Lic.

Roy Cedeo

Elucin. Absorcin.

EN EL CUAL SE ADHIERE UNO O MS ANTICUERPOS A LOS A LOS ANTGENOS CORRESPONDIENTE EN LOS ERITROCITOS PARA LA SUBSIGUIENTE REMOCIN (DEL ANTICUERPO) DEL SUERO.
PROCEDIMIENTO

EL SUERO ABSORVIDO SE PRUEBA CON UN PANEL PARA DETERMINAR SI HAY PRESENCIA DE ALOANTICUERPOS ENMASCARADOS.
LUEGO

ES EL PROCEDIMIENTO DE ADSORCIN EN EL QUE SE ADHIEREN LOS ANTICUERPOS DEL PACIENTE UTILIZANDO SUS PROPIOS ERITROCITOS SI EL PACIENTE NO HA SIDO TRANSFUNDIDO EN LOS ULTIMOS 3 MESES.

ES EL PROCEDIMIENTO DE ADSORCIN EN EL QUE SE ADHIEREN LOS ANTICUERPOS DEL PACIENTE CON ERITROCITOS NO GENETICAMENTE IDENTICOS.

PROCEDIMIENTO EN EL QUE SE DISOCIAN COMPLEJOS ANTIGENOS ANTICUERPO QUE SE ENCUENTRA EN LA MEMBRANA DE LOS ERITROCITOS . LUEGO SE PRUEBA LA ESPECIFICIDAD DEL ANTICUERPO IgG LIBERADO. A LA SOLUCIN QUE CONTIENE EL ANTICUERPO LIBERADO SE LE LLAMA ELUATO; ES REQUERIDO CUANDO EL COOMBS DIRECTO RESULTA POSITIVO POR IgG.

ALMACENAMIENTO Y SENSIBILIDAD DEL MTODO). 2. NIVELES ELEVADOS DE INMUNOGLOBULINAS (SIDA, MIELOMA MULTIPLE, PACIENTE RECIBIENDO INMUNOGLOBULINAS INTRAVENOSA.

1. FACTORES TCNICOS (TOMA DE LA MUESTRA,

3. DROGAS (CEFALOSPORINAS, CISPLASTINA Y SURAMINAS) QUE CAUSAN ADSORCIN NO INMUNOLOGICA DE PROTENAS EN LOS ERITROCITOS. 4. TRANSPLANTE DE MDULA ABO INCOMPATIBLE (DONANTE GRUPO OY PACIENTE A)

5. TRANSPLANTE DE RGANOS SLIDO ( EJ. DE PULMONES) EN DONDE EL ANTI A y/o ANTI B O ALOANTICUERPO DERIVADOS DE LOS LINFOCITOS DEL DONANTE PUEDEN CAUSAR UN COOMBS DIRECTO POSITIVO Y HEMLISIS. 6. USO DE PRODUCTOS DE PLASMA NO ABO ESPECFICO O INMUNOGLOBULINA INTRAVENOSA CONTENIENDO ANTI A y/o ANTI B. 7.ENFERMEDADES COMO FALLO RENAL, MAYORMENTE SI ESTAN EN DILISIS. 8.TRANSFUSIN DE SANGRE .

SI EL COOMBS DIRECTO INICIAL RESULTA POSITIVO, REPITA LA PRUEBA USANDO ERITROCITOS LAVADOS CON SALINA, SI EL COOMBS DIRECTO RESULTA NEGATIVO EN LA REPETICIN REPORTE NEGATIVO. SI EL COOMBS DIRECTO PREVALECE POSITIVO EN LA REPETICIN EFECTE LOS ESTUDIOS INMUNOHEMATOLGICOS ADICIONALES QUE SEAN REQUERIDOS.

