Avaliao do potencial das microalgas residuais como uma alternativa cadeia produtiva do biodiesel

Aderlnio da Silva Cardoso1 Orientadora: Dra. Glucia Eliza Gama Vieira2 Universidade Federal do Tocantins. Laboratrio de Ensaio e Desenvolvimento em Biomassa e
Biocombustvel LEDBIO, Universidade Federal do Tocantins, Campus de Palmas, Av. NS 15, ALCNO 14, 109 Norte, Estao Experimental, CEP 77001-090, Palmas-TO. (63) 3232-8205. E-mail: asc_uft@yahoo.com.br1; glau.eliza@ig.com.br2.

INTRODUO Biomassas com elevado teor lipdico esto sendo alvo de pesquisas para garantir o abastecimento de glicerdeos para a indstria de biodiesel (steres alqulicos simples de cidos graxos). Visto que, a demanda por este biocombustvel vem aumentando no Brasil (3,6% ao ano) e o que se observa que a principal oleaginosa utilizada para a obteno do biodiesel no Brasil (soja, atendendo 75% da produo de biodiesel) no ser capaz de auxiliar a produo desse biocombustvel sem a destinao de reas agricultveis exclusivamente para esse fim, devido baixa produtividade dessa biomassa (0,2-0,4 tonelada por hectare). Logo, prefervel que as biomassas utilizadas proporcionem uma tima produtividade em lipdeos e com o uso de uma menor superfcie do terreno (CHIST, 2007; BIODIESELBR, 2010a, 2010b). Como uma promissora fonte de lipdeos para a cadeia produtiva do biodiesel, as microalgas surgem como uma biomassa que apresenta um elevado teor lipdico (20% 50%), sendo este obtido naturalmente a partir da converso do dixido de carbono atmosfrico pelo uso da fotossntese e auxiliando, com isso, na retirada de CO2 da atmosfera (CHIST, 2007). Esses lipdeos so compostos de glicerol, acares ou bases esterificadas em cidos graxos saturados ou insaturados (12 a 22 tomos de carbono) (LOURENO, 2006), com o seu contedo e composio influenciados por fatores como luz, temperatura, concentrao e fonte de nitrognio e concentrao de CO2 (MORAIS e COSTA, 2008) e podendo serem obtidos por processos mecnicos (prensa) e/ou pelo uso de solventes, assim como j realizado com as biomassas tradicionais (CHIST, 2007). O que se observa, que o teor lipdico das microalgas e sua produtividade esto muito superiores a algumas oleaginosas

tradicionalmente utilizadas para a obteno de biodiesel (TABELA 1).

Tabela 1. Comparao do rendimento em leo das microalgas com o rendimento obtido por algumas oleaginosas.

Cultura Milho Soja Canola Pinho Manso Coco leo de Palma Microalgab Microalgac
a b

Rendimento em leo (L/ha) 172 446 1190 1892 2689 5950 136900 58700

Superfcie terrestre necessria (ha)a 1540 594 223 140 99 45 2 4,5

Percentual de rea de cultivo existente nos E.U.Aa 846 326 122 77 54 24 1,1 2,5

Para reunir 50% de todo o combustvel necessrio para transporte nos E.U.A. 70% em leo (por peso) na biomassa. c 30% em leo (por peso) na biomassa. Fonte: Xu et al. (2006).

A biomassa microalgal obtida principalmente a partir do cultivo em laboratrio ou industrial em sistemas fechados (fotobiorreatores) ou lagoas aeradas alimentadas com meio de cultura (BOROWITZKA, 1999) (FIGURA 1 e 2). Nestes, h a predominncia pelo uso de uma espcie de microalga cultivada por processos autotrfico e/ou heterotrfico. Como uma forma de minimizar os custos do produto final (o leo de microalga), as microalgas podem ser obtidas diretamente de um sistema onde elas j estejam disponveis naturalmente, devido ao fornecimento de condies ambientais timas para o seu desenvolvimento. As microalgas alimentadas por efluente, em um sistema de lagoa de estabilizao, por exemplo, podem ser utilizadas para a obteno de um leo mais barato quando comparado aos obtidos por sistemas de cultivos (SAWAYAMA et al., 1995). Isso levar a uma economia de gua e nutrientes, bem como servir para a remoo de nutrientes do efluente, como nitrognio e fsforo.

Figura 1. Produo de microalgas em tanques aerados em Kona, Hava, EUA. Fonte: Muoz e Guieysse (2006).

Figura 2. Obteno de microalgas em fotobiorreatores em escala de bancada. Autotrfica (verde) e heterotrficamente (amarelo). Fonte: Xu et al. (2006).

A lagoa de estabilizao facultativa por estar rica em nutrientes e favorecer a formao de uma zona aerbia, proporciona o desenvolvimento de espcies de microalgas. Estas, ao realizar o processo fotossinttico, fornecem o oxignio necessrio respirao das bactrias facultativas (CRAGGS et al,. 1997; VON SPERLING, 1986). Alm disso, o efluente da lagoa, com alta concentrao de biomassa microlagal, geralmente lanado em um meio hdrico, podendo causar impactos sobre as caractersticas do local de destino (VON SPERLING, 1986 e 2005). Portanto, esse meio apresenta-se como um potencial fornecedor de biomassa microalgal.

O alto custo do leo de microalgas o principal fator que impede a sua utilizao em larga escala. Isto est relacionado aos gastos com infra-estrutura (construo de tanques e fotobiorreatores, por exemplo) para cultivo, utilizao de meios de cultura, processos de separao da microalga do meio lquido. Com isso, a fim de contribuir para a diminuio do valor do leo da microalga e remover a grande quantidade dessa biomassa lanada no meio hdrico, aps o tratamento do afluente em lagoas facultativas, pretende-se utilizar a biomassa microalgal (denominada de residual) j presente no efluente da lagoa facultativa da Estao de Tratamento de Esgoto (ETE) da Vila Unio, Palmas-TO, para a obteno de lipdeo e propor o uso deste para a produo de biodiesel.

