Sebastian maqueda Villanueva

3 trimestre: Matutino Prctica No. 2 Efectos de la temperatura en una reaccin enzimtica Propsitos: El estudiante observa la actividad de una enzima y el cmo el estado fsico del hgado (entero y molido) y la temperatura influye en esta. Introduccin: El compuesto perxido de hidrgeno H2O2, es un producto secundario de la mayora de las reacciones metablicas en casi todos los seres vivos. Sin embargo, el perxido de hidrgeno es daino para las molculas delicadas que hay dentro de las clulas. Como resultado, casi todos los organismos tienen la enzima peroxidasa, que descompone el H2O2 a medida que ste se forma. El hgado de pollo fresco es una fuente importante de peroxidasa que acelera el rompimiento del H2O2 en molculas de agua y oxgeno gaseoso. La peroxidasa acelera el rompimiento del perxido de hidrgeno en molculas de agua y oxgeno gaseoso. Esta reaccin se puede comprobar mediante el desprendimiento de burbujas de oxgeno que se libera de los tejidos vivos. ---------------------------------------------------------------------------------------------------Las enzimas son protenas que incrementan la velocidad de una reaccin qumica y no se consumen durante la misma (algunos tipos de ARN pueden actuar como enzimas, usualmente rompen y sintetizan enlaces fosfodiester; a estas molculas se les denomina ribozimas y se encuentran en muy baja proporcin en la naturaleza).

Qu necesito saber? Propiedades de las enzimas

Las molculas de enzimas contienen hendiduras o cavidades denominadas sitio activo. El sitio activo est formado por las cadenas laterales de residuos especficos, lo que ocasiona que tenga un arreglo tridimensional particular, diferente al resto de la protena.

El sitio activo la enzima (E) une al substrato (S) formando un complejo enzima-substrato (ES). En el complejo ES, E transforma a S en l o los productos, formando el complejo enzima-producto (EP), finalmente la enzima libera del sitio activo a P, regenerndose.
Este sitio es afn por la estructura tridimensional del sustrato:

E + S ES E + P ---------------------------------------------------------------------------------

La mayora de las reacciones catalizadas por enzimas son muy eficientes y transcurren desde 106 hasta 1014 veces ms rpido que la misma reaccin no catalizada. Tpicamente, cada molcula de enzima es capaz de transformar cada segundo de 100 a 1000 molculas de substrato en producto. El nmero de estas molculas transformadas a producto por molcula de enzima en cada segundo, se conoce como el nmero de recambio.

Las enzimas son muy especficas por el substrato de la reaccin que catalizan. Interactan con una o muy pocas molculas y catalizan nicamente un tipo de reaccin, por lo que las molculas con las que interactan deben ser muy parecidas, tanto en composicin, como en estructura tridimensional. Por ejemplo, en la siguiente figura, en el panel A, se muestra la reaccin catalizada por la enzima triosafosfato isomerasa (enzima

que cataliza el paso 5 de la gluclisis), en el panel B se muestran inhibidores de la catlisis:

Algunas enzimas se asocian con molculas de carcter no proteco que son necesarias para el funcionamiento de la enzima, estas molculas se denominan cofactores. Comnmente, los factores encontrados en las enzimas incluyen iones metlicos como el Zn2+ o el Fe2+, tambin pueden ser molculas orgnicas que se denomina coenzimascomo el NAD+, FAD, la conezima A y la C, generalmente las coenzimas son derivados de las vitaminas. A la enzima en ausencia de su cofactor (cuando lo tiene), se le denominaapoenzima, en presencia de su cofactor (cuando lo tiene), se le denomina holoenzima. La apoenzima generalmente carece de actividad biolgica. La diferencia entre un cofactor y un grupo prosttico, como el grupo hemo, es que este ltimo est unido de manera covalente a la enzima, mientras que el cofactor puede ser removido de la misma con relativa facilidad

La actividad enzimtica puede ser regulada, esto quiere decir que dependiendo de los requerimientos metablicos, las enzimas son activadas o inhibidas, para acelerar o disminuir la velocidad con la que catalizan la reaccin, respondiendo as a las diferentes necesidades de sus productos en la clula. La regulacin ms comn es modificando la concentracin de su(s) substrato(s).

En

los

eucariontes,

muchas

enzimas

se

localizan

en organelos especficos en la clula. Esta compartamentalizacin ayuda a aislar los substratos de la reaccin o productos de la misma, de tal forma que

no hay competencia de reacciones, de esta manera se provee un medio favorable para la reaccin, de tal forma que es posible localizar diferentes partes del metabolismo en diferentes organelos, haciendo a la clula una entidad organizada en donde simultneamente funcionan miles de enzimas.