LOS ANTICUERPOS FRIOS PUEDEN SER REMOVIDOS DEL SUERO MEDIANTE UNA O MAS ADSORCIONES. SE UTILIZAN CELULAS AUTLOGAS. SI EL AUTOANTICUERPO ES POTENTE PUEDEN USARSE LAS PROPIAS CELULAS TRATADAS CON ENZIMAS. MUETRA: UN TUBO CON ANTICUAGULANTE UN TUBO SIN ANTICUAGULANTE

PREPARACIN DE LA MUESTRA: LA MUESTRA CON ANTICOGULANTE DEBE SER MEZCLADA INMEDIATAMENTE Y PUESTA EN UN BAO MARIA A 37C. CENTRIFUGAR LA MUESTRA ANTICOAGULADA SI ES POSIBLE A 37C Y SEPARAR TODO EL PLASMA. LAVAR LAS CELULAS CON SALINA CALENTADA A 37C POR 4 VECES Y EMPAQUETAR LAS CELULAS.

PLASMA CON EL AC A ADSORVER

CELULAS AUTOLOGAS

COLOCAR UN VOLUMEN DE SUERO PROBLEMA Y UN VOLUMEN DE CELULAS LAVADAS. MEZCLAR Y COLOCAR EN BAO MARIA MUY FRIO, CON ABUNDANTE HIELO MEZCLANDO FUERTEMENTE PARA PARA LOGRAR MAYOR CONTACTO ENTRE EL SUERO Y LAS CELULAS. INCUBAR EN LA NEVERA A 4C POR 30 A 60 MINUTOS MEZCLANDO FRECUENTEMENTE. DEMOSTRAR QUE LA ADSORCION FUE ADECUADA COLOCANDO EN UN TUBO DOS GOTAS DE SUERO Y UNA GOTA DE CELULAS AUTOLOGAS FRESCAS AL 5%. CENTRIFUGAR Y LEER, SI NO HAY AGLUTINACIN LA ADSORCIN FUE SATISFACTORIA DICHO SUERO SE IDENTIFICARA COMO ADSORVIDO Y SE UTILIZARA PARA LAS SUBSECUENTES PRUEBAS.

SI LA AGLUTINACIN PERSISTE REALIZAR OTRA ADSORCIN CON CELULAS FRESCAS. SI TODAVIA LA AGLUTINACIN PERSISTE ES RECOMENDABLE TRATAR UN MUESTRA FRESCA CON ENZIMAS.

EN PRESENCIA DE MEZCLA DE ANTICUERPO FRIOS DE AMPLIO RANGO TERMICO Y AC CALIENTES. EN PRESENCIA DE UN COOMBS DIRECTO POSITIVO QUE REACCIONA A TEMPERATURA AMBIENTE O BAJA TEMPERATURA EN DONDE DICHO ANTICUERPO PUEDE ESTAR ENMASCARA NDO O INTERFIRIENDO CON LA IDENTIFICACION DE OTRO.

A UN VOLUMEN DE CLULAS AUTLOGAS LAVADAS Y EMPAQUETADAS AGREGAR UN VOLUMEN IGUAL DE FICINA AL 1% Y MEZCLAR. INCUBAR A 37C POR 15 MINUTOS. CENTRIFUGAR Y REMOVER LA FICINA LAVANDO 3 VECES CON SALINA Y EMPAQUETAR LAS CLULAS DESPUS DEL LTIMO LAVADO.

MEZCLAR IGUAL VOLUMEN DE SUERO PROBLEMA Y DE CLULAS FICINADAS MEZCLAR BIEN E INCUBAR A 4C DE 15 A 60 MINUTOS . CENTRIFUGAR Y REMOVER EL SUERO ADSORVIDO Y PROBARLOS CON CLULAS AUTLOGAS FRESCAS AGREGANDO EN UN TUBO DOS GOTAS DE SUERO ADSORVIDO Y UN GOTA DE CLULAS FICINADAS INCUBAR A TEMPERATURA DEL LABORATORIO POR 15 MINUTOS . CENTRIFUGAR Y LEER SI HAY O NO AGLUTINACIN . SI LA AGLUTINACION PERSISTE REPETIR EL PROCEDIMIENTO CON CELULAS FISCINADAS FRESCAS.

