Recursos Profesor - Laboratorio de Enzima 6

Laboratorio de Enzimas
Version 6.12S por Michael OBrien, Greg Trotter and Ron Bates Traduccin: Jorge Camacho
Ayudas de Instruccin y Experimentos
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Laboratorio de Enzima
Tabla de Contenido
Presentacin al Instructor Seccin 1: Actividades Informativas Seccin 2: Laboratorio de Series Seccin 3: Laboratorio de Investigacin Opciones para Profesores Requisitos del Sistema e Instalacin Pantalla del Laboratorio de Investigacin Opciones de Acercamiento en el Laboratorio de Investigacin Pantalla del Laboratorio de Series Mens Empleados en el Laboratorio de Enzimas Seccin 1 Estudios para el Aula de Clase.
Pgina 4 5 5 6 6 7 8 9 10 11
Copyright 1999, 2007, 2009 By Michael OBrien
El Laboratorio de Enzimas fue desarrollado por Newbyte Educational Software. Todos los derechos reservados a nombre de Newbyte Educational Software. La copia, duplicacin, venta o distribucin de este Producto o sus componentes estn expresamente prohibidas, a menos que exista autorizacin escrita de Newbyte Educational Software. Este Producto o es para efectos educativos nicamente y no debe emplearse para otro propsito. Contiene simplificaciones que permiten un mejor aprendizaje por parte de los estudiantes. Se permite la duplicacin de partes de este manual solo para efectos de enseanza en la institucin o sede educativa que compra este Producto o. Ni Newbyte Educational Software, ni el propietario de los derechos de autor se hacen responsables ante el comprador, persona o entidad alguna, por los daos derivados directa o indirectamente del uso de este Producto o.
Actividad 1: Las Enzimas como Catalizadores Actividad 2: Estructura de una Enzima Actividad 3: Cmo actan las enzimas Actividad 4: Factores que Afectan la Accin de las Enzimas Actividad 5: Aplicaciones Prcticas de las Enzimas. Actividad 6: Nomenclatura Cmo se le da el nombre a las enzimas. Seccin 2 Experimentos con el Laboratorio de Series Exp 1: La Amilasa Humana & Variaciones de Temperatura Exp 2: Variacin de Temperatura y Enzimas Exp 3: El pH y la Actividad de la Enzima Exp 4: Concentracin de Enzimas Exp 5: Concentracin de Sustrato Seccin 3 Experimentos con el Laboratorio de Investigacin Exp 6: Las Enzimas y sus Productos Exp 7: Temperatura Optima de las Enzimas Exp 8: pH Optimo para Diferentes Enzimas Exp 9: Actividad de la Catalasa Localizacin y Solucin de Problemas
12 14 16 18 26 28
32 36 40 44 48
52 56 60 64 68
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Presentacin al Instructor del Laboratorio de Enzimas

Este programa de simulacin est diseado para permitirle a los estudiantes la investigacin de reacciones enzimticas tanto de manera cuantitativa como cualitativa, a tiempo que ofrece la oportunidad de simular una gran variedad de reacciones en forma acelerada. El programa y los recursos para el instructor estn diseados como un paquete que le permita al profesor de biologa realizar experimentos realistas. Tanto instructores como estudiantes pueden basarse en el programa y su manual sin dificultades, y en la confianza de que los resultados obtenidos se ajustan correctamente a la literatura existente al respecto. El Laboratorio Enzimas es un recurso de gran calidad que le permite al estudiante aprender de forma especial lo que debe saber acerca de las enzimas y los factores que las influencian. El paquete es lo suficientemente verstil como para utilizarlo en una gran variedad de ambientes educativos, desde un solo computador, hasta actividades de presentacin dirigidas por el profesor, o de investigacin individual de los estudiantes mismos. El Laboratorio de Enzimas no es simplemente una base de datos. El uso de diagramas realistas y su sencillo sistema de controles permite que los estudiantes descubran por simple observacin y anlisis los efectos de distintos factores sobre la conducta de las enzimas. Se recomienda muy especialmente la seccin Laboratorio de Investigacin a los profesores, porque animan a los estudiantes a disear sus propios experimentos con el fin de investigar distintos aspectos de la actividad enzimtica. De ah, los lleva a probar su mtodo en un experimento donde ellos controlan todas las variables. Los experimentos le presentan a los estudiantes preguntas analticas sobre los datos recogidos, y sugiere actividades que buscan mayor investigacin individual. Debe asegurarse de conocer bien el programa antes de presentrselo a sus estudiantes. Una simple demostracin al principio de cada leccin le ahorrara tiempo a largo plazo. Finalmente, confo que este recurso le sea de utilidad a usted y a sus estudiantes. Se trata de un recurso abierto con el que espero: Le permita a sus estudiantes experimentar libremente Los anime a utilizar el mtodo cientfico al disear sus propios experimentos, y Se sienta en libertad de comunicarse conmigo si encuentra algn problema o tiene sugerencias.
Posibles formas de empleo:

Para demostraciones magistrales Presentando la relacin entre distintas condiciones ambientales y la consiguiente reaccin de la enzima. As se presentan y explican fcilmente, conceptos tales como especificidad y condiciones ptimas para cada enzima. En Experimentos de los Estudiantes - Al llevar a cabo reacciones enzimticas simuladas, los estudiantes pueden deducir por s mismos, las relaciones entre condiciones, sustratos y Producto o. Los experimentos y actividades que aparecen en este manual les permiten descubrir relaciones claves aplicando investigacin cientfica a cada concepto. Para Diseo de Experimentos Los experimentos aqu incluidos no son, desde luego, los nicos disponibles. Sus estudiantes pueden fcilmente disear muchos ms experimentos que involucren enzimas. Seccin 1: Actividadades Informativas Las actividades 1-6 estn diseadas para usarse como ejercicios en clase, o como tarea. No es necesario llevar a cabo todas las actividades de esta u otras seccin. Una forma de manejar el paquete completo es escoger un tema; e.g. Como afecta el calor a las enzimas, darle a los estudiantes solo aquellos ejercicios en clase que tengan que ver con temperatura, y llevar a cabo un Laboratorio de Series sobre el mismo tema para que luego ellos utilicen el Laboratorio de Investigacin con un experimento que muestre los efectos de cambios de temperatura en la enzima. La familiaridad que los estudiantes adquieran con los conceptos presentados en esta seccin optimizar el tiempo que pasen frente al computador. Seccin 2: Laboratorio de Series Para aquellos que ya han usado una versin previa de esta aplicacin, este representa el mayor cambio. En vez de usar experimentos artificialmente controlados, el programa permite ahora hasta 101 experimentos simultneos. Esto permite investigar fcilmente las tendencias en los experimentos. Por ejemplo: para ver la tendencia en temperatura, simplemente escoja 0 C como la primera temperatura, y 100 C como el ltimo. Haga clic en Empezar, y puede ver como se presentan todos los 101 resultados al mismo tiempo. Por defecto, las graficas tienen un acercamiento de 10X, dado que las tendencia ms importantes tienden a dares en las fases tempranas de las reacciones.
Seccin 3: Laboratorio de Investigacin Esta seccin replica la situacin de un laboratorio y le permite a los estudiantes visualizar lo que sucede en el matraz cuando usan los botones de acercamiento. Aqu, la mayora de las variables se puede cambiar durante un mismo experimento. El Laboratorio de Investigacin refuerza el mtodo cientfico y el diseo experimental. Se debe animar a los estudiantes para que estudien bien su diseo experimental antes de intentar hacer los ejercicios de esta seccin. Ellos pueden controlar todas las variables. Una investigacin del efecto del pH sobre la actividad de la enzima requerira que se hicieran varios experimentos. Las actividades de esta seccin, son solo ejemplos de lo que se puede hacer. Haga que sus estudiantes investiguen las reacciones de las enzimas diseando y realizando cualquier experimento que ellos escojan. Anmelos a usar el Mtodo Cientfico en su diseo, y resalte la necesidad de controlar los matraces.
** Todos los matraces contienen las coenzimas y los cofactores que las reacciones necesitan para poder continuar.
Requisitos del Sistema e Instalacin: Este es un programa Windows. Corre en Windows XP, 2000, 98 etc. o en Mac OS X para Macintosh. REQUISITOS DEL SISTEMA El Laboratorio de Enzimas requiere de los siguientes componentes de sistema: 1. Pentium II 1.2 GHz o de mayor velocidad. 2. Sistema Operativo Windows XP o similar. (Mac OS X para Macintosh) 3. Approx. 20Mb de espacio libre en el disco duro. 4. Resolucin de pantalla de por lo menos 1024 x 768 con miles de colores. INSTALACION
**
Nota sobre las concentraciones de Enzimas: Durante los experimentos que emplean temperaturas muy altas, la cantidad de enzimas disminuir debido a la desnaturalizacin de sus molculas. En el casos de experimentos en series, la enzima y el sustrato se han incubado a distintas temperaturas antes de mezclarse. En los experimentos nos referimos a las Concentraciones Remanentes como a la concentracin de enzimas que queda luego de una desnaturalizacin por efecto del calor. El programa no reduce la cantidad de enzimas desplegadas cuando se utilizan inhibidores. Los Experimentos Guardados se pueden encontrar en el directorio de Experimentos Guardados, el cual se encuentra en el directorio de Programas\ Newbyte\Laboratorio de Enzimas 6 de su disco duro. Con todo, su administrador de sistemas puede ubicarlos en otro archivo. Cuando cargue o guarde los experimentos, podra tener que navegar a ese directorio a travs del men.
Para incorporar el Laboratorio de Enzimas a su Computador Windows: 1. Introduzca el CD de Enzimas en el Drive adecuado (e.g. D:). 2. Abra el directorio SETUP. 3. Haga doble clic en el archivo SETUP.EXE. 4. Siga las sugerencias de instalacin. 5. Al final de la instalacin se abre el programa. En ese momento tendr que completar el proceso de instalacin, introduciendo los detalles de registro. Use el nombre completo del colegio. No acepta iniciales. 6. Su Cdigo Clave para el programa se encuentra dentro de la cubierta del DVD. 7. cuando termina la instalacin puede encontrar una shortcut en Start > All Programs > Newbyte > Laboratorio de Enzimas 6. Para desinstalar en Windows 1. Inicie el sistema operativo de Windows 2. Corra el instalador de nuevo hasta cuando le de la opcin de retirar el programa.
Opciones para Profesores