Biologia das microalgas Microalgas so organismos eucariticos e procariticos de crescimento acelerado e com fcil adaptao a ambientes diferenciados devido sua simples estrutura unicelular ou multicelular. Suas clulas possuem uma composio bioqumica diversificada (carboidrato, protena, lipdios, cidos graxos, etc.) e esse contedo est relacionado no apenas com a natureza de cada espcie microalgal, mas tambm com fatores ambientais tanto relacionados regio onde o cultivo est sendo feito como ao meio de cultura utilizado (MIAO e WU, 2004). Um trabalho realizado por Xu et al. (2006) mostra que clulas da microalga Chlorella protothecoides tem a sua composio bioqumica diferenciada quando cultivada de forma autotrfica e heterotrfica (TABELA 2).

Tabela 2. Contedo dos principais componentes qumicos de clulas autotrficas e heterotrficas de Chlorella protothecoides.

Componente (%) Protena Lipdeo Carboidrato Cinzas Umidade Outros

Fonte: Xu et al. (2006).

Autotrfico 52,64 0,26 14,57 0,16 10,62 0,14 6,36 0,05 5,39 0,04 10,42 0,65

Heterotrfico 10,28 0,10 55,20 0,28 15,43 0,17 5,93 0,04 1,93 0,02 11,20 0,61

A formao de cada composto dentro da clula algal regulada por complexos mecanismos metablicos. Em microalgas verdes, como mostrado na Figura 3, por exemplo, o complexo sistema coletor de luz ligado clorofila e ao carotenide captura energia solar na forma de ftons. Esta energia utilizada pelo fotossistema II na oxidao cataltica da gua, formando prtons, eltrons e molcula de O2. Os eltrons com baixo potencial so transferidos atravs da cadeia de transporte de eltrons fotossintticos que levam reduo da ferredoxina para a formao de NADPH. Um gradiente eletroqumico formado por causa da liberao de prtons aps a oxidao da gua para o lmen do tilacide, o qual utilizado para conduzir a produo de ATP via ATP sintase. Os produtos fotossintticos NADPH e ATP so os substratos para o ciclo de Calvin-Benson, onde o CO2 fixado em molculas de 3 tomos de carbono que so assimilados em acares, amido, lipdeos, ou outras molculas exigidas para o crescimento celular. O substrato para a hidrogenase, H+ e e , so supridos tanto via cadeia de transporte de eltrons fotossintticos como via fermentao do carboidrato (amido) armazenado (BEER et al., 2009). Logo, devido a essa diversidade de produtos existentes em biomassa microalgal, esta utilizada pelo homem para o fornecimento de suplementos alimentares, obteno de frmacos, produo de biocombustveis (BOROWITZKA, 1999; VENKATESAN, 2006), uso da biomassa microalgal, juntamente com o efluente de lagoas de estabilizao, na agricultura e piscicultura (SOUSA, 2007; MATA et al., 2010), entre outros usos.

Figura3. Representao das vias metablicas em algas verdes relacionadas produo de biocombustveis e biohidrognio. Fonte: Adaptado de Beer et al. (2009).

As microalgas podem utilizar tanto carbono inorgnico (CO2) quanto orgnico (glucose, acetato, etc) para a formao de cidos graxos e, conseqentemente, lipdeos, sendo a quantidade destes em cada clula diferente entre espcies. As rotas de formao de cidos graxos e triglicerdeos em microalgas podem ser divididas nas seguintes etapas: formao da acetil coenzima A (acetil-coA) no citoplasma; o alongamento e insaturao da cadeia de carbono de cidos graxos, dependente principalmente dos sistemas enzimticos acetil-coA carboxilase (ACCE) e cido graxo sintase (FAS); e a biossntese de triglicerdeos, tendo L-fosfoglicerol e acetil-coA como os dois maiores iniciadores (primers) (HU et al., 2008; HUANG et al., 2010). As microalgas possuem um teor lipdico que pode variar entre 1% e 70%, mas sob certas condies algumas espcies podem atingir 90% do peso seco (CHIST, 2007; MATA et al., 2010; HUANG et al., 2010). O contedo de leo em microalgas pode atingir 75% em peso em relao biomassa seca, mas associado com baixa produtividade, como em Botryococcus braunii, por exemplo. Algas mais comuns (Chlorella, Crypthecodinium, Cylindrotheca, Dunaliella, Isochrysis, Nannochloris, Nannochloropsis, Neochloris, Nitzschia, Phaeodactylum, Porphyridium, Schizochytrium, Tetraselmis) tm nveis de leo entre 20% e 50%, mas produtividades maiores podem ser atingidas (MATA et al., 2010). Os lipdeos das microalgas so constitudos por diferentes cidos graxos saturados e insaturados, alguns deles da famlia do -3 e -6 (HU et al., 2009; HUANG et al., 2010). Thomas et al. (1984) apud Mata et al. (2010) analisou a composio de cido graxo de sete espcies de microalgas de gua doce mostrando que todas elas sintetizaram cidos graxos C14:0, C16:0, C18:1, C18:2 e C18:3. Estes autores relataram que a intensidade relativa de outras cadeias de cidos graxos especifico de algumas espcies, por exemplo, C16:4 e C18:4 em Ankistrodesmus sp., C18:4 e C22:6 em Isochrysis sp., C16:2, C16:3 e C20:5 em Nannochloris sp., C16:2, C16:3 e C20:5 em Nitzschia sp. As propriedades do biodiesel so fortemente dependentes das caractersticas do cido graxo que compe a cadeia do triglicerdeo e que deu origem ao metil ou etil ster. As propriedades mais influenciadas incluem a qualidade da ignio (nmero de cetano, por exemplo), as propriedades de fluxo a frio e estabilidade oxidativa. Embora a saturao e o perfil dos cidos graxos das microalgas no parecem ter muito impacto sobre a obteno de biodiesel a partir da reao de transesterificao, eles afetam as propriedades do combustvel. Por exemplo, leos saturados produzem um biodiesel com alta estabilidade oxidativa e alto nmero de cetano, mas propriedades indesejveis a baixas temperaturas, sendo susceptvel ao estado slido. Biodieseis produzidos a partir de biomassa que possui um alto teor de cidos

poliinsaturados possuem boas propriedades baixa temperatura. Entretanto, esses cidos graxos so muito susceptveis oxidao, possuindo problemas de instabilidade quando armazenado por muito tempo (HU et al., 2008).