Funciones principales de las enzimas

Las enzimas (son generalmente protenas) son catalizadores de reacciones. Pueden regular los procesos celulares, hacerlos mas rpidos o mas lentos, dependiendo de la necesidad del organismo.
Funcin estructural: muchas protenas (encimas) constituyen estructuras celulares y forman parte de los tejidos de sostn (seo, cartilaginoso y conjuntivo) proporcionndoles elasticidad y resistencia. CAPTULO 5 Glucoprotenas de membrana

Histonas de los cromosomas

Colgeno del tejido conjuntivo fibroso

Elastina del tejido conjuntivo elstico

Queratina de la piel

Funcin enzimtica: las reacciones metablicas son llevadas a cabo por enzimas que son molculas de naturaleza proteica. Son las protenas ms abundantes.

Enzimas digestivas (gastrina, pepsina) Enzimas catablicas (Piruvato kinasa) Enzimas anablicas (Cardiolipina sintasa) Enzimas transporte (L-carnitina)

Enzimas existentes en el hgado

LACTATO DESHIDROGENASA: es una enzima catalizadora que se encuentra en muchos tejidos del cuerpo, pero su presencia es mayor en el corazn, hgado, riones, msculos, glbulos rojos, cerebro y pulmones. Participa en el metabolismo energtico anaerobio, reduciendo el piruvato (procedente de la gluclisis) para regenerar el NAD+, que en presencia de glucosa es el sustrato limitante de la va glucoltica.

TRANSAMINASAS: son un conjunto de enzimas del grupo de las transferasas, pues transfieren grupos amino desde un metabolito a otro, generalmente aminocidos.

FOSFATASA ALCALINA: es una enzima hidrolasa responsable de eliminar grupos de fosfatos de varios tipos de molculas como nucletidos, protenas y alcaloides. El proceso de eliminar el grupo fosftico se denomina desfosforilacin. Como sugiere su nombre, las fosfatasas alcalinas son ms efectivas en un entorno alcalino.

Gamma glutamil transpeptidasa: Est involucrado en la transferencia de aminocidos a travs de la membrana celular y el metabolismo de los leucotrienos. Su rol principal es en el metabolismo del glutatin mediante la transferencia de la fraccin glutamil a una variedad de molculas aceptoras como el agua, algunos L-aminocidos y pptidos, dejando el producto cistena para preservar la homeostasis intracelular del estrs oxidativo.

NOTA: Investiga Ser capaz la enzima peroxidasa de trabajar en temperaturas fras? R: no a temperaturas bajas se hace rgido

Trabaja mejor la peroxidasa a temperaturas altas? R: No a temperatura elevada se rompen las uniones dbiles y se desarma la estructura tridemencional de la protena y pierde su capacidad para actuar como enzima

Cul es el efecto de la temperatura en la actividad enzimtica de la catalasa en el hgado entero y molido? R: La elevacin de la temperatura incrementa la velocidad de una reaccin catalizada
por enzimas. Al principio la velocidad de reaccin aumenta cuando la temperatura se eleva debido al incremento de la energa cintica de la energa de las molculas reactantes.

PONLO EN PRCTICA! Materiales 1 Gradilla hielo

8 tubos de ensaye Mortero con pistilo 1 vaso de precipitado de 50 ml 2 cristalizadores de 100 ml 1 agitador 1 esptula 1 probeta de 50 ml 1 pinza para tubo 1 mechero Estufa 2 termmetros

40 ml de perxido de hidrgeno 1 hgado de pollo fresco agua de la llave toallas de papel

Precauciones de seguridad

Asegrate de lavarte las manos antes y despus de manipular los materiales de laboratorio. Mtodo experimental 1. Etiquetar y enumerar los 8 tubos de ensaye (del 1 al 8), colocarlos en la gradilla. 2. Cortar 4 fragmentos de hgado de pollo de 1 cm3, colocar cada uno en los tubos de ensaye 1, 2, 3 y 4 3. Cortar un fragmento grande de hgado de pollo y molerlo en el mortero, agregar a los tubos 5, 6 , 7 y 8 aproximadamente 1 cm3 del hgado molido

Tratamiento: Tubos 1 y 5 a temperatura ambiente (medir temperatura inicial y final) agregar 1ml de agua oxigenada a cada tubo, observar la

produccin de burbujas (con la regla mide la altura que alcanzan las burbujas en cada tubo) anota los datos obtenidos. Tubos 2 y 6 a temperatura de 36 -37oC. Coloca dentro de un cristalizador agua de la llave, calintala a 37oC (mdela con el termmetro), sumerge los tubos cuando el agua tenga la temperatura sealada, agrega 1ml de agua oxigenada en cada tubo de ensaye y anota tus observaciones. Tubos 3 y 7 a temperatura de 4- 8oC. Coloca en otro cristalizador hielos y sumerge los dos tubos hasta que cada uno tenga la temperatura de 5 a 7oC, agrega 1 ml de agua oxigenada a cada tubo y anota tus observaciones Tubos 4 y 8 hgado entero y molido hervidos. En cada tubo de ensaye coloca 1ml de agua y con la pinza para tubo hierve el hgado, colcalos sobre la gradilla y agrega a cada uno 1ml de agua oxigenada (toma la temperatura a la que hirvi el agua) NOTA: Es importante que anotes la temperatura inicial y final de cada tratamiento, mide con la regla la altura que alcanzan las burbujas en cada tubo, observa si el hgado entero y molido tienen la misma actividad enzimtica en las diferentes temperaturas. Con estos datos elabora una grfica en papel milimtrico (eje X Temperatura C, en el eje de la Y altura de las burbujas)

Resultados

Tubo 1 y 5 a temperatura ambiente las burbujas fueron mas altas que en los tubos que estaba fri y mas bajas que los tubos calientes.

