Universidad de Chile Bioqumica

Vacunas de DNA

Niveles de defensa

Clulas B
Linfocitos que se diferencian en la mdula sea y que producen anticuerpos. Protagonistas principales de la respuesta inmune humoral Tipos: 1. memoria 2. plasmticas (descendiente de)

Anticuerpos
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Clulas T
Linfocitos que de diferencian en el timo y que regulan la respuesta inmunitaria o matan a ciertos tipos de clula. Protagonistas principales en la respuesta inmune mediada por clulas. Tipos: 1. citotxicas 2. auxiliares 3. memoria

Historia de las vacunas

En 1796 Edwar Jenner observ que las ordeadoras de vacas las cuales se vean expuestas a la viruela bovina o vacuna no contraan la viruela humana, una enfermedad altamente mortal para la cual hasta ese entonces no se conoca cura.

Historia de las vacunas

En 1796 Louis Pasteur lleva a cabo un experimento pblico para demostrar la efectividad de las vacunas. Inyect a vacas, carneros y un chivo con un cultivo atenuado de Bacillus anthracis, luego fueron inoculados con un cultivo menos atenuado y finalmente con uno muy virulento. El grupo control que no se encontraba inmunizado muri y los inoculados se encontraban vivos y sanos, sin ningn sntoma de la

Qu son las vacunas?

Es una inyeccin que contiene antgenos caractersticos de cierto organismo patgeno y estimula una respuesta inmunitaria. Se pueden clasificar en base a los inmungenos que las conforman: 1. vacunas atenuadas 2. vacunas inactivadas vivas muertas o o

Qu hacen?
Su objetivo central es el de preparar al sistema inmune, a fin de que su respuesta resulte vasta y oportuna cuando el individuo sea invadido por el agente patgeno correspondiente o afectado por sus respectivas toxinas.

Historia de las vacunas de DNA

Jon A. Wolff en 1990 inyect con DNA desnudo a ratones y sus clulas musculares fueron capaces de expresar genes. Estos resultados lo llevaron a plantear la posibilidad de que la transferencia gentica mediante DNA plasmdico podra ser utilizada para el desarrollo de vacunas

Posteriormente se report la generacin de anticuerpos contra dos protenas, la hormona de crecimiento humano (hGH) y la antitripsina (hAAT) mediante la inoculacin de DNA codificante . Ms adelante en 1993 el campo de la vacunacin de DNA qued establecido tras la demostracin de que esta vacuna protega contra el virus de la influenza en animales

Historia de las vacunas de DNA

Vacunas de DNA
Consisten en vectores plasmdicos a los que se les ha insertado un gen que codifica para una protena de algn microorganismo patgeno contra el cual se busca brindar proteccin. Los vectores son la unidad funcional de las vacunas de DNA

Vacunas de DNA:

Cmo se hacen?

D C I U S E ei u n x st p ei t a r e z s r r v g a R a o d r c N o c d a A e d cl i o b e n p n d a y c p n e s d p d a e a u e p D v r s o N a m r A c f a u s d r p n c o a a v n t c e s

Extraccin DNA

Lisis

Extraccin del Gen

Gen de Inters

Endonucleasas de Restriccin

Gen de Inters

Insercin de cDNA
E. de R.

Ligasas Plsmido Vector

Plsmido Modificado Gen de Inters

Cultivo en Bacterias

XN

Separacin y Purificacin

Lisis

Residuo s

Desarrollo de la vacuna

Estructura del Vector

Unidad Transcripcional. Esqueleto Plasmdico.

Esqueleto Plasmdico Unidad Transcripcional

Unidad Transcripcional
Promotor: CMV, RSV, SV40; alteradas para asemejarse al DNA del husped. Intrn: Intrn A, afecta expresin del gen. Secuencia Codificadora de Antgenos: Gen de inters que se expresa para, finalmente, crear anticuerpos. Secuencias de Terminacin y Poliadeniladoras: Estabilidad a la molcula de mRNA.

Esqueleto Plasmdico
Origen de Replicacin: ColE1, permite hasta 20 copias. Sitio de clonacin: Permite clonacin de secuencias de DNA, codificadoras de Ag. Gen de Resistencia a los Antibiticos: Marca clulas que han obtenido el plsmido modificado. Secuencias CpG: Adyuvantes, estimulan el sistema inmune innato.

Respuesta humoral

Respuesta Celular

Respuesta

Inmunitaria

1.Presentacion antignica a los linfocitos T, por parte de las clulas presentadoras de antgenas.

2. Presentacin cruzada

3.Reconocimiento

El DNA exgeno el ncleo blanco

la transcripcin RNA pol II y de otras diversas protenas

Transcripto viaja al citosol, all son sintetizadas las protenas.

Recin sintetizadas son degradadas por el

Proteosoma

NO es suficiente:

Seal O: (ACTIVACIN INICIAL) Favorece la presentacin del antgeno y Activan e inician maduracin

Seal 1: Complejo LTc +R activa Linfocitos Tc Seal 2: molculas potencia activacin de Linfocitos Tc y Th

Etapa Efectora

1-Linfocitos T

Resumen

Mtodos de inoculacin.

