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DIVULGAO TCNICA Diversidade de bioaerossis presentes em ambientes urbanizados e preservados de um Campus universitrio.

DIVERSIDADE DE BIOAEROSSIS PRESENTES EM AMBIENTES URBANIZADOS E PRESERVADOS DE UM CAMPUS UNIVERSITRIO


L.D.M. Pantoja*, M.S. Couto, G.C. Paixo Universidade Estadual do Cear, Instituto Superior de Cincias Biomdicas Costa, Laboratrio de Microbiologia, Av. Paranjana, 1700, CEP 60740-903, Fortaleza, CE, Brasil. E-mail: lydiapantoja@bol.com.br
RESUMO Os bioaerossis so partculas de origem biolgica suspensas no ar, tendo como importantes constituintes os fungos anemfilos. O conhecimento da microbiota area de um dado local determinante para o diagnstico ecolgico, monitoramento da contaminao do ar e tratamento de alergias. A presente pesquisa se props a estabelecer a microbiota fngica e verificar possveis impactos das diferenas sazonais sobre o espectro fngico. Para isso realizou-se a identificao e contagem das colnias dos fungos presentes no ar de diferentes ambientes do Campus do Itaperi/ UECE. Foram analisadas 50 amostras de ar das quais se isolou 4.086 colnias pertencentes a 18 gneros, sendo os mais incidentes Aspergillus sp., Penicillium sp. e Fusarium sp. Observaram-se relaes positivas entre o nmero de colnias e os ambientes analisados, sendo a sala de aula o ambiente mais biocontaminado, porm no se encontrou correlao com a sazonalidade. Constatou-se que a diferena na concentrao do ar deva estar mais relacionada com os desequilbrios das atividades humanas, do que com as condies climticas da regio. PALAVRAS-CHAVE: Aerobiologia, bioaerossis, fungos anemfilos, Aspergillus sp. ABSTRACT DIVERSITY OF THE BIOAEROSOLS PRESENT IN URBANIZED ENVIRONMENT AND PRESERVES OF A UNIVERSITY CAMPUS. The bioaerosols are particles of biological origin suspended in the air, having as important constituents the airborne fungi. The knowledge of the airborne mycota in a certain site is determinative for ecological diagnosis, measuring of air contamination and allergy treatments. This study was carried out to establish the mycota and verify possible impacts of seasonal differences on fungal community. For this, it was performed identification and counting of fungi colonies existed in the air environment of different sites at UECE/Itaperi Campus. The analyses carried through 50 air samples, which were isolated 4,086 colonies belonging to 18 genera, being the most incidents Aspergillus sp., Penicillium sp. eFusarium sp. Positive relations between the number of colonies and the analyzed environments were observed, being the classroom the most biocontaminated environment, although correlations with seasonal changes were not observed. It was evidenced that the difference in air concentration should be more related to the unbalance in human activities than to the climatic conditions of the region. KEY WORDS: Aerobiology, bioaerosols, airborne fungi, Aspergillus sp.

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O aumento da contaminao do ar, em especial nos grandes centros urbanos, tem se tornado cada vez mais importante como fonte de agravo sade do homem e dos demais seres vivos. A Aerobiologia a cincia que estuda os organismos biolgicos presentes no ar (viveis ou no-viveis), suas origens, o transporte e a deposio em relao s condies meteorolgicas e seus impactos sobre seres humanos, animais ou plantas (MOREAU, 1994; BIEVRE , 1998; MAIN, 2003). Em interao com
*Iniciao Cientfica, Curso de Cincias Biolgicas.

outras cincias, como a biologia, fisiologia vegetal, micologia e meteorologia formam o alicerce bsico para estudar a produo, a liberao, o transporte e a deposio de bioaerossis. Os bioaerossis so definidos como partculas de origem biolgica, suspensas no ar (CAVINATTO, 1991). So numerosos e diversificados, compreendendo vrus, bactrias, fungos, cistos de protozorios, gros de plen, fragmentos de plantas e insetos. Essas partculas biolgicas podem perfazer de 10 a 50% da massa

