FACULTAD DE BIOANALISIS

LIC. QUIMICA CLINICA.

NOMBRE: MIGUEL ANGEL ORTIZ GIL.

INMUNOHEMATOLOGIA.

CATEDRATICA: Q.C. RUTH ESTRADA MARQUEZ

CONTENIDO:

1. DETERMINACIN DE GRUPO SANGUNEO ABO Y RH

2. DETERMUNACION DE SUBGRUPOS

3. DETERMINACION

DE

RH

4. DETERMINACION DE GRUPO SANGUINEO POR TECNICA DE GEL

5. PRUEBA DE COMPATIBILIDAD

6. PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGNEA (TCNICA SALINA)

7. PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUNEA (TCNICA ALBUMINA)

8. PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS.

9. DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO

10.

IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES

Practica No. 1 Determinacin de grupo sanguneo ABO y Rh Introduccin: Un grupo sanguneo es una forma de agrupar ciertas caractersticas de la sangre que dependen de los antgenos presentes en la superficie de los glbulos rojos y en el suero de la sangre. Esta ha sido la base para que se pueda clasificar a la sangre en cuatro grupos en cuanto al sistema ABO: grupo A, grupo AB, grupo B y grupo O; y en dos con respecto al sistema Rh: Rh negativo o Rh positivo. Lo que a la postre trae ocho grupos posibles por las combinaciones posibles entre ambos sistemas. Las transfusiones de sangre entre grupos incompatibles pueden provocar una reaccin inmunolgica que puede desembocar en muerte. Las personas con sangre del tipo A tienen glbulos rojos que expresan antgenos de tipo A en su superficie y anticuerpos contra los antgenos B en el suero de su sangre. Las personas con sangre del tipo B tiene la combinacin contraria, glbulos rojos con antgenos de tipo B en su superficie y anticuerpos contra los antgenos A en el suero de su sangre. Los individuos con sangre del tipo O no expresan ninguna de los dos antgenos (A o B) en la superficie de sus glbulos rojos pero pueden fabricar anticuerpos contra ambos tipos, mientras que las personas con tipo AB expresan ambos antgenos en su superficie y no fabrican ninguno de los dos anticuerpos. A causa de estas combinaciones, el tipo O puede ser transfundido sin ningn problema a cualquier persona con cualquier tipo ABO y el tipo AB puede recibir de cualquier tipo ABO. Los donantes de sangre y los receptores deben tener grupos compatibles. El grupo O- es compatible con todos, por lo que quien tiene dicho grupo se dice que es un donante universal. Por otro lado, una persona cuyo grupo sea AB+ podr recibir sangre de cualquier grupo, y se dice que es un receptor universal.

Material y equipo: 40 tubos de ensayo de 12 x 75 4 pipetas Pasteur 1 gradilla de unicel 3 tubos Vacutiner con muestra sangunea anticoagulada con EDTA 1 tubo Vacutainer con muestra sangunea sin anticoagulante Antisuero Anti-A, Anti-AB, Anti-B y Anti-D * Eritrocitos con antgenos conocidos A1, A2, B y O 1 centrifuga *Reactivos:
Antisuero A monoclonal Lafon Lote:9662 Cad: 09NOV08 Aspecto: transparente Color: azul Antisuero B monoclonal Lafon Lote: 9762A Cad:09NOV08 Aspecto: transperente Color: amarillo Antisuero AB monoclonal Lafon Lote: 8764 Cad: 31OCT08 Aspecto:transparente Color: incoloro Antisuero D monoclonal NOVACLONE Lote: NDMG04305 Cad: 29MAR08 Aspecto: transperente Color: incoloro

Tcnica: Mtodo directo 1. Centrifugar los 3 tubos Vacutiner con muestra sangunea anticoagulada con EDTA y el tubo Vacutainer con muestra sangunea sin anticoagulante, a una velocidad de 2500 r.p.m. por 10 minutos, pues se utilizaran plasma y eritrocitos por separado.

2. Rotular los tubos de ensayo de la siguiente manera: en cada tubo rotular dos nmeros
en la muestra, uno correspondiente del 1 al 4, el otro numero corresponde al que ya traa la muestra, y con el tipo de antisuero: Anti-A, Anti-AB, Anti-B Anti-D. Ejemplo: 1, 13, Anti-A; 1,13, Anti-AB, etc. El procedimiento se repite para las tres muestras restantes. 3. En cuatro tubos limpios hacer una dilucin de 2-5 % de eritrocitos con agua destilada, de cada muestra. La dilucin tomara un color rojo tenue, similar a la sangra. 4. Colocar en cada tubo rotulado una gota de la dilucin de eritrocitos preparada y una gota de antisuero, segn corresponda.

5. Al concluir lo anterior, llevar los tubos a la centrifuga y centrifugar por solo 15 segundos
a una velocidad de 1000 r.p.m. para observar mejor la reaccin antigeno-anticuerpo (formacin de un botn).

6. Por ultimo leer los tubos, observando si hubo reaccin o no, y correlacionando los datos obtenidos con el mtodo inverso para determinar el grupo sanguneo. Metodo inverso 1. Centrifugar los 3 tubos Vacutiner con muestra sangunea anticoagulada con EDTA y el tubo Vacutainer con muestra sangunea sin anticoagulante, a una velocidad de 2500 r.p.m. por 10 minutos, pues se utilizaran plasma y eritrocitos por separado.

2. Rotular los tubos de ensayo de la siguiente manera: en cada tubo rotular dos nmeros
en la muestra, uno correspondiente del 1 al 4, el otro numero corresponde al que ya traa la muestra, y con el tipo de eritrocitos con antigeno conocido: A1, A2, B y O. Ejemplo: 1,13, A1; 1,13, A2; etc. El procedimiento se repite para las tres muestras restantes. 3. Colocar en cada tubo rotulado dos gotas ya sea de plasma o suero segn corresponda y una gota de los eritrocitos con antigeno conocido.

4. Al concluir lo anterior, llevar los tubos a la centrifuga y centrifugar por solo 15 segundos
a una velocidad de 1000 r.p.m. para observar mejor la reaccin antigeno-anticuerpo (formacin de un botn). 5. Por ultimo leer los tubos, observando si hubo reaccin o no, y correlacionando los datos obtenidos con el mtodo inverso para determinar el grupo sanguneo.