Cuando accede al tem OPCIONES del men del profesor, puede evitar que los DATOS DE VELOCIDAD DE REACCION se puedan ver o imprimir, siempre y cuando est corriendo el programa desde la maquina desde donde se carga el programa. Para confirmar sus cambios tiene que introducir el Cdigo del Instructor = 6elXpp (X = Da + mes) (el = Laboratorio de Enzimas) e.g. si la fecha es marzo 7 entonces X= 7 + 3 = 10 el cdigo sera 6el10pp
Pantalla del Laboratorio de Investigacin

Botones de Men para Archivo, Graficacion, Datos y Ayuda, que permiten controlar el programa, sus graficas y datos. Botones Laboratorio de Investigacin y de Series. Le permiten pasar de uno a otro. Los botones Inicio, Pausa y Continuar controlan la reaccin, su inicio y pausa. El Aparato de burbujas puede retirarse desde el men de opciones. Recipiente de Reaccion. Los botones de acercamiento le permiten ver lo que sucede en el matraz. Botn Turbo acelera la reaccin. Esto es bueno para toda de datos y demostraciones.
Opciones de Acercamiento en el Laboratorio de Investigacin

Los botones de acercamiento le permiten a los estudiantes visualizar lo que sucede en el matraz de reaccin, en un sentido general, en una enzima y hasta en un centro activo.
Zoom 1 - Vista general.

Las molculas naranja representan el sustrato y las azules el Producto o. Haga clic en cualquier enzima verde para de inmediato pasar a ver su centro activo.
Zoom 2 - Vista de la Enzima.

Escoja esta opcin para ver la enzima completa y lo que la rodea.
Lectores de Temperatura y pH, y botones para cambio de men. Botones de Seleccin de sustrato, enzima, Producto o e Inhibidor. Presentan el nombre, as como los botones y lectores para los cambios en la concentracin.
Notas Importantes:
Zoom 3 - Vista del Centro

Activo. Observe el centro active y su interaccin con las molculas del sustrato y los inhibidores competitivos. Vea el inhibidor Acompetitivo y su efecto en la enzima.
El botn de resTablacer da origen a una nueva reaccin usando los mismos valores de inicio. selo cuando lleve a cabo mltiples reacciones con las mismas soluciones.
El men de graficacin le permite escoger los datos que se han de graficar. El botn Borrar Grafica solo borra la grafica pero no elimina ningn dato almacenado para la reaccin. Los grficos no se borran cuando inicia otro experimento si usa RESTablaCER. Esto para permitirle la comparacin de distintos experimentos. Use el botn BORRAR GRAFICA antes de empezar un nuevo experimento si no quiere que los grficos actuales continen all.
Pantalla del Laboratorio de Series

Botones de Men para Archivo, Graficacion, Datos y Ayuda, que permiten controlar el programa sus graficas y datos. Botones Laboratorio de Investigacin y de Series. Le permiten pasar de uno a otro. Los botones Inicio, Pausa y Continuar controlan la reaccin, su inicio y pausa. Tubos de ensayo. Botn Turbo acelera la reaccin. Esto es bueno para toda de datos y demostraciones. Lectores de Temperatura y pH, y botones para cambio de men.
Mens Empleados en el Laboratorio de Enzimas

Archivo Cargar Experimento Carga la preparacin y datos de una investigacin o experimento del Laboratorio de Series y lo pasa a la pantalla correcta. Guardar Experimento - Guarda la preparacin y datos de una investigacin o experimento del Laboratorio de Series. Imprimir pantalla Imprime el contenido de la pantalla. Imprimir Grficos Imprime los grficos activos. Imprimir Datos Imprime los datos del experimento activo. Imprimir Acercamiento Imprime la vista de acercamiento actual. Salir Sale del programa y vuelve a Windows. Opciones Cambiar Nombre Grupo permite cambiarle el nombre al grupo en las impresiones y datos almacenados. Opciones Profesor le permite no mostrar la velocidad de reaccin. Ver Aparato Burbujas muestra u oculta el aparato de burbujas. Color Solucin en Matraz le cambia el color de la solucin en el matraz para ciertos niveles del experimento. Grficas si las molculas en el rea de acercamiento se mueven muy lentamente, ajuste aqu la cantidad de ellas. Grficos Borrar todo Grafico retira de la pantalla los grficos escogidos Ver Todo Grafico hace visibles todos los grficos disponibles Ver Varios Grficos Escoja de uno a seis tipos de grfico que pueden verse. Dependiendo del experimento, podra desear cambiar los grficos visibles. Imprimir Grafico imprime los grficos actuales. Datos Ver Datos - muestra en la pantalla los datos recogidos Imprimir Datos datos enviados a la impresora Exportar Datos a un archivo de texto para usarlos en hojas de clculo y otros programas Generar Datos Cada - 1-10 segundos (Solo para el Laboratorio de Investigacin). Ayuda Para Recordar ayuda general acerca del programa. Ayuda Laboratorio de Investigacin informacin adicional Ayuda Laboratorio de Series informacin adicional Acerca del Laboratorio de Enzimas informacin acerca del auto del programa y su versin.
Botones de Seleccin de sustrato, enzima, Producto o e Inhibidor. Presentan el nombre, as como los botones y lectores para los cambios en la concentracin en los experimentos de series.
Notas Importantes:
Se pueden graficar hasta tres series de experimentos a un mismo tiempo. Si se cambian los valores de inicio, los finales o la enzima, el sustrato o el inhibidor, se da inicio a un nuevo experimento. El botn de resTablacer da origen a una nueva reaccin usando los mismos valores de inicio. selo cuando lleve a cabo mltiples reacciones con las mismas soluciones. El men de graficacin le permite escoger los datos que se han de graficar. El botn Borrar Grafica solo borra la grafica pero no elimina ningn dato almacenado para la reaccin. Los grficos no se borran cuando inicia otro experimento si usa RESTablaCER. Esto para permitirle la comparacin de distintos experimentos. Use el botn BORRAR GRAFICA antes de empezar un nuevo experimento si no quiere que los grficos actuales continen all.
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Actividad 1: Las Enzimas como Catalizadores

Un catalizador es una sustancia que acelera la velocidad de una reaccin sin cambiar su estructura qumica. Para que podamos comprender la forma como funciona un catalizador, debemos ante todo ver la forma cmo funcionan todas las reacciones qumicas. Consideremos el estallido de la plvora en el aire. La plvora y el oxigeno de la atmosfera pueden coexistir sin que haya de por medio una reaccin. Si se enciende un fosforo que eleve su temperatura, la plvora se combinara con el oxigeno y liberara energa en forma de calor y de luz. El fosforo da el empuje energtico necesario para que se inicie la reaccin. La cantidad de energa que se necesita para iniciar una reaccin se conoce con el nombre ENERGIA DE ACTIVACION. Un catalizador reduce la energa de activacin; se requiere entonces un menor empuje para dar inicio a la reaccin. Es importante recordar que el catalizador no se desgasta, sino que puede utilizarse una y otra vez. El grafico 1 a continuacin, muestra cmo baja la energa de activacin para una reaccin cuando hay participacin de un catalizador.
Las Enzimas son catalizadores biolgicos. Ellas permiten que ocurran reacciones dentro de las clulas vivas, a temperaturas y presiones moderadas en el cuerpo humano. Logran esto reduciendo la energa de activacin que se necesita para una reaccin. Como todo catalizador, la enzima no se consume un una reaccin. Una pequea cantidad puede catalizar una reaccin muchas veces. La Tabla 1 compara la energa requerida para descomponer el perxido de hidrogeno en agua y oxigeno entre una reaccin sin catalizacin, catalizada inorgnicamente, y catalizada por medio de una enzima.
Tabla 1
Energas de Activacin en la descomposicin del Perxido de Hidrgeno.
Catalizador Energa de Activacin (KJmol-1) Velocidad de Reaccion Relativa
Ninguno
Fe++
Catalasa
70 -76 1
42 104
7 1010
Grfico 1 Energa de Activacin
Preguntas Gua
1. El diagrama que sigue puede usarse para ilustrar el concepto de Energa de Activacin. Marque la parte del diagrama que representa Energa de Activacin.
No Catalizada
Energa de Activacin AB
Catalizada
A+B
Comparacin de los diagramas de energa de activacin para una reaccin con, y sin catalizador.
2. Qu es una enzima? 3. Cmo aceleran una reaccin? 4. Por qu son importantes las enzimas para todos los seres vivos?
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Actividad 2: Estructura de una Enzima

