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UNIVERSIDADE PRESIDENTE ANTNIO CARLOS

GESIANE GONALVES FERREIRA

RELATRIO DE ESTGIO SUPERVISIONADO EM IMUNOLOGIA CLNICA DO CURSO DE FARMCIA

IPATINGA 4 DE MAIO DE 2011

LISTA DE FIGURAS E TABELAS

Figura 1. Princpio do teste de hepatite viral B IgG................................................................12 Figura 2. Princpio do teste de hepatite viral B IgM. ..............................................................15 Figura 3. Princpio do teste de rubola IgG. ...........................................................................18 Figura 4. Princpio do teste de rubola IgM. ..........................................................................20 Tabela 1. Determinao do grupo sanguneo pela presena de hemoaglutinao...................24 Tabela 2. Resultados obtidos pelo teste de tipagem sangunea................................................24

SUMRIO

1INTRODUO........................................................................ ................................................4 2 CARACTERIZAO DO LOCAL DE ESTGIO................................................................6 3 ATIVIDADES REALIZADAS...............................................................................................7 TESTES DE ASLO.........................................................................................................7 TESTE DE CHAGAS..................................... ................................................................8 TESTE DE -HCG.........................................................................................................9 TESE DE HEPATITE VIRAL B IgG...........................................................................11 TESTE DE HEPATITE VIRAL B IgM .......................................................................13 PCR LTEX................................................................. ................................................16 TESDE DE RUBOLA IgG........................................................................................17 TESTE DE RUBOLOA IgM........................................................................ ..............19 TESTE DE SFILIS......................................................................................................21 TIPAGEM SANGUNEA.............................................................................................23 TESTE DE WAALER ROSE.......................................................................................25 4 CONCLUSO.......................................................................................................................27 REFERNCIAS........................................................................................................................28 ANEXOS....................................................................................................................... ...........30

1 INTRODUO

A imunologia considerada uma cincia nova e sua origem est atribuda a Edward Janner, que em 1796 descobriu a utilizao da vacnia como proteo contra a varola humana, uma doena com conseqncias fatais. (JANEWAY et al., 2002) No setor de Imunologia em um Laboratrio de Anlises Clnicas, as reaes imunoqumicas so as bases de uma grande variedade de ensaios clnicos sensveis e especficos. Neste testes, em geral, utiliza-se anticorpos como reagentes para a deteco de substncias qumicas (antgenos) de interesse. a especificidade e a alta afinidade de anticorpos para antgenos especficos, juntamente com a capacidade exclusiva dos anticorpos interligarem aos antgenos, que permitem a identificao e a dosagem de substncias especficas pelos mtodos imunolgicos. (Tietz,1996) Anticorpos so imunoglobulinas capazes de se ligar especificamente a uma variedade de antgenos naturais e sintticos (por exemplo, protenas, glicdios, cidos nuclicos, lipdeos e outras molculas). A imunoglobulina G (IgG) o reagente imunoqumico de uso mais freqente. Atualmente, IgA ,IgM ,IgD e IgE no desempenham um papel importante na anlise imunoqumica. Da mesma forma, os anticorpos monoclonais so amplamente utilizados como reagente em tcnicas de imunoensaio. (Tietz,1996) Atualmente, os mtodos imunolgicos ampliaram sua ao para estudar os distrbios do prprio sistema imunolgico. As clulas linfides anormais podem perturbar a produo de imunoglobulinas, defeitos congnitos podem prejudicar a produo de anticorpos circulantes, a funo dos linfcitos, macrfagos, neutrfilos ou do complemento. A resposta imunolgica anormal pode causar doenas alrgicas ou auto-imunes. Assim, os mtodos imunolgicos continuam em grande desenvolvimento e novas tcnicas so frequentemente elaboradas. (MOURA, 2006) Dentre algumas reaes utilizadas no Laboratrio de Imunologia esto as reaes de precipitao e aglutinao. A primeira ocorre entre antgenos multivalentes (macromolculas solveis) e anticorpos dos tipos IgG, IgA, IgM ou, possivelmente IgE, levando a formao de mosaicos tridimensionais que se agregam e se precipitam. J as reaes de aglutinao ocorrem entre um antgeno particulado e seu anticorpo especfico (aglutinao direta) ou entre uma partcula inerte e recoberta pelo antgeno solvel e seu anticorpo especfico (aglutinao

indireta ou passiva). Em geral, as reaes de aglutinao, so simples, mas necessitam de uma cuidadosa padronizao e do uso de controles positivos e negativos. O estgio de Imunologia tem como finalidade ampliar e aprimorar os conhecimentos sobre a rea de atuao clnica imunolgica, sobre como realizar as anlises, o correto manuseio das informaes e dos reagentes fornecidos pelos kits utilizados nos testes, e inclusive a interpretao dos resultados, que muitas vezes so associados aos sintomas clnicos para a concluso de um diagnstico.

2 CARACTERIZAO DO LOCAL DE ESTGIO

O estgio de anlises imunolgicas foi realizado no laboratrio 111 no andar trreo da Universidade Presidente Antnio Carlos, Campus Ipatinga, localizado na Rua Salermo, 299 Bairro Bethnia. As atividades foram instrudas e supervisionadas pela professora Mriam Oliveira, formada em bioqumica pela Universidade Presidente Antnio Carlos- Ipatinga, e especializada em imunologia clnica, atuante como docente da mesma disciplina na presente universidade. O laboratrio onde foram feitas as atividades do estgio amplo, disposto com bancadas, outra bancadas onde esto dispostos os microscpios, cadeiras, televisor lousa , branca, armrios com equipamentos e materiais para a realizao de anlises diversas, pia s, refrigeradores para o armazenamento dos kits para os teste e as substncias termolbeis. As atividades transcorreram nos dias 17, 18, 24, 25, 31 do ms de maro e no dia 28 de abril sendo nas quintas-feiras das 9:30h s 13:30h, e nas sextas-feiras das 7:30h s 13:30h, totalizando uma carga horria de 30 horas.