Fitoplncton de uma lagoa facultativa funcionando como ps-tratamento de um reator UASB

Um reator UASB (Upflow Anaerobic Sludge Blanket ou Reator Anaerbio de Manta de Lodo e Fluxo Ascendente) no possui uma eficincia admissvel para a remoo de compostos de nitrognio e fsforo. Com isso, este sistema deve ser acompanhado de um tratamento tercirio para possibilitar a remoo desses compostos. Geralmente, utilizado como ps-tratamento de um reator UASB uma Lagoa Facultativa, a qual remover os nutrientes e matria orgnica no degradada no reator pela ao de bactrias (na zona anaerbia da lagoa) e microalgas (na zona aerbia) (CHERNICHARO, 1997; VLCHEZ et al., 1997). Em virtude disso, as microalgas presentes na lagoa facultativa, alimentadas por efluente de um reator UASB, so pertencentes, principalmente, a quatro filos: Cyanobacteria (tambm denominadas de algas verde-azuladas ou cianobactrias), Euglenophyta (flagelados pigmentados), Chlorophyta (algas verdes, as mais abundantes na lagoa) e Bacillariophyta (diatomceas) (KONIG et al., 2002; BITTON, 1994). No entanto, dependendo das condies ambientais e das caractersticas do efluente tratado outras espcies de microalgas podem estar presentes (SOLDATELLI, 2007).

Cultivo, coleta e processamento de biomassa microalgal para a obteno de lipdeos O cultivo de microalgas pode ser realizado por processo fototrfico ou heterotrfico. Em cultura fototrfica, as microalgas so cultivadas em dois tipos de sistemas: tanques abertos e fotobiorreatores. O sistema de fotobiorreator fechado o mais adequado para microalgas que podem ser rapidamente contaminadas por outros microrganismos, exceto para microalgas que conseguem sobreviver em condies ambientais extremas como alto pH (Spirulina, por exemplo) e alta salinidade (Dunaliella, por exemplo) ou podem crescer muito rapidamente (Chlorella, por exemplo) em tanques abertos (BRENNAN e OWENDE, 2010). Sistema de tanques abertos talvez o mais adequado para o cultivo de microalgas em sistema fototrfico para a produo de biodiesel devido ao seu baixo custo de operao. A fonte de carbono pode ser obtida diretamente da atmosfera. Alm da possibilidade de ser

utilizado o CO2 da queima de combustvel injetado diretamente no meio de cultivo, atravs do tratamento de gases. Adicionalmente, a gua residuria pode conter nutrientes abundantes (ferros, por exemplo), os quais so necessrios para o crescimento das microalgas. Chlorella vulgaris, por exemplo, foi cultivada em gua residuria de uma aciaria com o objetivo de desenvolvimento de um sistema economicamente vivel para a remoo de amnia da gua residuria e CO2 da queima de combustvel (BRENNAN e OWENDE, 2010; HUANG et al., 2010). Embora as microalgas possam utilizar eficientemente a luz solar, o cultivo autotrfico lento por causa da limitao luminosa em cultivos em larga escala com alta densidade celular ou devido a uma fotoinibio ocasionada pelo excesso de luz, especialmente em dias ensolarados. Em virtude disso, o crescimento heterotrfico de microalgas em fotobiorreatores convencionais poderia ser considerado favorvel. O cultivo heterotrfico de microalgas oferece vrias vantagens sobre o autotrfico como a eliminao da flutuabilidade da fonte natural de luz, possui um bom controle do processo de cultivo e baixo custo para colher a biomassa devido a uma elevada densidade celular obtida. Em cultura heterotrfica, as fontes de carbono so os elementos mais importantes para as microalgas na produo de lipdeos. Por exemplo, embora a microalga verde C. protothecoides possa crescer heterotrfica ou autotrficamente, o crescimento heterotrfico utilizando acetato, glicose ou outros compostos orgnicos como fonte de carbono resulta em uma maior quantidade de biomassa, assim como contedo lipdico na clula. Alm disso, dependendo da espcie utilizada, microalgas heterotrficas podem utilizar outras fontes de carbono como etanol, glicerol e frutose (HUANG et al., 2010; XU et al., 2006; MIAO e WU, 2006). O nitrognio tambm um macronutriente essencial na produo de lipdeos. Logo, uma gua residuria rica em nitrognio pode ser considerada tambm para o cultivo de microalgas (HAMMOUDA et al., 1995; GRAGGS et al., 1996; MULBRY et al., 2008; VENKATESAN et al., 2006). No entanto, muitas espcies de microalgas crescendo em meio com deficincia de nitrognio mostram um aumento no contedo lipdico. Um meio com limitao de nitrognio influencia no armazenamento de lipdeos e nas fraes lipdicas, podendo dobrar o contedo lipdico em algumas microalgas (WIDJAJA et al., 2008). Entretanto, a limitao de nitrognio nem sempre resulta em um aumento do teor lipdico total em microalgas, mas pode sim causar uma mudana na composio desses lipdeos. visvel tambm que as taxas totais de produo de leo podem ser menores no caso de uma deficincia de nitrognio devido baixa quantidade de biomassa alcanada. (HUANG et al., 2010).

