Universidade de vora

Licenciatura em Biologia Humana Unidade Curricular: Projecto e Investigao 3 Semestre, Ano Lectivo 2011/2012
Docente Responsvel: Lus Alho

Antibiticos e

Antibiogramas

Maria Ferreira, 27496 Raquel Franco, 27532 Vera Ferro, 28600 - 22 de Dezembro de 2011 -

NDICE
I.

INTRODUO TERICA_________________________________________ 3
1. Antibiticos______________________________________________

_3
1.1.O que so_____________________________________ 3 1.2.A sua histria__________________________________

5
1.3.A

escolha

na

prescrio__________________________ 6

1.4.Efeitos

secundrios______________________________ 6
1.5.Resistncia

antibitica___________________________ 7
2.

Antibiogramas

ou

Testes

de

Sensibilidade

Antimicrobiana___________ 8
I.

PROCEDIMENTO ______________________________________________ 9

II.

CONCLUSO/DISCUSSO ______________________________________ 13

III.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS__________________________________ 14

INTRODUO TERICA
Los medicamentos constituyem al mismo tiempo el mayor de los logros y el mayor de los fracassos de la modernidad Federico Tobar

1. Antibiticos
Este trabalho tem como principais objectivos esclarecer o conceito de antibitico, abordando tambm um pouco da sua histria e dos seus efeitos secundrios, e ainda discutir a importncia dos antibiogramas, tcnica sempre associada a frmacos antibiticos. De um modo geral, os antibiticos tm a capacidade de interagir com microrganismos unicelulares e pluricelulares capazes de causar infeces num organismo. Deve salientar-se que, segundo a Organizao Mundial de Sade (NICOLINI, 2008), as infeces so responsveis por cerca de 25% das mortes a nvel mundial. Sendo esta uma percentagem bastante significativa, a utilizao de teraputica com recurso a antibiticos capazes de reverter ou pelo menos reduzir estes nmeros tornou-se inevitavelmente indispensvel. Apesar deste tipo de frmacos e a sua funo serem de conhecimento praticamente geral, a sua prescrio nem sempre a mais adequada, sendo em muitos casos banalizada e demasiado rotineira.

1.1. O que so?

Um antibitico um composto natural produzido por microrganismos utilizado para reverter uma infeco bacteriana previamente estabelecida, ou seja, tem a funo de impedir o crescimento de bactrias. No que diz respeito a fins teraputicos estes so usados para impedir o crescimento de bactrias passveis de causar infeco no organismo embora possam tambm ser utilizados para combater fungos. Um antibitico, como frmaco disponvel para fins teraputicos, deve apresentar caractersticas tais como a estabilidade e actividade na

presena de tecidos e fluidos biolgicos, ser de actuao rpida, capaz de ser eficazmente absorvido e distribudo no organismo, e ainda susceptvel de ser eliminado, no caso de ocorrer acumulao excessiva, com alguma rapidez. Existem antibiticos de largo espectro, estes devem possuir a capacidade de prevenir o desenvolvimento de diversas formas microbianas resistentes e devem ainda ter a ausncia de efeitos colaterais indesejveis. A sua actuao na presena de bactrias acontece no sentido de causar a morte das mesmas ou inibir o seu metabolismo ou a sua reproduo; desta forma, o sistema imunitrio consegue combat-las e elimin-las de forma mais rpida e eficaz. Tendo isto em conta, os antibiticos podem ser classificados em dois tipos distintos: bactericidas e bacteriostticos. Os primeiros tm efeito letal sobre as bactrias e so mais eficazes quando o sistema imunitrio do indivduo est enfraquecido; os segundos so os que inibem o metabolismo e reproduo das mesmas. Genericamente os mecanismos de aco de um antibitico incluem a inibio da sntese da parede celular, da sntese proteica e da sntese de cidos gordos. Para que um antibitico seja eficaz, ele deve ter uma caracterstica comum a vrios tipos de frmacos, a toxicidade selectiva, ou seja, deve ter a capacidade de exercer o efeito anteriormente referido sobre a bactria, sem que as clulas hospedeiras sejam lesadas. Assim, como existem diversas bactrias diferentes, houve a necessidade de se produzir diferentes tipos de antibiticos de modo a combater as doenas que estas provocavam, uma vez que os antibiticos so relativamente especficos para uma dada bactria. Da vasta gama de antibiticos produzidos estes podem ser agrupados em seis grupos principais: B-Lactmicos, Aminoglicosdeos, Macrolidos, Tetraciclinas, Ansamicinas, Outros antibiticos. Ao contrrio do que muita gente pensa, os antibiticos no tm qualquer uso quando se trata de uma infeco causada por um vrus. Apesar das competncias inegavelmente atribudas a este tipo de compostos, deve ter-se em conta que existem riscos associados sua utilizao; destaca-se ento a ocorrncia de reaces adversas,

comummente conhecidas como efeitos secundrios, as interaces com outros frmacos e ainda a resistncia bacteriana. Deve ter-se ainda em conta o uso indiscriminado de antibiticos, principalmente sem orientao e acompanhamento de um mdico, que pode ser prejudicial sade, alm de que favorece o desenvolvimento de microrganismos resistentes a determinados antibiticos. por isso que to importante administrar o antibitico correcto, tom-lo da maneira correcta e nunca por conta prpria.

