Desenvolvimento de probiticos para aqicultura.

Jos Luiz P. Mourio

Laboratrio de Camares Marinhos
Departamento de Aqicultura, UFSC

Aquabrasil

Plano de Ao 03 Utilizao de bactrias cido lticas na carcinicultura

1-Isolamento de bactrias cidocido-lcticas com potencial probitico. probitico. 2-Execuo experimental, com larvas e juvenis 3-Desafios para avaliao do tratamento

Andamento

Concludo

Concludo Andamento

Secretaria Especial de Aqicultura e Pesca

Plano de Ao 05- Influncia do uso de bactrias cido lticas sobre as caractersticas hematolgicas
1-Isolamento da bactria cido-ltica, Execuo experimental, Desafios para avaliao do tratamento com bactrias cido lticas em SC

Andamento

Concludo.

Secretaria Especial de Aqicultura e Pesca

Mourino et al., 2009

Introduo:
Na aqicultura a elevada produo de matria orgnica (alimentao e animais mortos), perturbam a comunidade bacteriana e estimulam o crescimento de bactrias oportunistas nos sistemas de criao.
 

O risco de uma infeco microbiana alto.

Mourino et al., 2009

Intensificao e Desequilbrio ambiental

Monitoramento

Enfermidades
Alternativas para combate,
diminuio ou erradicao

Via tradicional Uso indiscriminado de antibiticos Bactrias resistentes

Mourino et al., 2009

Probiticos
Gatesoupe (1999):
Verschuere et al., (2000):

Biocontrole Biorremediao

Efeitos esperados
Aumento de ganho de peso; Aumento de sobrevivncia. Aumento de digestibilidade da dieta. Aumento de imuno competencia dos animais. Interferncia da comunicao das bactrias patognicas. Diminuio de bact. Patognicas bact. na gua. Degradao de matria orgnica (fundo de viveiro)
Mourino et al., 2009

LABORATRIO DE CAMARES MARINHOS

x

AQUOS DEPARTAMENTO DE AQUICULTURA

Linha de pesquisa: Isolamento e identificao de bactrias patognicas. Isolamento e seleo in vitro e in vivo de microorganismos com potencial probitico. Avaliao de vacinas partir de bactrias inativadas. Avaliaes microbiolgicas, hematolgicas e imunolgicas.
Mourino et al., 2009

Espcies:

Mourino et al., 2009

Mourino et al., 2009

Material e Mtodos
Infeco experimental com 30 camares por tanque de 100L: Alimentado com probitico e inoculado com soluo salina Alimentado com rao controle e inoculado com soluo salina

Alimentado com probitico e inoculado com Vibrio harveyi

Alimentado com rao controle e inoculado com Vibrio harveyi

Sobrevivncia dos camares aps 10h da infeco a a

c b

Atividade da enzima fenoloxidase

80 U/minutos/mg de protena 70 60 50 40 30 20 10 0 probitico + s ina controle + salina probitico + vibrio controle + vibrio

Contagem total de hemcitos

5,00E+07 4,50E+07 nmero de hemcitos 4,00E+07 3,50E+07 3,00E+07 2,50E+07 2,00E+07 1,50E+07 1,00E+07 5,00E+06 0,00E+00 pr i i + sali a control + probiotico control + salina + vibrio vibrio

b c

Antioxidant defenses in white shrimp, Litopenaeus vannamei, challenged with Vibrio harveyi and fed with Lactobacillus plantarum as a potential probiotic Karim Hahn Lchmann1, Juliano Zanette1, Felipe do Nascimento Vieira2, Jos Luiz Mourio2, Celso Buglione2, Elpidio Beltrame2, Afonso Celso Dias Bainy1, Maria Risoleta Freire Marques1
6

O D / m g protein

U C AT/ m g protein

6 5 4

a
2 1

25

2 1

15

mU

C
7

PV

PV

PV

6PD H / m g protein

R / m g protein

mU

mU

PV

PV

PV

Mourino et al., 2009

(8)

