Reconstrução

Tridimensional
Representação de Estruturas Celulares

A. VAN LEEUWENHOEK (1630 - 1723)

Drawing by Marcello Malpighi (1628-1694): anatome plantarum
Técnicas de Visualização

Campo Claro
Técnicas de Visualização

Nomarsky/DIC
Campo Claro Nomarsky/DIC
Campo claro Contraste de fase

Nomarski Campo escuro

Processamento Digital de Imagens

Correção de Brilho e Contraste

Processamento Digital de Imagens

Subtração de Background
Técnicas de Seccionamento de Material

Micrótomo
Técnicas de Seccionamento de Material

Criostato
Obtenção de cortes seriados
Microscopia de Fluorescência

Marcadores
Fluorescentes

Aumento de Resolução
Deconvolução Digital
Microscopia Confocal a Laser
Músculo de Rato, Neurônio Motor

Convencional Confocal
 Princípio de
Funcionamento
 Princípio de
Funcionamento
Neurônio
Capacidade de Fazer “Cortes Ópticos”

Grão de Pólen Reconstruído

Renderização de Imagens

Modelo de Grão de Pólen

Reconstrução a Partir de Cortes Seriados
(Microscopia Óptica ou Eletrônica)
nPOD Organ Trimming, Paraffin Blocks, and IHC Workplan
Head Body Tail
A

D C
B
Ultramicrotomia
Cortes Seriados
 Estimando a Espessura do Corte

Interference reflection angle from Sjöstrand (1967)

O que uma seção de corte
Representa?
Cortes Seriados

Modelo Reconstruído
Delineamento das Estruturas de
Interesse
 Alinhamento e Reconstrução

Wild Types
Images

Mutant
Images
 Modelagem

Modelo de Neurônio
Levedura de Fissão
Tomografia
Microscópio Eletrônico de
Alta Voltagem

400KeV – 3MeV

50KeV – 200KeV
 Dendrito com
Coloração
Seletiva

Dendrito
O espécimen é girado em diferentes ângulos

0˚ 60˚
Imagem Resultante
 Modelo Tridimensional

Tomografia Eletrônica de Mitocôndria

http://www.sci.sdsu.edu/TFrey/MitoMovies/MitoRecon.ht