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total do ar, dependendo da estao do ano e da localizao geogrfica. O tamanho das partculas pode variar de 0,01 m at mais de 100 m, sendo que os vrus correspondem s menores partculas biolgicas, enquanto os gros de plen apresentam partculas entre 10-150 m (MADELIN, 1994; WESTBROOK & ISARD, 1999; BURGE, 2002; MAIN, 2003). A colonizao do ar est diretamente relacionada s condies do ambiente, de forma que os microrganismos variam em qualidade e quantidade, dependendo do local analisado, podendo ainda ser, distintos dois tipos de microbiota area: de ambientes fechados e de ambientes abertos (PEI-CHIN et al., 2000a; PASTUSZKA et al., 2000; HUANG et al., 2002). Doenas infecciosas e no infecciosas induzidas pela inalao de diferentes bioaerossis dependem no apenas de suas propriedades biolgicas e composio qumica, mas tambm do nmero de partculas inaladas e stio em que se depositam no sistema respiratrio. Aerossis maiores que 10 m possuem baixa probabilidade de atravessar a regio nasal, os com dimetro de 5-10 m so depositados no sistema respiratrio superior e as partculas menores que 5 m, designadas de fraes respiratrias, so capazes de penetrar nos alvolos, causando infeces, reaes alrgicas e outras doenas graves (PASTUSZKA et al., 2000). Problemas respiratrios podem estar diretamente relacionados com a inalao de aeroalrgenos. Como forma usual de disperso, os fungos produzem propgulos que so estruturas muito leves e utilizam o ar como veculo de transporte, de forma que esto sempre presentes nesse meio. Os fungos so organismos de ampla distribuio e adaptados a vrios ambientes, sendo encontrados em quase todos os ecossistemas existentes no planeta (ALEXOPOULOS et al., 1996). Segundo AZEVEDO (1997) estes microrganismos despertam grande interesse prtico e cientfico devido as suas caractersticas biolgicas (saprofticos, parasitas e simbiontes), sendo considerados assim seres ubiquitrios, que podem facilmente utilizar substncias simples para o seu crescimento. Os fungos que comumente habitam o ambiente areo so denominados fungos anemfilos ou alergizantes, pertencentes a diversos gneros e espcies. Alguns estudos como os realizados por PEI-CHIN et al. (2000b), mostraram que a exposio a fungos do ar parece estar associada ao desenvolvimento de vrias doenas respiratrias. Assim, muitas asmas ditas de clima esto na dependncia ou em relao ntima com a flora mictica do ar, existindo, ainda outras patologias como aspergilose, pneumonite por hipersensibilidade, rinite e algumas reaes txicas, como toxicose sistmica aguda, alm de micoses com graus variados de dificuldade de tratamento (REPONEN et al., 1996). Tais problemas culminam com a ausncia de

estudantes escola e profissionais ao trabalho, ou a baixa produtividade em hospitais e ambientes ocupacionais (LI; KUO, 1992). Diferentes investigaes de campo sugerem que a distribuio fngica, em termos de concentraes e composies genricas, variam entre as reas geogrficas, sendo tambm influenciadas por fatores ambientais sazonais e climticos (PEI-CHIN et al., 2000a; HUANG et al., 2002). Apesar da necessidade de monitorao dos nveis de bioaerossis na avaliao dos riscos para a sade, diferenas entre amostradores automticos e tcnicas de cultivo dificultam a comparao dos resultados. No momento, no existe limite microbiolgico de exposio ocupacional (EDUARD & HEEDERIK, 1998). H numerosas propostas para determinao dos Valores Mximos Aceitveis (VMA) ou de conjuntos de valores que classifiquem as condies ambientais, com relao aos marcadores epidemiolgicos (fungos e bactrias), atravs de padres ou normas, indicados por rgos Governamentais, rgos e Sociedades Cientficas ou Privadas ou ainda atravs de projetos de pesquisa, experincia profissional ou consenso cientfico. Observa-se, porm, que essas propostas no so uniformes, sugerindo a possibilidade de variaes decorrentes de variveis macro-geogrficas, climticas e at mesmo scio-econmicas e tecnolgicas (RAO et al., 1996). No Brasil, o Conselho Nacional do Meio Ambiente, por meio da Resoluo n 3, de junho de 1990, estabelece os padres de qualidade do ar nos ambientes externos que, ultrapassados, podero afetar a sade, a segurana e o bem-estar da populao. No tocante s partculas inalveis, os padres primrios e secundrios so concentrao mdia anual de 50 g/m3 e concentrao de 150 g.m-3.dia-1, que no deve ser excedida mais de uma vez por ano (CONAMA, 1990). Enquanto que para os nveis de contaminantes biolgicos do ar de interiores, que variam enormemente em funo do tempo e espao, no existem mtodos e padres amplamente aceitos no pas. A despeito da reconhecida participao dos fungos em quadros de hipersensibilidade do trato respiratrio, as publicaes sobre a presena desses seres na atmosfera das cidades brasileiras ainda so reduzidas (GOMPERTZ et al., 1999). Com isso, atualmente, h grande dificuldade na caracterizao de certas doenas respiratrias, fato que pode ser parcialmente explicado pelo desconhecimento da microbiota fngica a que as populaes esto expostas. Assim, estudos sistematizados e peridicos da microbiota area podero permitir avanos no diagnstico e desenvolvimento de novos mtodos de abordagens de diferentes patologias. Desta forma, a presente pesquisa ao realizar estudos em reas urbanizadas e preservadas do Campus do Itaperi