(7)

(8)

(6)

( )

(8)

( )

( )

mU

( )

( 8)

( )

( )

T/ m g protein

a
7

( )

(8)

( )

( )

(8)

(8)

( )

( )

( )

(7)

(7)

( )

P x / m g protein

45 4

a a

Perspectivas futuras
- Avaliar o uso destas cepas em larga escala - Avaliar o potencial do uso dos produtos extracelulares produzidos por esta cepa na inibio de patgenos - Estudar quais so os extracelulares que a cepa produz produtos

- Avaliar o uso destas cepas frente a infeco com WSSV

Mourino et al., 2009

Tabela 1: Valores mdios dos halos de inibio de bactrias cido-lticas e de antibiogramas contra cepas de bactrias patognicas
Cepas Halo de inbio em mm bacteriana/ Vibrio Vibrio Vibrio Enterococcus Micrococcus Escherichia Mdia antibitico harveyi anguillarum alginolyticus sp. luteos coli L. plantarum 14,0 c* 14,0 b 14,0 b 18,0 b 19,0 e 16,0 e 15,7 d c a e f d L. Brevis 12,0 12,0 16,0 12,0 16,0 18,0 14,3 d c b b e d J5 12,0 12,0 14,0 18,0 20,0 18,0 15,7 d c c e e b J6 12,0 12,0 13,0 13,0 20,0 22,0 15,3 J7 12,0 d 12,0 c 10,0 d 14,0 d 16,0 f 16,0 e 13,2 J8 12,0 d 12,0 c 15,0 b 13,0 e 22,0 d 20,0 c 15,6 a b b a a f Magnemicina 20,0 14,0 14,0 21,0 38,0 14,0 20,2 b a a b b e Eritromicina 15,0 16,0 16,0 18,0 34,0 16,0 19,2 e d d c c a Enrofloxacina 10,0 12,0 10,0 16,0 26,0 24,0 16,3 Oxitetraciclina 0,0 f 0,0 e 0,0 e 0,0 f 34,0 b 20,0 c 9,0 * Letras distintas na coluna indicam diferena significativa pelo teste SNK de separao de mdia (p<0,05).

Mourino et al.(2008) - LCM-UFSC

Mourino et al.(2008) - LCM-UFSC

Tabela 2: Valores mdios e erro padro dos parmetros hematolgicos em tilpia do Nilo alimentada ou no com rao suplementada com Lactobacilus plantarum e infectada com Enterococcus.
Tratamentos ontrole no injetado Suplementado no injetado ontrole injetado com salina Suplementado injetado com salina ontrole injetado com Enterecoccus Suplementado injetado com Enterococcus
  

Glicose (mg/dL) 96,3s44,9a* 150,3s11,3a 106,6s29,5a 58,4s4,4a 59,3s9,5a 63,2s8,3a Hematcrito (%)

Eritrcitos (x106/L) 1,46s0,03b 1,15s0,05b 1,18s0,08b 1,26s0,09b 1,42s0,10b 1,96s0,13a Linfcitos (x103/L)

Trombcitos (x103/L) 35,4s3,1b 28,0s1,9b 26,9s1,9b 30,6s3,6b 36,2s3,9b 47,4s1,4a Neutrfilos (x103/L) 6,39s0,84a 6,47s0,24b 6,38s0,53b 6,85s0,91b 4,40s0,87c 8,85s0,39a

Leuccitos (x103/L) 13,7s1,6bc 15,1s1,6abc 12,0s1,6c 20,1s3,1ab 10,9s1,6c 22,3s1,4a Moncitos (x103/L) 0,24s0,24b 0,66s0,04b 0,05s0,01b 0,08s0,03b 0,73s0,24b 1,47s0,24a

entre as cepas ou antibiticos pelo teste SNK de separao de mdias (p<0,05).