3 ATIVIDADES REALIZADAS

As atividades foram dividas parte terica, quando foi apresentado o laboratrio, a localizao dos equipamentos, os materiais de utilizao rotineira para as anlises, procedimentos de segurana dentro do laboratrio e durante as prticas com os materiais e amostras, tambm, foram apresentadas as finalidades, os princpios e a metodologia dos testes realizados; E em parte prtica, quando foram realizados os testes a partir de amostras com a posterior obteno dos resultados finais. A seguir, esto descritos os testes imunolgicos realizados durante o perodo do estgio em imunologia clnica.

TESTES DE ASLO FINALIDADE um teste imunolgico qualitativo e semiquantitativo com a finalidade de determinar a antiestreptolisina O em soro sanguneo atravs da aglutinao de partculas de ltex sensibilizadas com Estreptolisina O. (ASLOTEST, 2010). PRINCPIO DO MTODO dado pela aglutinao que ocorre quando o reagente, constitudo por uma suspenso de partculas de poliestireno sensibilizadas com Estreptolisina O, ao ser colocado em contato com soro sanguneo contendo altos nveis de anticorpos antiestreptolisina O inicia a reao antgeno anticorpo, evidenciado pela aglutinao das partculas de ltex que formam agregados facilmente visveis. (ASLOTEST, 2010). A Estreptolisina O uma toxina liberada pelo Streptococcus pyogenes, nas infeces causadas por ela, e altamente antignica levando formao de Anticorpos AntieStreptoLisina O (ASLO). Estas bactrias so a causa mais frequente de faringite bacteriana em crianas e podem levar a complicaes como: miocardite reumtica glomerulonefrites agudas difusas. (ASLOTEST, 2010). Aproximadamente 85% dos portadores de febre reumtica apresentam nveis elevados de ASLO a partir da quarta semana da doena, mas mesmo assim, nestes casos no h como e

identificar a atividade da doena. Mesmo sendo considerado um teste importante, a ASLO apresenta apenas como resposta uma infeco prvia estreptoccica e sua elevao pode no significar um indicador de doenas reumticas. (ASLOTEST, 2010). MATERIAIS E REAGENTES
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Pipetas 25QL. Ponteiras descartveis. Placa de fundo preto. Bastes descartveis. Kit contendo: ltex, controles positivo e negativo. Amostra. Utilizou-se o soro para a realizao do teste.

Foi lembrado que no se deve utilizar o plasma, as amostras lipmicas e hemolisadas. PROCEDIMENTO TCNICO Foram seguidas as instrues descritas pela Bula do Kit teste. RESULTADOS Nenhuma das amostras analisadas apresentou aglutinao aps a realizao do teste, determinando-se todos os resultados como negativos para o teste de ASLO.

TESTE DE CHAGAS FINALIDADE DO TESTE Identificar a presena de anticorpos contra o Trypanosoma cruzi possveis de ser encontrados em amostras de soro sangunea. A doena de Chagas causada por um protozorio, Trypanosoma cruzi. uma infeco endmica, de evoluo crnica, e transmitida ao homem pelo inseto triatomneo. Podem ser considerados, imunologicamente, 3 estgios: agudo, latente e crnico. Na fase aguda, verificam-se febre, miocardiopatia, linfoadenopatia, hepatoesplenomegalia e parasitemia. A multiplicao intracelular dos parasitas nos msculos lisos e estriados, alm das clulas do sistema retculo endotelial, leva a formao de pseudocistos. Na fase latente no h sintomas e a doena pode evoluir para a fase crnica com sinais de miocardiopatia,

degenerao das clulas ganglionares do sistema nervoso central e perifrico, hipertrofia e dilatao de certos rgos, tais como esfago e clon. Infelizmente prevalecem os altos ndices de incidncia e morbidade da doena e por isso ela se tornou um dos maiores problemas de sade pblica na Amrica Latina. (IMUNO-HAI CHAGAS, 2004). PRINCPIO DO MTODO O teste tem por princpio a aglutinao pela reao de eritrcitos de aves estabilizados e sensibilizados com componentes antignicos do Trypanosoma cruzi altamente purificados, que entram em contato com o soro contendo anticorpos contra esses antgenos. (IMUNO-HAI CHAGAS, 2004). MATERIAIS E REAGENTES
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Pipetas e ponteiras descartveis. Tubos de ensaio. Diluente Kit com controles positivo e negativo, eritrcitos sensibilizados e 2Amostra. Utilizou-se o soro para a realizao do teste.

mercaptanol.
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PROCEDIMENTO TCNICO Foram seguidas as instrues descritas pela Bula do Kit teste. RESULTADOS Nenhuma das amostras analisadas apresentou floculao ap a realizao do teste, s determinando-se todos os resultados como negativos para o teste de Chagas.

TESTE DE

-HCG

FINALIDADE O teste de -hCG tem como objetivo a determinao quantitativa da gonadotrofina corinica humana no soro ou urina ( -hCG QUANTITATIVO, 2007) para a deteco da

gesto e para o diagnstico de distrbios precoces da gestao. (ACCULITE CLIA MICROWELLS, 2006). O hormnio gonadotropina corinica humana (hCG) secretado pelo tecido placentrio, desde o momento da implantao do ovcito fecundado e serve para manter o corpo lteo durante as primeiras semanas da gravidez. Sua concentrao plasmtica e urinria eleva-se dramaticamente durante a gestao normal. Porm, a hCG ou as glicoprotenas semelhantes ao hCG tambm podem ser produzidas por uma ampla variedade de tumores trofoblsticos e no trofoblsticos. (ACCULITE CLIA MICROWELLS, 2006). PRINCPIO DO MTODO um mtodo rpido de imuno-anlise cromatogrfica para a deteco qualitativa da Gonadotropina Corinica Humana na urina ou no soro para auxiliar na deteco do incio da gravidez. Onde uma combinao de anticorpos, incluindo um anticorpo hCG monoclonal, detectam seletivamente nveis elevados de hCG. (STRIP EASY TEST, 2007). A anlise feita pela imerso da tira de teste em urina ou soro e a posterior observao da formao de linhas coloridas. A amostra percorre via capilar ao longo da membrana para reagir com o conjugado colorido. Se a amostra contiver elevados nveis do hormnio, este reage com o anticorpo especfico hCG colorido conjugado e formam uma linha colorida na regio da linhas de teste da membrana. Mas, na ausncia desta linha colorida sugere-se um resultado negativo. Como controle, uma linha colorida sempre aparecer na regio da linha de controle indicando que um volume adequado de amostra foi acrescentado e que ocorreu absoro da membrana. (STRIP EASY TEST, 2007). MATERIAIS E REAGENTES
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Vidraria Pipetas manuais ou automticas Tira de teste Amostra. (podendo ser urina ou soro. Mas nesta anlise foi utilizado o soro)

PROCEDIMENTO TCNICO Foram seguidas as instrues descritas pela Bula do Kit teste.