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contribui para verificao dos possveis impactos das diferenas sazonais do semi-rido nordestino sobre o espectro fngico, bem como acrescenta informaes que possam ajudar em uma maior divulgao da aerobiologia em nosso pas. Coleta de amostras a) Caracterizao dos locais de coleta O experimento foi realizado no Campus do Itaperi da Universidade Estadual do Cear (UECE) situado a 03 47 S de latitude e 038 33 W de longitude, correspondendo a uma rea fsica total de 1.020.791 m2, localizado no Bairro do Itaperi, pertencente Secretaria Regional IV da Cidade de Fortaleza, Cear. A rea de estudo possui uma populao de transeuntes de aproximadamente 12.000 pessoas por dia. Dentro do Campus foram selecionados cinco locais, determinados por apresentarem caractersticas prprias, a saber: a Biblioteca Central e o Almoxarifado Central por serem ambientes areos estticos, midos e quentes que favorecem a proliferao dos fungos anemfilos; a Sala de Aula I-03 por se localizar em um local centralizado dentro do Campus e possuir ocupao nos trs turnos; a Praa de Alimentao por apresentar um elevado trnsito de transeuntes e uma rea Preservada localizada ao sul do Campus, ainda sem construes humanas e com pequena presena de transeuntes. b) Mtodo de coleta Para a coleta das amostras foi utilizado o mtodo da sedimentao passiva em placas de Petri de 150 mm de dimetro, contendo gar Sabouraud com 2% de dextrose, acrescido de cloranfenicol. Cada placa foi exposta por 12h, das 8 s 20h, em cada um dos cinco ambientes a uma altura de 2 m acima do solo, prximo rea de respirao humana (PEI-CHIN et al., 2000a). Coletas mensais foram realizadas entre os meses de agosto de 2004 a maio de 2005, em cada um dos locais perfazendo um total de 50 amostras. O perodo de coleta foi dividido em dois grupos: Grupo I (agosto a dezembro/2004) e Grupo II (janeiro a maio/2005), o que corresponde no Estado do Cear s estaes seca e chuvosa, respectivamente. Os dados climticos do Campus do Itaperi referentes s temperaturas mximas e mnimas, a mdia da umidade relativa do ar e a mdia da precipitao atmosfrica durante o perodo de coletas foram obtidos junto Fundao Cearense de Meteorologia e Recursos Hdricos (FUNCEME). Processamento laboratorial Aps o perodo de exposio, as placas foram vedadas com uma fina pelcula de plstico e incuba-