Las enzimas son protenas. Al igual que todas las protenas sestan compuestas de aminocidos, ligados por uniones de pptidos y en bucles de forma tridimensional. Parte de esa figura tridimensional consiste en una bolsa o ranura, conocida como el Centro Activo. Figura 1 Centro Activo de Una Enzima. El centro activo es la regin a la cual se une el sustrato y donde tiene lugar la reaccin cataltica. La Sustrato 1 naturaleza qumica y configuracin espacial del centro activo determina la especificidad de las enzimas. La enzima solo se une con un sustrato Enzima Sustrato 2 que tenga dimensiones qumicas y espaciales complementarias. La Figura 1 ilustra la reaccin entre una enzima y su sustrato. En algunos casos, el centro activo incluye un tomo o una molcula llamada cofactor. Los cofactores pueden ser iones de metal como el Zn2+, Mn2+, Mg2+ y el Fe2+. Cuando el Cofactor es una vitamina se llama coenzima. e.g. Niacina, Riboflavina y Tiamina.
Sustrato 1 Enzima
El zinc se mantiene en su lugar por medio de uniones qumicas dentro de la enzima. La coenzima NAD+, sirve como receptor o donante de hidrogeno para la enzima deshidrogenasa. Alcohol Deshidrogenasa
CH3CH2OH + NAD+
CH3CHO +NADH + H+
As the coenzyme is altered we might consider it more as a cosubstrate.
Los Cimgenos
Algunas enzimas son tan activas que la clula que las fabrica corre el riesgo de ser digerida por la enzima. La clula debe almacenar estas enzimas de forma inactiva , lo que se llama una protoenzima o cimgeno.
H Se retira un pequeo segmento para activar la enzima.
Sustrato 2 Enzima
La activacin no tiene lugar sino hasta despus de haber sido secretadas de la clula. El sufijo geno, se usa cuando se le da nombre a los cimgenos.
Pepsina
Co-F
Enzima
Figura 3 Estructuras de un Pepsingeno. El acido Hidroclrico ataca la cadena de pptidos en el pun H, lo que resulta en una Pepsina activa.
Preguntas Gua
La Figura 2 ilustra la relacin entre el cofactor de la enzima y el sustrato. El cofactor puede alterar a adicionarle al centro activo de forma que el sustrato de ajuste y pueda ocurrir la reaccin.
Sustrato 3
Enzima
Sustrato 3 Co-F
1. Defina los trminos enzima, cofactor, coenzima y centro activo. 2. Que evita que la proteasa Pepsina digiera la clula que la produce? 3. complete los diagramas que siguen y marque cada uno con la lista de la derecha. Enzima Cofactor Sustrato Centro Activo Complejo enzima-cofactor Complejo enzima-sustrato-cofactor
Complejo enzima-sustrato-cofactor
La Carboxipeptidasa es una enzima del sistema digestivo humano que rompe las protenas en unidades ms pequeas. El centro active de la carboxipeptidasa incluye un tomo de zinc (ion cofactor metlico).
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Actividad 3: Cmo actan las enzimas

Ya desde 1894 el cientfico alemn, Emil Fischer sugiri una hiptesis para explicar cmo actan las enzimas proponiendo que solo si la enzima y el sustrato tienen forma geomtrica similar pueden aproximarse las molculas de una y otro. El mecanismo candado-llave de Fischer sugiere que el sustrato se ajusta a una cavidad en la superficie de la enzima similar a la de una llave que entra en un candado. Para que una reaccin tenga lugar, la enzima y el sustrato deben ajustarse como lo hace la llave a su candado. Esta hiptesis explicaba por qu las enzimas eran tan especiales. El sustrato tena que cumplir con una forma y configuracin qumica nica para unirse al centro activo de la enzima. Fischer pensaba que si los sustratos tenan una geometra molecular distinta, no le serviran al candado y por tanto no ocurrira una reaccin. En 1963 Daniel Koshland modifico el mecanismo de accin de las enzimas propuesto por Fisher. Koshland sugiri que la enzima era ms flexible de lo que se pensaba. Con un mecanismo de ajuste inducido, el centro activo de la enzima sufra cambios en su forma en presencia del sustrato. La unin del sustrato hace que la enzima cambie de forma para que se ajuste exactamente a ella. Koshland dedujo que la enzima era una molcula de sostn que le daba la ms ventajosa orientacin al sustrato de forma que las uniones qumicas pudieran hacerse y deshacerse.
Enzima Centro Activo
En cualquier caso, la reaccin catalizada ocurre en dos etapas: S+ E S = sustrato SE E = enzima P+E P = producto o
La formacin del complejo enzima-sustrato se debe a fuerzas electrostticas ente las dos que alinean el sustrato de la mejor forma para la reaccin. el Producto o que as se forma se separa luego de la enzima. Esto permite que la enzima quede disponible para trabajar con otras molculas de sustrato.
Reacciones catalizadas por enzimas
Sustrato
Por lo general, todas las reacciones de enzimas catalizadas se clasifican en dos categoras: 1. Anabolismo - Pequeas molculas se unen entre s para formar molculas complejas.
Complejo Enzima-Sustrato
A+B
Enzima
AB
2. Catabolismo Molculas complejas se dividen en molculas simples.

Productos
AB
Enzima
A+B
Algunas enzimas pueden catalizar ambos tipos de reaccin. La enzima acta en ambos sentidos hasta que encuentra equilibrio.
Preguntas Gua
Enzima Enzima
1. Con base en sus propios diagramas, describa la principal diferencia entre las teoras de Fischer y de Koshland acerca de la accin de las enzimas. 2. Dibuje estas figures e identifique en ellas: La Enzima El Sustrato El Producto o El complejo enzima-sustrato 3. Para cada una de las reacciones siguientes, clasifquela como anablica o catablica. a. Harina que forma glucosa b. La digestin de las protenas c. La digestin de las grasas d. Glicgeno que forma glucosa e. Aminocidos enlazados para formar protenas.
Sustrato Productos
Sustrato
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Actividad 4: Factores que Afectan la Accin de las Enzimas

Son muchos los factores que afectan la actividad de las enzimas: La concentracin de las enzimas La concentracin del sustrato La concentracin del Producto o La Temperatura El pH Inhibidores y venenos
Grfico 3 Velocidad de Reaccin vs Concentracin de Sustrato