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RESULTADOS Todas as amostras analisadas apresentaram colorao somente para a fi a de controle x e nenhuma para a faixa de teste, determinando-se todos os resultados como negativos.

TESE DE HEPATITE VIRAL B IgG FINALIDADE O teste tem o objetivo de detectar qualitativamente os anticorpos IgG para o antgeno core da hepatite B (HBc), em soro ou plasma humano. (IMMUNO COOMB II HBc IgG). O vrus da hepatite B (HBV) pertence a uma famlia de vrus de DNA, chamada Hepadnaviridae, apresentando hepatotropismo evidente e um nico meio de replicao pelo mecanismo de transcrio reversa. O viron completo ou partcula de Dane, consiste em uma molcula de DNA circular protegida por um capsdeo nuclear / antgeno de core (HBcAg), e envolvido por uma lipoprotena de envelope, que o antgeno de superfcie (HBsAg). O HBsAg tambm encontrado no soro como partculas ou filamentos esfricos, incompletos e no infecciosos. Um pequeno componente do nucleocapsdeo do HBV, o antgeno HBe (HBeAg), tambm detectvel no sangue durante a fase replicativa deste vrus. (IMMUNO COOMB II HBc IgG). O vrus da hepatite B tem uma distribuio global e est amplamente presente. Suas principais vias de transmisso so: horizontal, atravs de contaminao sexual ou parenteral; e vertical, com a transmisso congnita da me infectada para o feto. As conseqncias clnicas da infeco por HBV variam de totalmente imperceptveis, maioria dos casos, ou evolui para uma hepatite aguda com ictercia, podendo haver recuperao total dentro de seis meses aps o incio da doena. A minoria da populao infectada pode desenvolver hepatite fulminante, freqentemente seguido de bito. J em uma proporo significativa dos pacientes adultos, o HBV pode persistir, progredindo para hepatite crnica com desenvolvimento de cirrose e hepatocarcinoma. (IMMUNO COOMB II HBc IgG). Os anticorpos IgM e IgG contra o antgeno core do vrus, aparecem durante a fase aguda da infeco por HBV. Mas, enquanto os nveis de anti-HBc IgM declinam rapidamente, os nveis de anti-HBc IgG persistem por anos. Assim, o anti-HBc IgG um indicador til para determinar uma infeco prvia com o HBV. Alm disso, o anti-HBc IgG o nico marcador HBV detectvel durante a chamada janela sorolgi a da hepatite B c

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aguda, ou seja, o perodo do desaparecimento do HBsAg, quando o anticorpo anti-HBs indicando liberao do vrus, ainda no detectvel. (IMMUNO COOMB II HBc IgG). PRINCPIO DO MTODO um ensaio imunoenzimtico (EIA) indireto em fase slida, onde a fase slida um pente com doze projees (dentes) e cada um dos dentes esto sensibilizados em duas posies: Ponto superior imunoglobulina humana (Controle Interno) Ponto inferior HbcAg recombinante. (IMMUNO COOMB II HBc IgG). A Placa Reveladora tem cavidades, e em cada uma contendo reagentes prontos para uso em diferentes etapas do teste, que realizado com incubao em cada etapa. Antes de iniciar o teste, amostras de soro ou plasma so pr-diludas a 1:10 e adicionadas ao diluente na primeira cavidades da Placa Reveladora e os anticorpos Anti-HBc, se presentes na amostra, iro ligar-se especificamente ao HBcAg no ponto inferior do dente do Pente. Os componentes no ligados so lavados na prxima etapa. J na etapa seguinte, os IgG antiHBc capturados nos pontos Inferiores do dente, e a imunoglobulina humana nos pontos superiores (Controle Interno) reagiro com anticorpos anti-IgG humana marcados com fosfatase alcalina (FA). Nas prximas duas etapas, os componentes no ligados so removidos por lavagem. Na ltima etapa, a fosfatase alcalina ligada ir reagir com o substrato cromognico e os resultados so visualizados como pontos cinza azulados na superfcie dos dentes do Pente. (IMMUNO COOMB II HBc IgG). Este princpio est resumido na figura 1, a seguir.

Figura 1. Princpio do teste de hepatite viral B IgG. (Fonte: IMMUNO COOMB II HBc IgG).

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MATERIAIS E REAGENTES
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Pipetas de 10 QL, 25Q L e 100QL. Ponteiras descartveis. Tesoura. Cronmetro. Tubo de ensaio Kit contendo: Placa reveladora, Pente, Controles positivo e negativo e Amostra. Utilizou-se o soro para a realizao do teste.

Diluente.
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PROCEDIMENTO TCNICO Foram seguidas as instrues descritas pela Bula do Kit teste. RESULTADOS Nenhuma das amostras analisadas apresentou reao enzimtica de cor aps a realizao do teste, determinando-se todos os resultados como negativos para o teste de Hepatite B.

