GRUPAREA BACTERIILOR  Dup multiplicarea bacteriilor se constat : - cele mai multe se separ complet rezultnd indivizi izola i (celule

izolate); - la unele specii, dup diviziune, celulele r mn ata ate una de alta formnd grup ri caracteristice cu mare valoare taxonomic ;  De men ionat ns c rareori toate celulele speciei sunt grupate tipic; caracteristic este modul de grupare predominant.  Modul de grupare a celulelor dup diviziune este n func ie de: - num rul planurilor de diviziune; - raportul geometric dintre diferitele planuri succesive de diviziune; - tendin a celulelor fiice de a r mne unite.
1

MODALITATI DE GRUPARE LA COCI (1)  In func ie de dispunerea celulelor fiice dup diviziune, cocii prezint urm toarele 6 tipuri de grupare: - coc individual sau celul izolat , celulele fiice rezultate din diviziune r mn independente; - diplococi la care celulele rezultate dup diviziune r mn grupate cte dou (ex. Diplococcus pneumoniae); - streptococi la care se constat gruparea n lan a celulelor care, are aspect de irag de m rgele (ex. Str. pyogenes, Str. agalactiae, Str. equi).
2

MODALITATI DE GRUPARE LA COCI (2) - tetrada (tetracocul) ca urmare a unor diviziuni perpendiculare unele pe altele rezult forma iuni a cte 4 elemente (ex. Microccocus tetragenes); - sarcina aspect de cub sau pachete de 8-16 elemente, planurile de diviziune sunt orientate n 3 direc ii diferite, perpendiculare unul pe altul, al doilea pe primul i al treilea pe primele dou (ex. Sarcina flava, S. aurantica); - staphylo cu aspect de ciorchine, planurile succesive de diviziune sunt dispuse n cteva direc ii, iar celulele rezultate se aranjeaz n grup ri neregulate (ex. Staphylococcus aureus, S. hyicus)

Ipoteze privind gruparea la bacteriile sferice (dup Prevot) : - planuri diferite de diviziune, - gruparea s-ar datora unei substan e vscoase, gomoase sintetizat de celula bacterian i dispus : - pericelular, - difuz pe toat suprafa a celulei, - localizat n anumite regiuni determinnd diferite tipuri de polarizare a celulelor, respectiv: - radiar simpl la diplococ, - diametral simpl la streptococ, - biradiar la tetracoc, - bidiametral la sarcina, - circumferen ial la stafilococ.
5

MODALITATI DE GRUPARE LA BACILI Bacilii pot s se prezinte sub urm toarele aspecte: - bacili izola i observati la numeroase bacterii cilindrice sau cocobacilare (ex. Escherichia, Salmonella, Proteus); - diplobacili din dou elemente dispuse cap la cap, V sau L (ex. Moraxella bovis, Listeria monocytogenes, Erysipelothrix); - streptobacili mai multe elemente a ezate cap la cap alc tuind un lan de lungimi variabile (ex. Bacillus anthracis, Streptobacillus moniliformis); - palisada dat de a ezarea celulelor una lng alta n sensul axului lor lung, asem n tor stinghiilor dintr-un gard (ex. Corynebacterium pyogenes).
6

1. Diplococi 2. Streptococi 3. Tetrada 4. Sarcina 5. Stafilococ 6. Diplobacil

7. Grupare in V 8. Streptobacili 9. Filament 10. Filament cu citoplasma granulara 11. Filamente ramificate 12. Palisada 13. Litere chinezesti

ALTE MODALITATI DE GRUPARE  Gruparea n stea sau n rozet ntlnit la: - actinomicete (ex. Actynomices bovis, Actinobacillus ligniersi), - agrobacterii (ex. Agrobacterium stellatum).  Gruparea cu aspect de m rci po tale ntlnit la: - bacteriile p trate care formeaz placarde de 8-16 p trate la care se v d net planurile de diviziune.  Trihomul de forma unui filament multicelular, uniseriat rezultat din diviziune, n care celulele adiacente sunt men inute ntr-un nveli parietal comun; se ntlne te la bacterii care tr iesc n ape sulfuroase, n moloase, ape poluate or ne ti (ex. Leucothrix, Beggiatoa).
9

In general ntre modul de grupare al bacteriilor i caracterele de cre tere pe mediile de cultur exist o rela ie evident . Aceast rela ie este redat n tabelul de mai jos.
Modul de grupare al bacteriilor Caracterul de cre tere n medii lichide (bulion nutritiv) Tulbur uniform datorit repartiz rii egale n coloana de mediu. Constituie un depozit granular sau floconos ca urmare a sediment rii lan urilor Aspectul coloniilor pe medii solide (agar nclinat sau n pl ci) Colonii circulare cu suprafa neted i lucioas (tip S) Colonii cu margini neregulate, suprafa rugoas i mat (tip R)