Resultados:
Muestra 1 2 3 4 Anti-A + + Mtodo directo Anti-AB Anti-B + + + + + Anti-D + + + + A1 + + + Mtodo inverso A2 + + B + + O Grupo y Rh O+ B+ A+ AB +

Interpretacin: Para el mtodo directo la lgica fue: si en un tubo hay formacin de botn (reaccin antigenoanticuerpo) quiere decir que los eritrocitos ensayados tienen el antigeno que reacciona con los anticuerpos presentes en el antisuero para ese tubo; y si no presentan aglutinacin querr decir que no corresponde el antigeno del eritrocito con el anticuerpo del antisuero, o que el antigeno esta ausente en esos eritrocitos. De ah que pueda observarse que una muestra sangunea muestre un solo tipo de antgenos del sistema ABO sobre su membrana (A o B), ambos antgenos (AB), o ninguno de ellos (O). lo mismo sucede para el sistema Rh ; al presentarlo (Rh +) o no (Rh -). Para el mtodo inverso el razonamiento fue: si en un tubo hay formacin del botn (reaccin antigeno-anticuerpo) quiere decir que el plasma del paciente ensayado tiene los anticuerpos que reaccionan con los eritrocitos con antigeno conocido, los cuales sirven de reactivo para esta prueba. Por lo tanto una reaccin positiva en este mtodo definitivamente indica que el paciente no tiene eritrocitos con antgenos que reaccionaran con los anticuerpos de su plasma. De ah que el mtodo se le nombre inverso.

Conclusin: Concluyo que Para realizar una transfusin sangunea se debe tomar en cuenta la sangre del donante y la del receptor. Los individuos pertenecientes al grupo O pueden donar sangre a cualquier otro grupo sanguneo, porque sus eritrocitos carecen de antigeno que puedan ser reconocidos por la sangre del receptor. Las personas del grupo AB pueden recibir sangre de cualquier grupo, ya que carecen de anticuerpos

PRACTICA N 2 DETERMUNACION DE SUBGRUPOS Anti- A1Lectina (Dolichos biflorus) Lectina de grupo sanguneo INTRODUCCION: El sistema de grupos sanguneos ABO sigue siendo el primero a tener en cuenta en el momento de realizar una transfusin de sangre. Los antgenos A y B son productos gnicos fcilmente detectables y constituyen marcadores genticos de gran valor. Entre los individuos A, se distinguen 2 categoras: A1y A2. La diferenciacin entre ambas se realiza mediante la utilizacin de anticuerpos monoclonales y lectinas especficas de grupo sanguneo Dolichos biflorus (anti A1) y Ulex europaeus (anti H).

Uso: Inmucor anti-A1 Lectin se utiliza para diferenciar clulas rojas A1 de otros subgrupos A en pruebas en tubo o en placa. MATERIAL Y EQUIPO: Tubos de ensaye de 10/75 mm. Cronometro Marcador Centrifuga serolgica MUESTRA BIOLOGICA: Clulas rojas de donador o paciente REACTIVO: Inmucor anti-A1 Lectin en gotero MARCA: INMUCOR. INC LOTE: SN2132 CADUCIDAD: 2007-12-14 TECNICA: 1. Adicione una gota de anti-A1 a tubos adecuadamente marcados. 2. Adicione una gota de una suspensin de eritrocitos bajo prueba del 3-5% en salina. Mezcle completamente el contenido del tubo. 3. Centrifugar de 15-30 minutos de 900-1000 rpm. 4. Agite suavemente el tubo y resuspenda el botn celular. Examine las reacciones resultantes macroscpicamente. Registre resultados. RESULTADOS ESPERADOS DE TIPIFICACION GRUPO SANGUINEO A1 A1b A2 A2B A1NT A3AM1AX1 Anti-A + + + + + + DEBIL + + 0 0 +DEBIL 0 Anti-A1 Porciento 80% DE TODOS LOS GRUPOS A 80% DE TODOS LOS GRUPOS AB 20% DE TODOS LOS GRUPOS A 20% DE TODOS LOS GRUPOS AB NO COMUN NO CUMUN

ANTI-H (LECTINA) Ulex europeaus Para la determinacin de del estado secretor y tipificacin de las clulas rojas INTRODUCCION: La mayora de los grupos sanguneos ABO que se determinan en el banco de sangre cumplen con las leyes establecidas de antgenos y anticuerpos recprocos para ese sistema. Los anticuerpos del sistema ABO existen en el individuo desde el momento en que son capaces de tener una respuesta inmunolgica y se producen contra los antgenos A y B. Los subgrupos son fenotipos ABO que difieren en la cantidad de antgeno presente en los eritrocitos y en la saliva de los secretores. Se hallan con mayor frecuencia y tienen ms relevancia clnica los de A, que los de B. Al utilizar lectinas se definen los subgrupos: A1 y A2: con el extracto de Dolichos biflorus se aglutinan los eritrocitos A1, pero no los de A2; y el anti H, semilla Ulex europeus, aglutina eritrocitos que tienen antgeno H.

MATERIAL Y EQUIPO: Tubos de ensaye de 10/75mm. Cronometro Marcador Centrifuga serolgica MUESTRA BIOLOGICA: Clulas rojas de donador o paciente REACTIVO: Inmucor anti-H (Lectina) en gotero MARCA: GANMA. LOTE: ML1581 CADUCIDAD: 2007-11-14 TECNICA:

1. Adicione una gota de una suspensin de eritrocitos bajo prueba del 3-5% en salina en tubos adecuadamente marcados. 2. Adicione dos gotas de anti-H Lectina y mezcle completamente el contenido del tubo. 3. incube durante 5 minutos a temperatura ambiente. 4. Centrifugar de 15-30 minutos a 1000 rpm. 5. Agite suavemente el tubo y resuspenda el botn celular. Examine las reacciones resultantes macroscpicamente. Registre resultados. INTERPRETACIN: PROBLEMA: PACIENTE 1 PACIENTE 2 ANTI A1 + ANTI H (ANTI A2) + RESULTADO SUBGRUPO: ANTI A1 ANTI A2

