UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHOMANN

FACULTAD DE INGENERIA EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

PRACTICA N2

TEMA: CURSO:

MEDIO DE CULTIVO

LABORATORIO DE MICROBIOLOGA

ALUMNA:

SANDYUDIT CASTRO

CODIGO: PROFESORA: FECHA:

07-30558

ING. AMELIA CASTRO

24-07-09

INTRODUCCIN

Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado ms de 10.000 medios de cultivo diferentes. Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin de oxgeno adecuadas, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante. La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares en composicin a los lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusin de extractos de carne y Peptona a la que se aadirn otros ingredientes. El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparacin de medios de cultivo. Se lica completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grados. en l. La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos ya que bastantes bacterias provocan su licuacin. En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentacin de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se aaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes. Con mnimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen

Tambin se aaden colorantes que actan como indicadores para detectar, por ejemplo, la formacin de cido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH bsico y amarillo en pH cido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide el crecimiento de la mayoria de las bacterias Gram-positivas).

OBJETIVOS

Los alumnos deben de conocer los principales principios para la preparacin de los medios de cultivo.

FUNDAMENTO

Para obtener colonia de microorganismos es necesario utilizar determinados sustratos (medios de cultivo), en los cuales los microorganismos puedan desarrollar todos sus procesos vitales. Los medios de cultivo deben reunir los siguientes requisitos:

Deben de contener nitrogeno,carbono,oxigeno,hidrogeno,sales minerales(sodio,potasio,etc),(Fe,Cu,Cr,Zn,Etc.)y factores de crecimiento (vitaminas, hormonas, etc).todas las sustancias deben ser fcilmente asimilables por los microorganismos.

Todos tienen un ph especfico. La presin osmtica en el medio debe ser igual que dentro de la clula microbiana. Los medios de cultivo deben ser esterilizados. Actualmente existen medios de cultivo desecados, los cuales se almacenan en recipientes bien cerrados en lugares oscuros y a una temperatura de 15-30C, son higroscpicos. Tiene un tiempo de duracin de 5 aos desde su fecha de fabricacin.

CONDICIONES GENERALES PARA EL CULTIVO El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve afectado por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos, son ajenos por completo al propio medio. 1- DISPONIBILIDAD DE NUTRIENTES ADECUADOS Un medio de cultivo adecuado para la investigacin microbiolgica ha de contener, como mnimo, carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas. En muchos casos sern necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento. Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer de donantes o captadores de electrones para las reacciones qumicas que tengan lugar. Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones de carne, extractos de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la preparacin de estas sustancias para su aplicacin a los medios de cultivo provocaban la prdida de los factores nutritivos lbiles. Actualmente, la forma ms extendida de aportar estas sustancias a los medios es utilizar peptona que, adems, representa una fuente fcilmente asequible de nitrgeno y carbn ya que la mayora de los microorganismos, que no suelen utilizar directamente las protenas naturales, tienen capacidad de atacar los aminocidos y otros compuestos ms simples de nitrgeno presentes en la peptona. Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas especficas por lo que se aade a muchos medios sustancias como suero, sangre, lquido asctico, etc. Igualmente pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y sales minerales como las de calcio, magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias vitamnica. Muy a menudo se aaden al medio de cultivo ciertos colorantes, bien como indicadores de ciertas actividades metablicas o bien por sus capacidades de ejercer de inhibidores selectivos de ciertos microorganismos. 2- CONSISTENCIA ADECUADA DEL MEDIO promotoras del crecimiento, generalmente de naturaleza

Partiendo de un medio lquido podemos modificar su consistencia aadiendo productos como albmina, gelatina o agar, con lo que obtendramos medios en estado semislido o slido. Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al punto de fusin de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla. Actualmente los medios slidos son de uso universal, por su versatilidad y comodidad, pero hay tambin gran cantidad de medios lquidos cuyo uso est ampliamente extendido en el laboratorio. 3- PRESENCIA (O AUSENCIA) DE OXGENO Y OTROS GASES Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmsfera con tensin de oxgeno normal. Algunas pueden obtener el oxgeno directamente de variados sustratos. Pero los microorganismos anaerobios estrictos slo se desarrollarn adecuadamente en una atmsfera sin oxgeno ambiental. En un punto intermedio, los microorganismos microaerfilos crecen mejor en condiciones atmosfricas parcialmente anaerobias (tensin de oxgeno muy reducida), mientras los anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones. 4- CONDICIONES ADECUADAS DE HUMEDAD Un nivel mnimo de humedad, tanto en el medio como en la atmsfera, es imprescindible para un buen desarrollo de las clulas vegetativas microbianas en los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mnimas en las estufas de cultivo a 35-37C proporcionando una fuente adecuada de agua que mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar as que se deseque el medio. 5- LUZ AMBIENTAL La mayora de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sera el caso de los microorganismos fotosintticos. 6- PH La concentracin de iones hidrgeno es muy importante para el crecimiento de los microorganismos. La mayora de ellos se desarrollan mejor en