TESTE DE HEPATITE VIRAL B IgM FINALIDADE O teste tem por objetivo detectar qualitativamente anticorpos IgM para antgeno core da hepatite B (HBc) em soro ou plasma humano. utilizado para o diagnstico e monitoramento de Hepatite B, tambm auxilia na diferenciao entre Hepatite B aguda ou infeco crnica reativada e doena crnica assintomtica ou remisso persistente. (IMMUNO COOMB II HBc IgM). O vrus da hepatite B (HBV) pertence a uma famlia de vrus de DNA, chamada Hepadnaviridae, apresentando hepatotropismo evidente e um nico meio de replicao pelo mecanismo de transcrio reversa. O viron completo ou partcula de Dane, consiste em uma molcula de DNA circular protegida por um capsdeo nuclear / antgeno de core (HBcAg), e envolvido por uma lipoprotena de envelope, que o antgeno de superfcie (HBsAg). O HBsAg tambm encontrado no soro como partculas ou

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filamentos esfricos, incompletos e no infecciosos. Um pequeno componente do nucleocapsdeo do HBV, o antgeno HBe (HBeAg), tambm detectvel no sangue durante a fase replicativa deste vrus. (IMMUNO COOMB II HBc IgM). O vrus da hepatite B tem uma distribuio global e est amplamente presente. Suas principais vias de transmisso so: horizontal, atravs de contaminao sexual ou parenteral; e vertical, com a transmisso congnita da me infectada para o feto. (IMMUNO COOMB II HBc IgM). As conseqncias clnicas da infeco por HBV variam de totalmente A minoria da imperceptveis, maioria dos casos, ou evolui para uma hepatite aguda com ictercia, podendo haver recuperao total dentro de seis meses aps o incio da doena. populao infectada pode desenvolver hepatite fulminante, freqentemente seguido de bito. J em uma proporo significativa dos pacientes adultos, o HBV pode persistir, progredindo para hepatite crnica com desenvolvimento de cirrose e hepatocarcinoma. (IMMUNO COOMB II HBc IgM). A deteco de anticorpos contra o antgeno core da Hepatite B (anti-HBc), em soro ou plasma humano um importante diagnstico na monitorao desta infeco. Geralmente os anticorpos anti-HBc so encontrados no soro logo aps a soroconverso do HBsAg, e persiste at que os anticorpos anti-HBs se tornem detectveis. Por isso, se os dois marcadores HBsAg e anti-HBs no estiverem presentes, os anticorpos anti-HBc podem indicar uma infeco recente ou um sangue potencialmente infectante. As duas classes de anticorpos IgG e IgM so encontradas no soro do paciente infectado. Os anticorpos IgM so os primeiros a serem encontrados e atingem seu pico durante a fase aguda. J os anticorpos IgG podem persistir durante anos sem sinais de infeco. (ANTI-HBC EIA WELL, 2001). PRINCPIO DO MTODO um teste imunoenzimtico (EIA) em fase slida, baseado no princpio de imunocaptura. A fase slida um pente com doze projees (dentes). Cada dente sensibilizado em duas posies: Ponto superior anti-HBc de coelho (Controle Interno). Ponto inferior anticorpos de cabra para IgM humano. A Placa Reveladora tem 6 fileiras cada uma contendo reagentes. O IgM ser capturado pelos anticorpos anti-IgM nos pontos inferiores dos dentes do Pente. Logo, o IgM anti-HBc capturado nos pontos inferiores dos dentes e os anti-HBc de coelho dos pontos superiores (Controle Interno), reagiro com HBcAg. Na prxima etapa, o HBcAg ligado reagir com os anticorpos de coelho antiHBc marcados com fosfatase alcalina (FA). Nas prximas duas etapas do teste, os

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componentes no ligados so removidos por lavagem. E por fim, na ltima etapa, a fosfatase alcalina ligada ir reagir com os componentes cromognicos. Os resultados so visveis como pontos cinza azulados na superfcie dos dentes do Pente. (IMMUNO COOMB II HBc IgM). O princpio est simplificado na figura 2.

Figura 2. Princpio do teste de hepatite viral B IgM. (Fonte: IMMUNO COOMB II HBc IgM). MATERIAIS E REAGENTES
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Pipetas de 10 QL, 25Q L e 100QL. Ponteiras descartveis. Tesoura. Cronmetro. Tubo de ensaio Kit contendo: Placa reveladora, Pente, Controles positivo e negativo e Amostra. Utilizou-se o soro para a realizao do teste.

Diluente.
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PROCEDIMENTO TCNICO Foram seguidas as instrues descritas pela Bula do Kit teste.

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RESULTADOS Nenhuma das amostras analisadas apresentou reao enzimtica de cor aps a realizao do teste, determinando-se todos os resultados como negativos para o teste de Hepatite B .

PCR LTEX FINALIDADE O teste de PCR Ltex tem por objetivo a determinao de Protenas C-Reativas (PCR) no soro sanguneo, tambm para a monitorao de infeces ps-operatrias, controle de doenas inflamatrias e infecciosas, para o diagnstico, controle teraputico aguda da artrite reumatide. (PRC LTEX, 2009). Os ndices de Protena C Reativa encontram-se aumentados em quadros de febre reumtica, espondilite anquilosante, infarto de miocrdio, carcinomas, inflamaes agudas, artrite reumatide, necrose tecidual, infeces bacterianas e aps cirurgias. Esta protena sintetizada pelo fgado e tem a capacidade de induzir diversas reaes do sistema imune, por exemplo, ativar complemento e fagocitose. Devido a isto, considerada uma das protenas de fase aguda, tambm como um marcador sensvel na monitorao de inflamao aguda e na destruio de tecidos. (PRC LTEX, 2009). PRINCPIO DO MTODO O princpio do teste fundamenta-se em uma reao de aglutinao das partculas de ltex inerte, em suspenso, (PRC LTEX, 2009), recobertas com Gama-globulina anti-PCR, especialmente tratadas para evitar aglutinaes inespecficas. A aglutinao ocorre quando o ltex entra em contato a uma amostra com concentrao de PCR igual ou superior a 6 mg/L. (BIO LTEX PCR, 2011). MATERIAIS E REAGENTES
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acompanhamento de recidivas de diversas doenas, como na febre reumtica e na fase

Pipeta de 50 L. Ponteiras descartveis Palitos descartveis

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Lmina de reao com fundo preto Kit com os reagentes (Ltex PCR, controles positivo e negativo) Amostra. Utilizou-se o soro para a realizao do teste.

Foi lembrado que no se deve utilizar o plasma, as amostras lipmicas e hemolisadas. PROCEDIMENTO TCNICO Foram seguidas as instrues descritas pela Bula do Kit teste. RESULTADOS Dentre as amostras utilizadas para a anlise, uma apresentou aglutinao e logo seguiu-se o procedimento do mtodo semiquantitaivo. Aps a realizao do mtodo semiquantitativo, realizado conforme as instrues da bula do kit teste, verificou-se que as concentraes da protena C reativa no eram significativas, o que leva a concluso de que a pessoa apresentaria algum sinal de infeco no grave. Este fato foi confirmado aps interrogar o paciente que relatou um incio de infeco de garganta.