Prueba positiva: Aglutinacin de las clulas rojas. Nota: La hemlisis no debe interpretarse como un resultado positivo ya que esto puede indetificarse como contaminacin del reactivo. Prueba negativa: Ausencia de aglutinacin de las clulas rojas. CONCLUSIONES: Concluyo que para realizar una transfusin sangunea se debe tomar en cuenta los subgrupos del donante y del receptor. Los subgrupo con mayor frecuencia y tienen ms relevancia clnica los de A, que los de B. Y se identifican por medio de utilizar lectinas. Los subgrupos A ms importantes son: A1 y A2. PRACTICA # 3 DETERMINACION DE INTRODUCCIN: El factor Rh es una clase de protena que se encuentra en los glbulos rojos de la sangre, cuando alguien tiene esa protena se le considera Rh Positivo. Cuando no la tiene es Rh Negativo. El factor Rh es hereditario y se transmite en dos genes. El Factor Rh positivo es dominante, es decir si una persona tiene un gen positivo y otro negativo, su factor Rh ser positivo. Esta prueba es importante en el diagnostico y estudio de la eritroblastosis fetal, en la que los glbulos rojos del nio se encuentran sensibilizados con Rh

anticuerpo materno. Es til tambin en el diagnostico de la anemia hemoltica adquirida (anticuerpos sobre los glbulo rojos del mismo paciente), as como la determinacin de eritrocitos sensibilizados en sangre usados para transfusin. Las dos clasificaciones ms importantes para describir grupos sanguneos en humanos son los antgenos y el factor Rh. Las transfusiones de sangre entre grupos incompatibles pueden provocar una reaccin inmunolgica que puede desembocar en hemlisis, anemia, fallo renal, shock, o muerte. MATERIAL: Tubos de ensayo de 12 x 75 Pipetas Pasteur Gradilla EQUIPO: Centrifuga MUESTRA BIOLGICA: Eritrocitos lavados 3-5% del paciente REACTIVOS: Antisuero Anti-D Suero anti globulina humana. Suero reactivo control Antisuero D monoclonal NOVACLONE Lote: NDMG04305 CAD: 29MAR08 Aspecto: transparente Color: incoloro Suero anti globulina Humana Lote: 405 CAD: 06-NOV-08 Aspecto: transparente Color: verde Reactivo control GAMMA-CLONE Lote: GCM115-3 CAD: 2008-12-08 Aspecto: transparente Color: incoloro
TCNICA: Determinacin de Rh

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Prepare una suspensin de glbulos rojos al 35 % en solucin salina. Los glbulos deben ser lavados previamente 5 veces con el objeto de eliminar las protenas del plasma. Rotular 3 tubos, para la previa identificacin de Rh. Ponga 1 gota de la suspensin lavada en cada tubo. Aada una gota de anti suero D monoclonal. Mezcle y centrifugue 15 seg. Y observe si hay aglutinacin. del control negativo al 3-5 %

Preparacin

Ponga una gota de eritrocitos lavados Aada una gota de reactivo control. Centrifugue 15 seg. y observe si hay sangre Du le realizo a los

aglutinacin

Deteccin de

Nota: esta tcnica se que no aglutinaron .

tubos

problemas

Los tubos que no tuvieron aglutinacin en la determinacin de Rh se incuban 15 min, y posteriormente se lavan 3 veces con sol. Salina Previamente lavados se le agregan 2 gotas de suero de COOMBS. Centrifugar 15 seg y observar, desprender boton

ESQUEMAS:

RESULTADOS: problemas 2 10 11

Aglutinacin positiva negativa negativa

resultado Rh + Rh Rh 11

Paciente 2 cdigo 021612 plata Lugo Javier Paciente 10 cdigo 021620 Hernndez Lpez Guillermo Paciente 11 cdigo 021621 camarillo Sonia rebeca INTERPRETACIN: Para el primer mtodo: Aglutinacion: Rh positivo No aglutinacin: realizar sangre Du.

prueba

de deteccin

de

Deteccin de sangre Du Aglutinacin. D dbil (Du positivo) No aglutinacin: Rh negativo

CONCLUSIONES: Con el descubrimiento del sistema Rh, se denominan Rh positivos los hemates que son aglutinados por este anticuerpo y tienen, por tanto, el antgeno Rh en la superficie. Se denominan Rh negativos los que no son aglutinados y que, por tanto, no poseen el antgeno Rh en su superficie. De la misma manera que en el sistema ABO, en el sistema Rh no se puede transfundir el antgeno Rh a las personas que no lo tienen, ya que podra originar la produccin de anticuerpos Rh en el receptor. Los sujetos Rh negativos slo podrn recibir sangre de donantes Rh negativos.

PRACTICA 4 INMUNOHEMATOLOGIA DETERMINACION DE GRUPO SANGUINEO POR TECNICA DE GEL INTRODUCCION: El sistema utilizado en inmunohematologa para investigar e identificar antgenos y anticuerpos antieritrocitarios. Es de tecnologa de microtipificacin en gel se basa en la separacin por tamao de los eritrocitos aglutinados, durante un proceso de centrifugacin en un gel poroso. Los eritrocitos van perdiendo elasticidad en sus membranas de forma que los aglutinados grandes quedan atrapados en la zona superior y los pequeos quedan distribuidos a lo largo de la columna.

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Esta tcnica nos permite que estandaricemos la lectura de la reaccin antgenoanticuerpo con facilidad y repetitividad. As como la estandariza del uso de reactivos, tiempos y lecturas disminuyendo sustancialmente la influencia de la mano de operador.

OBJETIVO: determinacin de los antigenos del sistema ABO,Rh (D) y determinacion del grupo serico , en tecnica de gel. FUNDAMENTOS: El principio del metdo se basa en la tecnica de gel descrita por Y. Lapierre para la deteccion de las reacciones de aglutinacion de los hematies. La aglutinacion se produce al entar en contacto los eritrocitos con los anticuerpos correspondientes. La tarjeta DG gel es un soporte de plastico constituidos por 8 microtubulos. Cada microtubulo esta formado por una columna y una camara de dispersion/incubacion. La tecnologa de microtipificacin en gel se basa en la separacin por tamao de los eritrocitos aglutinados, durante un proceso de centrifugacin en un gel poroso. Los eritrocitos van perdiendo elasticidad en sus membranas de forma que los aglutinados grandes quedan atrapados en la zona superior y los pequeos quedan distribuidos a lo largo de la columna.

MATERIAL Pipeta automtica 10 ul, 50ul, 1 ml. Puntas de pipeta desechable Tubos de vidrios DEG sol Centrifugas para tarjetas DG gel Hematies de reactivos para grupo inverso. MUESTRA BIOLOGICA: Clulas rojas de donador o paciente REACTIVO: Placa de gel Reactivo de gel sol

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TECNICA 1.- determinacion de los antigenos del sistema ABO/Rh. -preparar una suspension de hematies al 5 % de DG sol. Asegurar la resuspencion de lso hematies antes de utilizar. Anadir en cada microtubulos indicados 10 ul de una suspension de hematies al 5%. 2.- determinacion de l grupo serico. -homogenizar los hematies recativos A1/B - dispersar el microtubulo N /a1 50 ul de hematies reactivos A1 en un microtubulo N/b 50 ul de hematies reactivos B. -aadir suero o plasma. 3.- centrigugar en centrifuga para DG sol. Leer los resultados. RESULTADOS NEGATIVO +/1+ 2+ 3+ 4+ Banda de hematies al fondo de la columna, resto de la columna sin aglutinados Escasoa glutinados de pequeo tamaa d ela columna. Algunos aglutinados pequeso en la columna aglutinados pequeso en la columna o mediano a lo largo de la columna Banda superior de aglutinado Banda de aglutinados en la parte superior de la columna. Doble poblacion (doble banda de hematies , en el fondo y en la parte superior.