medios con un pH neutro, aunque los hay que requieren medios ms o menos cidos. No se debe olvidar que la presencia de cidos o bases en cantidades que no impiden el crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos metablicos normales. 7- TEMPERATURA Los microorganismos mesfilos crecen de forma ptima a temperaturas entre 15 y 43C. Otros como los psicrfilos crecen a 0C y los temfilos a 80C o incluso a temperaturas superiores (hipertemfilos). En lneas generales, los patgenos humanos crecen en rangos de temperatura mucho ms cortos, alrededor de 37C, y los saproftos tienen rangos ms amplios. 8- ESTERILIDAD DEL MEDIO Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estriles para evitar la aparicin de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el crecimiento microbiano normal del o de los especimenes inoculados en dichos medios. El sistema clsico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave (que utiliza vapor de agua a presin como agente esterilizante) TIPOS BSICOS DE MEDIOS DE CULTIVO
Atendiendo a su estado fsico: LQUIDOS SEMISLIDOS SLIDOS Atendiendo a su utilidad prctica: Medios para aislamientos primarios: Para usos generales: no selectivos, para cultivo de una amplia variedad de organismos difciles de hacer crecer. A menudo estn enriquecidos con materiales como: sangre, suero, Hemoglobina, FX, FV, glutamina, u otros factores accesorios para el crecimiento de las bacterias (Agar Sangre, Schaeadler, etc) selectivos: (pueden ser de moderada o de alta selectividad) se aaden sustancias que inhiban el crecimiento de ciertos grupos de

bacterias, permitiendo a la vez el crecimiento de otras. Variando las sustancia aadidas, se vara el tipo y grado de selectividad (Mac Conkey, Kanamicina-Vancomicina) enriquecidos: ralentizan/suprimen el crecimiento de la flora

competitiva normal potenciando el cultivo y crecimiento deseado (Selenito, medio con Vitamina K). Para aislamientos especializados: formulaciones nutritivas especiales que satisfacen requerimientos de grupos especficos de bacterias, ayudando a su identificacin (Lowenstein). Medios para identificacin: diferenciales: formulaciones especiales en las que se estudian las peculiaridades fisiolgicas (nutricin y respiracin sobre todo) especficas de las bacterias. Seleccionando los medios adecuados se puede llegar a la identificacin de casi cualquier bacteria (OxidacinFermentacin)

MATERIALES

Autoclave

Bao Mara

Material de vidrio ( balones ,placas petri, tubos de ensayo, pipetas y matraces)

PREPARACIN

Par la preparacin de medios de cultivo se utiliza agua limpia, destilada neutra. Los recipientes que se utilizaran se lavaran esmeradamente con el fin de eliminar cualquier sustancia extraa. En lo posible se prepara mximo 2 lts. Por recipiente. Se preparan segn las indicaciones de las etiquetas del envase de cada medio de cultivo. Los medios que se contienen agar o gelatina deben ser calentados para obtener su disolucin. Los medios que no contiene agar ni gelatinas se pueden disolver por lo general en agua fra o bajo calentamiento. Antes de esterilizarlos es conveniente repartir el medio de cultivo en porciones mas pequeas ,si las normas indicadas en le envase nos indican otra cosa, la esterilizacin de los medios de cultivo se lleva acabo en autoclave , a 12C durante 15 minutos

PROCEDIMIENTO

1. - Pesamos el caldo corazn 1,855gr en un matraz erlenmeyer.

2.- Pesamos el agar 2,011gr en un frasco baln.

3.- En la probeta medir 100ml de agua.

4.- Preparando caldo de cultivo corazn

100 ml de agua vaciar en el frasco que contena caldo de corazn para luego pasar a los tubos de ensayo. Son cinco tubos de ensayo de 10 ml cada uno.

4- Preparando el cultivo de agar.

Vaciar 10ml de agua al baln de agar y mezclar. Llevar a fuego lento hasta que elimine los grumos. Estos deben ser calentados para su mejor dilucin.

Luego vaciar en un matraz, este ser amarrado y luego esterilizado, este debe ser rotulado.

5.-

Esterilizamos

Esterilizamos en el autoclave .Lo primero que vemos es el nivel de agua, un aproximado de 5 litros. Luego se introduce el material a esterilizar en las rejillas sacadas anteriormente. Se cierra ajustando sus tuertitas. Luego se eleva la temperatura, cuando esta se excede comienza a botar vapor en exceso. Una vez visto esto se cierra la vlvula y el termmetro debe estar a unos 90-95 y el manmetro 25-28 y debemos esperar unos 30 min. Para bajar.

Par iniciar a esterilizar debemos cerrar bien y poner la temperatura a 121C y el manmetro 28-30 y esperar de hora cuando llega a 30 se baja la palanca de control y esperamos de llegue a 20,luego esperamos que llega 28 unas 3 veces, hasta que pase 15 min, despus de eso se apaga la autoclave. este enfra en media hora el autoclave pero el material tiene que estar de 1h a 1 1/2h.

CONCLUSIONES

Los medios de cultivo son de gran ayuda para estudiar bacterias y microorganismos, hemos visto dos tipos de medios de cultivo solido (agar) y liquido (caldo corazn).su preparacin es muy importante ya que de ella depende el cultivo. Estos medios de cultivo contienen los nutrientes necesarios para siembra de microorganismo.

RECOMENDACIONES

Se recomienda para una mejor preparacin seguir las indicaciones del frasco de cada medio de cultivo. Manipular con mucho cuidado el autoclave Se debe trabajar lo ms limpio posible y lavar bien los matraces y tubos para evitar cualquier sustancia extraa.

BIBLIOGRAFIA

http://www.danival.org/notasmicro/medioscult/_madre_me dios.html