Celule izolate Bacterii grupate n lan uri i formele filamentoase

10

DENSITATEA BACTERIILOR  Densitatea bacteriilor este - n general peste 1 - rareori sub 1  Un con inut crescut n lipide - scade densitatea bacteriilor  Un con inut mare de proteine i s ruri - cre te densitatea bacteriilor  Acest caracter constituie o particularitate de specie  Exist o rela ie evident ntre densitatea bacteriilor i necesit ile lor de oxigen.

11

Caracterul considerat Dezvoltarea n medii lichide Tipul respirator

Particularit i existente n raport cu densitatea Densitatea peste 1 Cresc n toat masa i tulbur uniform bulionul Sunt aerobe i facultativ anaerobe n cantitate redus Densitatea sub 1 Cresc la suprafa formnd membran sau pelicul Sunt obligatoriu aerobe sau dependente de oxigen n cantitate mare

Constituien i lipidici

12

STRUCTURA CELULEI BACTERIENE Definirea constituien ilor structurali a fost posibil datorit perfec ion rii tehnicilor de studiu: - tehnici citochimice - microscopie electronic Lund ca reper peretele celular - constituien ii celulei bacteriene pot fi grupa i n dou mari PERETELE CELULAR categorii: Constituien i intraparietali: Constituien i extraparietali: - membrana citoplasmatic - capsula - citoplasma - stratul mucos - nucleoidul i plasmidele - glicocalixul - mezozomii - spinii - ribozomii - flagelii (cilii) - incluziile - fimbriile (pilii) - vacuolele
13

1. Citoplasma 2. Ribozomii 3. Incluziile 4. Corpuscul bazal 5. Nucleoidul 6. Plasmidele

7. Membrana citoplasmatic 8. Mezozomii 9. Perete celular 10. Capsula 11. Flagelii (cilii) 12. Fimbriile (pilii)
14

PERETELE CELULAR (P.C) Existen a peretelui celular a fost b nuit de Cohn nc din 1872  Celula bacterian este delimitat de un perete celular - bine definit structural, - cu consisten a rigid (excep ie micoplasmele),  Eviden ierea lui este posibil prin: - colorare selectiv -prin examinare la microscopul electronic  La celulele tinere care au citoplasma bogat , compact i omogen , peretele celular ader intim la con inutul celular.  La celulele b trne sau n curs de liz peretele celular devine evident, fiind dep rtat de citoplasm .
15

Peretele celular poate fi caracterizat i prin metode selective de studiu:  Metode directe - izolarea lui ca structur intact complet ; - fie prin modificarea raporturilor sale cu citoplasma: - pe calea dezintegr rii celulare - prin ultrasonare - agitare cu perle de sticl - eviden ierea cu ajutorul tehnicii de microdisec ie - prin provocarea unui oc osmotic sau a autolizei celulare  Metode indirecte - prin degradarea lui pe cale enzimatic sub ac iunea lizozimului, enzim care atac mucopolizaharidele din structura peretelui; - prin cultivarea bacteriilor n medii cu diferite substan e (ex. penicilin n doze subinhibitoare).
16

 Examinat la microscopul electronic - are aspect de sac gol - care conserv forma bacteriei din care provine  Structural, peretele celular are o constitu ie - asem n toare ochiurilor unei plase, -cu tram regulat -apare ca fiind format din fascicole de fibre paralele, -cu dispunere n planuri diferite care se ncruci eaz .  Grosimea peretelui celular este variabil - este n general cuprins ntre 10-35 nm putnd s ajung la 80 nm, - reprezint cam 30% din ntreaga celula bacterian , - este n general mai sub ire la celulele tinere care cresc rapid.
17

 n func ie de prezen a i particularit ile de structur ale peretelui celular bacteriile se mpart n 3 diviziuni n cadrul regnului Procaryotae (Gibbson i Murray- 1978) 1. Firmacutes (firmus- tare, cutis piele) - au pertete celular gros, rigid, lipsit de membran extern - intr n aceast categorie bacteriile Gram pozitive 2. Gracillicutes (gracilis sub ire) - au perete celular n mod obi nuit sub ire avnd n structura sa membrana extern , - intr n acaest categorie bacteriile Gram negative 3. Mollicutes (mollis moale, delicat) - sunt lipsite de perete celular uniform, - grupeaz o categorie aparte de bacterii (micoplasmele).
18