Devido ao exposto acima, os fotobiorreatores podem no ter um impacto significante em um futuro prximo sobre qualquer produto ou processo que possa ser obtido com os tanques aerados abertos. Os fotobiorreatores padecem de vrias desvantagens que necessitam ser consideradas e resolvidas. Suas principais limitaes incluem: sobreaquecimento, bioincrustantes, acmulo de oxignio, dificuldade de ampliao, o alto custo de construo, operao e do cultivo da biomassa algal e danos s clulas pelo estresse de cisalhamento (shear stress) e deteriorao do material utilizado para a fase luminosa. Adicionalmente, o custo da produo de biomassa algal em fotobiorreatores pode ser maior que em tanques. Isto depender do destino que ser dado biomassa microalgal (obteno de qumicos de alto ou baixo valor no mercado) (BRENNAN e OWENDE, 2010; MATA et al., 2010). No entanto, para a produo de um biocombustvel, como o biodiesel, a baixo custo para que todos os consumidores venham a ter acesso, a escolha de um ou outro sistema de obteno de microalgas para este fim de fundamental importncia para que sejam feitos investimentos nessa rea. Para isso, seria necessria a otimizao do sistema de custo mais barato, com conseqente reduo de custos em todas as reas (uso de gua, nutrientes, energia, infra-estrutura, entre outros). Uma alternativa que vem sendo pensada atualmente o aproveitamento de efluentes industriais ou domsticos (como fonte de nutrientes) e a prpria infra-estrutura (ou com adies) de uma Estao de Tratamento de Efluente (ETE), com sistema de lagoa de estabilizao, para a obteno de biomassa microalgal (MULBRY et al., 2008). Para que a biomassa microalgal seja utilizada ela deve ser separada do meio de cultura que foi utilizado para o seu cultivo ou do meio em que ela est presente naturalmente (recuperao a partir de uma lagoa de estabilizao, por exemplo). Porm, o que se observa que o mtodo adequado para a remoo de elevadas quantidades de gua e o processamento de grandes volumes de biomassa algal pode envolver uma ou mais etapas e serem realizadas em vrias formas fsicas, qumicas e biolgicas para executar a separao slido-lquida desejada. Experincias tm demonstrado que embora no exista um mtodo de coleta universal, esta uma rea ativa para pesquisa, sendo possvel desenvolver um sistema de coleta apropriado e econmico para algumas espcies de algas (BRENNAN e OWENDE, 2010; MATA et al., 2010; GRIMA et al., 2003). Os mtodos de coleta mais comum incluem a sedimentao, centrifugao, filtrao, ultra-filtrao, s vezes com uma etapa adicional de floculao ou uma combinao de flotao com floculao (WANG et al., 2008). Meios de cultura so geralmente diludos (<0,5 Kg m-3 de biomassa seca em alguns sistemas de produo comercial). Com isso, a

recuperao da biomassa microalgal do meio de cultura tem sido responsvel por contribuir com 20-30% do total de gastos para a produo de biomassa (GRIMA et al., 2003). O processamento, aps a recuperao das clulas, representa a maior limitao econmica obteno de produtos microalgais de baixo custo, possuindo uma alta especificidade e sendo fortemente dependente dos produtos desejados. Vrios mtodos tm sido aplicados para a secagem de microalgas como Chlorella, Scenedesmus e Spirulina, sendo que dentre os mais comuns tm-se a secagem com spray (spry-drying) (pulverizao da amostra em uma cmara submetida a uma corrente de ar quente), tambor de secagem (drumdrying) (transferncia de calor para a amostra atravs das paredes internas do cilindro do tambor), liofilizao (congelamento da amostra e remoo da umidade por sublimao) e secagem ao sol. A secagem ao sol mais utilizada para biomassas com um baixo teor de umidade e a secagem com spray no economicamente vivel para produtos de baixo valor, como biocombustveis e protenas. A liofilizao tem sido utilizada para secagem de microalgas em pesquisas laboratoriais. No entanto, este mtodo muito caro para ser utilizado em uma escala comercial para a recuperao de produtos microalgais. Em alguns casos, a extrao com solvente de biomassa seca tem demonstrado uma maior recuperao de metablitos intracelulares do que a biomassa mida. Produtos intracelulares como leos podem ser de difcil extrao de biomassas midas de clulas no rompidas. Mas so extradas facilmente se a biomassa for seca anteriormente (BRENNAN e OWENDE, 2010; GRIMA et al., 2003; MATA et al., 2010). Alm de conservar a biomassa algal, a secagem auxilia na ruptura celular das microalgas para a liberao dos metablitos de interesse. Vrios mtodos podem ser utilizados, dependendo da parede das microalgas e da natureza dos produtos a serem obtidos, os quais podem utilizar a ao mecnica ou no-mecnica (por exemplo, congelamento, solvente orgnico, choque osmtico e reaes cidas, bsicas e enzimticas). O rompimento aumenta profundamente a biodisponibilidade e a assimilao dos pigmentos das clulas. O ultra-som pode ser utilizado para romper clulas de microalgas suspensas em pequenas quantidades de biomassa, mas este no aplicvel ao uso em grandes escalas. O tratamento com lcalis outro mtodo efetivo de ruptura da parede celular, mas geralmente no adequado para produtos sensveis como protenas. No entanto, a ruptura alcalina pode ser utilizada para isolar cidos graxos livres de microalgas. cidos graxos livres de Porphyridium cruentum e Phaeodactylum tricornutum tm sido extrados pela saponificao direta de biomassa mida com uma mistura de KOH e etanol (GRIMA et al., 2003; MATA et al., 2010).

No entanto, a produo de biodiesel e outros produtos a partir das microalgas podem ser mais ambientalmente sustentvel, com um custo efetivo e lucrativo, se for combinado com processos como tratamento de gua residuria e tratamento de gs. Vrios estudos demonstraram o uso de microalgas para a obteno de produtos com alto valor no mercado combinado com aplicaes ambientais (MORAIS e COSTA, 2008; HAMMOUDA et al., 1995). Como exemplo, tem-se os sistemas de aqicultura envolvendo a produo de microalgas e o tratamento de gua residuria (por exemplo, de aminocidos, enzimas ou guas residurias de indstrias de alimento) parecem ser bastante promissores para o cultivo de microalgas combinado com o saneamento biolgico. Esses sistemas permitem a nutrio das microalgas pelo uso de compostos de nitrognio e fsforo, alm de outros compostos, disponveis em algumas guas residurias. Alm disso, as microalgas podem mitigar os efeitos dos esgotos e fontes industriais de nitrognio residual como aqueles derivados de tratamento de gua residuria ou da ictiocultura e, ao mesmo tempo, contribuindo para a preservao da biodiversidade. Alm disso, removendo nitrognio e fsforo da gua, as microalgas podem ajudar a reduzir a eutrofizao no ambiente aqutico (DE-BASHAN et al., 2004; HAMMOUDA et al., 1995; CRAGGS et al., 1997; LIN et al., 2007; MULBRY et al., 2008; VEKATESAN et al., 2006).

