DETERMINACIN DE UN PROTOCOLO PARA LA OBTENCIN DE UN LIOFILIZADO DE FRUTA Y PROBITICO CON PROPIEDADES FUNCIONALES.

Alejandra Cardona Gaviria Esneider Durango Murillo Hadaluz Pulgarn Taborda Melissa Patio Arboleda Pablo Alejandro Torres Estrada Catalina Beltrn lzate Robinson Salazar Daz William Prez Campo Microbiologa Industrial Yessica Gutirrez Lpez I. E. Colegio Loyola para la Ciencia y la Innovacin Medelln 2012

NDICE Nombre de la investigacin ______________________________________ 2 Resumen _____________________________________________________ 2 Introduccin __________________________________________________ 2 Perturbacin de la onda________________________________________ 11 Superposicin de la onda ______________________________________ 11 Trayectoria de indagacin ______________________________________ 11 Reflexin de la onda __________________________________________ 12 Bibliografa __________________________________________________ 12 Agradecimientos _____________________________________________ 13 Anexos _____________________________________________________ 13

NOMBRE DE LA INVESTIGACIN Determinacin de un protocolo para la obtencin de un liofilizado de fruta y probitico con propiedades funcionales. RESUMEN En vista de que en el mercado las opciones de productos funcionales, es muy limitada y la mayora de veces implica solamente lcteos, el grupo de investigacin WaveBerries decidi investigar sobre el tema con el fin realizar un proyecto en donde se pudiera obtener un suplemento en polvo con propiedades de la fruta (mora y fresa) y probiticos, y as lanzarlo al mercado, el cual sera fcilmente aadido a cualquier comida para darle caractersticas funcionales a diferentes alimentos utilizando organismos probiticos. Nuestra metodologa se dividir en dos procesos: uno de ellos consta de cultivar el microorganismos a trabajar en un medio de cultivo optimo y al mismo tener el zumo de fruta para luego liofilizar estos dos productos por aparte; nuestro segundo proceso consta de cultivar el microorganismos en el zumo de fruta, controlando pH y temperatura del mismo para luego proceder al liofilizado de este solo productos. INTRODUCCIN Antecedentes Actualmente en el mercado se encuentran productos con propiedades probiticas que se encargan de mejorar la calidad de vida de las personas que los consuman y a su vez, aaden otro tipo de propiedades benficas para el organismo, pero la mayora de estos productos contienen en su composicin un 50% o ms de lcteo, lo que hace que las personas que sean intolerantes a la lactosa no consuman este tipo de productos y se priven de los beneficios que se pueden obtener. MARCO TERICO MICRORGANISMO Microorganismo es un organismo microscpico que individualmente no puede observarse a simple vista, est compuesto de una o ms clulas y es capaz de reproducirse por divisin. Dado la diversidad de microorganismos existentes, muchos de ellos pueden ser benficos para el ser humano (la mayora) y otros perjudiciales. METABOLITOS Los metabolitos son los productos intermedios y productos del metabolismo. El trmino''''metabolito generalmente se limita a pequeas molculas. Un metabolito principal est directamente implicado en el crecimiento normal, el desarrollo y la reproduccin. El alcohol es un ejemplo de un metabolito primario producido en gran escala por parte de la microbiologa industrial.