Cromozomul Pilii (fimbriile) Ribozomii

Incluziile Cil (flagel) Capsula Plasmid Citoplasma Membrana celulara Peretele celular
19

In func ie de structur

i de compozi ia chimic

- pere ii celulari ai bacteriilor se coloreaz diferen iat, - se clasific din acest punct de vedere n 3 grupe principale - Gram pozitive - Gram negative - Acidorezistente
CONSTITUIENTUL COMUN AL PERETELUI CELULAR LA TOATE TIPURILE DE BACTERII ESTE PEPTIDOGLICANUL SAU MUREINA

Exist ns diferen e privind: - cantitatea, - aranjamentul structural al proteinelor, polizaharidelor i lipidelor. Pe sec iuni ultrafine n structura sa se identific : - un strat bazal (comun la toate categoriile de bacterii) - stratul structurilor specifice.

20

PERETELE CELULAR LA BACTERIILE GRAM POZITIVE  La microscopul electronic apare ca un strat unic relativ omogen.  Componentul major este peptidoglicanul (89-90% din greutatea uscat ) - apare foarte net dup colorare cu s ruri ale metalelor grele, - poate fi degradat dup tratare cu lizozim.  Peretele celular al bacteriilor Gram pozitive mai con ine: - proteine i polizaharide care includ: - acizi teicoici, acizi teichuronici, - acizi neteichoici i polizaharide neutre.

21

Proteine asociate cu peretele celular

Acizi teicoici

Peptidoglican

Membrana citoplasmatica

Peretele bacterian la bacteriile Gram pozitive

22

Pepetidoglicanul (murein , glicopeptid, mucopeptid, mucocomplex) - este un heteropolimer compus dintr-o por iune glicanica i o component peptidic . Por iunea glicanic foarte uniform - are structura unor lan uri lineare, - formate din resturile alternante a dou N-acetilhexozamine: - N-acetil glucozamina i acidul N-acetil muramic - legate ntre ele prin leg turi glicozidice. Componenta peptidic con ine ca unitate de construc ie - un tetrapeptid, - unit ile tetrapeptidice sunt la rndul lor legate prin intermediul unor pun i interpeptidice. - ntre compu ii chimici ce intr n structur , - unii care sunt ntlni i numai la bacterii (ex. acidul muramic, D-alanina, acidul D-glutamic i acidul 23 pimelic).

1. N-acetil glucozamina (NAG) 2. Acidul N-acetil muramic 3. Tetrapeptid 4. Pentaglicina

24

Sacul peptodoglicanic este n esen - o molecul unic , gigant i rigid , - formeaz n jurul prtoplastului bacterian o re ea ca o plas rigid cu ochiuri mici, - are o structur de re ea tridimensional deoarece leg turile ncruci ate se fac n dou planuri ale spa iului. Peptidoglicanul poate fi atacat (descompus) de : - lizozim - atac specific leg turile glicozidice dintre acidul muramic i resturile glicozaminil - penicilin - inhib treapta terminal n biosinteza mureinei.

25

Peptidoglicanul (reteaua sub forma de plasa rigida)

Fosfolipide Proteine Lipoproteine

26

Acizii teichoici (teichos=zid, perte) - sunt molecule polimere lungi i flexibile, - formate din ribitolfosfat i glicerol-fosfat, - localizate exclusiv n peretele celular, membrana plasmatic i structurile capsulare ale bacteriilor, - sunt prezen i numai la bacteriile Gram pozitive - confer bacteriilor Gram pozitive o serie de propriet i importante - au rol esen ial n men inerea unei concentra ii de ioni metalici (Mg2+) - au rol arhitectural contribuind la men inerea structurii tridimensionale a peptidoglicanului - joac rol important n patogenitatea unor bacterii contribuind la inhibarea fagocitozei (acizii teichoici + acizii teichuronici) - acizii lipoteicoici ac ioneaz ca receptori de fag i de colicine.
27

Proteine asociate cu peretele celular

Acizi teicoici

Acizi lipoteicoici

Peptidoglican

Membrana citoplasmatica

28

PERETELE CELULAR LA BACTERIILE GRAM NEGATIVE - este mai sub ire - are o structur mai complex - este distinct stratificat

De la exterior spre interior este alc tuit din urm toarele componente: - membrana extern - stratul de peptidoglican - spa iul periplasmatic

29

1. Membrana extern reprezint stratul exterior. - pe sec iune apare triplu stratificat , - chimic este alc tuit din - fosfolipide, - proteine, - lipopolizaharide, - sunt componente termostabile, - poate fi izolat i purificat cu u urin , - lipopolizaharidul are propriet i antigenice i activitate endotoxic . 2. Stratul de peptidoglican - este electronodens, - are grosime de 1,5-3 nm, - poate fi ndep rtat prin tratare cu lizozim, - se leag de membrana extern prin intermediul unor molecule globulare de lipoprotein .