1.2. A sua histria

A palavra antibitico foi utilizada pela primeira vez em 1941, por Selman Waksan, para descrever uma pequena molcula formada por microrganismos que impedia o crescimento de outros microrganismos susceptveis, no entanto um outro conceito utilizado desde 1889, antibiose, em tudo dizia respeito a este que mais tarde se veio a introduzir, sendo que o primeiro era definido apenas como o antagonismo de seres vivos, de um modo geral. O primeiro antibitico, a Penicilina, foi descoberto em 1928 por Alexander Fleming. Os seus primeiros registos atribuam mesma a funo de suprimir o crescimento da flora oral. Isto porque ao efectuar pesquisas com uma colnia de bactrias, por acaso, estas entraram em contacto com uma espcie de fungo. Fleming percebeu que as bactrias no se desenvolviam na presena daqueles fungos. Ou seja, eles funcionavam como antibiticos, neste caso.

Figura 1 - Alexander Fleming (1881-1955)

No entanto, s cerca de dez anos aps a sua descoberta, seria possvel isolar este composto cuja pesquisa foi impulsionada pelo aumento do nmero de casos de infeco aquando da Segunda Guerra Mundial. Assim, s em 1940 seria possvel produzir este composto com objectivos

puramente teraputicos e em larga escala; iniciava-se assim a era dos antibiticos. Actualmente os laboratrios farmacuticos conseguem sintetizar compostos com propriedades antimicrobianas, contudo as primeiras substncias descobertas com este tipo de carcterstica eram sintetizadas por fungos e bactrias, sendo por isso mesmo consideradas, na altura, substncias naturais. Os antibiticos mais utilizados na prtica clnica so: penicilinas, cefalosporinas, quinolonas, aminoglicosdeos, macroldios, tetraciclinas, entre outros.

1.3.

A escolha na prescrio

A prescrio de antibiticos representa cerca de 12% de todas as prescries farmacolgicas e estima-se ainda que aproximadamente 50% das prescries antimicrobianas seja incorrecta (WANNMACHER, 2004). Numa primeira instncia essencial clarificar a ideia de que este tipo de frmacos extremamente especfico, e consequentemente eficaz apenas em determinados agentes infecciosos previamente conhecidos. Em segundo lugar os mdicos devem estar bastante atentos, tal como foi referido anteriormente, s interaces entre diferentes frmacos. O que acontece na maioria dos casos que a prescrio feita sem que se conhea o agente infeccioso responsvel pela infeco, visto que isso implica testes laboratoriais que requerem tempo, ainda que bastante reduzido. Tudo isto promove, em grande parte dos casos, uma incorrecta prescrio. Aquando da seleco do frmaco antibitico a prescrever h factores a ter em conta, no sentido de accionar um combate eficaz ao agente infeccioso; estes incluem, para alm dos efeitos secundrios, a natureza e gravidade da infeco. Relativamente ao frmaco essencial conhecer o seu grau de absoro, a velocidade de eliminao, a MIC, minimal inhibitory

concentration, que corresponde concentrao mnima de um frmaco, neste caso de um antibitico, capaz de inibir o crescimento de um microrganismo, e ainda a MLT, minimal lethal concentration, que a concentrao mnima capaz de matar o microrganismo.

1.4. Efeitos Secundrios

Os antibiticos representam, na actualidade, a classe de frmacos que apresenta mais frequentemente efeitos secundrios. A World Health Organization define efeito secundrio como uma resposta nociva, e no intencional inerente ao uso de um frmaco, que ocorre normalmente em doses utilizadas em seres humanos para profilaxia, diagnstico ou terapia, ou ainda para modificao de uma aco fisiolgica (LOURO, 2007). Os efeitos secundrios representam um problema de sade pblica pois a sua ocorrncia bastante significativa. Pensa-se que a ocorrncia de reaces adversas causada pela utilizao de teraputica antimicrobiana resulta de vrios factores, tais como o conhecimento inadequado do frmaco e suas caractersticas e a informao clnica insuficiente do paciente. Os efeitos secundrios deste tipo de frmaco so na maioria dos casos gastrointestinais, tais como nuseas e diarreia. No entanto no caso de grvidas e insuficientes renais a ateno por parte dos clnicos deve ser redobrada, uma vez que a utilizao de antibiticos pode originar malformaes do feto, e no caso de insuficientes renais, doses relativamente baixas podem tornar-se txicas visto que a eliminao de produtos ou de substncias exgenas (por exemplo os antibiticos) pode estar comprometida. Aps um estudo realizado pelo Instituto Sueco, sabe-se ainda que, a toma de antibiticos por uma semana pode prejudicar as defesas do organismo at dois anos, o que alarmante uma vez que, actualmente, aproximadamente um quarto de todas as prescries de antibiticos so desnecessrias por no exigirem esse tipo de medicao. Essas prescries