Mxima Velocidad
Velocidad de Reaccin
1/2 Mxima Velocidad
Km Concentracin de Sustrato
La concentracin de las enzimas
A medida que aumenta la concentracin, la velocidad de reaccin aumenta de forma lineal. A mayor concentracin de enzimas, mayor velocidad de reaccin. Grfico 1& 2 Velocidad de Reaccin vs Concentracin de Enzimas
Km representa la concentracin del sustrato a la cual la enzima trabaja a la mitad de su mxima velocidad. El valor Km se utiliza para comparar enzimas distintas.
La concentracin del Producto
Una enzima solo puede acelerar una reaccin. No permitir que una reaccin ocurra si no debe ocurrir bajo condiciones normales. Si la reaccin es reversible, entonces la misma. A+B C+D
Concentracin de Enzimas
Concentracin de Enzimas
enzima puede usarse para que la reaccin proceda de ambas formas. En este caso, la direccin de la reaccin depende de las concentraciones relativas de sustrato y Producto o. Cualquier exceso de sustrato enviara la reaccin hacia la derecha, mientras que un exceso de Producto o lo har hacia la izquierda. La enzima acelerara la reaccin en cualquiera de las direcciones hasta que se logre un equilibrio. e.g. cuando el efecto de la reaccin a la derecha sea igual al de la reaccin hacia la izquierda. En el ltimo caso, la creciente concentracin del Producto o reduce la velocidad de formacin de Producto o a partir del sustrato. De hecho, el Producto o se convierte en sustrato. El Grfico 4 muestra el estado de equilibro en la accin de una lipasa sobre una grasa. Grfico 4 Lipasa en accin
Conc. Acidos Grasos
Grfico 1 Velocidad de Reaccin vs Concentracin de Enzimas con exceso de sustrato. Grfico 2 Velocidad de Reaccin vs Concentracin de Enzimas donde la concentracin de enzimas es infinita. En el Grfico 2 la concentracin de sustrato se convierte en factor limitante a la velocidad de reaccin. cuando el sustrato est saturado de la enzima, la adicin de ms enzimas no tendr ningn efecto en la velocidad de reaccin.
La concentracin del sustrato
Por el grfico 3 podemos observar que inicialmente la velocidad de la reaccin aumenta en forma lineal con el aumento de concentracin de sustrato. Luego de esta fase inicial, la velocidad se reduce hasta llegar a un mximo. La enzima se satura de sustrato y la reaccin se hace dependiente del tiempo de actividad de la enzima. Cada enzima se encuentra ocupada todo el tiempo y la liberacin de Producto o por parte de la enzima se convierte en una reaccin en cuello de botella.
Sntesis de lpidos Hidrlisis de lpidos
Tiempo (Hrs)
La direccin de la reaccin de arriba depende de la concentracin relativa de acido graso (Producto o). Una alta concentracin de cidos grasos lleva a una sntesis de lpidos, mientras que una baja concentracin de cidos grasos tiene como resultado una hidrlisis de lpidos para la formacin de ms cidos grasos.
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Temperatura
Todas las reacciones aumentan con un aumento de la temperatura. La energa adicional impartida a las molculas por efecto del calor, aumenta la energa cintica (K.E) de las molculas. El mayor movimiento de las molculas aumenta la probabilidad de que estas choquen entre s. Son estas colisiones entre reactivos las que descomponen y crean enlaces qumicos entre las molculas reactivas. En una reaccin catalizada, aumentar la temperatura incrementa la energa cintica de enzimas y sustratos y por tanto aumenta la probabilidad de que esas dos molculas se encuentren y se combinen. Pero aumentar la temperatura tambin reduce la actividad de las enzimas. Como todas las protenas, las enzimas se destruyen aumentado la temperatura. Los enlaces dbiles que la sostienen en su forma tridimensional nica, se rompen y el bucle de la cadena polipptida se desenrolla. Cuando esto ocurre, la configuracin del centro activo se altera y en algunos casos se pierde. Si furamos a graficar las velocidades de reaccin de las enzimas contra temperatura, tendramos una grafica como la que presentamos en el Grafico 5. Grfico 5 Velocidad de Reaccin vs Temperatura
El pH
Toda enzima tiene un cierto pH en la cual es ms activa, conocido como su pH Optimo. La mayora tiene su pH optimo dentro del rango de 6-8, pero hay excepciones. e.g. la pepsina, pH 1-2, la Tripsina, pH 8. Al igual que con la temperatura, el pH optimo refleja el ambiente en el que se encuentra la enzima. El grfico 6 muestra una velocidad tpica de reaccin vs su pH.. Grfico 6 Velocidad de Reaccin vs pH
Pepsina
Tripsina
7 pH
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El enlace del sustrato al centro activo se debe en parte en las cargas electrostticas de cada cual y a la atraccin resultante. Tanto el estado de carga del centro activo como del sustrato se ven afectados por cambios en los niveles de pH. Grfico 7 Temperatura (C) Carga Vs pH
Probabilidad de que el Centro Activo tenga Carga Positiva
Probabilidad de que el Sustrato tenga Carga Negativa
La velocidad de reaccin aumenta inicialmente a un mximo luego de lo cual baja. La parte superior de este grafico recibe el nombre de Temperatura Optima de la Enzima. A esa temperatura, la ganancia en velocidad de reaccin a causa de aumento en la temperatura se equilibra con la perdida de actividad enzimtica por causa de desnaturalizacin. Las temperaturas optimas de las enzimas generalmente reflejan la temperatura ambiental del organismo del cual provienen. Para un pez rtico, la temperatura optima puede ser tan baja como 5 C, mientras que para bacterias de aguas termales esta puede estar en el rango de los 70-80 C . La velocidad de desnaturalizacin difiere entre las especies, pero la mayora de las enzimas se desnaturalizan a temperaturas sobre los 60 C.
Probabilidad
Probabilidad de que el sustrato se enlace a la Enzima.
pH
Grfico 7: El pH ptimo corresponde al pH que la enzima probablemente tenga bajo una carga opuesta a la del sustrato.
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Inhibidores y Venenos
Los inhibidores son sustancias que cuando estn presentes, reducen la actividad cataltica de una enzima.
Preguntas Gua
1. El Cuajo contiene una enzima llamada renina que cuaja la leche. Una tableta de cuajo se disuelve en agua y luego se hicieron 5 diluciones en 5 tubos de ensayo. A los tubos se aaden 10 ml(cm3) de leche. Seguidamente, se incuban los tubos a 35C y se registro el tiempo que tomo la leche en solidificarse en cada tubo. Se produjo el siguiente grafico: Grfico 8 Tiempo vs Concentracin de Renina Tiempo de Solidificacion
Inhibidores Competitivos:
Los inhibidores competitivos son sustancias que tienen suficiente similitud con el sustrato, que pueden ocupar un centro activo. No se obtiene ningn Producto o, pero evitan que el sustrato se combine con la enzima. El efecto de los inhibidores competitivos se puede obviar aumentando las concentraciones de sustrato; e.g. Inhibicin del malonato sobre la enzima succinato deshidrogenasa.
CH2COOH CH2COOH Succinato
CHCOOH CHCOOH Fumarato
COOH CH2 COOH Malonato
El malonato tiene la misma configuracin qumica del succinato y por tanto ocupa el mismo centro activo. De ah que se le clasifique como inhibidor competitivo. En este diagrama, el Inhibidor C ocupa el mismo Sustrato 1 centro activo del sustrato 1 y acta como inhibidor competitivo.
Sustrato 1
Enzima
2 3 4 Tubo de Ensayo
Sustrato 1
a) Que tubo tiene la mayor concentracin de enzima? b) Cual tiene la menor concentracin? c) Por que no mejora el tiempo entre los tubos 4 y 5? d) Cul de los tubos tuvo una mayor velocidad de reaccin? 2. Para una concentracin de enzima dada, la curva de velocidad de reaccin vs concentracin de sustrato se ve como el grafico 9. Grfico 9 Velocidad de Reaccin vs Concentracin de sustrato
Sustrato 1
Inh.C Enzima
Inh.C
Enzima
Sustrato 2
Enzima
Inh. Enzima
En este caso el inhibidor ocupa un lugar diferente de la enzima y al hacerlo, altera el centro activo para el sustrato.
Enzima
Reaction Rate
presencia en la enzima evita la unin del sustrato alterando el centro activo de la Inh. enzima.
Sustrato 2 Enzima
Velocidad Rate Reactionde Reaccin
Inhibidores Acompetitivos ocupan un sitio distinto de la enzima. Su Enzima
Enzyme Concentration
Tal inhibidor se conoce como Acompetitivo. Este tipo de inhibicin no puede reducirse al aumentar de los niveles de sustrato, puesto que este sigue ligado a su sitio secundario y vuelve inactiva a la enzima.
Haga un grfico similar en sus notas, e indique en l la forma que tomara la curva si la concentracin de enzima fuera la mitad de la original.
Enzyme Concentration
Concentracin de sustrato
22
23
3.
Cmo cambia la actividad de la enzima con cambios en: a) Temperatura ? b) pH ? Grfico 10 Concentracin de Producto o vs Tiempo
Producto o Obtenido
50C 60C 70C 40C 80C
6.
Lea la siguiente informacin relativa a algunos inhibidores comunes. Los organofosfatos tales como el gas nervioso y el Malathion se unen al centro activo de la enzima acetilcolinesterasa. Esta enzima es responsable de descargar impulsos nerviosos. Su inhibicin lleva a parlisis. El cianuro se combina con los cofactores de Fe2+ en muchas enzimas importantes en la respiracin, afectando as la forma de sus centros activos. La penicilina inhibe la produccin de paredes celulares en las bacterias enlazndose a un sitio que cambia el centro activo a cargo de la produccin de muco-protenas.
4.
Tiempo
a) Describa el efecto que 80C tienen sobre la enzima. b) A partir de esta informacin, cual es la temperatura ptima de la enzima? 5. Se hizo la comparacin de bacteria y descomposicin en ciertas verduras a distintos niveles de pH. Grfico 11 Concentracin de Bacteria vs pH
Clasifique estos inhibidores como competitivos o acompetitivos. a) Organofosfatos b) Cianuro c) Penicilina
Preguntas Adicionales
Concentracin Bacteriana
7 pH
a) A partir de la informacin del grfico, cual es la relevancia de decapar (encurtir) una verdura en vinagre? b) Qu efecto puede tener el enfriamiento en la velocidad de descomposicin de las verduras? Explique.
24
25
Actividad 5: Aplicaciones Prcticas de las Enzimas

Alcohol Deshidrogenasa
Empleado en el anlisis de concentracin de alcohol en la sangre. Pruebas de CAS para automovilistas. Mejora la accin de la levadura en la fabricacin del pan. Permite que la levadura produzca ms CO2 y mejore su textura. Disuelve la gelatina en las pelculas de Rayos X para permitir la recuperacin de la plata en el proceso de reciclaje.
Preguntas Gua
1. Con base en la informacin de la pgina anterior, complete la tabla 1 que sigue: Tabla 1 Uso de las Enzimas Enzima Accin Aplicacin
Alcohol
Acetaldehdo
Amilasas
Amidones
Glucosa
Ficina
Protenas
Polipptidos
Tripsina
Protenas
Pequeos Pptidos
Predigestion de la papilla para bebes.
Renina
Coagula la Leche.
Se usa en la fabricacin de quesos
Subtilisina
La contienen algunos detergentes en polvo para retirar manchas de origen protenico, e.g. Sangre.
Protenas
Polipptidos
2. Algunas personas son sensible a la penicilina como antibitico. La enzima penicilinasa, producida por ciertas bacterias puede usarse para el tratamiento de pacientes que presentan alergia a la penicilina. Como trabaja en ese caso la penicilinasa?
Celulasa
Celulosa
Carbohidratos simples
Aclara los jugos de frutas.
3. Algunas enzimas dan lugar a Producto os que reaccionan cambiando de color. Dado que la temperatura afecta la actividad de las enzimas, como podra utilizarse una enzima as, para indicar si los alimentos se han descongelado accidentalmente?
Papana
Evita la turbidez en la cerveza cuando se enfra. Se usa tambin para ablandar Producto os crnicos. Descompone las paredes celulares de las bacterias hidrolizando muco-pptidos. Usada en el tratamiento de infecciones de los ojos.
Laboratorio de Enzima Newbyte Educational Software Newbyte Educational Software Laboratorio de Enzima
Protenas
Polipptidos
Lisozima
Preguntas Adicionales:
26
27
Actividad 6: Nomenclatura Cmo se le da el nombre a las enzimas

Por lo general el nombre de una enzima indica el sustrato con el que interacta. El sufijo asa se aade al nombre del sustrato. e.g. La ureasa ataca la urea. La tirosinasa ataca la tirosina. Los nombres tradicionales de algunas enzimas se mantienen en uso comn, como la Pepsina, la Catalasa, la Quimotripsina, y la Papana. Dichos nombres se derivaron casi siempre de la fuente de la enzima. As por ejemplo, la papana proviene de la fruta verde del papayo. (La misma palabra enzima, viene del griego, en levadura). Las enzimas se clasifican en 6 grandes grupos dependiendo del tipo de reaccin que se catalice.
Transferasas - Transfieren un grupo qumico de una molcula a otra.