das temperatura de 25 - 28 C durante uma semana, realizando-se observaes dirias. A partir do aparecimento de colnias fngicas procedeu-se contagem das mesmas nas placas provenientes de cada ambiente. Aps a contagem global, realizou-se uma triagem, atravs das caractersticas macroscpicas, de todos os diferentes tipos de colnias, as quais foram, em seguida, repicadas individualmente para tubos com gar Sabouraud com 2% de dextrose, acrescido de cloranfenicol. Depois de purificadas, as colnias foram identificadas mediante a anlise conjunta dos aspectos macro-morfolgicos e micromorfolgicos segundo metodologia preconizada por SIDRIM et al. (2004) e HOOG et al. (2000). Anlise dos Dados Os dados foram analisados atravs de estatsticas descritivas, anlise de varincia e teste de Tukey para comparao das mdias. A contagem global de colnias de todos os ambientes resultou em 4.086 colnias de fungos. A Sala de Aula I-03 se destacou como o local com maior nmero de colnias (1.260), enquanto que na rea Preservada houve o crescimento de apenas 354 colnias. Na Tabela 1 percebe-se a relao existente entre o nmero total de colnias e o local selecionado para a coleta, onde os locais com maior movimentao de pessoas e disponibilidade de substratos orgnicos foram mais colonizados por fungos que reas com poucas atividades humanas. Esses achados se coadunam aos de Teresa et al. (2001), que realizaram pesquisa sobre a concentrao microbiana e a influncia de alguns fatores ambientais na disperso de bioaerossis em cmodos especficos do Prdio Tradicional da Faculdade de Cincias Farmacuticas UNESP, demonstrando que a concentrao desses bioaerossis em ambientes internos populosos superior a observada em ambientes onde existe menor circulao de pessoas. Foram isolados 18 gneros fngicos, sendo que os gneros Aspergillus sp., presente em 39 amostras (78%), Penicillium sp. (15 amostras - 30%) e Fusarium sp. (11 amostras - 22%) os mais comumente encontrados. Os demais gneros foram observados com menor freqncia conforme demonstrado na Figura 1. Os hifomicetos no identificados at gnero (4%) foram includos na ordem Agonomycetales (Mycelia sterilia). No tocante a composio do espectro de fungos anemfilos, este formado predo-minantemente por deuteromicetos filamentosos hialinos. O nico representante do grupo das leveduras foi o gnero Candida sp., presente em 2% das amostras. Entre estudos aerobiolgicos realizados em pases temperados apontam os fungos demceos, em especial o gnero Cladosporium sp., como os membros preponderantes

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no ar e na poeira (SOLOMON et al., 2006). No presente estudo, a incidncia de fungos demceos foi pequena, representada pelos gneros: Curvularia s p ., Cladosporium sp., Bipolaris sp. e Exserohilum sp., isolados em 10%, 4%, 2% e 2% das amostras, respectivamente.

Tabela 1 - Freqncia absoluta e mdia desvio padro (sd) de colnias por local de coleta. Local de coleta Freqncia absoluta de colnias 1.260 1.046 860 566 354 4.086 Mdia Sd

Sala de Aula I-03 Biblioteca Central Almoxarifado Central Praa de Alimentao rea Preservada Total

86,0 52,8 35,4 30,6 56,6 52,47 104,6 73,1 126,0 67,2 -

Fig. 1 - Participao relativa (%) dos principais gneros fngicos isolados nos diversos ambientes analisados.

Segundo LACAZ et al. (2002), os gneros Alternaria, Cladosporium, Fusarium, Ustilago, Paecilomyces, Scopulariopsis, Gliocladium, Verticillium, Trichoderma, Diplosporium, Trichothecium, Graphium, Streptomyces, Rhizopus, Acremonium, Mucor, Helminthosporium, Pullularia, Hemispora, Pleospora, Pestalotia, Monilia,Chaetomium, Teichospora, Aspergillus, Penicillium e Rhodotorula so os principais componentes fngicos do ar e da poeira, deste modo a maioria dos gneros ora isolados encontram-se dentro do esperado para esse habitat. Embora a Sala de Aula I-03 tenha se caracterizado como o ambiente com o maior nmero de colnias no

