascos a través del diafragma o del tapón
previamente desinfectado y seco.
8.4.7 Utilizando los siguientes medios:
Medio sólido líquido
Infusión de cerebro y corazón con o sin PABA y agar
Caldo soya tripticasa
Caldo teoglicolato – 135°C
Caldo glucosado con 0.05% de líquido
8.4.8 Mezclar la sangre con el medio de cultivo para evitar coagulación.
8.4.9 Llevar 1ml de sangre extraída a un tubo conteniendo alguno de los
siguientes medios, fundidos y enfriados a 45°C
Agar soya tripticasa
Eugonagar
Agar Columbia
8.4.10 Mezclar bien y hacer vaciado en placa.

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8.5 Transporte
Profesional Este proceso debe ser realizado en el laboratorio o por un profesional de
8.5.1
analista la salud con el conocimiento de la técnica.

8.6 Conservación
Profesional Solo para el analista debe conservar los hemocultivos hasta por 30 días
8.6.1
analista antes de dar un resultado negativo

Profesional 8.7 Procesamiento de la muestra

analista 8.7.1 Incubar a 37°C durante siete días observando si existe turbidez en el
medio.
8.7.2 Incubar a 37°C las botellas o matraces (en posición inclinada si el medio
es sólido-líquido) y placas a 37°C y en atmósfera de CO2 si se desea o se
requiere.
8.7.3 Observar diariamente, agitando los medios líquidos suavemente después
de observarlos y colocar el medio sólido-líquido en posición horizontal
durante 30 minutos para bañar el medio sólido con la mezcla del medio
líquido y sangre y volver a incubarlo en posición vertical.
8.7.4 la observación de los medios de cultivo consiste en:
-si se observa turbidez en el caldo y el medio sólido la germinación al
frasco se le acopla un tapón o capucha por el cual saldrán solo la cantidad
de medio que se requiera sin que se contamine el resto del medio.
-cambio de color en la sangre (normalmente depositada bajo la forma
de una capa roja en el fondo del recipiente o sobre la superficie del medio
sólido en el medio doble).
-hemólisis
-formación de burbujas en el caldo.
-cuando se observe germinación bacteriana, preparar frotis, teñidos al
Gram.
8.7.5 conforme los resultados obtenidos en la observación microscópica.
Proseguir la identificación mediante subcultivos en agar sangre, medios
de aislamiento selectivo diferencial (EMB, agar sulfito de bismuto, agar
MacConkey) y medios para las pruebas bioquímicos diferenciales.
8.7.6 Los hemocultivos deben examinarse de menos cada 48 horas. Después
de las 24 horas de incubación.

8.7.7 se retira una gota del cultivo, con todas las precauciones de asepsia, con
un asa o jeringa pequeña, con este material se siembra en una agar
sangre una placa en anaerobiosis y otra en aerobiosis o incluye en CO2 si
los cultivos son negativos a las 24 horas.
8.7.8 se repite el estudio a los 14 y 21 días antes de desechar los medios.

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8.7.9 Antes de desechar el frasco del medio sólido-líquido se recomiendo hacer

una resiembra en un caldo teoglicolato observar germinación y realizar la
identificación.

8.7.10 Practicar antibiograma a las cepas patógenas aisladas.

8.7.11 No debe de dar por negativo un hemocultivo hasta después de 30 días de

no observar crecimiento alguno.

