UNIVERSIDAD METROPOLITANA DE CIENCIAS DE LA EDUCACIN FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS.

DEPARTAMENTO DE BIOLOGA LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

LABORATORIO DE LEVADURAS
1. Introduccin
Se denomina levadura a cualquiera de los diversos hongos microscpicos unicelulares que son importantes por su capacidad para realizar la descomposicin mediante fermentacin de diversos cuerpos orgnicos, principalmente los azcares o hidratos de carbono, produciendo distintas sustancias como anhdrido carbnico o CO2. Por esa razn se han utilizado desde hace miles de aos las levaduras que existen en la Naturaleza en la elaboracin del pan y de bebidas como el vino y la cerveza. Cuando se elabora el pan el CO2 forma burbujas en la masa, que entonces es ms liviana y apetitosa. El vino y la cerveza, en cambio, contienen alcohol que se forma durante la fermentacin. Las levaduras se reproducen asexualmente por gemacin o brotacin y sexualmente mediante ascosporas o basidioesporas. Durante la reproduccin asexual, una nueva yema surge de la levadura madre cuando se dan las condiciones adecuadas, tras lo cual la yema se separa de la madre al alcanzar un tamao adulto. En condiciones de escasez de nutrientes las levaduras que son capaces de reproducirse sexualmente formarn ascosporas.

2. Objetivos
Observar levaduras mediante el mtodo de tincin simple. Reconocer que en un cultivo las bacterias se encuentran vivas y que por lo tanto ocurre muerte y reproduccin.

3. Materiales
Cultivo puro de levadura Azul de metileno Portaobjetos y cubreobjetos Pizeta con agua destilada Microscopio ptico Asa de inoculacin Mechero

4. Procedimiento experimental
4.1 Limpiar con cuidado un portaobjetos con etanol. Evaporar el residuo de alcohol del portaobjeto pasando este rpidamente por la llama del mechero. 4.2 Depositar en el portaobjeto una gota de agua destilada. Esterilizar a la llama del mechero un asa en argolla, dejar enfriar y tomar una pequea cantidad de muestra de levadura. Emulsionar la muestra en

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la gota de lquido del portaobjeto y extender con el asa. Incinerar el asa despus de cada extensin del preparado. 4.3 Secar el portaobjeto pasndolo de manera rpida y repetida por la parte mas alta de la llama del mechero evitando el sobrecalentamiento del portaobjeto. Para esto controlar la temperatura del portaobjeto con el dorso de la mano. 4.4 Poner sobre la muestra una o dos gotas de azul de metileno cuidando recubrir toda la muestra. Dejar actuar de 1 a 2 minutos. Luego lavar el exceso de colorante con agua destilada desde un extremo del portaobjeto, nunca sobre la muestra en si. 4.5 Secar el exceso de agua cuidadosamente con papel absorbente y poner sobre la muestra un cubreobjeto. 4.6 Observar al microscopio enfocando inicialmente con el lente de aumento menor hasta enfocar, luego aplicar aceite de inmersin y proceder a observar con el lente de inmersin.

5. ndice de viabilidad y gemacin

El ndice de viabilidad se refiere al porcentaje de clulas vivas de la muestra, esto se puede apreciar viendo el nmero total de clulas y el nmero de clulas teidas dentro de un cuadrante. Las clulas que se tien son aquellas q estn muertas I.V = nmero de clulas teidas x 100 nmero total de clulas I.V = 100 todas las clulas muertas

El ndice de gemacin se refiere al porcentaje de clulas en proceso de gemacin en la muestra, esto se puede apreciar contando el nmero total de clulas y el nmero de clulas en proceso de gemacin. I.G = nmero de clulas gemando x 100 I.G = 100 nmero total de clulas cultivo joven