TESDE DE RUBOLA IgG FINALIDADE O teste de rubola IgG tem por obejtivo a determinao quantitativa de anticorpos IgG para o vrus da rubola em soro ou plasma humano. O vrus da rubola encontrado principalmente em populaes humanas a sua transmisso ocorre principalmente pelo ar ou por contato direto. considerada uma infeco geralmente de manifestao benigna e autolimitante, linfoadenopatia, caracterizada por erupo maculopapoular (sarampo), febre tnue e e artrite leve. mas tambm podem ocorrer artralgia provisria

(IMMUNOCOMB II RUBOLA IgM). A infeco primria por rubola contrada logo no incio da gravidez, pode resultar em danos severos ao feto levando, inclusive ao aborto. Estes danos causado pela infeco congnita s incluem anormalidades anatmicas e neuro-sensoriais srias, tais como surdez, defeitos cardacos, catarata, glaucoma, retardo mental e ainda, complicaes posteriores como o retardo no crescimento e a diabete mellitus. Por causa disto, tm utilizado a -se vacinao em massa para se reduzir a incidncia de rubola em todas as faixas etrias.

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Mesmo assim, de 10 a 20% dos jovens adultos ainda so suscetveis ao vrus. (IMMUNOCOMB II RUBOLA IgM). A triagem de anticorpos IgG para o vrus da rubola til para o diagnstico da doena e para a determinao do estado da imunizao. Os anticorpos para o vrus aparecem medida que a erupo diminui. Nos adultos, os anticorpos IgG geralmente, persistem por toda a vida e como consequncia, um nvel estvel de IgG anti-rubola revela uma exposio prvia ao vrus, enquanto um aumento quadruplicado ou maior diagnstico positivo para uma infeco recente. (IMMUNOCOMB II RUBOLA IgM). PRINCPIO DO MTODO um mtodo de enzimaimunoensaio ou imunoenzimtrica em fase slida baseada no princpio de deteco qualitativa e quantitativa indireta de anticorpos IgG para rubola no soro ou plasma humano. Neste mtodo, os anticorpos IgG anti - rubola presentes na amostra ligam-se aos antgenos revestidos na microplaca formando complexos antgeno-anticorpos IgG. Aps a incubao inicial, a microplaca lavada para remover os materiais no ligados. A Enzima Conjugada anti-Anticorpos IgG humanos adicionada microplaca e ento incubada novamente. Os anticorpos enzima - conjugado anti-IgG humano se ligam aos anticorpos IgG imobilizados pelos antgenos presentes. realizada nova Lavagem para remover os excedentes. Aps a realizao das etapas, a colorao produzida indica a quantidade de anticorpos IgG presentes nas amostras e so comparadas a colorao do controle positivo. (BIOLISA RUBOLA IgG, 2011). Todo o princpio do teste est simplificado na figura 3.

Figura 3. Princpio do teste de rubola IgG. (Fonte: IMMUNOCOMB II RUBOLA IgM).

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MATERIAIS E REAGENTES Pipetas 10 L, 25 L e 100 L.

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Ponteiras descartveis. Tesoura. Kit do teste: Placa reveladora, Pente e absorvente residual. Amostra. (Tanto o soro como o plasma podem ser testados, mas nesta anlise

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foi utilizado soro.) PROCEDIMENTO TCNICO Foram seguidas as instrues descritas pela Bula do Kit teste. RESULTADOS Todas as amostras, com exceo de uma, no apresentaram nenhum ponto de colorao. Mesmo, assim, a amostra em exceo no alcanou colorao igual ou mais intensa que o ponto do controle positivo, considerando-se todas as amostras analisadas como resultados negativos.

TESTE DE RUBOLOA IgM FINALIDADE O teste rubola IgM tem como objetivo a determinao qualitativa de anticorpos IgM para o vrus da Rubola em soro ou plasma humano. O vrus da rubola encontrado principalmente em populaes humanas a sua transmisso ocorre principalmente pelo ar ou por contato direto. considerada uma infeco geralmente de manifestao benigna e autolimitante, linfoadenopatia, caracterizada por erupo maculopapoular (sarampo), febre tnue e e artrite leve. mas tambm podem ocorrer artralgia provisria

(IMMUNOCOMB II RUBOLA IgM). A infeco primria por rubola contrada logo no incio da gravidez, pode resultar em danos severos ao feto levando, inclusive ao aborto. Estes danos causado pela infeco congnita s incluem anormalidades anatmicas e neuro-sensoriais srias, tais como surdez, defeitos cardacos, catarata, glaucoma, retardo mental e ainda, complicaes posteriores como o retardo no crescimento e a diabete mellitus. Por causa disto, tm utilizado a -se vacinao em massa para se reduzir a incidncia de rubola em todas as faixas etrias.

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Mesmo assim, de 10 a 20% dos jovens adultos ainda so suscetveis ao vrus. (IMMUNOCOMB II RUBOLA IgM). A determinao de IgM anti-rubola til para a distino entre a infeco recente ou a vacinao e imunidade adquirida ou uma reinfeco em mulheres grvidas ou ainda, a medida de anticorpo IgM especfico em recm nascido permite diagnosticar a infeco congnita. (IMMUNOCOMB II RUBOLA IgM). PRINCPIO DO MTODO um teste de enzimaimunoensaio ou imunoenzimtrica em fase slida baseada no princpio de deteco qualitativa e quantitativa indireta de anticorpos IgM para rubola no soro ou plasma humano. Neste mtodo, os anticorpos IgM anti - rubola presentes na amostra ligam-se aos antgenos revestidos na microplaca formando complexos antgeno-anticorpos IgM. Aps a incubao inicial, a microplaca lavada para remover os materiais no ligados. A Enzima Conjugada anti-Anticorpos IgM humanos adicionada microplaca e ento incubada novamente. Os anticorpos enzima - conjugado anti-IgM humano se ligam aos anticorpos IgM imobilizados pelos antgenos presentes. realizada nova Lavagem para remover os excedentes. Aps a realizao das etapas, a colorao produzida indica a quantidade de anticorpos IgM presentes nas amostras e so comparadas a colorao do controle positivo. (BIOLISA RUBOLA, 2011). O princpio do teste est resumido na figura 4 a seguir.