Un metabolito secundario no est directamente involucrada en esos procesos, pero por lo general tiene una importante funcin ecolgica. Los ejemplos incluyen los antibiticos y pigmentos. Algunos antibiticos de uso metabolitos primarios como precursores, tales como actinomicina que se crea a partir del triptfano principal metabolito. CARACTERISTICAS DE LOS MICRORGANISMOS: PROBIOTICOS: Los alimentos probiticos son aquellos en los que existen bacterias que ayudan a reforzar nuestro sistema inmunolgico, estas bacterias adems, pueden sobrevivir a una digestin llegando vivas al colon y ayudando a restituir la flora intestinal que pueda haber sido alterada por alguna causa. Este tipo de alimentos son por ejemplo las bebidas energticas o los yogures. PREBIOTICOS: Los alimentos prebiticos, estos estimulan el crecimiento en el colon de las bacterias beneficiosas. A diferencia de las bacterias vivas de los probiticos, los prebiticos son solamente sustancias que ayudan, sin vida, a modo de complementos energticos para las bacterias beneficiosas. Estas sustancias son aadidas a algunos alimentos para fomentar el desarrollo selectivo de nuestra flora intestinal. En resumidas cuentas, un alimento prebitico sirve para potenciar otro probitico, es decir son complementarios. SIMBITICOS: La combinacin de prebiticos con probiticos se ha definido como simbitico, la cual beneficia al husped mediante el aumento de la sobrevivencia e implantacin de los microorganismos vivos de los suplementos dietticos en el sistema gastrointestinal. MORFOLOGIA MICROBIANA BACTERIAS: Las bacterias o eubacterias son microorganismos unicelulares que pertenecen al dominio Bacteria. Los miembros de este dominio tienen diferencias con aquellos pertenecientes a los otros dos dominios, Archaea y Eukarya. En la Tierra, existen slo dos tipos bsicos de clulas que son estructuralmente muy diferentes: las procariontes y las eucariontes. Las bacterias son clulas procariontes. Estas clulas poseen un nico cromosoma desnudo, es decir, que este cromosoma no se halla envuelto por una membrana nuclear sino que se halla en el citoplasma. Algunos investigadores se refieren a este cromosoma desnudo como nucleoide o ncleo primitivo. Otra de las caractersticas principales de las clulas procariontes es que no poseen organelas rodeadas por membranas como retculos endoplsmicos, mitocondrias, aparato de Golgi o lisosomas. Las clulas bacterianas son muy pequeas, de menos de una micra hasta 10 micras de longitud y de 0.2 a 1 micra de anchura. Casi todas las especies bacterianas son
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unicelulares pero las hay filamentosas o bajo forma de clulas con cierto grado de unin. En vista de su pequeo tamao y semejanza estructural suelen clasificarse por sus estructuras fisiolgicas o bioqumicas y no exclusivamente morfolgicas. Las bacterias tienen una estructura menos compleja que la de las clulas de los organismos superiores: son clulas procariotas (su ncleo est formado por un nico cromosoma y carecen de membrana nuclear). Igualmente son muy diferentes a los virus, que no pueden desarrollarse ms dentro de las clulas y que slo contienen un cido nucleico. Las eubacterias poseen las siguientes caractersticas: Presentan una pared celular, con excepcin de los Mycoplasmas, por fuera de la clula que otorga rigidez y proteccin en medios osmticamente inadecuados. La membrana citoplasmtica posee una estructura trilaminar tpica y est formada por lpidos, protenas y pequeas cantidades de hidratos de carbono. Se reproducen por fisin binaria o divisin simple. No poseen un ncleo verdadero sino un cromosoma de DNA que se encuentra, ms o menos libre, en el citoplasma. No poseen organelas rodeadas por membranas. Sus ribosomas son 70s formados por las subunidades 30s y 50s. Poseen grnulos citoplasmticos que son acumulaciones de materiales de reserva como polisacridos, lpidos y polifosfatos. Las bacterias pueden clasificarse, atendiendo a su forma, en cocos (esfricas), bacilos (bastones rectos) y espirilos (bastones curvos). Otra forma de clasificar las bacterias es aerobia, las que necesitan aire para vivir, anaerobia, que no pueden vivir en presencia de aire y por ltimo, aquella que indiferentemente pueden vivir con aire o sin ste. Dentro de las eubacterias existen tres grupos de bacterias que pueden ser diferenciados en relacin a la estructura de la pared celular. Para poder diferenciar a estos grupos no es necesario utilizar complejos sistemas de identificacin, y basta con un microscopio ptico y unas cuantas soluciones de colorantes. La forma ms sencilla de iniciar una identificacin del microorganismo que se desea estudiar es realizar una coloracin o tincin de Gram. La tincin de Gram es una tincin diferencial porque no todas las clulas se tien de la misma manera y permite discriminar entre dos grandes grupos de eubacterias, las eubacterias Gram positivas y Gram negativas.