Las reacciones de transferencia pueden involucrar grupos fosfato, metal, o amida. Ejemplos de estos son: Transaminasas Transmetilasas Esa reaccin para la glutmico-asprtico aminotransferasa se presenta a continuacin:
COOH CH2 CH2 CHNH2 COOH Acido Glutmico + +
COOH CH2 C=O COOH
COOH CH2 CH2 C=O COOH +
COOH CH2 CHNH2 COOH
Hidrolasas - Reacciones Hidrolticas.

Estas enzimas introducen agua en ciertas uniones de sus sustratos. Son a menudo reversibles. e.g. Enzimas de la digestin: amilasas lactasa maltasa sacarasa proteasas lipasas A continuacin, la ecuacin de la hidrlisis de la sacarasa por accin de la enzima hidrolasa invertasa. Agua + Sacarosa Glucosa + Fructosa
Acido Oxaloactico
Acido + Alfacetoglutrico
Acido Asprtico
Liasas - Retira grupos de una molcula de forma no hidroltica.

Un tipo de liasa, las descarboxilasas retiran el dixido de carbono de los cidos carboxlicos. La enzima Lisina descarboxilasa convierte la lisina en cadaverina.
CH2 (CH2)3 CH COOH Lisina
NH2
CH2 (CH2)3
NH2 + CO2 NH2
Oxidoreductasas - Reacciones de Oxidacin-Reduccin.

Las oxidoreductasas suministran energa a otros procesos celulares y transforman constituyentes dietticos. e.g. Deshidrogenasas Oxidasas Peroxidasas La alcohol deshidrogenasa, que se halla concentrada en el hgado, descompone el alcohol en el cuerpo.
NH2
CH2
Cadaverina
+ Dixido de Carbono
Alcohol + NAD+
Acetaldehdo + NADH + H+
28
29
Isomerasas - Ismeros que originan cambios intra-moleculares.

Los ismeros tienen la misma frmula molecular pero distinta forma estructural. Las isomerasas convierten un ismero en otro y otro reacomodando sus molculas. e.g. cis-trans Isomerasa. La fosfohexosa isomerasa cataliza la siguiente reaccin: Glucosa 6-fosfato Fructosa 6-fosfato
Preguntas Gua
1. Que sustratos catalizan las siguientes enzimas? a) Proteasa b) Lipasa c) Carbohidrasa d) Peroxidasa
2. Cmo podra usar un Ingeniero Gentico la Ligasa para desarrollar una nueva cepa bacteriana?
Ligasas - Combina la hidrolisis de la adenosina trifosfato (ATP) - tambin llamada trifosfato de adenosina, con los enlaces de dos sustratos.
Estas enzimas tambin se conocen como sintetasas. Las ligasas son enzimas de unin. La ligasa ADN puede emplearse para descomponer y unir segmentos del ADN. Esta accin es la base de tcnicas de INGENIERIA GENETICA en las que se crean bacterias a travs del corte y pegado de informacin gentica en forma de ADN.
3.a) Cul de los compuestos (A, B, C) representa a la enzima, cul el Producto o y cul el sustrato en estos diagramas?
A
La enzima: El Producto o: El sustrato: 3.b) Qu otro compuesto se halla presente en la reaccin? 3.c) Clasifique esta enzima.
agua A
Bucle de ADN bacteriano
Segment eliminado
C'' B C'
Ligasa Nuevo captulo de ADN Nuevo bucle de ADN bacteriano

4. Se dan una serie de reacciones en las que cierta cantidad de nucletidos se combinan formando una cepa larga de ADN. Qu tipo de enzima se uso para catalizar estas reacciones? 5. Lactosa, Maltosa, Urea y Tirosina.
Esta tcnica fue empleada en la produccin de una bacteria que produce la insulina humana. En el proceso, un segmento del ADN capaz de producir la insulina se inserta al ADN de una bacteria husped.
Ponga al frente de la enzima ms probable, cada uno de los sustratos mencionados arriba: Enzima Sustrato Maltasa Tirosinasa Lactasa Ureasa
30
31
Exp 1: La Amilasa Humana & Variaciones de Temperatura

Nombre :___________________________ Fecha:______________
Resultados: Complete esta tabla a mano o imprima los datos desde el men. Tabla 1
Temperatura
Introduccin:
(C )
(Unidades Arbitrarias)
Todas las enzimas tienen una temperatura ptima a la cual trabajan mejor. Nuestros cuerpos tienen problema para funcionar si estamos muy acalorados o sentimos demasiado fro. Las enzimas de comportan de forma similar. La -amilasa humana es una enzima de la digestin, presente en la saliva y los jugos pancreticos. Esta enzima es responsable de la descomposicin de los almidones en maltosa, isomaltosa y glucosa. Gran parte de esa descomposicin ocurre en el intestino delgado porque el bajo pH del estomago desactiva la enzima, que trabaja mejor en un pH de 7. Al igual que con otras enzimas, una alta temperatura desnaturaliza (afecta) la -amilasa.
Concentracin Restante de la Enzima

Objetivo:
Investigar el efecto de cambios en la temperatura sobre la actividad de la -amilasa humana.
Procedimiento:
Durante esta actividad estaremos empleando el computador para similar una serie de experimentos en 101 tubos de ensayo, cada uno 1C ms caliente que el anterior. Enzimas y sustratos se incuban por 5 minutos a distintas temperaturas antes de combinarlas para iniciar los experimentos. 1. Escoja Series de Experimentos y con el men de Archivo > Cargar Experimento cargue el Exp_1.els del directorio Experimentos Guardados. Asegrese de que los siguientes pre-esTablacidos estn correctos: Sustrato Almidn 100 100 Enzima -amilasa 100 100 Producto Maltosa 0 0 Inhibidor Ninguno 0 0 Temperatura 0 100 pH 7.0 7.0 El men de Grficos en Producto y no hay ningn grafico visible. 2. Haga clic en el botn de Inicio y preprese a hacerle clic al botn de pausa cuando el experimento haya llegado a 1 minuto. Pista: Apague el Turbo a los 50 segundos. 3. Haga clic en el botn de Datos al lado de la pantalla para observar los datos recogidos. Complete la tabla de la siguiente pgina o imprima los datos usando la opcin de imprimir en la parte superior del men de datos. 4. Diagrame la velocidad de reaccin en el Grfico 1 empleando para ello una lnea sencilla. Esto se puede hacer fcilmente escogiendo la Velocidad inicial de reaccin del men de grficos. 5. Dibuje una grafica de la Concentracin de la enzima en el Grafico 2, tambin con una sola lnea. Esto se hace fcilmente escogindola del men de grficos.
0 10 20 30 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 50 60 70 80 100
100
Grfico 1 Velocidad de Reaccin
Velocidad de 50 Reaccin
20
40 60 80 Temperatura (C)
100
32
Newbyte Educational Software Newbyte Educational Software
33
100
Grfico 2 Enzima Restante
Preguntas Gua 1. Con base en el Grfico 3, a que temperatura (Temperatura ptima) parece estar ms activa la -amilasa ?
50 2. Cul es la importancia biolgica de esta temperatura?
20
100
Traslade los datos de la Tabla 1 al grfico a continuacin:

Grfico 3 Velocidad de Reaccin vs Temperatura
3. En la gran mayora de reacciones qumicas, a mayor temperatura mayor velocidad de reaccin. Por qu, entonces, se reduce la velocidad de la reaccin luego de haber alcanzado la temperatura optima?
100
4. Si se incuba una solucin a 100C por varios minutes y luego se enfra a 35C, la Velocidad de Reaccin seria de cero. Por qu?
5. La -amilasa humana acta sobre los almidones produciendo qu 3 productos? 50 6. Los perros no tienen amilasas salivares. Puede sugerir por qu ha habido muy poca presin evolutiva para que la desarrollen?
20
40 60 Temperatura (C)
80
100
34
35
Exp 2: Variacin de Temperatura y Enzimas