Figura 4. Princpio do teste de rubola IgM. (Fonte: IMMUNOCOMB II RUBOLA IgM).

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MATERIAIS E REAGENTES Pipetas 25 L e 100 L.

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Ponteiras descartveis. Tesoura. Kit do teste: Placa reveladora, Pente e absorvente residual. Amostra. (Tanto o soro como o plasma podem ser testados, mas nesta anlise

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foi utilizado soro.) PROCEDIMENTO TCNICO Foram seguidas as instrues descritas pela Bula do Kit teste. RESULTADOS Os resultados foram obtidos comparande-se a intensidade do ponto inferior de cada dente de amostra com o ponto do dente do controle positivo. A amostra analisada no apresentou ponto com colorao igual ou mais intensa que a colorao do ponto do controle positivo, considerando-se como resultado negativo.

TESTE DE SFILIS FINALIDADE O objetivo do teste de sfilis detectar anticorpos (reaginas) da sfilis nas amostras de soro, plasma ou at mesmo de lquido cefalo-raquidiano (LCR). (SFILIS VDRL, 2009). O Treponema pallidum o agente causador da sfilis e leva o organismo a produzir dois tipos de anticorpos: os no treponmicos ou reaginas (inespecficos) e os treponmicos (especficos). O teste VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) desenvolvido por Harris, Rosenberg e Riedel na dcada de 40 capaz de detectar anticorpos inespecficos ou reaginas, presentes no soro de pacientes com infeco sifiltica, o que permite sua utilizao como prova de triagem sorolgica para esta doena. (VDRL BRS, 2004). A sfilis uma doena infecciosa humana transmitida sexualmente. As outras possveis formas de transmisso so a transfuso de sangue infectado e a perinatal. Clinicamente aps um perodo de incubao, cerca de 10 a 90 dias, em 85% dos pacientes, ocorre o surgimento de um cancro, uma leso solitria e indolor, caracterizando a sfilis primria. Na 4 at a 10 semana logo aps o aparecimento deste cancro, surge sintomas m

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como perda de peso, cefalia, anorexia, mialgia, artralgia, mal-estar, febre baixa, linfadenopatia generalizada e exantema, o que caracteriza a sfilis secundria. durante este estgio que podem ocorrer tambm, as manifestaes do comprometimento do sistema nervoso central. (RPR SFILIS,2011). Aps as manifestaes primrias ou secundrias, ocorre o perodo chamado de sfilis latente, determinado pelos testes sorolgicos positivos e ausncia de achados clnicos. Pode ter durao de 1 a 2 anos. Se no houver um tratamento adequado, pode se manifestar a sfilis terciria, causando goma, sfilis cardiovascular ou neurossfilis. (RPR SFILIS,2011). PRICPIO DO MTODO O teste, no-treponmico, para diagnstico da sfilis baseado na reao de floculao na presena de anticorpos (reaginas) no soro ou plasma. (RPR SFILIS,2011). Quando a suspenso antignica do teste misturada amostra em uma lmina apropriada e submetida a um processo de rotao mecnica por alguns minutos, as partculas de colesterol revestidas iro flocular caso a amostra contenha reaginas, sendo esta floculao visvel ao microscpio, ou permanecero livres em suspenso no caso da amostra no conter reaginas. (VDRL BRS, 2004). MATERIAIS E REAGENTES
y y y y y y y y

Lmina escavada Pipetas 50QL. Ponteiras descartveis. Microscpio ptico Tubos de ensaio Soluo salina 0,9% Kit com os reagentes Amostra. Utilizou-se o soro para a realizao do teste.

PROCEDIMENTO TCNICO Foram seguidas as instrues descritas pela Bula do Kit teste.

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RESULTADOS Nenhuma das amostras analisadas apresentou floculao aps a realizao do teste, determinando-se todas negativas para o teste de sfilis.

TIPAGEM SANGUNEA FINALIDADE O objetivo do teste determinar o grupo sanguneo atravs do teste de aglutinao das hemcias com Anti-A, Anti-B e Anti-AB, este ltimo facilita o reconhecimento de certos subgrupos raros e tambm serve para a confirmao do grupo sanguneo ABO. E tambm com a utilizao do Anti-D, para a possvel determinao do fator Rh. (SORO ANTI-A, ANTI- B, ANTI-AB, 2008). O sistema ABO foi determinado por Landsteiner em 1901 e representado por quatro grupos principais: A, B, A/B e O. (SORO ANTI-A, ANTI- B, ANTI-AB, 2008). Landsteiner descobriu que os glbulos vermelhos podiam ser classificados por estes quatro tipos conforme a presena ou ausncia de antgenos altamente reativos em sua superfcie. Ele tambm comprovou a existncia de anticorpos (aglutininas) para os antgenos A e B e que o soro de um indivduo no contm anticorpos para o antgeno presente em seus prprios glbulos vermelhos, mas, contra os que no possui. (ANTI-A, ANTI-B E ANTI- AB MONOCLONAL, 2000). Tudo isto demonstra a importncia da compatibilidade ABO na prtica transfusional. (ANTI-A, ANTI-B E ANTI- AB MONOCLONAL, 2000). Afinal, os anticorpos Anti-A e Anti-B podem causar reaes hemolticas transfusionais srias, assim como a Doena Hemoltica do Recm Nascido. Desta forma, h a necessidade de se testar tanto o sang do ue receptor quanto do doador para a presenados antgenos A e/ou B. (SORO ANTI-A, ANTIB, ANTI-AB, 2008). PRINCPIO DO MTODO Os reagentes causam aglutinao direta macroscpica das hemcias que carregam os antgenos correspondentes. Assim, as hemcias que possuem o antgeno B se aglutinam quando misturadas ao reagente Anti B e tambm ao reagente Anti AB; As hemcias que possuem o antgeno A se aglutinam quando misturadas ao reagente Anti A e tambm ao reagente Anti AB; As hemcias que possuem antgenos AB aglutinam quando misturadas aos