POSITIVO

DP

INTERPRETACION DE RESULTADOS. microtubo A 0 + 0 + GRUPO HEMATICO microtubo microtubo B AB 0 0 + + 0 + + + Micrutubo CTL 0 0 0 0 GRUPO SERICO microtubo CTL 0 0 0 0
MICROTUBUBO N+ a1 MICROTUBUBO N+ B ABO GRUPO

+ 0 + 0 INTERPRETACION D positivo D negativo D dbil parcial

+ + 0 0

0 A B AB

SISTEMA Rh Micrutubo D Micrutubo D + + 0 0 0 + + 0

RESULTADO E INTERPRETACION DE LA PRACTICA

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Resultado; A+ CONCLUSION Concluyo que esta tcnica, es una forma de estabilizar las reacciones de aglutinacin y reducir los resultados falsamente negativos a consecuencia de una tcnica inapropiada, asi como crear un mtodo de interpretaciones sencillas y constantes.

Practica No. 5 Prueba de compatibilidad

Introduccin:

Para requerir una ptima transfusin actualmente se requiere de aceptaciones inmunolgicas receptor - donante, ya que la transfusin de sangre o la de sus componentes celulares de un donante a un receptor es una forma de transplante.

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La prueba de Coombs se usa para determinar la presencia de anticuerpos no aglutinantes en el suero de sujetos sensibilizados a uno o mas antgenos sanguneos. Es til en el estudio del suero de mujeres con isoinmunizacin materno-fetal y se emplea tambin en otro tipo de pruebas como identificacin de anticuerpos autoinmunes, deteccin de algunos sistemas sanguneos y pruebas de compatibilidad sangunea. La prueba indirecta se realiza con eritrocitos normales incubados in Vitro con el suero de estudio. Durante este periodo, si existe un anticuerpo, este se fija sobre su respectivo determinante antignico. Una vez fijados, los eritrocitos son igualmente lavados y se agrega el reactivo de Coombs, produciendo aglutinacin. Una prueba de Coombs indirecta positiva significa que existen anticuerpos libres en el suero de la persona, los cuales puedan ser igualmente auto-anticuerpos o isoanticuerpos.
Material y equipo: Pipetas automticas de 10 l, 25 l, 50 l y 1 ml. Puntas de pipetas desechables Tubos de vidrio. Incubador para tarjetas DG Gel. Centrifuga para tarjetas DG Gel. Material biolgico: Hemates reactivo para investigacin e identificacin de anticuerpos irregulares de Diagnostic Grifols, S.A. Suero de hemoclasificacin. Muestras de sangre de extraccin reciente, recogida con anticoagulante o sin anticoagulante.

Reactivos: Tarjetas DG Gel. DG Gel Sol. *Reactivos:

Tarjetas DG Gel Coombs Rango de temperatura: entre 2 y 25 C Lote: 7049.01 Cad: 2008-03 Aspecto: transparente Color: verde DG Gel Sol Rango de temperatura: entre 2 y 8C Lote: 7003.701 Cad: 2008-06 Aspecto: transparente Color: incoloro

Tcnica: Mtodo manual:

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1. 2. 3. 4.

5.

6. 7. 8. 9. 10. 11.

Dejar atemperar (18-25C) muestras y reactivo. Inspeccionar el estado de las tarjetas antes de utilizar. Identificar las tarjetas y muestras a utilizar. Despegar con precaucin la lamina de metal que cubre los microtubos para prevenir contaminaciones cruzadas entre ellos. Preparar una suspensin con hemates al 1% en DG Gel Sol (10 l de sedimento o concentrado de hemates en 1 ml de DG Gel Sol). Utilizar los hemates del donante para la PC mayor y hemates del receptor para la PC menor. Asegurar la suspensin de los hemates antes de utilizar. Dispensar en el tubo correspondiente, 50 l de suspensin de los hemates al 1% del donante (PC mayor) o 50 l de suspensin de los hemates al 1% del receptor (PC menor). Aadir 25 l de suero o plasma del receptor (PC mayor) o 25 l de suero o plasma del donante (PC menor). Preparar auto control con 50 l de suspensin de los hemates al 1% del receptor y 25 l de suero o plasma del receptor. Incubar 15 minutos a 37 C. Centrifugar en la centrifuga para tarjetas DG Gel. Leer los resultados.
+/1+ 2+ 3+ 4+ Banda de hemates en el fondo de la columna, resto de la columna sin aglutinados visibles. Escasos aglutinados de pequeo tamao en la mitad inferior de la columna. Algunos aglutinados de pequeo tamao en la columna. Aglutinados de tamao pequeo o mediano a lo largo de la columna. Banda superior de aglutinados, de tamao mediano en la mitad superior de la columna. Banda de hemates aglutinados en la parte superior de la columna. Doble poblacin (doble banda de hemates, en el fondo y en la parte superior de la columna.

Interpretacin:
Negativo: Positivo:

DP:

Resultados:

Paciente: Donador 1: Donador 2: M1

Lira Cabrera Carlos Alberto Orea Valero Erasmo. Moreno Adolfo. m1

GR del paciente + suero de donador 1

(AB+) (A+) (O+) M2 m2

GR del paciente + suero de donador 2

Autocontrol
GR del paciente + suero del paciente

GR de donador 1 + suero del paciente

GR de donador 2 + suero del paciente

Por lo antes expuesto se puede deducir que el donador 1 (A+) puede donar eritrocitos al paciente (AB+), lo mismo que el donador 2 (O+) puede donarle eritrocitos; no as plasma por parte de ambos donadores pues la prueba muestra que hubo reaccin en ambas pruebas menores.

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Conclusin:

Concluyo que es esencial que toda la sangre sea estudiada antes de la transfusin para: Asegurar que todos los glbulos rojos transfundidos son compatibles con los anticuerpos en el plasma del paciente. Evitar estimular la produccin de nuevos anticuerpos contra los glbulos rojos en el receptor, especialmente anti-Rh D.

PRCTICA No. 6

PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGNEA (Tcnica salina)

INTRODUCCIN Landsteiner constat que cuando un aglutingeno se pone en contacto con la aglutinina homloga se produce una aglutinacin.