OBJETIVOS

Objetivo geral Avaliar o potencial das microalgas retiradas de uma lagoa de estabilizao facultativa para a produo de lipdeos.

Objetivos especficos Obter biomassa microalgal da lagoa facultativa da ETE Vila Unio, Palmas-TO, por processo de filtrao; Caracterizar taxonomicamente e quantitativamente as microalgas do efluente coletado na lagoa facultativa; Obter os lipdeos totais das microalgas coletadas; Realizar uma caracterizao fsica dos lipdeos.

METODOLOGIA

Caractersticas da ETE Vila Unio, Palmas-TO

A ETE Vila Unio est localizada no setor norte do municpio de Palmas-TO e pertence Companhia de Saneamento do Estado do Tocantins (SANEATINS), sendo composta por pr-tratamento (gradeamento, caixa de areia e caixa de gordura), um reator UASB seguido de uma Lagoa Facultativa para um ps-tratamento do efluente daquele (TABELA 3) (FIGURA 4 e 5). O meio aqutico receptor do efluente da ETE o Ribeiro gua Fria cuja foz o reservatrio da Usina Hidreltrica Luis Eduardo Magalhes, onde o ponto de lanamento do efluente localiza-se prximo foz do crrego. Alm disso, a populao faz o uso deste para fins diversos (recreao, pesca e lavagem de utenslios) (NAVAL et al., 2010).
Tabela 3. Caractersticas do reator UASB e da Lagoa Facultativa da ETE Vila Unio. Formato UASB cilndrico Lagoa Facultativa Comprimento 256m 23m Largura 110m 7,8m rea 28.160m Volume 42.240m 3.240m Altura 1,5m Dimetro Altura Volume

Fonte: Naval et al. (2010).

Gerao de Resduo Slido

Esgoto Bruto
Grade Caixa de Areia Caixa de Gordura Coletor de Gs Medidor de Vazo

Lagoa Facultativa

Reator UASB

Efluente Final

Leito de secagem

Figura 4. Desenho esquemtico da ETE Vila Unio, localizada em Palmas, Tocantins.

Figura 5. Reator UASB (destaque em vermelho) e Lagoa Facultativa (destaque em azul). ETE Vila Unio.

A metodologia realizada neste trabalho pode ser observada, resumidamente, no fluxograma 1.

Fluxograma 1. Fluxograma representando a metodologia do trabalho. A coleta de efluente teve duas finalidades, anlise da comunidade fitoplanctnica e concentrao da biomassa algal.

Coleta das microalgas Para a anlise qualitativa e quantitativa das microalgas, foi coletada, na sada da lagoa facultativa (FIGURA 6), uma amostra do efluente (100mL) em um frasco mbar com o auxilio de um recipiente coletor e de um funil, ambos de plstico. A amostra foi armazenada em uma caixa de isopor com gelo e transferida para anlise no Laboratrio de Microbiologia Ambiental e Biotecnologia, Setor de Hidrobiologia, da Universidade Federal do Tocantins.

Figura 6. Sada do efluente da lagoa da ETE Vila Unio, sendo lanado no crrego gua Fria.

J em relao coleta de efluente para a obteno de biomassa microalgal, foi coletado um volume de aproximadamente 10L para a obteno de biomassa. A coleta foi realizada na sada da lagoa e, para isto, foram utilizados trs recipientes de plstico transparente com capacidade de 5L cada um. Aps a coleta do efluente, este foi transportado ao laboratrio da Companhia de Saneamento do Tocantins (Saneatins), localizado na ETE Vila Unio, para que fosse feita a concentrao da biomassa microalgal.

Caracterizao qualitativa das microalgas da lagoa facultativa A metodologia utilizada para a anlise qualitativa das microalgas da lagoa facultativa foi a descrita por Marques (2006), que consiste na abordagem taxonmica e da estrutura populacional, com o uso de microscpio tico (uso de objetiva de 40x, correspondendo escala 10m para 25,3cm) binocular Olympus, MX41, equipado com cmera digital colorida e ocular micrometrada, sendo que os organismos foram observados em vista frontal, apical e lateral, visando identificao, mensurao e captura de imagens. As caractersticas

(morfolgicas e morfomtricas da vida vegetativa e reprodutiva) de valor taxonmico das espcies foram analisadas de acordo com bibliografias especializadas.

Anlise quantitativa das microalgas da lagoa facultativa A anlise quantitativa foi realizada de acordo com o mtodo descrito por Uthermhl (1958), o qual se baseia na distribuio aleatria dos indivduos no fundo da cmara de sedimentao. O volume sedimentado foi de 10mL, em funo da concentrao da amostra. A contagem foi realizada em microscpio invertido cujos campos de contagem foram distribudos em transectos verticais paralelos, cobrindo praticamente toda a rea da cmara, sorteados aleatoriamente. O tempo de sedimentao foi de no mnimo 3 horas para cada centmetro de altura da cmara (MARGALEF, 1983). Na contagem do fitoplncton, foi considerado como um indivduo organismos unicelulares, filamentos, tricomas, colnias e cenbios. O nmero de campos contados foi a quantidade necessria para alcanar 100 indivduos da espcie mais freqente, ou estabilizar o nmero de espcies adicionadas por campo (rea mnima de compensao). Lund, Kipling e Lecren (1958) consideraram o erro de contagem inferior a 20%, a um nvel de significncia de 95%. Os resultados da contagem foram expressos em indivduos por mL, calculada de acordo com Nogueira e Rodrigues (1999).

Concentrao da biomassa microalgal A concentrao da biomassa microalgal foi realizada com o uso de um sistema de filtrao vcuo constitudo de um Kitassato (1000mL), funil de Bchner e bomba de vcuo (Prismatec modelo 131B) (FIGURA 7), utilizando, para a reteno das microalgas, papel de filtro quantitativo da marca CAAL n 1540 de filtragem mdia e de porosidade de 6m. Aps, a filtrao, a biomassa concentrada foi seca diretamente ao sol, em ambiente aberto (ao ar livre), e a temperatura e umidade do ar foram medidas com o uso de um term-higrmetro TFA. A concentrao da biomassa microalgal foi realizada em triplicata.