8.8 Reporte de hemocultivos

8.8.1 Reporte verbal.
a) Telefonear inmediatamente después de confirmar un cultivo positivo por
8.8.1.1
Gram.
b) Indicar el nombre de la persona que llamó, la fecha y hora de la
8.8.1.2
llamada.
c) Proveer el máximo de información posible: número de muestras
positivas, morfología y arreglo microscópico, cultivos positivos de otros
sitios anatómicos. Un reporte de cocos Gram-positivos en cadenas es
Profesional 8.8.1.3
más útil que uno de cocos Gram-positivos solamente. Un reporte de E.
analista coli a partir de un urocultivo y un bacilo Gram-negativo en el hemocultivo
pueden sugerirle al clínico la posible fuente de infección.
8.8.2 Reporte escrito.
a) Proveer una copia de todos los resultados preliminares (no crecimiento
8.8.2.1
o positivos por Gram).
8.8.2.2 b) Proveer una copia de los resultados finales.
c) Indicar la duración de la incubación en los reportes negativos: “No
8.8.2.3
crecimiento a los 7 días”
8.8.2.4 d) Reportar identificación y antibiograma de los cultivos positivos.

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9.0 Criterios de aceptación

9.1 Flora normal y flora patógena

FLORA NORMAL FLORA PATÓGENA
Cualquier bacteria que se
GRAM POSITIVOS Negativo
encuentra
Cualquier bacteria que se
GRAM NEGATIVOS Negativo
encuentra

9.2 Valores normales

9.2.1 Negativo
Al observar los medios, si no se observan las alteraciones el cultivo es negativo, que son
9.2.2
evidentes en los casos positivos.
Debe tenerse presente que la incubación prolongada de la sangre en un hemocultivo,
9.2.3 usualmente provoca la desintegración de los eritrocitos lo que causa turbiedad y cambios de
color, aún en presencia de germinación bacteriana.
Es fácil comprobar la contaminación de un hemocultivo por el aspecto del crecimiento y
morfología microscópica de los gérmenes banales, cuyo resultado puede ser la causa de
9.2.4
una esterilización incorrecta del equipo, aseo deficiente de la piel, exposición prolongada al
aire fuera de la llama, la siembra del medio de cultivo e inoculo.

10.0 Referencias bibliográficas

10.1 Documentos mandatorios

NORMA Oficial Mexicana NOM-045-SSA2-2005, Para la vigilancia epidemiológica,
10.1.1 prevención y control de las infecciones nosocomiales.
Koneman E, Allen S, Dowell V, Sommers H. Diagnóstico microbiológico. 3a ed., Buenos
10.1.2 Aires. Editorial Médica Panamericana. 1992.
Murray, P. R. (Ed.). Manual of Clinical Mícrobiology, Sixth Edition. 1995. American Society
10.1.3 for Microbiology: Washington,D.C.
10.2 Fuentes bibliográficas adicionales consultadas
Miller J. Michael, Holmes H. Specimen collection, transport and storage. En: Murray PR,
Baron EJ, Pfaller MA, Tenover FC. Yolken RH. Manual of Clinical Microbiology. 7a ed.
10.2.1 Washington DC: American Society for Microbiology; 1999. pp 33 – 63.
Instituto Nacional de Salud. Manual de procedimientos de laboratorio para el diagnóstico
de infecciones respiratorias agudas. Curso Teórico Práctico. En: Diagnóstico de
10.2.2 laboratorio de infecciones respiratorias agudas y enterovirus. Lima. 1999.
Bone, R. C. Gram-negative sepsis: a dilemma of modem medicine. 1993. Clinical
10.2.3 Microbiology Reviews, 6:57-68.

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11.0 Formatos y anexos

11.1 Formatos
Nombre del formato Código

11.2 Anexos
Anexo Nombre
A Cuadro 1. Definiciones en la sepsis por Gram-negativos
B Cuadro 2. Factores de nesgo en sepsis
C Cuadro 3.Manejo clínico de la sepsis
D Cuadro 4. Agentes etiológicos de endocarditis infecciosa
Cuadro5. Sistemas de hemocultivos automatizados y
E
computarizados
F Cuadro 6. Signos visibles de crecimiento en hemocultivos
G Diagrama de flujo

ANEXO A
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ANEXO B
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ANEXO C

ANEXO D

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ANEXO E

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ANEXO F

ANEXO G

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Diagrama de flujo:

Muestra
Obtenida

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