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La compatibilidad sangunea es la posibilidad de mezcla de sangre sin que se produzcan trastornos, tales como los fenmenos de la lisis o de la aglutinacin. A causa de este fenmeno biolgico en las transfusiones de sangre no es suficiente con conocer que la sangre del donante y la del receptor son del mismo grupo, o bien que la del donante pertenezca al grupo O (cero), sino que es necesario conocer si la compatibilidad es perfecta, porque ningn otro fenmeno de inmunizacin interfiera. Es en este sentido por lo que son empleadas las pruebas cruzadas. Adems de los 6 antgenos del sistema ABO en los eritrocitos humanos, existen numerosos sistemas de aglutingenos que contienen muchos antgenos individuales en los eritrocitos (ms de 500.000 millones posibles de fenotipos de grupos sanguneos conocidos). Para evitar accidentes transfusionales es indispensable tener en cuenta el sistema Rh adems del ABO. Del sistema de antgenos Rh es el D el ms antignico, y el trmino Rh positivo indica que el individuo presenta aglutingeno D. El individuo Rh negativo no tiene antgeno D y forma la aglutinina anti-D en contacto con ste. Las reacciones antgeno-anticuerpo pueden observarse in vitro por: Hemlisis: la unin antgeno-anticuerpo se traduce en lisis de los eritrocitos en presencia del complemento (siempre que el anticoagulante empleado no capture los iones Ca y Mg necesarios para la activacin del complemento). Aglutinacin: los anticuerpos que reaccionan en medio salino se conocen como anticuerpos completos o aglutinantes (comnmente tipo IgM). OBJETIVO: Determinacin de los antigenos del sistema ABO, Rh (D) y su compatibilidad entre un paciente Donador y un Paciente Receptor.

MATERIAL *5 Tubos de ensaye. *6 Pipetas Pasteur. *1Gradilla. *1 Bulbo.

EQUIPO Microcentrfuga. Bao Mara Estufa.

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*Papel Parafilm. MUESTRA Muestra de sangre con Anticoagulante EDTA. REACTIVOS Antisuero RO-Antiglobulina humana (Poliespecfico Anti IgG C-d) Para prueba de Coombs. LABORATORIOS LAFON S.A de C. V. Fecha de Caducidad: 31-Ene-09 Lote: 406 Hecho en Mxico Aspecto: Transparente: Color: Verde TCNICA Lavar los eritrocitos con solucin salina (3 veces). SALINA RPIDA: 1. Agregar una gota de Eritrocitos Lavados. 2. Diluirlo al 3-5% con solucin salina 0.9%. 3. Agregar 2 gotas de suero. 4. Centrifugar y observar, anotar desprendimiento del botn.
PRUEBA MAYOR G. Rojos del DONADOR + Suero del RECEPTOR (paciente) PRUEBA MENOR G. Rojos del RECEPTOR (paciente) + Suero del DONADOR AUTOTESTIGO G. Rojos del RECEPTOR (paciente) + Suero del RECEPTOR (paciente)

SALINA 37 BAO MARA: 1. Incubar tubos a Bao mara a 37C durante 1 hora (o 20 min). 2. Centirfugar despus de haber pasado el tiempo. 3. Desprender el botn de eritrocitos y observar. AGLUTINACIN No es compatible. NO AGLUTINACIN - Lavar 3 veces.

SALINA COOMBS:

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1. Con solucin salina 0.9% lavar los eritrocitos de los tubos q no tuvieron aglutinacin 3 veces. 2. Decantar y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs AGLUTINACIN No es compatible. NO AGLUTINACIN - Lavar 3 veces. RESULTADOS
Paciente: Madrigal Mndez Luis Eduardo (B+) Folio: 009164 Fecha:30/10/07 Torres Avils Jos Ramn Folio: 022604 Fecha:31/10/07 (O+)

Donador 1:

Donador 2:

Rodrguez Nez Jos Angel (A+) Folio: 022605 Fecha:31/10/07

SALINA RPIDA:
M1
GR de donador 1 + suero del paciente

m1
GR del paciente + suero de donador 1

M2
GR de donador 2 + suero del paciente

m2
GR del paciente + suero de donador 2

Autotestigo
GR del paciente + suero del paciente

4+

4+

4+

SALINA 37 BAO MARA:

M1 Compatible m1 4+ No compatible M2 4+ No compatible m2 4+ No compatible Autotestigo Compatible

SALINA COOMBS:
M1 Compatibl e Autotestigo Compatible

Por lo tanto se puede decir que el donador 1 (O+) puede donar suero al paciente (B+), debido a que en el suero no hay anticuerpos de ningn tipo que reaccionen con los antgenos de los eritrocios del Donador 1. Mientras tanto el Donador 2 no puede donar al Paciente ni suero ni eritrocitos.

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INTERPRETACIN PRUEBA POSITIVA: Existe una aglutinacin de las clulas sanguneas que indica la presencia del antgeno A o B. En el suero de Coombs notamos si esta la precencia de Antgeno D en los eritrocitos. La hemlisis no se debe interpretar como resultado positivo ya que puede indicar contaminacin del reactivo. PRUEBA NEGATIVA: La no aglutinacin indica un resultado negativo e indica que las clulas son negativas para Antgenos del sisitema ABO y D CONCLUSIN He concluido que en las transfusiones de sangre no es suficiente con conocer que la sangre del donante y la del receptor son del mismo grupo, o bien que la del donante pertenezca al grupo O (cero), sino que es necesario conocer si la compatibilidad es perfecta, porque ningn otro fenmeno de inmunizacin interfiera. Es en este sentido por lo que son empleadas las pruebas cruzadas.