Los microorganismos Gram positivos, como el Staphylococcus aureus, adquieren un color violeta despus de la coloracin de Gram debido a que contienen una pared celular estructuralmente muy diferente a la de los microorganismos Gram negativos, como la Escherichia coli, que adquieren un color rosado. El tercer grupo de eubacterias es el de los Acido-Alcohol Resistentes (BAAR) que pueden ser diferenciados utilizando la coloracin de Ziehl-Neelsen. La diferencia en la coloracin no se debe a reacciones qumicas con ciertos componentes de la pared sino a la estructura fsica de la misma. TIPO GRAM Gram positivos: Ests clulas poseen una membrana citoplasmtica con fosfolpidos y protenas. Por fuera de la membrana citoplasmtica se encuentra la pared celular que est compuesta por una ancha capa de peptidoglicano. Este peptidoglicano es una macromolcula gigante formada por cadenas de un dmero compuesto por Nacetilglucosamina y N-acetilmurmico. A su vez, estas cadenas se encuentran unidas entre s mediante pptidos, que son pequeas cadenas de aminocidos que se entrecruzan. Estos puentes peptdicos son caractersticos de las distintas bacterias y presentan mayor rigidez cuanto ms completo sea el entrecruzamiento. El peptidoglicano es una malla porosa que otorga forma y rigidez a la clula, y evita que la clula estalle en medios hipotnicos. Al ser porosa permite el paso de nutrientes desde el exterior y el movimiento de enzimas catalticas y productos de secrecin hacia el exterior de la clula. La pared celular Gram positiva tambin contiene cidos teicoicos y cidos lipoteicoicos. Los cidos teicoicos son cadenas de ribitol o glicerol unidas por fosfodisteres, y estn unidos covalentemente al peptidoglicano por medio de grupos fosfodister en el oxidrilo del C6 del N-acetilmurmico. Los cidos lipoteicoicos son polmeros de glicerofosfato se encuentran anclados en la membrana citoplasmtica y no estn unidos al peptidoglicano. La funcin de estos compuestos sera estructural, pero existen evidencias que indican que tambin participaran en la regulacin de las enzimas hidrolticas que renuevan la pared celular (autolisisnas) y que seran sitios de fijacin de fagos. Gram Negativos: Las clulas se encuentran envueltas por una membrana citoplasmtica formada por una bicapa fosfolipdica y protenas. Por encima de esta membrana se encuentra una fina capa de peptidoglicano que se halla unida covalentemente a unas lipoprotenas de anclaje que fijan la membrana externa por medio de porciones lipoflicas. Entre la membrana citoplasmtica y la membrana externa queda delimitado el espacio periplsmico. Este espacio es ocupado por el periplasma que es una matriz isotnica respecto al citoplasma, isotonicidad que es
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mantenida mediante los oligosacridos derivados de membrana (MDO), y en la que se hallan componentes catalticos de suma importancia para la viabilidad celular. La membrana externa tiene una estructura de bicapa asimtrica en donde la cara externa esta compuesta por el lipopolisacarido (LPS) y la cara interna por fosfolpidos. Adems, esta membrana es rica en protenas, algunas de las cuales se denominan porinas. La membrana externa funciona como una barrera de permeabilidad para ciertas sustancias como antimicrobianas y enlentece el pasaje de otros que son inactivados en el periplasma. El LPS est formado por tres regiones: el polisacrido O (Antgeno O), el polisacrido del centro (KDO) y el lpido A (Endotoxina). La presencia del LPS en la membrana externa le confiere a la clula una efectiva proteccin contra enzimas digestivas y detergentes como las sales biliares, y dota a la superficie bacteriana con una fuerte hidrofilicidad que le permite a la clula evadir la fagocitosis, tener cierta resistencia al complemento, evitar la respuesta inmune especfica por alteracin de la superficie antignica y adherirse a ciertas clulas del hospedador. Las porinas son poros o canales proteicos no especficos que pueden ser atravesados por pequeas molculas hidroflicas. En la membrana externa se encuentran otras protenas que funcionan como canales de difusin especficos y facilitan el paso de di, tri y oligosacridos. NOMENCLATURA DE MICROORGANISMO Es el darle nombre a los microorganismos y su objetivo es precisamente elegir el nombre adecuado y nombrar el germen siempre por el mismo nombre evitando as confusiones. Es importante diferenciar entre taxonoma y nomenclatura, ya que nomenclatura es nicamente darle el nombre al organismo luego que se ha completado el trabajo taxonmico. Para nombrar las bacterias se usa el esquema binomial en el cual el nombre de la bacteria est constituido por 2 palabras; la primera es una palabra en latn o latinizada, que se escribe con la primera letra en mayscula e indica el GNERO, usualmente esta palabra proviene del nombre del descubridor u otro cientfico relacionado o describe la morfologa del microorganismo. La segunda palabra indica la ESPECIE, se escribe con minscula, y es usualmente descriptivo refirindose al color, origen, patogenicidad, etc. Ejemplo: Bacillus subtilis Gnero Especie