EN EL CASO DE UNA ADSORCION ALOGENICA SE ULITIZA CLULAS CON ANTIGENOS CONOCIDOS ESPECFICOS PARA EL ANTICUERPO QUE SE DESEA ADSORVER.

ELUCIN POR CALENTAMIENTO. ELUCIN POR CONGELAMIENTO RPIDO. ELUCIN POR ETER. ELUCIN POR XILENO (XILOL ). ELUCIN POR CLOROFORMO.

PREPARACION DE LA MUESTRA: LAVAR EL VOLUMEN DE CLULAS CON UN EXESO DE SALINA POR 6 VECES, DESPUS DEL LTIMO LAVADO CONSERVAR UNA ALICUOTA DE SALINA PARA INVESTIGAR ANTICUERPOS LIBRES, SI PERSISTE APLICAR LAVADOS ADICIONALES HASTA QUE EL RESIDUO DE SALINA NO PRESENTE ANTICUERPOS. DESPUES DEL ULTIMO LAVADO EMPAQUETAR BIEN LAS CLULAS Y AGREGAR IGUAL VOLUMEN DE SE SOLUCIN DE ALBUMINA BOVINA AL 6% Y MEZCLAR BIEN. LLEVAR AL BAO MARIA A 56C DURANTE 10 MINUTOS MEZCLANDO PERIODICAMENTE. CENTRIFUGAR A ALTA VELOCIDAD POR 5 MINUTOS. SEPARAR EL SOBRENADANTE ROSADO EN UN TUBO APARTE IDENTIFICADO ADECUADAMENTE. ESTE METODO OFRECE BUENOS RESULTADOS PARA ELUIR ANTICUERPOS ANTI-A Y ANTI B PERO NO ES RECOMENDABLE PARA OTROS ANTICUERPOS.

COLOCAR EN UN TUBO 0.5ML DE GLOBULOS ROJOS EMPAQUETADOS Y LAVADOS PREVIAMENTE 6 VECES. AGREGAR 3 GOTAS DE SALINA NORMAL Y MEZCLAR BIEN. TAPAR EL TUBO Y ROTARLO EN POSICION HORIZONTAL PARA QUE LAS CELULAS SE DISTRIBUYAN EN UN CAPA DELGADA EN TODA LA SUPERFICIE INTERIOR. COLOCARLOS EL TUBO EN EL CONGELADOR DE FORMA HORIZONTAL ENTRE -20 A -70 POR 10 MINUTOS. DESCONGELAR RAPIDAMENTE COLOCANDO EL TUBO EN EL CHORRO DE AGUA Y CENTRIFUGAR FUERTEMENTE POR 2 MINUTOS Y TRANSFERIR EL SOBRENADANTE ROSADO A UN TUBO LIMPIO. EL ELUATO DEBE SER PROBADO CONJUNTAMENTE CON UN ALICUOTA DEL SOBRENADANTE DEL MISMO LAVADO. ESTE MTODO ES UTIL PARA RECUPERAR ANTICUERPOS ANTI-A Y ANTI-B POR EJEMPLO EN EL CASO DE LA ENFERMEDAD HEMOLITICA DEL RECIEN NACIDO. TIENE POCA SENSIBILIDAD PARA ELUIR AUTO O ALOANTICUERPO.