dispensveis no fazem necessariamente bem sade pelo contrrio, podem trazer prejuzos.

1.5. Resistncia Antibitica

A resistncia antibitica surgiu como o reflexo indesejado da evoluo do campo em estudo neste trabalho. Ela constitui, desde a sua primeira manifestao avalivel, um retrocesso, ainda que relativamente pequeno, no desenvolvimento tecnolgico e teraputico em frmacos antimicrobianos. O conceito de resistncia antibitica diz respeito ao crescente aparecimento de espcies resistentes a determinados tipos de antibitico. Como j foi referido, estes frmacos so extremamente especficos e como tal esto direccionados apenas para o combate a um grupo muito restrito de microrganismos. Assim, pode dizer-se que o desenvolvimento e produo de novos frmacos desta classe, so geralmente, a curto ou a longo prazo, acompanhados pelo aparecimento de espcies imunes aos mesmos, levando a uma maior premncia na descoberta e pesquisa constantes. Para alm disso, os aspectos at aqui referidos so agravados, em determinados indivduos, pelo uso contnuo e abusivo de antimicrobianos, que tambm leva destruio de bactrias da flora natural, aumentando a susceptibilidade do indivduo ao desenvolvimento de infeces. A resistncia antibitica pode ser explicada pelas leis de evoluo e seleco natural. O que acontece aquando da toma de um antibitico que as bactrias que causaram a infeco no so eliminadas na sua totalidade; na realidade a pequena percentagem restante, considerada resistente ao antibitico, pode multiplicar-se, dando origem a novas bactrias, sendo que estas apresentam as mesmas caractersticas que as que lhes deram origem. Portugal um doa pases da Europa com maior taxa de resistncia a antibiticos.

2.

Antibiogramas ou Testes de Sensibilidade Antimicrobiana

Os antibiogramas representam desde a sua descoberta at

actualidade um recurso para avaliar a resistncia antibitica, anteriormente abordada, no sentido de orientar e promover uma correcta prescrio por parte dos clnicos. Tratam-se de testes in vitro que determinam a susceptibilidade bacteriana a frmacos antibiticos e podem ser chamados de Testes de Sensibilidade Antimicrobiana (TSA). Devido especificidade dos antibiticos, essencial conhecer os microrganismos passveis de serem destrudos ou inibidos pela presena dos frmacos em causa. Assim, a correcta prescrio favorecida e consequentemente a utilizao dos mesmos, mais eficaz e a resistncia antibitica menor, j que diminui o desenvolvimento precoce de novas estirpes bacterianas. Existe uma escala que avalia a susceptibilidade antibitica e que divide a sensibilidade dos microrganismos face a um antibitico em sensvel, intermdia ou resistente. Esta avaliao feita tendo em conta o tamanho do halo de inibio; se este for grande a bactria susceptvel a esse antibitico e deve por isso ser prescrito. Por outro lado, se no houver halo de inibio significa que a bactria consegue crescer na presena do antibitico, por isso a sua prescrio no servir para o tratamento. Por vezes conseguem ver-se no halo de inibio algumas bactrias, mas poucas, estas representam algumas bactrias da colnia com maior resistncia. Abordaremos mais frente a interpretao destes mesmos antibiogramas, enquadrando essa interpretao com o trabalho prtico realizado. Nesse trabalho usmos o mtodo de disco-difuso para avaliar a resistncia antimicrobiana, mais conhecido como o mtodo de Kirby-Bauer.

PROCEDIMENTO
1. Material e Reagentes
Cultura de E. coli; Cultura de Actinomices; Soluo de Canamicina;

Soluo de Estreptomicina;
Soluo de Espectinomicina;

Soluo salina estril;

Rolho de algodo estril; Placas de agar nutritivo;

Discos de papel esterilizados; Pina; Estufa de incubao; Lamparina.

1. Preparao da cultura bacteriana

Identificar duas placas de petri

(figura 2), com meio indicador com: Data Turma Sigla do grupo Tipo de cultura

Fig.2 Placas de petri

Fig.3 Transferir soluo salina Fig.4 Retirar rolho de algodo estril

Transferir 10mL de soluo salina estril (figura 3) sobre uma placa com crescimento bacteriano (cultura de E. coli), tendo o cuidado de esterilizar o gargalo da garrafa e realizar este processo perto da lamparina.

