UNIVERSIDADE FEDERAL CEAR UFC CENTRO DE CINCIAS DEPARTAMENTO DE BIOQUMICA E BIOLOGIA MOLECULAR DISCIPLINA: Metodologia cientfica Curso: Biotecnologia

a TURMA: A (10 s 12H /Sex) PROF: Andr Luis Coelho Crditos: 02

Normas e Modelo (Resumos) Ttulo: Tcnicas de Cultivo e Semeadura de Bactrias. Autor: Guilherme da Silva Nascimento. A Biologia Molecular uma rea que utiliza diversas tcnicas para o estudo do DNA e RNA como tambm os processos de replicao, transcrio, traduo e de regulao desses processos. A microbiologia uma rea que complementa os estudos da biologia molecular atravs do emprego de tcnicas de crescimento e cultivo de microorganismos. Devido variedade de micro-organismos presentes no ambiente, se faz necessrio de tcnicas que permitam a identificao e o cultivo de organismos especficos. Os meios de culturas so utilizados como ambientes artificiais capazes de suprir todas as necessidades requeridas pela cultura estudada ao mesmo tempo em que possvel o emprego de tcnicas de seleo e identificao desta. A prtica de cultivo e seleo de bactrias objetiva apresentar as tcnicas bsicas de inoculao de bactrias e semeadura, como tambm apresentar os principais meios de cultura e suas finalidades e o modelo de crescimento de uma cultura aps a inoculao. Os procedimentos foram realizados em uma cmara de fluxo laminar, prximos ao raio de ar esterilizado (calor seco) gerado por uma lamparina. O material biolgico utilizado em todas as inoculaes foi uma cultura de Escherichia coli. semeada em tudo de ensaio contendo meio lquido LB(meio Luria-Bertani). A incubao dos repiques foi realizada em estufa bacteriolgica a 37C por um perodo de 16h e os resultados foram observados aps 24h com exceo do repique em meio lquido no qual foi observado apenas aps 48h. Na primeira prtica foi realizada a inoculao em meio lquido LB utilizando como vetor uma ala de platina esterilizada. Nesse experimento foi observado um crescimento bacteriano devido um aumento na turbidez do meio em comparao com o grupo controle. Na segunda prtica foi realizada a semeadura em meio slido atravs da tcnica de picada na qual utilizado um palito estril para realizao do repique. O palito carregado com a amostra e so feitos furos no meio. Foi observado crescimento bacteriano devido formao de colnias apenas nos pontos em que foram realizados. Na terceira prtica foi utilizado como meio o gar LB slido inclinado. A inoculao foi realizada utilizando uma ala de platina e o repique por meio de esgotamento do material coletado atravs da formao de estrias que foram formadas desde a parte mais profunda do meio. A formao de colnias foi observada confirmando o crescimento bacteriano. A quarta prtica foi realizada atravs de esgotamento em meio slido utilizando-se alas de platina. As alas foram carregadas com a amostra e repicadas atravs de tcnica de estriamento iniciando com estrias mais fechadas e tornando-as mais abertas a cada novo quadrante que formado. Foi observado crescimento de colnias bem prximas nas primeiras estrias e, seguinte distanciamento, aumento do isolamento das colnias em desenvolvimento. Na ltima prtica, foi realizada a inoculao de 100microlitros de amostra biolgica em meio lquido atravs do uso de uma pipeta automtica. O crescimento observado nesse meio foi, semelhante a primeira prtica, observado e identificado atravs da turbidez do meio. Apesar da

avaliao do ltimo meio ter sido realizada em tempo superior ao determinado( 24h aps a inoculao), foi possvel determinar o crescimento bacteriano na cultura. Todos os meios apresentaram resultado positivo para crescimento bacteriano indicando que tanto o meio era propcio para o micro-organismo como tambm as tcnicas foram aplicadas corretamente.