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reagentes Anti A, Anti B e Anti AB. (SORO ANTI-A, ANTI- B, ANTI-AB, 2008). A ausncia de aglutinao em para todos os reagentes demonstra ausncia de antgenos. (ANTIA, ANTI-B E ANTI- AB MONOCLONAL, 2000). Quando houver antgenos D presentes nas hemcias, elas aglutinam quando entram em contanto com reagente Anti D. (SORO ANTI-A, ANTI- B, ANTI-AB, 2008). A tabela 1 a seguir, resume o princpio do mtodo do teste com a determinao do grupo sanguneo. Anti A + 0 0 + Anti B 0 + 0 + Anti AB + + 0 + GRUPO SANGUNEO A B Anti D Rh + + Rh 0

Tabela 1. Determinao do grupo sanguneo pela presena de hemoaglutinao. MATERIAIS E REAGENTES

y y y

Lmina de vidro. Kit contendo: Reagentes Anti A, Anti B, Anti AB e Anti D. Amostra. Utilizou-se sangue total colhido por puno venosa e capilar.

PROCEDIMENTO TCNICO Foram seguidas as instrues descritas pela Bula do Kit teste. RESULTADOS Os resultados esto apresentados na tabela 2 a seguir:
Amostra Anti A Anti B Anti AB Anti D

Tipo sanguneo A Rh+

A Rh+ O Rh+

1 2 3

+
+ 0

0
0 0

+
+ 0

+
+ +

Tabela 2. Resultados obtidos pelo teste de tipagem sangunea.

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TESTE DE WAALER ROSE FINALIDADE O teste Waaler Rose tem o objetivo de determinar o fator reumatide (FR) no soro sanguneo. (WAALER ROSE BIOTCNICA, 2009). PRINCPIO DO MTODO O princpio deste teste est na capacidade das partculas de ltex, previamente sensibilizadas com a frao IgG, sofrerem uma reao de aglutinao ntida e rel tivamente a rpida, quando em contato a uma amostra com concentraes de fatores reumatides igual ou superior a 8 UI/mL. O teste possui ainda fatores limitantes de seu processo, como a utilizao do plasma ou soro homolisado ou lipmico e mostras nestas co ndies podem gerar falso positivo, pois podem induzir a aglutinao inespecfica. (BIOCLIN, 2006). O fator reumatide (FR) refere-se a um grupo de macroglobulinas, ou seja, antiglobulinas, que reagem com o fragmento Fc das Imunoglobulinas IgG. Este fator representa o achado mais importante para o teste sorolgico em casos de artrite reumatide. No somente neste caso, mas o nvel plasmtico do fator reumatide pode estar aumentado significativamente tambm na velhice, em casos de doenas do tecido conjuntivo, hepatopatias crnicas, sfilis, tuberculose, hansenase, endocardite bacteriana, mononucleose, sarcoidose, calazar, rubola, neoplasias, infestaes parasitrias, transfuses de sangue, transplante renal, sndrome de Sjogren. (BIOCLIN, 2006). Pacientes com altos ttulos de FR tendem a evoluir com complicaes viscerais e a ter resposta teraputica insatisfatria. (WAALER ROSE BIOTCNICA, 2009). MATERIAIS E REAGENTES
y y y y y

Pipeta de 50 L Ponteiras descartveis Palitos descartveis Lmina de reao de fundo claro Kit com os reagentes (Suspenso de hemcias de ovelha estabilizadas e Amostra (Utilizou-se o soro para a realizao do teste).

sensibilizadas com IgG de coelho anti-hemcias de ovelha)

y

Foi lembrado que no se deve utilizar o plasma, as amostras lipmicas e hemolisadas.

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PROCEDIMENTO TCNICO Foram seguidas as instrues descritas pela Bula do Kit teste. RESULTADOS Nenhuma das amostras analisadas apresentou aglutinao na realizao do teste, determinando-se todas negativas para o teste de Waaler Rose . No ltimo dia do estgio em imunologia clnica, foram sorteados 3 testes para a uma nova realizao individual das anlises e seus resultados foram registrados em forma de Laudos, conforme o modelo fornecido pela supervisora, e assinados pelo estagirio efetor do teste. Os testes sorteados foram: -hCG, Rubola IgM e PCR Ltex. Os laudos emitidos esto em anexo neste relatrio.

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4 CONCLUSO O setor de Imunologia como qualquer outro setor do Laboratrio de Anlise Clnicas, um setor onde se exige ateno e precauo, usando adequadamente os equipamentos de proteo individual (EPIs) devido o manuseio com amostras de sangue. Os procedimentos dos testes devem ser realizados cuidadosamente analisando cada passo e observando possveis interferentes como soros hemolisados ou lipmicos e outros, os quais podem vir a alterar a reao do teste e conseqentemente vir dar um resultado falso positivo ou negativo, assim faz-se necessrio a padronizao da execuo dos mtodos para um resultado mais seguro e confivel. Com isso, o papel do farmacutico no setor vem a ser o acompanhamento da realizao correto dos exames, a padronizao da execuo dos mtodos, interpretao dos resultados para liberao do laudo e garantia do controle de qualidade.