30

- Are o compozi ie chimic asem n toare la toate bacteriile Gram negative. - Con ine acid N-acetilmuramic, N-acetilglucozamin , diaminopimelat, alanin i acid glutamic (glutamat) 3. Spa iul periplasmic - pe sec iuni fine apare ca o zon cu densitate electronooptic redus , - o l rgime variabil depinznd de: - starea fiziologic a celulei, - condi iile de cultivare - constituie sediul de depozitare a unui num r mare de enzime i pigmen i.

31

Antigenul somatic O Zona cu polizaharide Lipidul A Lipopolizaharide

Peptidoglican Membrana citoplasmatica Proteina membranala Spatiul periplasmic

32

Peretele bacterian la bacteriile Gram negative

PERETELE CELULAR LA BACTERII ACIDOREZISTENTE  Micobacteriile au un con inut ridicat n lipide - reprezentnd 20-45% din greutatea uscat a celulei, - aflate predominat n peretele celulei microbiene (cca. 60%), - con inutul n lipide este direct propor ional cu: - gradul de patogenitate al micobacteriilor - fiind cel mai ridicat la Mycobacterium leprae, M. tuberculosis, M. bovis; - cel mai sc zut la micobacteriile cu cre tere rapid (M. phley).  Prezen a lipidelor micobacteriene explic : - propriet ile tinctoriale (acido-alcoolo-rezisten ) - rezisten a ridicat n mediul exterior.
33

Cele mai importante componente lipidice: 1. Fosfolipidele (cardiolipina) sunt localizate n membrana celular . 2. Acizii micolinici - sunt structuri sub forma unei re ele insolubile care nconjoar bacteria, - re ea la care contribuie i al i compu i macromoleculari nelipidici - n ochiurile re elei se afl lipide libere i glicolipide. 3. Micozidele sunt glicolipide i peptido-glico-lipide, - din micozide face parte i dimiocolatul de trehaloz numit i factorul cord care se afl n raport direct cu gradul de virulen al unei tulpini. 4. Ceara D care este de fapt o peptido-glico-lipid care - se afl ntr-o concentra ie mai ridicat la M. tuberculosis, - are ac iune adjuvant .
34

ROLUL PERETELUI CELULAR 1. Reprezint sistemul de sus inere mecanic al ntregii arhitecturi celulare. 2. Datorit rigidit ii sale determin forma caracteristic a celulelor 3. Particip la procesul de cre tere i diviziune celular urmnd membrana citoplasmatic n formarea septurilor de diviziune. 4. Asigur protec ia fa de ocul osmotic, - presiunea osmotic intern este de aproximativ 5-6 atm la E. coli, 20-30 atm. la Stph. aureus. - f r prezen a peretelui celular, membrana plasmatic nu ar rezista acestei presiuni.
35

Diviziunea celular

36

5. Unii constituenti ai peretelui celular au rol de receptori pentru bacteriofagi 6. Ac ioneaz ca o sit molecular asigurnd - trecerea substan elor nutritive - mpiedicnd n acela i timp - p trunderea unor substan e nocive - sau pierderea unor metaboli i necesari. 7. Membrana extern la bacteriile Gram negative re ine - n spa iul periplasmatic enzimele, - o larg varietate de molecule nutritive. 8. Lipopolizaharidele membranei externe poart : - un mare num r de determinan i antigenici, - confer complexitatea i specificitatea antigenic a antigenelor somatice bacteriene, - ele fixeaz anticorpii i elementele sistemului complement.

37

Aspectul bacteriofagilor
Cap Fibrile Coada

Perete celular

38

Chestionar 2
1. Cocii pot sa se grupeze: a) Sub forma de tetrada? b) Sub forma de palisada? c) Sub forma de litere chinezesti? 2. Constituientii intraparietali la bacterii sunt: a) Cilii? b) Ribozomii? c) Pilii? 3. Constituientul comun al peretelui celular la toate bacteriile este: a) Acidul teicoic? b) Peptidoglicanul? c) Ceara D? 4. Rolul peretelui celular este : a) De sus inere mecanic a ntregii arhitecturi celulare? b) De deplasare in medii lichide? c) De transmitere a informatiei genetice?
39