Nombre :___________________________ Fecha:______________
Resultados
Temperatura (C ) 20 30 32 34 36 38 40 42 44 50 60 62 64 66 68 70 72 80 90 100
Tabla 1
Velocidad de Reaccin Conc. Restante de la Enzima
Introduccin:
Todas las enzimas tienen una temperatura ptima a la cual trabajan mejor. Nuestros cuerpos tienen problema para funcionar si estamos muy acalorados o sentimos demasiado fro. Las enzimas de comportan de forma similar. Las Proteasas son enzimas que descomponen las protenas durante la digestin, para formar pequeos pptidos.
Objetivo:
Investigar el efecto de variaciones de temperatura sobre la actividad de proteasas similares de distintas especies.
Procedimiento:
Durante esta actividad estaremos empleando el computador para similar una serie de experimentos en 101 tubos de ensayo, cada uno 1C ms caliente que el anterior. Enzimas y sustratos se incuban por 5 minutos a distintas temperaturas antes de combinarlas para iniciar los experimentos. 1. Escoja Series de Experimentos y con el men de Archivo > Cargar Experimento cargue el Exp_2.els del directorio Experimentos Guardados. Asegrese de que los siguientes pre-establacidos estn correctos: Sustrato Protena 100 100 Enzima Proteasa 1 100 100 Producto Pptidos 0 0 Inhibidor Ninguno 0 0 Temperatura 0 100 pH 5.0 5.0 El men de Grficos en Producto y no hay ningn grafico visible. 2. Haga clic en el botn de Inicio y preprese a hacerle clic al botn de pausa cuando el experimento haya llegado a 1 minuto. Pista: Apague el Turbo a los 50 segundos. 3. Haga clic en el botn de Datos al lado de la pantalla para observar los datos recogidos. Complete la tabla de la siguiente pgina o imprima los datos usando la opcin de imprimir en la parte superior del men de datos. 4. Diagrame la velocidad de reaccin en el Grfico 1 empleando para ello una lnea sencilla. Esto se puede hacer fcilmente escogiendo la velocidad inicial de reaccin del men de grficos. 5. Dibuje una grafica de la concentracin de la enzima en el Grafico 2, tambin con una sola lnea. Esto se hace fcilmente escogindola del men de grficos. 6. Haga clic en resTablacer y repita los pasos 2-5 luego de pasar a Proteasa 2. (Use un color distinto en las graficas e identifique cada lnea trazada)
100
20
100
36
37
100 Conc. Restante de la Enzima

Grfico 2 Enzima Restante
Preguntas Gua
1. Con base en el Grfico 3, Cuales son las temperaturas optimas probables de las Proteasas 1 y 2? 2. Al frente de cada fuente indique la enzima ms probable.
50
Ser Humano :Bacteria de Agua Caliente :3. Sugiera una razn de por qu la Proteasa 2 tiene una Temperatura Optima mucho mayor a la de la Proteasa 1.
20
100 4. Ambas enzimas son proteasas. Era de esperar que tuvieran estructuras moleculares idnticas. Por qu?

Grfico 3 Velocidad de Reaccin vs Temperatura
100
5. En el grfico a continuacin, dibuje una posible curva de velocidad de reaccin vs temperatura para una enzima proteasa de un pez del rtico. (Temperatura ambiental 5C) 100
50
0 0 0 20 40 60 Temperatura (C)
20
100
80
100
38
6. On the Grfico above sketch a possible Velocidad de Reaccin vs Temperatura curve for an protease enzyme from a polar bear. Label both curves.
Newbyte Educational Software Laboratorio de Enzima
39
Exp 3: El pH y la Actividad de la Enzima

Nombre :___________________________ Fecha:______________
Resultados
pH 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 8.5 9.0 9.5 10.0 10.5 11.0
Tabla 1
Introduccin:
Tripsina
Pepsina
La Pepsina y la Tripsina son enzimas proteasas, lo que indica que descomponen las molculas de las protenas como parte del proceso digestivo. La pepsina se encuentra en el estomago. La Tripsina es secretada del pncreas al duodeno. Ambas se liberan en forma de cimgeno inactivo y entran en accin en el estomago y el lumen del tracto intestinal. Proteasa Protena Pptidos
Objetivo:
Comparar el efecto del pH en la actividad de ambas proteasas de la digestin.
Procedimiento:
Durante esta actividad estaremos empleando el computador para similar una serie de experimentos en 101 tubos de ensayo, cada aumentar el pH de 0.1. 1. Escoja Series de Experimentos y con el men de Archivo > Cargar Experimento cargue el Exp_3.els del directorio Experimentos Guardados. Asegrese de que los siguientes pre-establacidos estn correctos: Sustrato Protena 100 100 Enzima Tripsina 100 100 Producto Pptidos 0 0 Inhibidor Ninguno 0 0 Temperatura 37.0 37.0 pH 1.0 11.0 El men de Grficos en Producto y no hay ningn grafico visible. 2. Haga clic en el botn de Inicio y preprese a hacerle clic al botn de pausa cuando el experimento haya llegado a 1 minuto. Pista: Apague el Turbo a los 50 segundos. 3. Haga clic en el botn de Datos al lado de la pantalla para observar los datos recogidos. Complete la tabla de la siguiente pgina o imprima los datos usando la opcin de imprimir en la parte superior del men de datos. 4. Diagrame la velocidad de reaccin en el Grfico 1 empleando para ello una lnea sencilla. Esto se puede hacer fcilmente escogiendo la velocidad inicial de reaccin del men de grficos. 5. Dibuje una grafica de la concentracin de la enzima en el Grafico 2, tambin con una sola lnea. Esto se hace fcilmente escogindola del men de grficos. 6. Haga clic en restablecer y repita los pasos 2-5 luego de pasar a Pepsina. (Use un color distinto en las graficas e identifique cada lnea trazada)
100
7 pH
11
40
41
Plot the data from Tabla 1 on the Grfico below.

Grfico 2 Velocidad de Reaccin vs pH
5. En el grfico que sigue, dibuje la posible velocidad de reaccin vs curva de pH para una proteasa que sea ms activa sobre pH 7.
100
100
50 0
7 pH
11
7 pH
11
6. El sustrato sobre el que acta la enzima afecta la forma como esta reacciona a distintas condiciones de pH. Puede ofrecer alguna idea de por qu?
Preguntas Gua
1. Con base en el Grafico 2, cuales son los pH ptimos de estas enzimas digestivas? 2. Sugiera por qu la Pepsina es mas activa a bajos niveles de pH. 3. Sugiera por qu la Tripsina es ms activa a niveles de pH mayores de 7. 4. Ambas enzimas son proteasas. Era de esperar que tuvieran estructuras moleculares idnticas. Por qu?
Actividades Sugeridas:
1. Disee un experimento para obtener el pH ptimo de dos enzimas diferentes en el laboratorio. Pruebe su mtodo utilizando la opcin Laboratorio de Investigacin de este programa. NOTA: El experimento 8 de este manual hace este tipo de experimento.
42
43
Exp 4: Concentracin de Enzimas

Nombre :___________________________ Fecha:______________
Resultados
Tabla 1 Concentracin de Velocidad de Enzima Reaccin

Introduccin:
La catalasa est presente en todas las clulas y en mayor concentracin en el hgado y las clulas de la sangre. Evita la acumulacin de ciertos perxidos txicos que se forman durante la respiracin. 2H2O2 Catalasa 2H2O + O2
La Catalasa acelera el proceso naturalmente por un factor de 1010.
Objetivo:
Investigar el efecto de la concentracin de la enzima catalasa en la descomposicin del perxido de hidrogeno.
Procedimiento:
Durante esta actividad estaremos empleando el computador para simular una serie de experimentos en 101 tubos de ensayo, cada uno contendr una unidad ms de enzimas que el anterior. 1. Escoja Series de Experimentos y con el men de Archivo > Cargar Experimento cargue el Exp_4.els del directorio Experimentos Guardados. Asegrese de que los siguientes pre-establacidos estn correctos: Sustrato Perxido de Hidrogeno 100 100 Enzima Catalasa 0 100 Producto Oxigeno 0 0 Inhibidor Ninguno 0 0 Temperatura 37.0 37.0 pH 7.0 7.0 El men de Grficos en Producto y no hay ningn grafico visible. 2. Haga clic en el botn de Inicio y preprese a hacerle clic al botn de pausa cuando el experimento haya llegado a 1 minuto. Pista: Apague el Turbo a los 50 segundos. 3. Haga clic en el botn de Datos al lado de la pantalla para observar los datos recogidos. Complete la tabla de la siguiente pgina o imprima los datos usando la opcin de imprimir en la parte superior del men de datos. 4. Diagrame la velocidad de reaccin en el Grfico 1 empleando para ello una lnea sencilla. Esto se puede hacer fcilmente escogiendo la velocidad inicial de reaccin del men de grficos.
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 65 60 65 70 75 80 85 90 95 100
10
20 40 60 80 100 Concentracin de Enzima (Unidades Arbitrarias)

44
45

Grfico 2 Velocidad de Reaccin vs Concentracin de Enzima
3. La mayora de los procesos metablicos ocurren en series de reacciones. Los productos de la reaccin catalizada por la enzima pueden pasarse a la siguiente: En una reaccin, el Paso 1 provee el sustrato para el Paso 2. Sustrato E1E2 Producto 1 Producto 2
10
Step-1
Step-2
En la ruta descrita arriba, la velocidad mxima del Paso 1 es de 3.0 m. mol/sec. y en el Paso 21, de 4.5 m.mol/sec. Cul sera la velocidad de la reaccin general que sigue?
Sustrato
Producto 2
4. Dada una misma ruta, la eficiencia de la reaccin en la formacin del producto 2 depender de que las velocidades de reaccin tanto de E1 como de E2 sean iguales. Si la velocidad de reaccin de E1 es el doble de la de E2, cmo puede la clula evitar la acumulacin de producto 1?
0 0 20 40 60 80 Concentracin de Enzima (Unidades Arbitrarias) 100
1. Haga un listado de los pasos necesarios en la construccin de un experimento que demuestre que el sustrato puede ser un factor limitante de la velocidad con que la enzima cataliza la reaccin. Pruebe su mtodo utilizando la opcin Laboratorio de Investigacin de este programa.
Preguntas Gua
1. A qu conclusin pudo llegar respecto de la concentracin de enzimas y la velocidad de reaccin en las secciones de 0-5 en el grafico?
2. Por qu se nivela la velocidad de reaccin cuando las concentraciones de enzima son mayores?
46
47
Exp 5: Concentracin de Sustrato