Los nombres cientficos de las bacterias deben ser escritos en letra cursiva (Itlica) o en su defecto cada palabra debe ser subrayada. Las reglas y mtodos del sistema de
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Nomenclatura Bacteriana se encuentran en el Cdigo Internacional de Nomenclatura Bacteriana. Identificacin La informacin acerca de los microorganismos obtenidas de los mtodos ya citados, nos permite no slo la clasificacin de nuevos microorganismos sino tambin la identificacin de los microorganismos ya conocidos, aislados de muestras de orgenes diversos. Dos de los mtodos utilizados para la identificacin son: las claves dicotmicas y los cladogramas. LACTOBACILOS Se conoce por lactobacilos a unos microorganismos que encontramos en el sistema digestivo humano, entre los que precisamente destacan las especies bifidus, casei o acidophilus, entre otros. En este sentido, por poner solo un sencillo ejemplo, conocidos son los denominados como alimentos prebiticos. Tal y como podemos comprobar cada cierto tiempo, estos nombres son muy conocidos a da de hoy en el sector de la alimentacin, debido a la introduccin de lactobacilos en el mercado alimenticio. Pero, cules son los beneficios de los lactobacilos cuando los tomamos en forma, por ejemplo, de yogur? Beneficios de los lactobacilos Los lactobacilos son muy beneficiosos para nuestro organismo, ya que como han demostrado una cantidad muy diversa de estudios cientficos, corrigen el desequilibrio de la flora intestinal, a la vez que estimulan la respuesta inmunitaria del organismo y facilitan la digestin. Por este motivo principal, es recomendable tomar yogures con lactobacilos ante estas circunstancias, pero siempre y cuando no se tomen con demasiada frecuencia, ni se cambian de clase o tipo en tan poco tiempo. Lo ideal, segn recomiendan algunos especialistas, es comer dos yogures a la semana, del mismo tipo de lactobacilo, durante una o dos semanas. PROPIEDADES FUNCIONALES Entre estos lactobacilos destacan principalmente los bifidus, casei o brevis. Como de buen seguro habrs imaginado ya, dos de ellos son muy conocidos en la actualidad, debido sobretodo a la introduccin de los lactobacilos en el sector de la alimentacin en la ltima dcada. Destacando especialmente los denominados como alimentos prebiticos (o alimentos probiticos). No hay duda que son variados los beneficios de los lactobacilos que estos pequesimos microorganismos nos aportan no solo a nuestro sistema digestivo, sino a nuestra salud en general. Propiedades de los lactobacilos para el sistema digestivo. Los lactobacilos son conocidos principalmente por sus propiedades para el sistema digestivo:

Facilitan la digestin.Corrigen desequilibrio de la flora intestinal.tiles para corregir la flora intestinal ante un consumo excesivo de antibiticos o por alteraciones gastrointestinales.Adecuados para tratar dolencias intestinales en bebs y nios.Ayudan a tratar problemas de diarreas.Propiedades de los lactobacilos para la salud generalAdems de las principales propiedades y virtudes que los lactobacilos aportan para el sistema digestivo, tambin son destacados sus propiedades para la salud en general.Por ejemplo, son tiles y recomendados a la hora de aumentar las defensas, gracias a que son capaces de estimular la respuesta inmunitaria del organismo.Por tanto, consumir productos ricos en lactobacilos ayudan de manera saludable a la hora de fortalecer el sistema inmunolgico.Cmo disfrutar de las propiedades de los lactobacilosUna buena opcin es consumir productos ricos en lactobacilos. Uno de ellos son los yogures, siendo ideal tomar dos o tres yogures a la semana con lactobacilos. Pero para poder disfrutar de las propiedades de los lactobacilos sin que stos pierdan sus virtudes medicinales, lo mejor es tomar el yogur con el mismo lactobacilo (aunque de diferentes sabores) durante una o dos semanas, y luego cambiar por yogures con otros lactobacilos. Y es que no es aconsejable mezclar distintas clases de lactobacilos, dado que pueden competir entre s. 1. LIOFILIZACION La liofilizacin es un proceso en el que se congela el producto y posteriormente se introduce en una cmara de vaco para realizar la separacin del agua por sublimacin. De esta manera se elimina el agua desde el estado slido al gaseoso del ambiente sin pasar por el estado lquido. Para acelerar el proceso se utilizan ciclos de congelacinsublimacin con los que se consigue eliminar prcticamente la totalidad del agua libre contenida en el producto original,1 2 pero preservando la estructura molecular de la sustancia liofilizada. 12.1. PROCESO DE LA LIOFILIZACIN T. A. Jennings (1993) report que el primer paso del proceso de liofilizacin debe ser elestablecimiento de una formulacin o un producto reproducible, es decir, en la cual existaun control cuidadoso sobre la composicin qumica y las concentraciones de losconstituyentes activos e inactivos. Considerando los medios a travs de los cuales laspropiedades fsicas, pticas y elctricas pueden ser usadas para determinar si lanaturaleza de la formulacin cae dentro de lmites predeterminados. El punto clave en lapreparacin de un producto a liofilizar es la reproducibilidad. Un producto liofilizadoreproducible debe comenzar con una formulacin reproducible o una composicinconocida.El conocimiento de la formulacin o composicin del producto a liofilizar es el paso msimportante del proceso. La naturaleza, tiempo y gasto del proceso de liofilizacin sondirectamente dependientes de la naturaleza qumica y fsica del producto, su impactosobre el proceso de secado y sobre la naturaleza del producto final no es frecuentemente
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bien entendido. La disminucin del costo de la liofilizacin es un paso inmediato que selograr mediante una reduccin de la temperatura en la operacin. Para atender esteobjetivo, la comprensin a profundidad de la transferencia simultanea de calor y masa delproceso es probablemente una condicin sin igual (T.A. Jennings 1993; S. Khalloufi, J. L.Robert y C. Ratti 2004).T. A. Jennings (1993) indica que existen conocimientos previos de vital importancia: En lo relacionado a la composicin o formulacin del producto es conveniente conocerel o los ingredientes activos y los constituyentes del producto, con la finalidad deanalizar sus lmites de concentracin y propiedades tales como color, conductividad,ndice de refraccin, turbidez, etc., que al liofilizar podran cambiar. Tambin es muy importante el agua contenida en el producto a liofilizar, por laformacin de los cristales de hielo durante la congelacin, el sper-enfriamiento, elgrado de cristalizacin y la conductividad del hielo. En lo referente a los cambios de fase se debe determinar que tan homogneo oheterogneo son sus componentes y cuales son las variables de estado intensivas. Otros conceptos que deben manejarse adicionalmente son el anlisis trmico, anlisistrmico diferencial (ATD) Y anlisis electrotrmico.Con stos se puede comenzar el proceso de estudio y profundizacin de conocimientos acerca de la liofilizacin con mayor xito. Adems en lo relacionado al proceso esimportante definir: El tipo de congelacin empleado La tecnologa de vaco aplicada. Las caractersticas del equipo, as como sus limitaciones, y Las caractersticas texturales y otras propiedades del producto a obtener 2. PROPIEDADES DEL YOGURT El yogurt es considerado un alimento fundamental para la salud, debido a que es un producto del grupo probitico, los cuales contienen varias colonias de microorganismos vivos que influyen positivamente en nuestro organismo. La palabra probitico proviene del griego y significa "por la vida". Esto se refiere a que son alimentos de cultivos puros, mezclas de microorganismos viables y activos los cuales, al ser consumidos por el hombre o los animales, aportan efectos realmente benficos, mejorando prinscipalmente la salud de la flora intestinal. La salud empieza por los intestinos En medicina natural se sabe que si el intestino esta sano, todo el organismo lo est. Y el yogurt es uno de los alimentos ms favorables, en dnde sus principales efectos en la salud son:

 Mejorar, restaurar y sanar la flora intestinal, sus propiedades antimicrobianas permiten la evacuacin del contenido estomacal, inhibiendo los microorganismos indeseables alojados en el estmago. Mantener la flora intestinal normal y la microflora urogenital. Mejora el valor nutricional de alimentos y la resistencia contra organismos patgenos. Acta en la resistencia natural del individuo a las infecciones. Aumenta resistencia a enfermedades: el consumo habitual del yogurt estimula el sistema inmunolgico. Muy til para las personas que padecen de diarreas, estreimiento o trastornos gastrointestinales. Ayuda en casos de patologa cardiovascular. Previene la osteoporosis en cualquier edad (el yogurt aporta el 70 % del contenido total de calcio en la dieta, por lo que este alimento se convierte en una abundante fuente natural de calcio) Las bacterias lcticas del yogurt incrementan diversas funciones inmunolgicas, que estimulan la accin antitumoral, la cual retrasa (o evita) la reaparicin de cncer. En una persona que toma yogurt natural constantemente se reduce el riesgo de padecer cncer de colon y de mama, adems de que mejora la calidad de vida en personas que ya lo padecen. Es un excelente antialrgico: al depurar los intestinos, reduce o desaparece las alergias provocadas por un organismo intoxicado. Ayuda en casos de anorexia y bulimia; su alto contenido en calcio y protenas de alta calidad, vitaminas e hidratos de carbono, restaura enormemente las defensas del organismo. Es muy til para los alcohlicos, drogadictos o personas que han tomado muchos medicamentos. El yogurt en la dieta es un tratamiento casi obligado en muchas instituciones. Ayuda a los celiacos a sanar la flora intestinal y a absorber mejor los nutrientes. Para los intolerantes al azcar de la leche, el yogurt es una opcin muy benfica. Previene desnutricin y anemia. OBJETIVOS General:

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Determinar un protocolo para la obtencin de un liofilizado con caractersticas funcionales derivadas de microorganismos probiticos inoculados en un medio ptimo para su crecimiento y en medios de cultivo a base de zumo de fruta.

Especficos: Obtener e identificar microorganismos propios de un producto lcteo, utilizando tcnicas microbiolgicas de aislamiento y descripcin de morfologa macroscpica y microscpica bsica. Realizar ensayos tanto en un medio de cultivo ptimo para crecimiento de microorganismos lcticos como en un medio con diferentes concentraciones de zumo de fruta. Determinar la cantidad de biomasa para cada ensayo, con el fin de obtener indicadores de rendimiento celular (mg biomasa seca/ml de medio de cultivo). Realizar un anlisis de costo beneficio, utilizando diferentes parmetros, como la cantidad de biomasa obtenida y aspectos prcticos y econmicos propios de cada ensayo realizado.

