MORFOLOGÍA Y ESTRUCTURA MICROBIANA DE

BIOGRÁNULOS DE REACTORES ANAEROBIOS UASB

(Upflow Anaerobic Sludge Bed).
Ma. Guadalupe Nieto L., Dulce T. González C. y Ricardo Bello. El Colegio de la Frontera
Sur. A. P. 36, Tapachula, Chis., CP 30700 México.
Correo electrónico: gnieto@tap-ecosur.edu.mx

RESUMEN

Introducción: El funcionamiento de los reactores UASB se basa en la formación de un lecho de

lodo granular con buena capacidad de sedimentación y alta actividad biológica (1). Los gránulos y
flóculos, constituyen un microambiente en donde bacterias anaerobias especializadas convierten los
contaminantes complejos hasta metano (2). El gránulo anaerobio puede describirse como una
biopelícula casi esférica, que consiste de tres capas concéntricas: en la capa interna están las
bacterias metanogénicas, en la intermedia las acetogénicas, y en la superficial las acidogénicas
e hidrolíticas (2,3). Entre los espacios intersticiales de los gránulos se encuentran las sustancias
poliméricas extracelulares (SPE), de origen biológico, que son un componente básico para la
formación e integridad de los gránulos (3). El objetivo de este estudio fue obtener información de la
estructura, composición y abundancia relativa de los morfotipos bacterianos presentes en los
biogránulos anaerobios.
Metodología: Se estudiaron dos tipos de lodos granulares: a) gránulos de un reactor UASB de
Querétaro conservados en refrigeración a 3 °C por 6 meses. b) gránulos de un reactor UASB de la
UNAM, conservados en refrigeración a 3°C por 2 meses. Ambas muestras fueron clasificadas en
dos tamaños (micras): gránulos chicos (580-920) y grandes (1330-1920) de Querétaro, gránulos
chicos (950-1200) y grandes (1500-2300) de la UNAM. Los gránulos se lavaron tres veces con
solución buffer de fosfatos (SBF) 0.1 M, pH 7.2 y se eliminó todo agregado de bajo grado de
compactación. Los gránulos lavados se fijaron con glutaraldehido al 2.5 % en SBF, se deshidrataron
en soluciones seriadas de etanol del 30, 50, 70, 90, 100 % por 15-30 minutos y se secaron al punto
crítico del CO2. Los gránulos secos se fracturaron en dos mitades, se cubrieron con una capa de
oro-paladio y se exploró la superficie de fractura para observar la distribución espacial de los
microorganismos al interior. Se delimitaron tres profundidades de capas a partir de la superficie: a
15 micras, de 15 a 50 micras y de 50 a 100 micras. Para cuantificar la abundancia relativa de los
morfotipos bacterianos se tomó un gránulo lavado, se colocó en un tubo Eppendorf MR y se
destruyó por agitación y ultrasonido. La suspensión se ajustó a 2 ml, se tomó una alícuota de 0.2 ml
con una jeringa y se pasó por un microfiltro con una membrana de policarbonato spi MR de 0.2 µm
de poro. La membrana se fijó y deshidrató de la misma manera que los gránulos enteros, se montó,
se cubrió con oro-paladio y se tomaron fotografías de tal manera que aparecieran aprox. 100
bacterias por imagen. Clasificación: Se analizaron y clasificaron los diferentes morfotipos
bacterianos en base a características morfológicas externas y tamaño. Las observaciones se hicieron
con un MEB Topcon SM510.
Resultados: Se encontraron los siguientes morfotipos bacterianos (medidas en micras): Coco (0.4
dia), oval chico (0.9x0.5), oval grande (1.4x0.6), bastón irregular (1.6x0.4), b. curvo (1.9 x 0.5), b.
forma de “U” (2.2x0.3), b. forma de bambú (1.3x0.5), b. c/extremo ensanchado (3.4x0.5), b. corto
(0.6x0.32), b. mediano (0.9x0.3), b. largo (1.6x0.3), b. grueso (1.3x0.5), filamento delgado (0.23),
filamento grueso (0.34). En los gránulos chicos QRO, la capa externa presentó abundante SPE pero
disminuyó hacia el interior de los gránulos. Los bastones medianos y en forma de bambú fueron los
morfotipos más frecuentes en la capa externa e intermedia; los medianos en grupos mixtos y los de
forma de bambú se encontraron en grupos o colonias homogéneas chicas a medianas. Los cocos se
encontraron también en casi todas las fotografías examinadas, libres o en pequeños grupos