Figura 7. Sistema de filtrao vcuo montado para a recuperao da biomassa microalgal do efluente da lagoa da ETE Vila Unio.

Extrao dos lipdeos A extrao dos lipdeos da biomassa seca foi realizada conforme Folch et al. (1957) apud Loureno (2006), com adaptaes. Inicialmente, as amostras secas foram postas em um bquer e a este foi adicionada uma mistura de clorofrmio:metanol 2:1 (v/v). A mistura foi agitada (com auxlio de agitador mecnico Fisatom modelo 713D), em capela, e macerada por 5 minutos. Em seguida, foi feita uma filtrao vcuo, onde os resduos celulares ficaram no papel de filtro e o meio lquido foi recolhido, teve seu volume aferido, e foi transferido para um funil de separao. A este, foi adicionado uma soluo de KCl 0,88% (correspondendo a do volume da mistura contida no funil). A mistura foi agitada manualmente por 3 vezes e, aps esta, o meio foi posto para decantar por 10 minutos. Foi feita a separao das fases (superior e inferior), sendo que a fase superior foi descartada. A fase inferior, densa e com lipdeos dissolvidos, foi separada e adicionou-se uma mistura de metanol:gua destilada (1:1 v/v) correspondente a do volume da soluo. Novamente o sistema foi agitado por 3 vezes e deixado em repouso por 10 minutos. A fase inferior foi separada e seca com Na2SO4 anidro. Em seguida, a mistura foi filtrada vcuo. O solvente presente na mistura foi retirado por rota-evaporao com o uso de um aparelho de rota-evaporao Fisatom modelo 802 (FIGURA 8). O concentrado teve sua massa aferida e foi armazenado em frasco mbar e em ambiente refrigerado.

Figura 8. Concentrao do extrato obtida das microalgas via rota-evaporao. Extrato (seta vermelha) e solvente recuperado (seta amarela). Sendo esta a etapa final do processo de extrao dos lipdeos.

Anlise do extrato, obtido das microalgas, por infravermelho por transformada de Fourier (FTIR) Os espectros de infravermelho abrangendo a regio de 4000 400cm-1 foram obtidos em Espectrofotmetro FTIR, Thermo Nicolet, modelo Nexus 470, na Universidade Federal do Rio Grande do Norte - UFRN. Os espectros foram obtidos temperatura ambiente em pastilhas slidas, e foram adquiridos com resoluo de 4cm-1 e 32 scans/min.

RESULTADOS E DISCUSSES Caracterizao qualitativa das microalgas da lagoa facultativa As espcies descritoras da comunidade fitoplanctonica da lagoa da ETE Vila Unio pertencem aos grupos Bacillariophyceae, Cyanobacteria, Chlorophyceae, Cryptophyceae, Euglenophyceae, Zygnemaphyceae e Dinophyceae (TABELA 4).
Tabela 4. Composio dos txons fitoplanctnicos inventariados na ETE Vila Unio. Txons Coleta 1 Coleta 2 BACILLARIOPHYCEAE Aulacoseira granulata (Ehr.) Sim. var. granulata X Fragillaria sp1 X CYANOBACTERIA Cylindrospermopsis raciborskii (W.) Seen. e Sub. Raj X Geitlerinema amphibium (Agardh. Ex Gomont) Anag. X Geitlerinema unigranulatum ( Singh) Kom. e Azevedo X Lemmermaniella sp X Merismopedia tenuissima Lemm. X Planktolyngbya circuncreta (G. S. West) Anagn.et Kom X Planktolyngbya limnetica (Lemm.) Kom.-Legn. ET Gronberg X Planktothrix isothrix Bory X X Planktothrix sp X X CHLOROPHYCEAE Coelastrum reticulatum (Dang.) Senn. X Dictyosphaerium ehrenbergianum Ng. X Dictyosphaerium pulchellum Wood X Eudorina elegans Ehr. X Monoraphidium arcuatum (Kors.) Hind. X X Monoraphidium irregulare (G. M. Sm.) Kom.-Legn. X X Pediastrum duplex Mey. X Radiococcus planctonicus Lund. X Treubaria schmidlei (Schr.) Fott & Kov. X CRYPTOPHYCEAE Cryptomonas cf pirenoidifera Gleitler X EUGLENOPHYCEAE Euglena caudata (Cunha) Conr. X X Euglena sp. X Lepocinclis ovum (Ehr.) Lemm. X X Lepocinclis salina Frits. X X Lepocinclis sp1 X Phacus longicauda (Ehr.) Duj. X X Phacus longicauda var tortus ( Lemm. ) Skorvotzov X Phacus sp. 1 X X Trachelomonas volvocina Ehr. X ZYGNEMAPHYCEAE Cosmarium pseudoconatum Nordst. X Mougeotia cf. delicata Beck X Staurastrum curvimarginatum Scott & Gronblad X Staurastrum iversenii Nyg. X Staurastrum leptocladum Nordst. var. leptocladum Nordst X X Staurastrum sebaldi Reins. X Staurodesmus mamillatus Norsted X DINOPHYCEAE Peridinium cf. volzii Lemm. X