Vas de Inoculacin

Piel

Oral Intramuscu lar

Musculo Esqueltico

Mtodos de Inoculacin: Vacunas de DNA Desnudo

Bombardeo de partculas Inyeccin intramuscular Mtodo Sorpresa

Vacunas comestible

Seleccin del Mtodo

En la seleccin del mtodo a emplear se toman en cuenta dos consideraciones: -La cantidad de DNA a inocular - Caractersticas de respuesta inmune que se desea obtener.

Vacunas de DNA desnudo

DNA no recubierto de ninguna formulacin qumica viral u otro tipo de estructura. Se introduce mediante plsmidos Estos plsmidos contienen un gen codificable para una protena, un promotor, generalmente viral, un terminador que permite la expresin del gen de las clulas de mamfero y un gen de resistencia a antibitico que permite la seleccin de plsmidos durante su

Bombardeo de partculas

Se realiza mediante pistolas gnicas en piel y mucosa. Acoplamiento del DNA a esferas de oro o tungsteno (W) Se bombardean en la dermis y capas subdrmicas con la ayuda de He comprimido, lo cual permite la transfeccin directa de las clulas blanco, esto hace ocupar menos DNA. Estas partculas son aceleradas por una descarga elctrica y son "disparadas"

Inyeccin intramuscular

Se realiza mediante agujas hipodrmicas con la utilizacin de jeringas. Deposita el DNA de manera extracelular En este tipo de inoculacin la presentacin del antgeno se lleva a cabo en el bazo principalmente. Mtodo barato.

Vacunas comestible

Plantas a las cuales se les ha introducido por medio de tcnicas de ingeniera gentica, un gen que conlleva la informacin necesaria para producir e su interior una protena autognica. Por lo tanto son plantas transgnicas que se pueden cultivar de manera natural y usar el tejido vegetal como vacuna. Generando una ventaja, ya que desencadena una respuesta inmunitaria mucosa

Tatuaje: Otro mtodo en investigacin.

Se ha demostrado que induce mayor respuesta inmunitaria especifica y humoral.

Cuando el producto es inculado se pretende que:

Ocurra la transfeccin hacia las diferentes clulas del hospedador.

El DNA exogenado alcance el ncleo blanco, en donde tendra lugar la transcripcin correspondiente bajo la influencia de las RNA pol II y otras tcnicas diversas.

Ventajas y desventajas de las vacunas de DNA

Ventajas:
v

Bajo costo de produccin Produce respuesta inmunitaria tanto humoral como celular

Son seguras Generacin de memoria inmunolgica

Ventajas:
q

Son mas estables Existen mayores rutas de inoculacin

Pistolas gnicas:

Desventajas:
q

Alto costo econmico en fases iniciales

La respuesta inmunitaria en humanos es dbil y aun esta en investigacin

Resistencia a antibioticos Algunosantgenosrequieren un procesamientoque a vecesno ocurre

Desventajas:
q

Expresin de antgenos inapropiadamente la respuesta autoinmune es mas lenta que las vacunas tradicionales

El proceso de respuesta

autoinmune es irreversible
q

Posibles dosis de recuerdo Generacion de enfermedades autoinmunes

Desventajas:

Toxicidad gnica:

Sobrexpresin de la vacuna de DNA

Mutagenesis insersional Inastibilidad cromosomica Enciende los oncogenes Apaga los genes supresores

Respuesta inflamatoria aguda o cronica Destruccion de tejido normal

Vacunas de DNA v/s Vacunas tradicionales DNA

Utiliza nicamente el ADN de organismos infecciosos Evita el riesgo de utilizar organismos infecciosos reales Provee inmunidad humoral y mediada por clulas No se requiere de

Tradicionales

Utiliza organismo infeccioso atenuado muerto

al o

Crea un posible riesgo de reversin del microorganismo a su forma virulenta

Vacunas de DNA v/s Vacunas tradicionales

DNA Se puede utilizar en embarazadas y en individuos inmunocomprometid os Bajo costo produccin Facilidad en preparacin de su Tradicionales Muy riesgoso de utilizar en individuos inmunocomprometidos y embarazadas Alto costo de produccin Difcil de preparar

Resultados Clnicos
Baja respuesta inmunitaria en humanos

Desarrollo secuencias DNA.

de

nuevas

combinaciones

de

Algunas firmas lograron inmunizacin para enfermedades con bajas dosis (1 para 4 meses).

F o o c c o o s s

C n c e r

Contra Cncer

Contra Infecciones
Virales

Contra infecciones
Bacteriales

Contra infecciones
Parasitarias

Dficit de protenas

Ensayos ms importantes
Prevencin (y posible cura) del SIDA.

Prevencin y tratamiento de tuberculosis.

Avances de vacunas DNA

Uso de DNA-Protena.

Futuro de las vacunas DNA

Uso completo en prevencin y tratamiento.

Uso de cromosoma artificial.

Conclusin

A pesar de que an no se obtengan resultados favorables en