Tubo 2 y 6 se coloco el tubo en agua caliente y el hgado cambio de color por que se estaba cociendo y al agregar el agua oxigenada las burbujas fueron mas altas y grandes que en la primera prueba.

Tubo 3 y 7 se colocaron los tubos en hielo, se agrego el agua oxigenada y las burbujas fueron mucho menores a las otras pruebas, esto por que la peroxidasa funciona mejor en calor.

Tubo 4 y 8 se colocaron los tubos en agua hirviendo, se aclaro el color del hgado por el calor y al agregar salieron ms burbujas ya que con el calor funciona mejor la peroxidasa

Realiza la grfica en papel milimtrico

Temperaturas iniciales y finales

70 60 50 40 30 20 10 0 Tub1

Temperatura inicial Temperatura final

Tub2

tubo3 Tubo4 Tubo 5 Tubo6 tubo7

tubo8

Altura de las burbujas al agregar agua oxigenada

5 4 3 2 1 0 Tubo1 Tubo2 Tubo3 Tubo4 Tubo5 Tubo6 Tubo7 Tubo8

Altura de burbujas en cm Tubos 1,2,3,4 Entero Tubos 5,6,7,8 Molido

Anlisis y conclusin 1.- Qu es una enzima?

Una enzima es la versin biolgica de un catalizador. Ellas sencillamente son macromolculas con grupos tipo llave cerradura donde un sustrato de una reaccin se une y se convierte en el producto en un tiempo apreciable

2.- Qu enzima contiene el hgado?

LACTATO DESHIDROGENASA, TRANSAMINASAS, FOSFATASA ALCALINA, Gamma glutamil transpeptidasa.

3.- Cul es su funcin en el metabolismo?

Constituyen estructuras celulares y forman parte de los tejidos de sostn. de eliminar grupos de fosfatos de varios tipos de molculas como nucletidos, protenas y alcaloides. Transferencia de la fraccin glutamil a una variedad de molculas aceptoras como el agua. Dejando el producto cistena para preservar la homeostasis intracelular del estrs oxidativo

4.- Qu efecto hubo al moler el hgado?

Subi la temperatura inicial y en algunos casos hubo un poco mas de burbujas.

5.- Qu ocurri al hervir el hgado? Qu se afect?

Se formaron burbujas mas grandes que en las otras pruebas y mas altas

6.- Qu ocurri en la temperatura fra? Explica el porqu.

Casi no haba burbujas en el tubo ya que la peroxidasa funciona mejor en calor que en fri. (Como sucede con muchas protenas, las enzimas pueden ser desnaturalizadas por varios medios, entre ellos el calor. La mayora de las enzimas son, por lo tanto termolbiles y generalmente una temperatura de 70 a 80 C durante 2 a 5 minutos basta para inactivarlas.)

La enzima peroxidasa es particularmente estable y puede llegar a soportar por algunos minutos, temperaturas de hasta 120 "C, sin perder por completo su actividad.

7.- Cul es la influencia de la temperatura en la reaccin enzimtica?

La velocidad de muchas reacciones enzimticas se duplica, aproximadamente, por cada 10C de aumento de la temperatura. El efecto negativo del aumento de la temperatura sobre la actividad enzimtica se debe a la rotura de los enlaces dbiles que mantienen la estabilidad de las estructuras terciaria y secundaria de las protenas. De este modo, las altas temperaturas desorganizan la estructura final del enzima y decimos que ste se ha desnaturalizado. En muchas ocasiones, cuando baja la temperatura, el enzima adquiere de nuevo su estructura original y, por tanto, su funcin, por lo que decimos que el enzima se ha renaturalizado.

Por otra parte, una bajada de la temperatura afecta tambin negativamente a la actividad enzimtica, la cual se enlentece, ya que en esta situacin el complejo ES muy poco reactivo, teniendo dificultad para alcanzar el estado de transicin.

8.- Qu variables se manejaron?

La temperatura y el hgado molido y entero

9.- Cul fue la variable constante?

Las burbujas y temperaturas iniciales

El hgado de pollo fresco es una fuente importante de peroxidada y el hgado de res y puerco no tienen tanta enzimas peroxidas como la de pollo

http://www.rincondelasciencias.com/index.html

http://genesis.uag.mx/edmedia/material/quimicaII/enzimas.cfm

http://superfund.pharmacy.arizona.edu/toxamb/c1-1-3-5.html

http://www2.udec.cl/~lilherna/enzimas.html aguna.fmedic.unam.mx/~evazquez/0403/enzimas.html

Maestra como no tenia equipo envi la practica solo, gracias por su comprensin.