Hiptesis: La concentracin de zumo de fruta afecta el desarrollo de los microorganismos probiticos. PERTURBACIN DE LA ONDA Qu efecto tiene la concentracin de zumo de fruta en el crecimiento de bacterias probiticas bajo condiciones de cultivo controladas, para la elaboracin de un liofilizado con propiedades funcionales? SUPERPOSICIN DE LA ONDA Actualmente la oferta de productos con propiedades funcionales es muy limitada y se reduce bsicamente a lcteos. Teniendo en cuenta la falta de variedad en productos con propiedades funcionales que existe en este momento en el mercado, se consider importante crear un sustrato que cumpla con estas caractersticas y pueda ser utilizado en la produccin de otros productos alimenticios adems de los lcteos, de esta forma se lograra diversificar la oferta de productos dietarios. En nuestra sociedad hay personas que poseen enfermedades comunes y no se consideran realmente graves, pero estas afectan constantemente sus actividades diarias por el resto de sus vidas. En este momento en el mercado hay productos que estn destinados al mejoramiento de la calidad de vida de estas personas reduciendo el impacto que generan estas enfermedades, pero la oferta de estos productos no es muy variada. Debido a esta problemtica se pretende realizar el liofilizado, ya que este podra aplicarse en la elaboracin de diferentes productos alimenticios y de esta manera se incrementara la variedad y oferta en el mercado de productos con propiedades benficas. TRAYECTORIA DE INDAGACIN Metodologa:
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Asilamiento de microorganismos de un producto lcteo en medios de cultivos selectivo Caracterizacin macroscpica y microscpica bsica de las colonias obtenidas. Aumento de la biomasa de los microorganismos buscados. Inicio del cultivo de microorganismos y proceso de liofilizacin por dos mtodos. METODO 1: Cultivo de los microorganismos obtenidos en un medio de cultivo especfico para microorganismos lcticos, bajo condiciones optimas de crecimiento. Obtencin de zumo de fruta. Liofilizacin del zumo y el microorganismo por separado Mezcla de los liofilizados

METODO 2: Cultivo del Microorganismos en un ambiente con condiciones optimas para su crecimiento y desarrollo. Obtencin del zumo de fruta. Unin del microorganismo y el zumo de fruta Liofilizacin de la unin del microorganismo con el zumo de fruta

REFLEXIN DE LA ONDA Breve resumen de los resultados, conclusiones e impactos sociales, econmicos y acadmicos entre otros. BIBLIOGRAFA AuVe. (s.f.). Veneloga. Recuperado el 18 de Mayo de 2012, de Beneficios y propiedades de la mora: http://www.venelogia.com/archivos/5730/ Cerela Conicet. (s.f.). Recuperado el 5 de Mayo de 2012, de La ciencia y usted.: http://www.cerela.org.ar/ciencia/probioticos.htm Compaia Medica. (s.f.). Recuperado el 18 de Mayo de 2012, de Naturismos, las frutas, la mora: http://www.companiamedica.com/naturismo/la_mora.html Kaliman. (s.f.). El poder del ciudadano. Recuperado el 18 de Mayo de 2012, de Los beneficios de la mora: http://elpoderdelciudadano.forogratis.es/los-beneficios-de-lamora-t3988.html

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AGRADECIMIENTOS Mencin al final del documento, del nombre de instituciones o personas que hayan hecho sugerencias o proporcionado asesora y ayuda. ANEXOS Realizacin de Encuesta Debido a que internamente no se pudo tomar una decisin sobre la fruta que se utilizara, se realiz una encuesta a los estudiantes para observar cual era la fruta de preferencia del pblico, al ver en los resultados que no haba una diferencia considerable en la preferencia de las frutas, decidimos que lo mejor sera trabajar con los dos organismos.

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80% 60% 40% 20% 0% Color

48% 52% 31%

69%

75% 55% 45% 25% 52%

70% 48%

30%

Mora Fresa

Compra

Bebida

Polvo

Costo

Bebida Fra

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