 

Tratamentos

ontrole no injetado 31,1s3,0a 6,63s0,70b Suplementado no injetado 30,8s2,9a 12,47s 1,41a ontrole injetado com salina 26,5s2,9a 5,33s1,13b Suplementado injetado com 29,7s3,4a 7,98s1,93b salina ontrole injetado com 33,3s2,0a 7,53s1,25b Enterecoccus Suplementado injetado com 25,1s2,1a 15,39s 0,99a Enterococcus * Letras distintas na coluna indicam diferena significativa

Mourino et al., 2009

Avaliao do microbiolgica (tilpias)

b Jatob et. al (2008) b

b a

Figura 1. Contagens bacterianas do trato intestinal de tilpias do Nilo em sistema de policultivo com camares alimentados com rao suplementada com Lactobacillus plantarum e controle. Diferentes letras indicam diferena significativa (p<0,05) no t-teste entre os tratamentos.

Mourino et al.(2008) - LCM-UFSC

Avaliao do microbiolgica (camares)

b a a b a a b a

Figura 2. Contagens bacterianas no intestino dos camares em sistema de policultivo com camares alimentados com rao suplementada com Lactobacillus plantarum e controle. Diferentes letras indicam diferena significativa (p<0,05) no t-teste entre os tratamentos. Mourino et al.(2008) - LCM-UFSC

Digestibilidade
Tabela 3: Resultados dos parmetros nutricionais avaliados nas dietas. Coeficiente de digestibilidade aparente da protena bruta (CDAPB), da matria seca (CDAMS), da energia (CDAE), quantidade de fezes produzida e consumo dirio ao longo do experimento. Probitico Parmetros MediaDp CDAMS (%) CDAPB (%) CDAE (%) 63,30 0,23 84,18 0,35* 81,28 0,16* MediaDp 62,50 1,23 82,73 1,012 78,63 0,93 Controle

Mourino et al., 2009

Robalo peva
Tabela 1. armetros hematolgicos de robalo peva alimentadas com rao comercial (controle) e rao suplementada com Lactobacillus plantarum (probitico).Dados expressos em mdiadesvio padro. *Diferentes letras indicam diferena significativa (p < 0,0 ) no t-teste entre os tratamentos
 

9.0 8.0 7.0 6.0 5.0 4.0 3.0 2.0 1.0 0.0 Bactrias Totais Vibrionaceas Bactrias cidolcticas

Robalo peva alimentado com rao suplementada com Lactobacillus plantarum .

Probitico Controle

Parmetros hematolgicos Hematcrito (%) Eritrcito (x10 L-1) Trombcito (x103 L-1) Leuccito (x103 L-1) Linfcitos (x103 L-1) Neutrfilos (x103 L-1) Moncitos (x103 L-1)


Tratamento Controle 33,9 s 5,1a 2,2 s 0,

a

Probitico 3 ,2 s 5,0 a 2,9 s 0,1 a 12, s 1,3 a 55,0 s 9,0 a 50,3 s 5,

b

, s 1,7 b 39,3 s ,9 b 35,5 s 5, 2,3 s 2,

b a

2, s 1,7 a 2,3 s 0,5 a

1, s 0,5 a

Figura 1. Contagens bacterianas do trato intestinal de robalo peva alimentados com rao suplementada com Lactobacillus plantarum e controle. Diferentes letras indicam diferena significativa (p<0,05) no t-teste entre os tratamentos

Jatoba et al 2008.

Seleo de bactrias probiticas visando produo de enzimas digestivas

Fabiola Pedrotti, Debora Fracalossi, Jos Luiz Mourino, Mauricio Latera

Cepa de bacterias probiticas

Agar seletivo Ex: Agar amido

Mourino et al.(2008) -2009 Mourino et al., LCM-UFSC

Secretaria Especial de Aqicultura e Pesca

Aquabrasil

Mourino et al., 2009