Foram identificados 2 txons pertencentes diviso Bacillariophyceae, 9 txons da diviso Cyanobacteria, 9 txons da diviso Chlorophyceae, 1 da Cryptophyceae, 9 da Euglenophyceae, 7 da Zygnemaphyceae e 1 txon da diviso Dinophyceae. Segundo Hu et al. (2008), microalgas pertencentes aos txons Bacillariophyceae produzem, predominantemente, cidos graxos de C16:0 e C16:1, bem como C16:0 e C18:1 produzido por Chlorophyceae, C16:0 e C18:1 por Euglenophyceae, C16:0 e C20:1 por Cryptophyceae, C16:0 Dinophyceae e C16:0, C16:1 e C18:1 por Cianobactria. Alm desses cidos graxos, as Bacillariophyceae so produtores de cidos graxos poliinsaturados (3 ou 6, onde x representa a posio em que se encontra a primeira insaturao, contanto a partir do final do cido graxo) como C20:53e C22:63, assim como algas verde e Euglenophyceae so produtoras de C18:2 e C18:33, C18:33, 18:4 e C20:5 produzidos por Cryptophyceae, C18:53 e C22:63 por Dinophyceae e C16:0, C18:2 e C18:33 em Cianobactria. Logo, o lipdeo extrado de uma mistura de microalgas pertencentes aos txons identificados na ETE Vila Unio poder possuir sua cadeia constituda, predominantemente, por esses cidos graxos. Anlise quantitativa das microalgas da lagoa facultativa A maior quantidade de indivduos por mililitro foi de microalgas pertencentes aos grupos Cyanobacteria e Euglenophyceae, nas duas coletas. Isso pode estar relacionado, segundo Soldatelli (2007), s caractersticas do meio de cultura (efluente tratado secundariamente por reator anaerbio UASB), rico em compostos de nitrognio, ambiente propcio proliferao desses grupos de microalgas. Foram identificados 15 txons a nvel genrico, especfico e intraespecfico. O nmero de gneros para os diferentes grupos de algas foram: 3 Cyanobacteria, 5 Chlorophyceae, 1 da Cryptophyceae, 5 Euglenophyceae e 1 Dinophyceae. J em relao s espcies encontradas, a Lepocinclis salina Frits., a Plankthotrix isothrix Bory, Euglena sp. e a Phacus longicauda (Ehr.) Duj. foram as espcies com o maior nmero de indivduos por mililitro (TABELA 5).

Tabela 5. Densidade (ind. ml -1) dos txons fitoplanctnicos inventariados na ETE Vila Unio. Txons Coleta 1 Coleta 2 CYANOBACTERIA Merismopedia tenuissima Lemm. 34 Planktolyngbya circuncreta (G. S. West) Anagn.et Kom 34 Plankthotrix isothrix Bory 4569 7707 CHLOROPHYCEAE Coelastrum reticulatum (Dang.) Senn. 87 Dictyosphaerium pulchellum Wood 34 Monoraphidium arcuatum (Kors.) Hind. 34 Monoraphidium irregulare (G. M. Sm.) Kom.-Legn. 29 68 Radiococcus planctonicus Lund. 34 CRYPTOPHYCEAE Cryptomonas cf pirenoidifera Gleitler 272 EUGLENOPHYCEAE Euglena caudata (Cunha) Conr. 238 Euglena sp. 4584 Lepocinclis salina Frits. 8003 5772 Phacus longicauda (Ehr.) Duj. 87 713 Phacus sp. 1 29 DINOPHYCEAE Peridinium cf. volzii Lemm. 29 TOTAL 12833 19524

Concentrao da biomassa microalgal A quantidade de biomassa microalgal obtida pela filtrao do efluente da lagoa facultativa pode ser observada na Tabela 6.

Tabela 6. Quantidade de biomassa microalgal obtida a partir do volume de efluente filtrado da lagoa da ETE Vila Unio.

Amostras Coleta 1 Coleta 2 Coleta 3

Volume filtrado (L) 9,750 10,500 9,250

Biomassa recuperada (mg) 594,2 756,3 1114,8

De acordo com a Tabela 4, observa-se que a quantidade de biomassa obtida foi aumentando gradativamente da coleta 1 3. Isso pode estar relacionado s diferenas nas condies ambientais (reduo do ndice pluviomtrico, diminuio da umidade relativa do ar, diminuio da temperatura do ar e aumento da insolao e exposio luz) que ocorrem no ms em que as coleta foram realizadas (REBELLO e SALES, 2010). Segundo Jacob-Lopes et al. (2009), um aumento na durao do perodo luminoso o fator determinante para o funcionamento dos fotobiorreatores e que a condio de luminosidade de 12 horas de luz a ideal para se ter uma tima fixao de CO2 e aumento da biomassa algal. Alm disso, como todas as coletas foram realizadas no ms de maio (quando comea a diminuir as chuvas em

Palmas-TO), porm em dias diferentes (incio, meio e fim de maio), espera-se que com a diminuio das chuvas o afluente esteja mais concentrado (maior disponibilidade de nutrientes) proporcionando o desenvolvimento das microalgas e, segundo Guihneuf et al. (2009), um aumento da quantidade de luz proporciona o aumento na quantidade de cidos graxos saturados e de cido docosahexaenico e, baixa luminosidade, proporciona aumento de cidos poliinsaturados, principalmente cido eicosapentaenico. O efluente, aps a filtrao, teve a sua cor aparente modificada (de verde para transparente) (FIGURA 9), comprovando a recuperao da biomassa microalgal e melhorando o efluente que ser lanado no corpo receptor, uma vez que, segundo Petry (2005), algas presentes na gua possuem caractersticas de precursores de trihalometanos, quando neste tambm existe a presena de halognio. Borges (2003) apud Petry (2005) analisou amostras de guas contendo algas clorofceas e cianofceas e viu que nessas guas trihalometanos foram formados, mesmo em pequena quantidade comparado com guas com cidos hmicos. Observou, tambm, pela filtrao ou no de guas contendo algas, que tanto as algas como seus produtos extracelulares atuam como precursores de trihalometanos, sendo que as guas com algas em suspenso apresentam maiores riscos de formao desses subprodutos. De acordo com Naval et al. (2010), a ETE Vila Unio geradora de uma grande quantidade de impactos negativos em vrios ambientes (gua, solo e ar) e sobre a populao que utiliza as guas do crrego que recebe o efluente da ETE e, observando o trabalho realizado por Marques (2006) na caracterizao das espcies de microalgas presentes no lago da Usina Hidreltrica de Lajeado, espcies presentes na lagoa da ETE Vila Unio tambm foram encontradas por esta autora, sendo que se for cogitada a possibilidade de uso da gua do reservatrio da usina para abastecimento humano, estas espcies devem ser retiradas. Com isso, v-se a importncia ambiental, como minimizao de alguns impactos, da retirada desses microrganismos do efluente antes de lan-lo no meio aqutico.

Figura 9. Efluente da lagoa facultativa da ETE Vila Unio. Antes (a) e depois (b) da filtrao.