LAVAR UN VOLUMEN DE GLOBULOS ROJOS POR 6 VECES Y EMPAQUETAR FUERTEMENTE EN EL LTIMO LAVADO Y CONSERVAR UN ALICUOTA DE LA SALINA RESIDUAL . AGREGAR AL PAQUETE GLOBULAR UN VOLUMEN DE SALINA Y DOS VOLUMENES DE ETER. Y AGITAR FUERTEMENTE EL TUBO EN FORMA HORIZONTAL DURANTE 1 MINUTO. QUITA EL TAPON CUIDADOSAMENTE PARA DEJAR ESCAPAR LOS VAPORES DEL ETER. CENTRIFUGAR A ALTA VELOCIDADES DURANTE 10 MINUTOS, DESPUS DE LA CENTRIFUGACIN SE PUEDE OBSERVAR 3 CAPAS BIEN DEFINIDAS : 1. UNO SUPERIOR TRANSPARENTE QUE ES EL ETER. 2. UN INTERMEDIA: FORMADA POR ELTROMA Y PROTENAS 3. Y UNA INFERIOR COLOREADA DE ROJO POR LA HEMOGLOBINA QUE ES EL ELUATO. ASPIRAR EL ELUATO CON UN PIPETA PASTEUR Y TRANSFERIRLO A UN TUBO LIMPIO. LLEVAR EL TUBO DESTAPADO AL BAO MARIA A 37C PARA QUE EL ETER SE TERMINE DE EVAPORAR

SI QUEDA UNA PORCION DE ETER RESIDUAL SE RECOMIENDA COLOCAR EL TUBO PARA LA PRUEBA DOS GOTAS DEL ELUATO Y LLEVARLO A BAO MARIA A 37C DURANTE 5 MINUTOS PAR QUE ETER SE EVAPORE.

COLOCAR UN VOLUMEN DE GLOBULOS ROJOS EMPAQUETADOS Y LAVADOS PREVIAMENTE 6 VECES Y AGREGARLE IGUAL VOLUMEN DE XILOL. TAPAR EL TUBO Y COLOCARLO DE FORMA HORIZONTAL Y AGITAR FUERTEMENTE DURANTE 1 A 2 MINUTOS. INCUBAR EN BAO MARIA A 56C DURANTE 10 MINUTOS AGITANDO PERIODICAMENTE . CENTRIFUGAR A ALTA VELOCIDAD (3,000 RPM) POR 10 MINUTOS. RETIRAR LA CAPA SUPERIOR Y EL ESTROMA TENIENDO EL CUIDADO DE RECENTRIFUGAR FUERTEMENTE EL ELUATO PARA ELIMINAR RESIDUOS CONTAMINANTES DEL ESTROMA.

COLOCAR EN UN TUBO 1 ML DE GLOBULOS ROJOS EMPAQUETADOS Y LAVADOS PREVIAMENTE 6 VECES AGREGAR 1ML DE ALBMINA Y 2 ML DE CLOROFORMO. TAPAR EL TUBO CON UN TAPON DE CORCHO Y COLOCARLO DE FORMA HORIZONTAL Y AGITAR FUERTEMENTE DURANTE 15 SEGUNDOS. LUEGO MEZCLAR POR INVERSION DURANTE 1 MINUTO. DESTAPAR Y COLOCAR EL TUBO EN BAO MARIA A 56C DURANTE 5 MINUTOS, MEZCLAR EL CONTENIDO CON UN APLICADOR DURANTE ESTE TIEMPO. CENTRIFUGAR FUERTEMENTE (3,400 RPM) POR 5 MINUTOS TRANSFERIR EL ELUATO( CAPA SUPERIOR) EN UN TUBO LIMPIO.

LOS PROCEDIMIENTOS DE ELUCIN O ADSORCIN SON DE GRAN UTILIDAD PARA AQUELLOS CASOS DONDE ES NECESARIO OBTENER O SEPARAR DEL GLOBULO ROJOS INMUNOGLOBULINAS CON EL FIN DE INDENTIFICAR EL TIPO DE ANTICUERPO INVOLUCRADO O EN TAL CASO PARA EVITAR LA INTERFERENTE DE ESTE CON LA IDENTIFICACION DEL PANEL. HAY PROCESOS MANUALES QUE SON DE GRAN UTILIDAD SIN EMBARGO LA DISPONIBILIDAD DE METODOLOGIAS MS SENSIBLES Y SENCILLAS EVITAN EL PROBLEMA DE LA MANIPULACION DE COMPUESTOS UN TANTO PELIGROSOS.