homogéneos. En la capa interna los bastones de forma de bambú fueron las bacterias dominantes
formando una colonia grande (Fig. 1). En los gránulos grandes QRO, el alto contenido de SPE
(relacionado con su consistencia dura, con aspecto de piedra obsidiana quebradiza) impidió la
observación de las bacterias y su análisis. En los gránulos chicos UNAM, todas las capas
presentaron abundante SPE, se encontraron estructuras parecidas huecos y canales, con menor
presencia al interior del gránulo. La capa externa presentó bastones medianos, b. irregulares y b.
gruesos como morfotipos representativos; todos ellos se presentaron en grupos mixtos y colonias
chicas. En la capa intermedia se encontró además, colonias chicas y medianas de bastones forma de
bambú. La capa interna se caracterizó por la presencia de colonias grandes de bastones de forma de
bambú (Fig. 2). En los gránulos grandes UNAM, las tres capas presentaron SPE diferenciándose
principalmente en su consistencia y forma, también presentaron huecos y huellas de bacterias. Las
capas externa e intermedia presentaron bastones irregulares, b. gruesos y b. medianos; éstos se
encontraron principalmente en grupos mixtos y libres. En la capa interna, los bastones forma de
bambú se encontraron como grupos y colonias grandes, siempre homogéneos (Fig. 3). En todos los
gránulos se presentaron otros morfotipos no mencionados por estar presentes en menor cantidad.
Todos los gránulos presentaron igual diversidad de morfotipos, aunque hubo diferencias en su
composición dependiendo de su origen y tamaño: Los gr QRO se distinguen por la alta proporción
de b. forma de bambú (50%) y b. medianos (25%) mientras los ch QRO presentan proporciones
similares de b. forma de bambú, b. mediano y b. con extremo ensanchado (30, 25, 15). Las
diferencias de composición por tamaño, son de esperarse que a medida que el grano crece, la parte
central es más favorable para los microorganismos metanogénicos como Methanotrix, bastón forma
de bambú encontrada como casi única forma en el centro del gránulo. Los gránulos UNAM
presentaron mejor distribución de los diferentes morfotipos, aunque con diferencias en los tipos de
bacterias y abundancias relativas dependiendo del tamaño (ch y gr): en b. medianos (25%, ambos);
b. chicos (10% ambos), b. largo (7 y 10%), b. forma de bambú (10 y 25%), b. irregulares (20 y
10%), b. grueso (15 y 5%). Al igual que los de QRO, los b. forma de bambú son más abundantes en
los gránulos grandes. Los resultados de estos conteos son acordes a las observaciones de la
composición estructural de los gránulos.La metodología empleada, ha sido útil para la dilucidación
de la composición y estructura microbiana de los biogránulos. Estos resultados, al igual que otras
características, físicas y bioquímicas de los biogránulos, proporcionan información invaluable para
el conocimiento de las transformaciones llevadas en los reactores UASB.
Referencias:
[1] González-M S, R G Guerra, A P Trupiano, M L Castañeda, M E Figueroa, L Seghezzo y C M
Cuevas. 2000. Tratamiento de líquidos cloacales pre-sedimentados en un reactor UASB en regiones
subtropicales. AVERMA 4: 1-6.
[2] Fang H H P. 2000. Microbial distribution in UASB granules and its resulting effects. Water Sc.
and Tech. 42 : 201-208.
[3] Macleod F A, S R Guiot y J W Costerton. 1995. Electron microscopic examination of the
extracellular polymeric substances in anaerobic granular biofilms. World Journal of Microbiology
& Biotechnology 11: 481-485.
Fig. 1. a) Superficie del gránulo chico de QRO, se indican las tres capas analizadas. b)
Acercamiento de grupos de varios morfotipos ubicados en la capa intermedia c). Bastones en forma
de bambú en la capa interna.
Fig. 2. a) Huecos y canales en los gránulos chicos de UNAM. b) Varios morfotipos localizados en
la capa intermedia. c) Colonia de bastones medianos y gruesos de la capa externa.
Fig. 3. a) Huellas de bacterias en los gránulos grandes de UNAM. c) Bastones varios tamaños de la
capa externa. b) Bastones irregulares, medianos y gruesos de las capas externa e
intermedia.