Nombre :___________________________ Fecha:______________
Resultados
Tabla 1 Concentracin de Velocidad de Sustrato Reaccin

Introduccin:
La catalasa est presente en todas las clulas y en mayor concentracin en el hgado y las clulas de la sangre. Evita la acumulacin de ciertos perxidos txicos que se forman durante la respiracin. 2H2O2 Catalasa 2H2O + O2
La Catalasa acelera el proceso naturalmente por un factor de 1010.
Objetivo:
Investigar el efecto de la concentracin de perxido de hidrgeno en la velocidad de reaccin de la enzima catalasa.
Procedimiento:
Durante esta actividad estaremos empleando el computador para simular una serie de experimentos en 101 tubos de ensayo, cada uno contendr una unidad ms de enzimas que el anterior. 1. Escoja Series de Experimentos y con el men de Archivo > Cargar Experimento cargue el Exp_5.els del directorio Experimentos Guardados. Asegrese de que los siguientes pre-establacidos estn correctos: Sustrato Perxido de Hidrogeno 0 100 Enzima Catalasa 10 10 Producto Oxigeno 0 0 Inhibidor Ninguno 0 0 Temperatura 37.0 37.0 pH 7.0 7.0 El men de Grficos en Producto y no hay ningn grafico visible. 2. Haga clic en el botn de Inicio y preprese a hacerle clic al botn de pausa cuando el experimento haya llegado a 1 minuto. Pista: Apague el Turbo a los 50 segundos. 3. Haga clic en el botn de Datos al lado de la pantalla para observar los datos recogidos. Complete la tabla de la siguiente pgina o imprima los datos usando la opcin de imprimir en la parte superior del men de datos. 4. Diagrame la velocidad de reaccin en el Grfico 1 empleando para ello una lnea sencilla. Esto se puede hacer fcilmente escogiendo la velocidad inicial de reaccin del men de grficos.
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 65 60 65 70 75 80 85 90 95 100
10
0 20 40 60 80 100 Concentracin de Sustrato ((Unidades Arbitrarias)

48
49

Grfico 2 Velocidad de Reaccin vs Concentracin de Sustrato
3. Si la concentracin de enzima fuera mayor, como afectara esto el grfico?
10
4. En el grafico que sigue, dibuje la curva que resultara si la concentracin de enzimas fuera la mitad de la del grafico 1. 10
Velocidad de 5 Reaccin 0 20 40 60 Concentracin de Sustrato 80 100

(Unidades Arbitrarias) (Unidades Arbitrarias)
Preguntas Gua
1. Describa la relacin entre concentracin de sustrato y velocidad de reaccin.
0 20 40 60 Concentracin de Sustrato
80
100
1. Haga un listado de los pasos necesarios en la construccin de un experimento que demuestre que la enzima puede ser un factor limitante de la velocidad con que la enzima cataliza la reaccin. Pruebe su mtodo utilizando la opcin Laboratorio de Investigacin de este programa.
2. Por qu se nivela la grfica?
Preguntas Adicionales: 50
51
Exp 6: Las Enzimas y sus Productos

Nombre :___________________________ Fecha:______________
Resultados
Substrato
Tabla 1 Enzima
Productos
Introduccin:
Las enzimas tienen acciones muy especificas. Una enzima puede actuar en ms de un sustrato si ambos tienen una formacin molecular comn. Algunos sustratos pueden recibir la accin de distintas enzimas.
-amilasa
Objetivo:
Identificar los sustratos y productos de distintas enzimas.
Procedimiento:
Estos son experimentos realistas. Las concentraciones de sustrato y de producto en el matraz cambian segn avanza el experimento. Si se cambiaran el sustrato o la enzima, el programa dara inicio a un nuevo experimento; pero el producto que se est monitoreando s puede cambiarse a mitad del experimento. Para obtener buenos resultados, tendr que escoger la combinacin correcta de sustrato, enzima y producto. 1. Escoja Laboratorio de Investigacin. Seleccione la primera enzima de la tabla usando el botn Men de Enzimas a un lado de la palabra Enzima de la pantalla. 2. Escoja un sustrato usando el botn del Men de Sustratos. 3. Haga clic en Inicio. 4. Si la concentracin del sustrato decrece, es porque escogi una combinacin probable. Registre el sustrato con la encima correspondiente en la Tabla 1. Pista: Si se inicia la reaccin y no hay sustrato, pruebe cambiar el pH. 5. Si no tiene reaccin, vuelva al paso 2. 6. Si la concentracin de producto es mayor a cero, registre el producto y su correspondiente enzima en la Tabla 1. 7. Escoja un Producto Nuevo. Y repita los pasos 6 & 7 hasta que haya examinado todos los productos para cada combinacion enzima-sustrato que funcione. 8. Repita los pasos 2 a 8 hasta que todos los sustratos se hayan probado con la enzima. 9. Escoja la siguiente enzima y repita los pasos 2 a 9, hasta que haya probado todas las enzimas.
-amilasa
Catalasa
Lipasa
Pepsina
Tripsina
52
53
Preguntas de Comprensin:
1. El nombre comn del triglicrido es: 2. Cul es el grupo de compuestos de los que el almidn es ejemplo? 3. Otro ejemplo de un carbohidrato encontrado en los mamferos es: 4. Nombre de la enzima que sirve para descomponer el almidn. 5. Por qu es la descomposicin de los almidones un proceso necesario? 6. Cules son los productos de la digestin de las protenas? 7. Escriba en palabras la ecuacin para la descomposicin del perxido de hidrogeno: 8. Las enzimas son ....................... ; la parte directamente involucrada en la reaccin con el sustrato se conoce como ....................... . 10. La accin de una enzima se ve afectada por condiciones tales como ......................., ................, fuerza de ............, ............... de iones y la presencia de ................. . Preguntas Gua 1. Un ejemplo de dos enzimas que actan sobre un mismo sustrato es:
3. Existen dos enzimas distintas que hidrolizan el almidn. Cmo indican los resultados que puedan actuar de manera diferente?
4. Si dos enzimas actan sobre un mismo sustrato y obtienen el mismo producto, son necesariamente la misma enzima? Explique.
5. Qu reacciones de esta actividad dan como producto un gas?
6. Complete la Tabla siguiente conectando los sustratos, las enzimas y los productos con lneas. Substrate Enzyme Lipasa -Amilasa Triglicridos Perxido de Hidrogeno -Amilasa Pepsina Catalasa Trypsina Product Maltosa Acidos Grasos Dextrinas Pptidos Agua Glucosa Isomaltosa Glicerol Oxigeno
Protenas
Almidn
2. Por qu las enzimas solo actan sobre ciertos y determinados sustratos?
54
55
Exp 7: Temperatura Optima de las Enzimas

Nombre :___________________________ Fecha:______________
Resultados
Tabla 1 Temperatura (C) 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 Concentracin de Producto
Introduccin:
Todas las enzimas tienen una temperatura ptima a la cual trabajan mejor. Nuestros cuerpos tienen problema para funcionar si estamos muy acalorados o sentimos demasiado fro. Las enzimas de comportan de forma similar. Las proteasas son enzimas que descomponen protenas durante la digestin para formar pequeos pptidos.
Proteasa 1
Proteasa 2
Proteasa 3
Objetivos:
1. Encontrar la temperatura ptima de tres proteasas 2. Relacionar las enzimas estudiadas a su ambiente particular.
Procedimiento:
En este experimento se va a alterar la temperatura de cada solucin por un minuto. Las reaccin se puede seguir detectando la cantidad de sustrato que reacciona en un cierto periodo de tiempo. 1. Escoja Laboratorio de Investigacin, haga clic en Restablecer y borre toda grfica. 2. Asegrese de que los siguientes pre-establacidos estn correctos: Sustrato Protena 100 Enzima Proteasa 1 100 Producto Pptidos 0 Inhibidor Ninguno 0 Temperatura 37.0 pH 5.0 El men de Grficos en Producto y no hay ningn grafico visible. 3. Haga clic en el botn de Inicio y preprese a activar el botn de pausa cuando el experimento haya llegado a 1 minuto. Pista: Apague el Turbo a los 50 segundos. 4. Registre la concentracin del producto en la Tabla 1. 5. Haga clic en Restablecer. Esto devuelve todos los parmetros a sus valores iniciales. 6. Cambie la temperatura de su solucin al siguiente valor de la tabla. Repita los pasos 3 a 6 hasta que haya probado con todas las temperaturas. 7. Repita los pasos 2 a 7 para las dems enzimas. 8. Lleve los resultados al Grafico 1. (Cambie de color para cada caso)
56
57
Traslade los datos de la Tabla 1 al grfico a continuacin. (use la clave para distinguir las enzimas) 250
Grfico 1 Concentracin de Producto vs Temperatura
Preguntas para Discussion:

1. De sus resultados , cuales son las temperaturas optimas para las 3 enzimas?
200
2. Cmo se asemejan los tres grficos?
3. Cmo se asemejan las 3 enzimas?
Concentracin de Producto
4. Esperara usted que las estructuras moleculares de las enzimas fueran idnticas? 100 5. Cmo se relacionan las temperaturas optimas a los organismos en los que se encuentran?
6. A que temperatura empieza a decrecer la actividad de cada enzima por causa de desnaturalizacin? Marque esas tres reas en el Grfico 1. 0 20 40 60 Temperatura (C) 80 100
KEY _______________________ _______________________ _______________________
58
59
Exp 8: pH Optimo para Diferentes Enzimas

Nombre :___________________________ Fecha:______________
Resultados
pH Sugerido 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0
Tabla 1
Tripsina Pepsina
Concentrac ConcentracConcentrac Concentrac Sustrato Producto Sustrato Producto (Unidades) (Unidades) (Unidades) (Unidades)
Introduccin:
La Pepsina y la Tripsina son enzimas proteasas, lo que indica que descomponen las molculas de las protenas como parte del proceso digestivo. La pepsina se encuentra en el estomago. La Tripsina es secretada del pncreas al duodeno. Ambas se liberan en forma de cimgeno inactivo y entran en accin en el estomago y el lumen del tracto intestinal. Proteasa Protena Pptidos
Objetivo:
Encontrar el pH ptimo para dos proteasas humanas y referirlos a los ambientes en que operan.
Procedimiento:
Se les puede alterar el pH y por tanto comparar la actividad de la enzima bajo diferentes condiciones. La reaccin puede seguirse detectando la cantidad de sustrato que reacciona en un periodo de tiempo dado. 1. Escoja Laboratorio de Investigacin, haga clic en Restablecer y borre toda grfica. 2. Asegrese de que los siguientes pre-establacidos estn correctos: Sustrato Protena 100 Enzima Tripsina 100 Producto Pptidos 0 Inhibidor Ninguno 0 Temperatura 37.0 pH 1.0 El men de Grficos en Producto y no hay ningn grafico visible. 3. Haga clic en el botn de Inicio y preprese a activar el botn de pausa cuando el experimento haya llegado a 1 minuto. Pista: Apague el Turbo a los 50 segundos. 4. Registre las concentraciones de sustrato y producto en la Tabla. 5. Empiece un nuevo experimento haciendo clic en Restablecer. 6. Cambie el pH y repita los pasos 4 a 6 hasta que complete la tabla 7. Repita los pasos 3 a 6 para la pepsina. 8. Lleve los niveles de sustrato al Grafico 1 y los de producto al Grafico 2. (use un color diferente para cada Grafico)
Diagrame a continuacin los datos de sustrato de la tabla 1.

(use la clave para diferenciar las enzimas)
100
Grfico 1 Substrato vs pH
Concentracin de Sustrato (Unidades Arbitrarias) 50
Key 0
6 pH
10
60
61

indicate the different enzymes)
(use the key to
Preguntas Gua
1. Con base en sus resultados, cual es el pH optimo de las dos enzimas?
250
2. Cmo se asemejan las dos grficas? Concentracin de Producto (Unidades Arbitrarias) 200 3. Cmo se asemejan las enzimas?
4. Esperara usted que las estructuras moleculares de las enzimas fueran idnticas? 100
5. La tripsina se encuentra en el estomago. La pepsina en el intestino delgado. Como se relacionan los valores ptimos de pH al ambiente en el que se encuentran?
pH
10
6. Compare ambas graficas. Cmo se comparan los cambios en sustrato a los del nivel de producto?
Key
62
63
Exp 9: Actividad de la Catalasa

Nombre :___________________________ Fecha:______________
Resultados
Temperatura Sugerida (C) 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70
Introduccin:
Tabla 1 Concentrac Sustrato (U. A.)
Concentrac Producto (U. A.)
La Catalasa es una enzima que retira el perxido de hidrgeno txico de las clulas y lo convierte en agua y oxgeno. Se encuentra en altos niveles en el hgado, las clulas rojas de la sangre y en los riones. La catalasa tambin existe en plantas y microorganismos.
Objetivo:
Estudiar la temperatura y actividad de pH de la catalasa.
Procedimiento:
Se dar inicio a un nuevo experimento con cada nueva temperatura y nivel de pH. La reaccin puede seguirse detectando la cantidad de sustrato. 1. Escoja Laboratorio de Investigacin, haga clic en Restablecer y borre toda grfica. 2. Asegrese de que los siguientes pre-establacidos estn correctos: Sustrato Perxido de Hidrogeno 100 Enzima Catalasa 50 Producto Oxigeno 0 Inhibidor Ninguno 0 Temperatura 20.0 pH 70 El men de Grficos en Producto y no hay ningn grafico visible. 3. Haga clic en el botn de Inicio y preprese a activar el botn de pausa cuando el experimento haya llegado a 1 minuto. Pista: Apague el Turbo a los 50 segundos. 4. Registre las concentraciones de sustrato y enzima en la Tabla. 5. Empiece un nuevo experimento haciendo clic en Restablecer. 6. Cambie la temperatura al siguiente valor y repita los pasos 3 a 5. 7. De sus resultados escoja el mejor rango de temperatura para la enzima. 8. Trate de obtener una mayor velocidad de reaccin. (ms producto despus de 1 min.) probando con la temperatura. Registre sus resultados. 9. Use la misma tcnica para determinar el pH optimo de esta enzima con la temperatura fijada en la optima de las enzimas. Registre sus resultados en la Tabla 2.
Tabla 2 pH Concentrac Sugerido Producto (U. A.) 1.0 Temperatura ptima de la Catalasa: ___________ 2.0 3.0 4.0 pH ptimo de la Catalasa: ____________ 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0
64
65

Preguntas Gua
1. Por qu hay un aumento inicial en la actividad de la enzima con un aumento de temperatura? 2. por qu la actividad decrece rpidamente cuando se sobrepasa la temperatura ptima?
50
Concentracin de Producto 25
3. Por qu se encuentra la temperatura optima en este nivel particular? 4. En cul de las siguientes condiciones operaria efectivamente la catalasa? i) lumen del estomago: ii) lumen del intestino: iii) protoplasma de la clula: 5. Qu evidencia hay de que se produjo un gas en esta reaccin?
20
100
Plot the product data from Tabla 2.

Grfico 2 Concentracin de Producto vs pH
6. Dibuje la curva Sustrato vs Temperatura para la Catalasa usando los resultados de su experimento. Cmo se relaciona al grfico 1?
Grfico 3 Concentracin de Sustrato vs Temperatura
50
Concentracin de Producto 20
100
Concentracin de Sustrato
50
pH
10
20
66
100
67
Localizacin y Solucin de Problemas

El programa requiere de una tarjeta de video capaz de manejar miles de colores con una resolucin mnima de 1024 X 768. Visite nuestro sitio web en busca de actualizaciones GRATUITAS aun si acaba de comprar el producto. Para copiar datos del programa a una hoja de clculo exporte primero los datos como archivo de texto desde el men. Luego de hacer esto, cargue la hoja de calcula e importe desde all los datos. Reporte cualquier problema que pueda tener con este producto. Trataremos de resolver cualquier problema de inmediato.
Asistencia Tcnica:
Where can I obtain further help? For technical support contact: Newbyte Educational Software 12 John Street Dudley NSW 2290 Australia Ph: (02) 4942 6733 Fax: (02) 4944 8826 International: Ph: +61 2 4942 6733 Fax: +61 2 4944 8826 Email: espanol_support@newbyte.com Web Site: www.newbyte.com
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problem and any steps taken to relieve the problem computer make and model, for example, IBM P4 4.2 GHz. Windows version, e.g. Windows 2000, XP or Vista etc include the message on the screen, e.g. Not Enough Memory.
68

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Energas de Activacin en la descomposicin del Perxido de Hidrgeno.

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Actividad 2: Estructura de una Enzima

As the coenzyme is altered we might consider it more as a cosubstrate.

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2. Catabolismo Molculas complejas se dividen en molculas simples.

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Actividad 4: Factores que Afectan la Accin de las Enzimas

Grfico 3 Velocidad de Reaccin vs Concentracin de Sustrato

1/2 Mxima Velocidad

La concentracin de las enzimas

La concentracin del Producto

La concentracin del sustrato

Sntesis de lpidos Hidrlisis de lpidos

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Probabilidad de que el Centro Activo tenga Carga Positiva

Probabilidad de que el Sustrato tenga Carga Negativa

Probabilidad de que el sustrato se enlace a la Enzima.

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CH2COOH CH2COOH Succinato

CHCOOH CHCOOH Fumarato

COOH CH2 COOH Malonato

Velocidad Rate Reactionde Reaccin

Inhibidores Acompetitivos ocupan un sitio distinto de la enzima. Su Enzima

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Clasifique estos inhibidores como competitivos o acompetitivos. a) Organofosfatos b) Cianuro c) Penicilina

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Actividad 5: Aplicaciones Prcticas de las Enzimas

Predigestion de la papilla para bebes.

Aclara los jugos de frutas.

Actividad 6: Nomenclatura Cmo se le da el nombre a las enzimas

Transferasas - Transfieren un grupo qumico de una molcula a otra.

COOH CH2 CH2 CHNH2 COOH Acido Glutmico + +

COOH CH2 C=O COOH

COOH CH2 CH2 C=O COOH +

COOH CH2 CHNH2 COOH

Hidrolasas - Reacciones Hidrolticas.

Liasas - Retira grupos de una molcula de forma no hidroltica.

CH2 (CH2)3 CH COOH Lisina

KEY ___________ _ _____________