Extrao dos lipdeos totais A massa do concentrado obtido aps a extrao pode ser observada na Tabela 7.

Tabela 7. Quantidade de biomassa microalgal obtida a partir do volume de efluente filtrado da lagoa da ETE Vila Unio.

Amostras Coleta 1 Coleta 2 Coleta 3

Volume filtrado (L) 9,750 10,500 9,250

Biomassa recuperada (mg) 594,2 756,3 1114,8

Em termos percentuais, foi obtido um extrato com valores iguais a 16%. Com uma mdia, em massa, de 55,6mg. Com isso, considerando apenas 0,50m de profundidade da lagoa facultativa (com um total de 1,5m, TABELA 3), que a zona de maior intensidade luminosa segundo Von Sperling (1986), o volume obtido seria de 14.080m e, utilizando a menor quantidade de biomassa filtrada obtida (594,2mg), a biomassa algal recuperada seria de aproximadamente 858,086Kg e com uma quantidade, considerando um teor de 16%, de aproximadamente 127,39Kg em lipdeos. O concentrado obtido possuiu uma cor esverdeada e uma aparncia cerosa (FIGURA 10). Como essa metodologia destinada extrao de lipdeos totais, de se esperar que no s lipdeos neutros, como tambm polares, fossem extrados, sendo esses constitudos por uma quantidade maior de cidos graxos saturados e possurem, com isso, uma aparncia slida. Alm de, segundo Thompson Jr. (1996), algumas microalgas possuem uma forma alternativa de armazenamento de lipdeos. A espcie Euglena gracilis (Euglenophyceae),

dependendo da condio ambiental de luz em que se encontra, pode armazenar cera composta por cidos graxos de 12 a 13 tomos de carbono, com a quantidade de cera apresentando um maior valor quando as clulas so cultivadas em ambiente anaerbio. A espcie Chroomonas salina (Cryptophyceae) tambm indicada como uma espcie armazenadora de cera. Espcies constituintes desses txons foram identificadas no efluente da ETE Vila Unio. Alm de cera, muitas espcies identificadas no efluente da lagoa facultativa da ETE Vila Unio so produtoras, predominantemente, de cidos graxos saturados, proporcionando uma consistncia slida ao extrato obtido, quando presente na estrutura do triglicerdeo.

Figura 10. Efluente da lagoa facultativa da ETE Vila Unio. Antes (a) e depois (b) da filtrao.

Observando o exposto por Hu et al. (2008), de que os cidos graxos mais comumente produzidos pelas microalgas possuem uma cadeia carbnica de 16 a 18 tomos, podendo ser saturados ou insaturados, mas os saturados e mono-insaturados so predominantes na maioria das microalgas, analisando as espcies identificadas na ETE Vila Unio (comumente produtoras de cidos graxos saturados), e considerando ainda que o extrato obtido uma mistura de lipdeos de diferentes espcies, a aparncia do lipdeo apresentou caractersticas semelhantes a um lipdeo cuja composio de cidos graxos predominantemente de cidos graxos saturados (aparncia slida em temperatura ambiente, 25C).

Anlise do extrato, obtido das microalgas, por infravermelho por transformada de Fourier (FTIR)

Figura 11. Extrato lipdico obtido a partir das microalgas da lagoa da ETE Vila Unio. Concentrado (a) e diludo em hexano (b).

De acordo com Yang et al. (2005), a maioria das bandas de absoro que representa os grupos funcionais dos triglicerdeos podem ser observados em torno de 2937cm-1 (deformao axial assimtrica de C-H), 2856cm-1 (deformao axial simtricade C-H), 1749cm-1 (deformao axial do grupo C=O), 1454cm-1 (deformao angular tipo scissoring de C-H), 1166cm-1 (deformao angular de C-O e C-H) e 709cm-1 (deformao angular tipo rocking de C-H). Vrias bandas de absoro foram obtidas na anlise de FTIR do extrato obtido (FIGURA 11). No entanto, os que caracterizam a presena de lipdeos so: 1736cm-1 (deformao axial de C=O de steres alifaticos saturados); 1096cm-1 (deformao axial de OC-C de steres de lcoois primrios (deformao axial da ligao carbono-oxignio de lcoois); deformao axial de C-H de alcanos: (1) ~2962cm-1, vasCH3; (2) 2872cm-1, vsCH3; (3) 2924cm-1, vas CH2; 2853cm-1, vsCH2; 3394cm-1 (deformao axial de O-H de lcool) (SILVERSTEIN e WEBSTER, 2000).

CONCLUSO E RECOMENDAES

Os txons com o maior nmero de espcies no efluente da lagoa facultativa da ETE Vila Unio so Cyanobacteria, Chlorophyceae, Euglenophyceae e Zygnemaphyceae; Os txons com o maior nmero de indivduos por mililitro na lagoa da ETE Vila Unio so Cyanobacteria e Euglenophyceae; O processo de filtrao pode ser utilizado para a concentrao de biomassa microalgal, em escala de bancada; O teor de lipdeo obtido (em torno de 16%) a partir das microalgas da lagoa facultativa assemelha-se aos teores obtidos a partir de biomassa microalgal cultivada por processos convencionais, comparado com dados literrios, possuindo, com isso, potencial para uso na obteno de biodiesel; A anlise de FTIR pode ser utilizada para realizar uma caracterizao rpida de lipdeos. As bandas de absoro observadas mostraram que o extrato constitudo por lipdeos; As microalgas identificadas possuem a capacidade de produo de lipdeos e cidos graxos, predominantemente, saturados, os quais podem ser utilizados nas reaes de obteno de biodiesel; A obteno de biomassa microalgal diretamente da lagoa facultativa mostra-se como uma alternativa aos processos de obteno de biomassa algal tradicionalmente utilizados (fotobiorreator e tanques aerados). Alm de apresentar um motivo para o investimento da instalao de um sistema para recuperar a biomassa microalgal deixando, com isso, de lanla no crrego e podendo ter-se um ganho econmico e ambiental, visando o aproveitamento da biomassa para a produo de biocombustvel e, simultaneamente, minimizando impactos ambientais decorrentes da presena elevada desse material no ambiente.

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