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REFERNCIAS

ACCULITE CLIA MICROWELLS. HUMAN CHORIONIC GONADOTROPIN (HCG). Belo Horizonte: USA diagnostic Ltda., 2006. Bula de kit de anlise laboratorial. ANTI-A, ANTI-B E ANTI- AB MONOCLONAL. Rosrio: Wiener Lab, 2000. Bula de kit de anlise laboratorial. ANTI-HBC EIA WELL. Pomezia: Radim SPA, 2001. Bula de kit de anlise laboratorial. ASLOTEST. Goinia: Doles Reag. Equip. para Laboratrios Ltda., 2010. Bula de kit de anlise laboratorial. BIOCLIN BIOLISA RUBOLA IgG. Belo Horizonte: Quibasa qumica bsica Ltada., 2011. Bula de kit de anlise laboratorial. BIOCLIN BIOLISA RUBOLA IgG. Belo Horizonte: Quibasa qumica bsica Ltda., 2011. Bula de kit de anlise laboratorial. BIOCLIN, Belo Horizonte: Quibasa qumica bsica Ltda., 2006. Bula de kit de anlise laboratorial. BIOCLIN, BIO LTEX PCR. Belo Horizonte: Quibasa Qumica bsica Ltda., 2011. Bula de kit de anlise laboratorial. IMMUNO COOMB II HBc IgG. Yavne: Orgenics Ltda. Bula de kit de anlise laboratorial. IMMUNO COOMB II HBc IgM. Yavne: Orgenics Ltda. Bula de kit de anlise laboratorial. IMMUNOCONB II RUBOLA IgM. So Paulo: Orgeniscs. Bula de kit de anlise laboratorial. IMMUNOCONB II, RUBOLA IgM. So Paulo: Orgeniscs. Bula de kit de anlise laboratorial. IMUNO RPIDO HCG. Teste de gravidez. So Carlos: Ama diagnstica, 2008. Bula de kit de anlise laboratorial. IMUNO-HAI CHAGAS. So Carlos: Wama Diagnstica, 2004. Bula de kit de anlise laboratorial. JANEWAY, Charles A. et al. Imunologia: o sistema imune na ssade e na doena. 5 ed. Porte Alegre: Artmed, 2002. MOURA, Roberto de Alemida; WADA, Carlos S.; PURCHIO, Adhemar; ALMEIDA, Therezinha Verrastro de. Tcnicas de Laboratrio: Imunologia. 3 ed. So Paulo: Atheneu, 2006.

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PCR-LTEX DIRECTO LINHA MAXI. Rosario: Wiener lab., Argentina, 2000. Bula de kit de anlise laboratorial. PRC LTEX. Varginha: Biotcnica, 2009. Bula de kit de anlise laboratorial. RPR SFILIS. So Carlos: Wama Diagnstica, 2011. Bula de kit de anlise laboratorial. SFILIS VDRL Analisa Gold. Belo Horizonte: Analisa diagnstica Ltda., 2009. Bula de kit de anlise laboratorial. SORO ANTI-A, ANTI- B, ANTI-AB: Anticorpos monoclonais para tipagem sangunea. So Paulo: Ebram produtos laboratoriais Ltda., 2008. Bula de kit de anlise laboratorial. STRIP EASY TEST. Wiener Neudorf: Dialab G.m.b.H., 2007. Bula de kit de anlise laboratorial. TIETZ. Fundamentos de Qumica Clnica: Fundamentos de Tcnicas Imunoqumicas. 4 ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan S.A, 1998. VDRL BRS. Pinhais: Laborclin produtos para laboratrios Ltda., 2004. Bula de kit de anlise laboratorial. WAALER ROSE BIOTCNICA. Varginha: Biotcnica Ind. Com. Ltda, 2009. Bula de kit de anlise laboratorial. -hCG QUANTITATIVO. Belo Horizonte: Katal Biotecnologia, 2007. Bula de kit de anlise laboratorial.

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ANEXO 1. Laudo do Exame de PCR Laboratrio da Faculdade Presidente Antnio Carlos Setor de Imunologia Sala 111 Rua Salermo, 299 Bethnia, Ipatinga Tel.: (31) 2109-2300 - 0800 724 23 00 Cliente: Gesiane Gonalves Ferreira Pajarinen IMUNOLOGIA Exame: PCR Ltex Mtodo: Reao de aglutinao das partculas de ltex inerte, em suspenso, recobertas com Gama-globulina anti-PCR. Resultado: No houve aglutinao, presumindo valores de concentrao de PCR na amostra menores que 6mg/L. Valor de referncia: Concentrao de PCR < 6 mg/L. Registro: 01.28042011

Obs.: _________________________ Nome do aluno Reg. Acadmico 110009928 Data de emisso: 28/04/2011 O presente laudo parte das atividades realizadas em estgio supervisionado e no possui qualquer valor clnico.

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ANEXO 2. Laudo do Exame de -hCG Laboratrio da Faculdade Presidente Antnio Carlos Setor de Imunologia Sala 111 Rua Salermo, 299 Bethnia, Ipatinga Tel.: (31) 2109-2300 - 0800 724 23 00 Cliente: Gesiane Gonalves Ferreira Pajarinen IMUNOLOGIA Exame: Teste de gravidez. Mtodo: Imuno-anlise cromatogrfica para deteco qualitativa da Gonadotropina Corinica Humana (HCG) no soro. Resultado: Concentrao de HCG inferior a 25 mUI/mL. Valor de referncia: Concentrao de HCG superior a 25 mUI/mL apresenta altas chances do desenvolvimento de gravidez. Concentrao de HCG inferior a 25 mUI/mL apresenta baixas chances do desenvolvimento de gravidez. Registro: 01.28042011

Obs.: _________________________ Nome do aluno Reg. Acadmico 110009928 Data de emisso: 28/04/2011 O presente laudo parte das atividades realizadas em estgio supervisionado e no possui qualquer valor clnico.

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ANEXO 3. Laudo do Exame de Rubola IgM Laboratrio da Faculdade Presidente Antnio Carlos Setor de Imunologia Sala 111 Rua Salermo, 299 Bethnia, Ipatinga Tel.: (31) 2109-2300 - 0800 724 23 00 Cliente: Gesiane Gonalves Ferreira Pajarinen IMUNOLOGIA Exame: Rubola IgM Mtodo: Imunoenzimetria de cor em fase slida para deteco qualitativa indireta de anticorpos IgM para rubola no soro ou plasma humano. Resultado: Intensidade de cor inferior ao controle positivo. Valor de referncia: Ausncia de anticorpos IgM para o vrus da Rubola: Intensidade de cor inferior ao controle positivo. Presena de anticorpos IgM para o vrus da Rubola: cor com intensidade maior ou igual ao controle positivo. Cor com intensidade ligeiramente menor que o ponto do controle positivo deve ser considerado um resultado indeterminado e a amostra deve ser retestada. Obs.: _________________________ Nome do aluno Reg. Acadmico 110009928 Data de emisso: 28/04/2011 O presente laudo parte das atividades realizadas em estgio supervisionado e no possui qualquer valor clnico. Registro: 01.28042011