Retirar com uma pina um rolho de algodo estril (figura 4)

de modo a suspender as bactrias, fazendo movimentos circulares na de petri (figura 5). placa

Fig.5 Suspenso de bactrias

1. Preparao do antibiograma

 Numa das placas de petri, identificada inicialmente como

cultura de E. coli, utilizando o rolho de algodo anterior, humedecer a placa, fazendo novamente movimentos circulares.
Deitar o rolho de algodo fora. Colocar a placa de petri 5 a 10min da estufa. Retirar a placa de petri da estufa e dividi-la em quatro partes. Com a ajuda de uma pina, e tendo em conta todos os cuidados

de assepsia (flambar a pina entre a colocao dos vrios antibiticos; efectuar o procedimento perto da lamparina), introduzir em cada uma das quatro partes um disco de papel impregnada em soluo de antibitico (figura 6).

1- Espectinomicina (SPC) 2- Canamicina (Kan)

Fig.6 Introduo dos discos de antibitico

3- Salina (Sal) 4- Estreptomicina

Repetir toda a segunda parte do

procedimento mas com a placa de petri contendo o meio de cultura de Actinomices. Incubar ambas as duas placas na estufa at ao crescimento da bactria ser visvel.

E. coli a 37C Actinomices a 30C

1.

Interpretao de resultados

Em primeiro lugar deve salientar-se que a regio assinalada com o nmero 3 serve apenas como regio de controlo, no sendo espectvel a inibio de crescimento bacteriano nessa zona. Como foi anteriormente referido, foram usados trs antibiticos distintos de forma a poder comparar-se a inibio do crescimento bacteriano entre eles. Foram tambm usadas duas estirpes bacterianas diferentes para avaliar a resposta de cada uma delas a cada um dos antibiticos, j que estes apresentam especificidades diferentes dependendo da estirpe utilizada.

Fig.6 Placa de petri com cultura dede petri com cultura de Fig.7 Placa E. coli Actinomices

Observando as placas de petri, com cultura de E. coli (Figura 7) e com cultura de Actinomices (Figura 8) aps terem sido retiradas da estufa de incubao, foi possvel medir o halo em volta do papel impregnado em antibitico, chamado o halo de inibio, visto que o valor do dimetro est inversamente relacionado com a resistncia da estirpe ao antibitico utilizado. Atentemos ento nos resultados que se seguem que mostram os valores medidos de cada um dos halos de inibio.

Escherichia Coli Espectinomicina Canamicina Salina 2,5 cm 2 cm 0 cm

Actinomices 1,5 cm 2 cm 0 cm

Estreptomicina

2,3 cm

2,5 cm

Tabela 1: Valores dos dimetros dos halos de inibio de cada amostra.

Analisando os valores obtidos pode constatar-se que a relao onde se observa maior resistncia por parte da bactria da Actinomices com o antibitico estreptomicina e da Escherichia Coli com espectinomicina, visto que foi onde se verificou o maior halo de inibio, com 2,5 cm.

CONCLUSO/DISCUSSO
Verificou-se, pelo mtodo Kirby-Bauer, que diferentes estirpes apresentam diferentes sensibilidades ao mesmo antibitico, e ainda que a mesma estirpe, dependendo do antibitico utilizado, manifesta tambm sensibilidades distintas. Este parmetro foi avaliado pelo halo de inibio, sendo que quanto maior, menor ser a resistncia do microrganismo. Com a realizao deste trabalho foi ainda possvel perceber que a prescrio de antibiticos representa, actualmente, um problema de sade pblica. No entanto, e talvez como motivo para tal facto, verifica-se por parte da classe mdica alguma desateno face a esta questo. Esta envolve no s a obteno de uma escassa informao clnica do paciente, bem como um desconhecimento do prprio frmaco em causa, no seu todo. Quer a prescrio quer a administrao de antibiticos requerem um controlo bastante rigoroso, pois deles depende uma teraputica o mais eficaz que possvel seja. O trabalho e pesquisa permitiram-nos perceber que a resistncia antimicrobiana tambm varia inversamente com a concentrao de frmaco administrada. Deste ponto de vista este rigor torna-se ainda mais

importante, j que a toma inadequada promove um aumento da resistncia antibitica. Defende-se que esta questo no ser resolvida com a contnua pesquisa de novos frmacos, j que com eles surgiro tambm novas estirpes cada vez mais resistentes; pensa-se que esta problemtica seria minimizada, de outro modo, com uma reduo do uso inadequado e banalizado deste tipo de frmacos.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
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