Prctica No. 7 Prueba de compatibilidad sangunea (tcnica albumina) Introduccin: La tipificacin de sangre identifica el tipo sanguneo determinando antgenos presentes en los eritrocitos, detecta aloanticuerpos en contra esos antgenos. As los aloanticuerpos pueden aparecer naturalmente o ser inducidos y pueden ser dirigidos contra del grupo conocido o a los antgenos de superficie de los eritrocitos. La prueba de compatibilidad sangunea o cross matching esta formada por la prueba mayor y menor.La prueba de cruzamiento mayor para los aloanticuerpos, consiste en probar el plasma del receptor contra los

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glbulos rojos del donante. Es incompatible cuando se genera una reaccin hemoltica, los eritrocitos del donante se destruyen por los aloanticuerpos del plasma del receptor. La prueba menor es una prueba para los aloanticuerpos del plasma del donante en contra los glbulos rojos del receptor. Una incompatibilidad menor es una causa menos frecuente para causar una reaccin en contra una transfusin, porque el volumen de plasma del donante es menor y es diluido marcadamente en el receptor. Para llevar a cabo dicho procedimiento se utilizan diversos reactivos como potencializadores que mejoran la unin de eritrocitos con algn tipo de anticuerpo. Uno de esos potencializadores es la albmina. La albumina bovina polimerizada es un reactivo muy utilizado en el laboratorio de inmunohematologia y en centros de bancos de sangre, funciona como un potencializador que facilita la reaccion de aglutinacin de eritrocitos sensibilizados. Al final de la prueba se prueban los eritrocitos con el reactivo de Coombs. El principio de la prueba de Coombs fue descrito por Moreschi en 1908, pero Coombs, Mourant y Race, en 1946, la introdujeron en el estudio de los grupos sanguneos y anticuerpos, cuando una parte de sangre (suero) fue usada para la inoculacin de animales para inmunizarlos con protena humana, utilizando el anticuerpo obtenido en la deteccin de los llamados anticuerpos incompletos. Esta prueba se usa para determinar la presencia de anticuerpos no aglutinantes en el suero de sujetos sensibilizados a uno o mas antgenos sanguneos. Es til en el estudio del suero de mujeres con isoinmunizacin maternofetal y se emplea tambin en otro tipo de pruebas como identificacin de anticuerpos autoinmunes, deteccin de algunos sistemas sanguneos y pruebas de compatibilidad sangunea. La prueba indirecta se realiza con eritrocitos normales incubados in Vitro con el suero de estudio. Durante este periodo, si existe un anticuerpo, este se fija sobre su respectivo determinante antignico. Una vez fijados, los eritrocitos son igualmente lavados y se agrega el reactivo de Coombs, produciendo aglutinacin. Una prueba de Coombs indirecta positiva significa que existen anticuerpos libres en el suero de la persona, los cuales puedan ser igualmente auto-anticuerpos o isoanticuerpos. Objetivo: Determinacin de los antgenos del sistema ABO, Rh (D) y su compatibilidad entre un paciente Donador y un Paciente Receptor. Material y equipo: 5 Tubos de ensaye. 6 Pipetas Pasteur. 1Gradilla. 1 Bulbo. Papel Parafilm. Microcentrfuga.

Bao Mara Estufa.

Material biolgico: Muestras de sangre de extraccin anticoagulante o sin anticoagulante. Reactivos: Suero de Coombs* Albmina bovina

reciente,

recogida

con

*Suero anti-globulina humana Lafon. Lote 406. Cad: 31/01/09. Color: verde. Aspecto: transparente. Albumina de bovino polimerizada Interbiol. Lote APO107. Cad: 15/01/09. Color: incoloro. Aspecto: transparente.

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Tcnica: 1. Montar prueba mayor 1 y 2, prueba menor 1 y 2, y autotestigo, con el procedimiento ya anteriormente conocido. 2. Agregar 2 gotas de albmina al 22%. 3. Centrifugar 20 segundos. 4. observar aglutinacin o hemolisis, o no aglutinacin. 5. A los tubos con lecturas negativas, incubar 20 minutos en bao Mara a 37 C. 6. Centrifugar y observar: Aglutinacin o hemlisis: reportar incompatible. No aglutinacin: llevar a Coombs. 7. Lavar tres veces, decantar, y quitar el exceso de salina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs y centrifugar 20 segundos y observar: Aglutinacin o hemlisis: reportar incompatible. No aglutinacin: reportar compatible. Resultados:
1 2 3 4 5 PRUEBA MAYOR donador 1. PRUEBA MENOR paciente. PRUEBA MAYOR donador 2. PRUEBA MENOR paciente. AUTOTESTIGO: 1: 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de G.R. al 3-5% del 1: 2 Gotas de suero del donador 1 + 1 gota de G.R. al 3-5% del 2: 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de G.R. al 3-5% del 2: 2 Gotas de suero del donador 2 + 1 gota de G.R. al 3-5% del 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de G.R. al 3-5% del paciente. M1 + m1 + M2 + m2 + Autotestigo +

Con albmina. Despus de incubacin a 37 C. Despus de Coombs. Despus de validacin con glbulos positivos.

Interpretacin: Prueba positiva: Alutinacin o hemolisis. Indica no compatibilidad. Prueba negativa:No aglutinacin. Indica compatibilidad.

Esquemas:

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Conclusin: Concluyo que la prueba de compatibilidad sangunea en su modalidad con albmina bovina ofrece mucha ventaja al ser, al igual que otros reactivos, un potencializador de la reaccin antgeno-anticuerpo. Esto permite que el operador o realizador de la prueba tenga mayor confianza y certeza en los resultados que obtenga.

PRACTICA No. 8 PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS. 25

FUNDAMENTO: LISS es utilizado para reducir la fuerza inica del medio de reaccin en los procedimientos de deteccin e identificacin de anticuerpos y en las pruebas de compatibilidad. La presencia de este reactivo refuerza la interaccin antgeno - anticuerpo durante la incubacin.

GENERALIDADES: El uso de solucin salina de baja fuerza inica fue descrito inicialmente en 1964 por Hughes-Jones y col. y Elliot y col., pero en ese tiempo su uso era limitado ya que la concentracin molar obtenida provocaba la hemlisis de los eritrocitos suspendidos. En 1974, Low y Messeter describieron el uso rutinario de la solucin Liss de 0,03 M que lograba reducir el tiempo de incubacin y no presentaba tendencia a la hemlisis al ser suspendidos en salina a baja fuerza inica, restableciendo la presin osmtica de la solucin mediante la adicin de glicina. Las soluciones de baja fuerza inica son actualmente las ms utilizadas en inmunohematologa, provocando un aumento en la velocidad de asociacin entre antgenos y anticuerpos permitiendo as acortar el tiempo de incubacin de 60 minutos a 10-15 minutos, sin sacrificar la sensibilidad de las mismas y sin costos elevados.Se ha observado que las reacciones antgeno-anticuerpo se ven potenciadas al reducir la fuerza inica del medio de reaccin. La fuerza inica es uno de los factores ms importantes que determinan la tasa y la cantidad de captacin de anticuerpos por parte de los eritrocitos. El uso de medios de reaccin de baja fuerza inica permite disminuir el tiempo de incubacin y potenciar las reacciones de los anticuerpos sin incrementar las reacciones inespecficas. Los iones Na+ y Cl-, presentes en la solucin salina fisiolgica, se agrupan alrededor de las molculas de antgeno y anticuerpo neutralizando sus cargas opuestas, lo cual dificulta la unin entre ellos. Este efecto se reduce utilizando soluciones de baja fuerza inica y disminuyendo de esta manera la incubacin de las pruebas.

