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Células rojas humanas sensibilizadas con anti D (Ig. G), utilizadas para producir reacción
fuerte de aglutinación en la presencia de reactivos activos de antiglobulina humana
PROCEDIMIENTO:
2) Lave las células 4veces con solución salina fisiológica, y centrifugue a 3400rpm por
5min.
Antes de cada centrifugación mezcle unas 10 veces por inversión hasta que no se
observen células adheridas al fondo del tubo. Descarte siempre la sol. Salina con pipeta
presencia de grumos).
fisiológica. Mezcle bien y colóquelo en baño María a 37ºC por 30min, mezclándolo
cada 5min.
8) Separe en 2alicuotas: uno de los frascos como reserva y el otro para trabajo diario.
Células Rojas preparadas en Vitro para utilización en el Coombs indirecto, las cuales nos
permiten determinar la presencia de anticuerpos irregulares (anti. Rh) en el suero de los
pacientes luego de una sensibilización.
PROCEDIMIENTO:
2) Coloque 1ml de paquete globular en un tubo 12x75mm y lave las células 4veces
con solución salina fisiológica por 3min.
Descartando el sobrenadante en cada lavada con pipeta Pasteur y mezclando entre lavado
observando que no se encuentren células adheridas al fondo del tubo. En el último lavado
descartar toda la solución salina.
4) Separe en 2alicuotas: uno de los frascos como stock y el otro para el trabajo
diario.
PRUEBA CRUZADA
Procedimiento:
1) Preparar suspensión al 5% con solución salina fisiológica de células del donante y del
paciente, previamente lavadas.
FASE I:
2) Identificar 3 tubos debidamente rotulados como prueba: mayor, menor y control del
paciente. A los cuales se le agrega lo siguiente:
PRUEBA MAYOR PRUEBA MENOR PRUEBA CONTROL
2 Gotas de suero o 2 gotas de suero o 2 gotas de suero o
plasma del Paciente.
Paciente plasma del Donante.
Donante plasma del Paciente.
Paciente
1 gota de células 1 gota de células 1 gota de células
preparadas del Donante.
Donante preparadas del Paciente.
Paciente preparadas del Paciente.
Paciente
5) Agregar 2 gotas de Albúmina Bovina a cada uno de los tubos, mezclar e incubar en
baño María a 37ºC durante 15 – 30min.
6) Después del baño María centrifugar durante 15seg. Observar si hay hemólisis o
aglutinación, desprendiendo suavemente el botón de células del fondo del tubo y anotar
los resultados.
FASE III:
7) Lavar los hematíes 4veces con solución salina fisiológica y decantar totalmente el
sobrenadante en el último lavado.
8) Agregar 2gotas del reactivo de anti-globulina humana poliespecífico y mezclar.
9) Centrifugar inmediatamente por 15seg y leer desprendiendo el botón de células
suavemente observando si hay aglutinación con la ayuda de una lámpara o fondo blanco.
10) Sí la prueba resulta ser negativa Agregar una gota de células control de coombs,
Centrifugar por 15seg. Leer y anotar los resultados. (Siempre la reacción es positiva).
TIPIFICACIÓN SANGUÍNEA
PRUEBA DIRECTA.
1) Preparar suspensión de células al 0.5% lavadas una vez con solución salina al
0.9%.
2) Rotular 3 tubos con la letra correspondiente y agregar:
A B AB RH
1 gota de anti A 1 gota de anti B 1 gota de anti AB 1 gota de anti D.
1 gota de suspensión de células del paciente a cada tubo.
3) Mezclar y centrifugar durante 15 seg. A 2500 p.m.
4) Luego de la centrifugación con movimientos suaves desprender el botón de
células del fondo del tubo y leer sobre una lámpara de lectura.
5) Anotar los resultados.
1) Preparar suspensión de células al 0.5% lavadas una vez con solución salina al
0.9%.
2) Rotular 3 tubos con la letra correspondiente y agregar:
A B
1 gota de células A 1 gota de células B
2 gotas de suero del paciente
COOMBS DIRECTO
PRINCIPIO: Determinar mediante una reacción in Vitro la presencia de eritrocitos
sensibilizados (recubiertos de anticuerpos anti Rh) en el paciente, debido a la exposición a
eritrocitos sin antígenos “Ag. D” de membrana” Rh” negativo, siendo éste Rh positivo
1) Preparar suspensión de células al 0.5% lavadas una vez con solución salina al
0.9%.
RENE RAMOS 2008
BANCO DE SANGRE
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2) En otro tubo colocar de 1-2 gotas de Glóbulos Rojos suspendidos en solución
salina fisiológica al 0.9%.
3) Se realizan 4 lavadas durante 3 min. A 3400rpm decantando en cada lavado la
solución salina y en el último eliminarla completamente.
4) Agregar 2 gotas de Anti-Globulina humana.
5) Centrifugar a 3000rpm por 15 seg.
6) Examinar el tubo sobre una lámpara de lectura para observar si hay aglutinación.
De estar presente se gradúa con cruces la intensidad de la reacción y se anotan los
resultados.
OJO:
Si hay ausencia de aglutinación debe de agregarse 1 gota de células control de
Coombs.
☺ Se mezclan y centrifugan por 15 seg. A 3000rpm.
☺ Nuevamente leer y anotar los resultados.
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:
POSITIVA:
Evidencia de aglutinación o hemólisis. Significa que hubo sensibilización en
vivo de los eritrocitos y se informa prueba de coombs directa positiva. Señalando
con cruces la intensidad de la reacción.
NEGATIVA:
Ausencia de aglutinación. Significa que no hubo o existió sensibilización
eritrocitaria.
PREPARACION DE CELULAS
”A”Y “B”
PRINCIPIO: Determinar mediante una reacción de aglutinación in Vitro la existencia de
anticuerpos en el suero del paciente que puedan reaccionar con estas.
A A O - A AB -
B B O - B AB -
AB AB BöA O AB - -
“-“NINGUNO DE LOS OTROS GRUPOS
RENE RAMOS 2008