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En esta etapa de sensibilizacin, las posibilidades de asociacin pueden incrementarse mediante agitacin, centrifugacin y/o variacin de la concentracin del anticuerpo. Despus de que el anticuerpo se ha fijado al antgeno, los eritrocitos sensibilizados deben unirse para dar lugar a la aglutinacin visible; esta red tambin solidifica y estabiliza la reaccin. En esta etapa la reaccin depende de factores como las caractersticas del anticuerpo, localizacin en la membrana y nmero de sitios antignicos, fuerzas que mantienen la distancia entre los eritrocitos. Las caractersticas del anticuerpo que deben considerarse son el tamao del anticuerpo involucrado y el nmero de sitios de combinacin con el antgeno. Los anticuerpos IgM pueden establecer puentes entre los eritrocitos y aglutinarlos espontneamente en solucin salina, mientras que los IgG no, ya que las IgM, pentamricas poseen 10 sitios de combinacin con el antgeno y las IgG dmeros slo dos sitios. Los eritrocitos tienen una carga neta negativa en su superficie, su interaccin con los iones del medio altera esta carga y producen una carga neta crtica denominada potencial zeta, y la reduccin de dicha carga permite que los eritrocitos se aproximen lo suficiente para que sean aglutinados por medio de los IgG que los sensibilizaron. Las soluciones de baja fuerza ionica empleadas en banco de sangre tienen un pH entre 6.5 7.0, se recomienda una osmolalidad de 270 305 mosm/kg y una conductividad de 3.7 mm/cm. El control diario implica el examen de su apariencia fsica: ausencia de turbidez, particulas o sedimento, as como, corroborar la capacidad para generar hemlisis, crenacion o prueba de coombs positiva en eritrocitos normales. Cada lote nuevo se valora mediante el rastreo de un anticuerpo ya sea un anti- D, un anti- jk, anti- fy o anti- kell diluido; se compara su capacidad de deteccin contra un medio salino normal incubando 10min a 37C, en LISS debe poder rastrearse un anticuerpo, en tanto que en medio salino no. MATERIAL Y EQUIPO: Material 10 1 10 Cantidad Tubos de ensayo de 12 x 75 Gradilla Pipetas pasteur 27

1 1 1 1 MATERIAL BIOLOGICO:

Bulbo Marcador Microcentrfuga Bao Mara

Glbulos rojos lavados al 3 - 5% Suero REACTIVOS: Reactivo de LISS Reactivo de Coombs TECNICA: 1.- Lavar los eritrocitos: Separar el suero del paquete de glbulos rojos. Agregar cierta cantidad de eritrocitos a un tubo de ensayo y agregarle solucin salina Centrifugar y decantar Repetir este proceso 3 veces 2.- Realizar la Prueba de LISS: Enumerar los tubos Poner dos gotas de LISS en cada tubo, agregar una gota de eritrocitos lavados y al 3 - 5%, segn el nmero de tubo correspondiente, Mezclar y centrifugar un minuto, decantar el sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar el exceso del reactivo. Poner nuevamente 2 gota de LISS, resuspender por agitacin, agregar 2 gotas de suero problema, mezclar, incubar 15 minutos a 37 C. centrifugar 30 seg. A 1000 R.P.M. Anotar los resultados. 3.- A las pruebas negativas realizar Coombs: Lavar 3 veces las clulas, agregar suero Coombs, centrifugar 30 seg. Leer aglutinaciones y anotar resultados. REACTIVOS UTILIZADOS:
REACTIVO MARCA FECHA DE ASPECTO COLOR LOTE

de

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Suero Antiglobuina humana LISS

Lafon Casero realiza do en CMN SIGLO XXI

CADUCIDAD 31/ 01/ 2009 1 ao

Transparente Transparente

Verde Transp arente

406

---------

PACIENTE: ASCANIO MENDEZ JOSUE DONADOR 1: GARCIA CARBAJAL OSCAR DONADOR 2: GARCIA SUAREZ ORLANDO RESULTADOS: Tubo M1 m1 M2 M2 AUTOTES.

O (+) O (+) A (+)

Resultado NEGATIVO NEGATIVO POSITIVO NEGATIVO NEGATIVO

INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS La hemlisis o la aglutinacin representan un resultado positivo e indican la presencia de una reaccin antgeno-anticuerpo. Los resultados negativos no se vera aglutinacin o hemolisis. ESQUEMAS:

CONCLUSIONES:
Concluyo que la prueba de compatibilidad sangunea en su modalidad con liss ofrece mucha ventaja al ser, al igual que otros reactivos, un potencializador de la reaccin antgeno-anticuerpo. Esto permite que el operador o realizador de la prueba tenga mayor confianza y certeza en los resultados que obtenga.

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PRACTICA 9 INMUNOHEMATOLOGIA DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO INTRODUCCION: PRUEBA DE COOMBS DIRECTA El examen de Coombs directo se utiliza para detectar autoanticuerpos contra los propios glbulos rojos (GR) de un individuo. Es una prueba que sirve para demostrar el revestimiento de los eritrocitos in vivo, (mientras los eritrocitos estn circulando en el individuo). La prueba se realiza agregando directamente el reactivo de Coombs a los eritrocitos, previamente lavados para eliminar otras protenas no fijadas a el; una prueba directa positiva significa que la relacin antgeno-anticuerpo ocurri in vivo, es decir que la fijacin del anticuerpo sobre el antgeno se realizo en el organismo del individuo en estudio. Las indicaciones principales de esta prueba son: diagnostico de enfermedades hemolticas, ictericia o anomalas en la apariencia de los glbulos rojos bajo el microscopio, ya que estos anticuerpos algunas veces destruyen los glbulos rojos y causan anemia; para investigar reacciones en transfusiones. Para investigar la induccin de drogas en clulas rojas sensibilizadas, medicamentos (por ejemplo, quinidina, metildopa, procainamida y otros) que pueden llevar a la produccin de estos anticuerpos. OBJETIVO: Determinar la presencia de anticuerpos en la superficie de los glbulos rojos del individuo. MATERIAL 10 Tubos de 12/75 10 Pipetas Pasteur 1 Gradilla. 1 Bulbo. Papel Parafilm. Microcentrfuga. Bao Mara a 37C. MUESTRA BIOLOGICA: Eritrocitos lavados de (3-5%) del donador o paciente. REACTIVO: Suero de Coombs*
*Suero anti-globulina humana Lafon. Lote 406 Cad: 31/01/09. Color: verde. Aspecto: transparente.

TECNICA: 30

Colocar en un tubo de ensaye dos gotas de suero de Coombs mas una gota de globulos rojos (3-5%). Centrifugar a 1000 rpm durante 20 seg. Desprender el boton suavemente y buscar la presencia de aglutinacion. Rotular y enumerar 8 tubos de ensayes con las diferentes diluciones (,,1/8...) Enumerar 8 tubos mas del 1 al 8. Agregar a cada tubo de las diluciones 10 gotas de solucion salina mas 10 gotas de suero de Coombs. Colocar Al primer tubo de la dilucion 1 gota de globulos rojos (3-5%), mezclar completamente y agregar al tubo #1 Centrifugar todos los tubos a 1000 rpm durante 20 seg. LECTURA: Aglutina.- Prueba de Coombs directa es positiva. No aglutina.- Prueba de Coombs directa es negativa. ESQUEMAS y RESULTADOS: DILUCIONES positiva positiva 1/8 positiva 1/16 negativa 1/32 negativa 1/64 negativa 1/128 negativa 1/256 negativa

CONCLUCION: He concluido que la prueba de Coombs directa es una prueba que se utiliza para medir la presencia de anticuerpos en la superficie de los glbulos rojos que se encuentran circulando en el paciente y se realiza para investigar reacciones en transfusiones adems sirve para la determinacin de anemia hemoltica autoinmune entre otras afecciones.

Practica 10 IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES

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Fundamento: Los anticuerpos del sistema ABO aparecen una vez que el individuo entra en contacto con el medio ambiente y en el cual se encuentran microorganismos como algunas bacterias coliformes que contienen sustancias qumicas en su estructura parecidas a las de este sistema. Por anticuerpos regulares debemos identificar a los que existen en todos los individuos y que stos tendrn durante toda su vida. Los anticuerpos irregulares son los que no estn de esa manera, aunque en el caso de los naturales no se conoce a ciencia cierta qu o cmo se induce su produccin. Los adquiridos se conocen tambin como inmunes y son el resultado de la exposicin a antgenos desconocidos por el individuo al momento de la transfusin o en las mujeres por el embarazo; estos anticuerpos son dirigidos contra antgenos de sistemas diferentes al ABO. Los anticuerpos naturales regulares son preferentemente inmunoglobulinas M, las cuales fijan de manera tan eficiente el complemento que pueden provocar lisis intravascular y ocasionar insuficiencia renal o incluso la muerte del paciente. Los anticuerpos adquiridos o inmunes son generalmente inmunoglobulinas G, las cuales producen hemlisis extravascular en el bazo o en el hgado mediante fagocitosis del complejo eritrocito ms anticuerpo. Los aloanticuerpos irregulares (adquiridos) ms comunes en nuestra poblacin son los que involucran a los sistemas MNSs, P1, Kidd (Jka, Jkb), Duffy (Fya, Fyb), Kell, Lewis y Diego. OBJETIVO: identificacin del anticuerpo irregular a travs de las diferentes tcnicas. MATERIAL 10 Tubos de ensaye. 10 Pipetas Pasteur. 1Gradilla. 1 Bulbo. Papel Parafim. EQUIPO 1. Microcentrfuga. 2. Bao Mara Estufa.

MATERIAL BIOLOGICO: Glbulos rojos lavados al 3 - 5% Suero REACTIVOS Reactivos: 32

1. 2. 3. 4.

Suero de Albmina SOLUCION SOLUCION

Coombs* bovina SALINA DE LISS

TCNICA SOLUCION SALINA Lavar los eritrocitos con solucin salina (3 veces). SALINA RPIDA: Agregar una gota de Eritrocitos Lavados. Dilurlo al 3-5% con solucin salina 0.9%. Agregar 2 gotas de suero. Centrifugar y observar, anotar desprendimiento del botn. SALINA 37 BAO MARA: 1) Incubar tubos a Bao mara a 37C durante 1 hora (o 20 min). 2) Centirfugar despus de haber pasado el tiempo. 3) Desprender el botn de eritrocitos y observar. AGLUTINACIN No es compatible. NO AGLUTINACIN - Lavar 3 veces. SALINA COOMBS: 1) Con solucin salina 0.9% lavar los eritrocitos de los tubos q no tuvieron aglutinacin 3 veces. 2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs AGLUTINACIN No es compatible. NO AGLUTINACIN - Lavar 3 veces. TECNICA LISS 1. Poner dos gotas de LISS en cada tubo, agregar una gota de eritrocitos lavados y al 3 - 5%, segn el nmero de tubo correspondiente, 2. Mezclar y centrifugar un minuto, decantar el sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar el exceso del reactivo. 3. Poner nuevamente 2 gota de LISS, resuspender por agitacin, agregar 2 gotas de suero problema, mezclar, incubar 15 minutos a 37 C. centrifugar 30 seg. A 1000 R.P.M. 4. Anotar los resultados. A las pruebas negativas realizar Coombs:

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1. Lavar 3 veces las clulas, agregar suero de Coombs, centrifugar 30 seg. 2. Leer aglutinaciones y anotar resultados. TECNICA ALBUMINA BOVINA 8. Agregar 2 gotas de albmina al 22%. 9. Centrifugar 20 segundos. 10. observar aglutinacin o hemolisis, o no aglutinacin. 11. A los tubos con lecturas negativas, incubar 20 minutos en bao Mara a 37 C. 12. Centrifugar y observar: Aglutinacin o hemlisis: reportar incompatible. No aglutinacin: llevar a Coombs. 13. Lavar tres veces, decantar, y quitar el exceso de salina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs y centrifugar 20 segundos y observar: Aglutinacin o hemlisis: reportar incompatible. No aglutinacin: reportar compatible. Resultados ANTICUERPO IRREGULAR: Anticuerpo c.

Interpretacin Estos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo M y ocasionalmente tipo G, y debido a esa temperatura de reaccin carecen de importancia clnica salvo que su reaccin ocurra tambin a 37 C, su importancia radica en pacientes que sern intervenido a 22 c como es el caso de operacin de corazn.
Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura ptima de reaccin a 37 C, a Estos anticuerpos tienen una relevante importancia clnica ya que se les asocia con reacciones transfusionales de intensidad moderada a severa, que pueden ocasionar la muerte.

Esquemas:

CONCLUSION:

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He concluido que es importante determinar los anticuerpos irregulares ya que estos anticuerpos tienen una relevante
importancia clnica ya que se les asocia transfusionales de intensidad moderada a severa. con reacciones

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