existe na literatura respaldo para uma possvel comparao dos dados presentes nesta pesquisa, estando disponveis apenas dados referentes ao ambiente com o segundo maior nmero de colnias que foi a Biblioteca Central. Assim, ao analisar especificamente a distribuio dos fungos no ar da Biblioteca Central da UECE, encontrou-se Acremonium blochii, Aspergillus flavus, Aspergillus niger, Aspergillus s p ., Fusarium clamidosporium, Fusarium sp., Mycelia sterilia, Mucor sp., Penicillium sp., Rhizopus sp. e Scytalidium hyalinum. em diferentes percentuais. GAMBALE et al. (1993) realizando trabalho de pesquisa da microbiota fngica do ar e de livros em 28 bibliotecas da Universidade de So Paulo, verificaram que os fungos mais freqentes nesses locais pertencem aos gneros Cladosporium sp ., Fusarium sp., Aspergillus sp., Rhodotorula sp., Epicoccum sp., Aureobasidium sp., Neurospora sp., Trichoderma sp., Rhizopus sp., Phoma sp., Monascus sp., Curvularia sp., Alternaria sp., Penicillium sp., Geotrichum sp., Acremonium sp., e outros no-esporulados (Mycelia sterilia). Embora a concentrao total de fungos na Biblioteca Central da UECE seja elevada, a diversidade de gneros bem menor do que o descrito na literatura, havendo divergncia ainda nos gneros mais incidentes, uma vez que diferentemente de outros estudos nacionais semelhantes, o gnero Aspergillus sp. foi o mais isolado nesse ambiente. Fungos hialinos da famlia Moniliaceae, representados pelos gneros Aspergillus sp., Penicillium sp. e Acremonium sp. foram os nicos presentes em todos os ambientes (Tabela 2), possivelmente motivados por sua ampla distribuio ubiquitria. O predomnio do gnero Aspergillus sp. comoprincipal componente da microbiota fngica da Cidade de Fortaleza, CE, j havia sido descrito por MENEZES et al. (2004), os quais fazendo um estudo em dez bairros da cidade de Fortaleza, usando tambm a tcnica da sedimentao passiva em placas de Petri com perodo de exposio de 15 minutos, catalogaram 1.521 colnias de 24 gneros diferentes, sendo Aspergillus sp. (44,7%) o de maior freqncia. No tocante as condies climticas os Grupos I e II apresentaram, respectivamente, mdia da temperatura mxima de 29,74 C e 30,00 C; mdia da temperatura mnima de 26,32 C e 26,68 C; mdia da umidade relativa do ar de 66,68 e 73,39 e mdia da precipitao atmosfrica 0,06 mm e 1,7 mm, no sendo possvel constatar nenhuma relao significativa entre a composio quantitativa global de colnias fngicas com os perodos climticos analisados, visto que a mdia dos perodos no foi considerada significante, pois apresentaram um coeficiente de variao (CV) superior ou muito prximo a 50% (Tabela 3), assim sendo, no foi possvel

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estabelecer diferenas de distribuio e quantificao fngica em relao a sazonalidade, o que provavelmente pode ser explicado pela ausncia de estaes climticas bem definidas no Estado do Cear.

Tabela 2 - Distribuio de freqncia absoluta de gneros fngicos por ambiente. Gnero fngico Aspergillus sp. Penicillium sp. Fusarium sp. Acremonium sp. Curvularia sp. Mucor sp. Rhizopus sp. Scytalidium sp. Trichoderma sp. Cladosporium sp. Geotrichum sp. Mycelia sterilia* Sepedonium sp. Bipolares sp. Candida sp. Exserohilum sp. Phaeoacremonium sp. Scopulariopsis sp. Synceplalastum sp. AS 10 3 6 1 1 1 2 1 1 1 BC 9 3 3 1 2 2 1 1 AC 9 4 1 3 3 1 1 1 2 1 1 1 PA 5 3 1 1 1 1 1 1 AP 6 2 1 1 1 1 1

Porm ao analisar separadamente o nmero mdio de colnias da cada ambiente por perodo observou-se que a Sala de Aula I-03 foi considerada uma exceo visto que o nmero de colnias variou bastante nos dois perodos, sendo que no perodo seco o nmero de colnias foi 2 vezes maior em comparao ao perodo chuvoso, tal achado deve-se provavelmente as atividades humanas desenvolvidas no Campus, pois os meses de janeiro e fevereiro so caracterizados como os meses de menor trnsito de alunos devido o recesso das atividades acadmicas, enquanto a rea Preservada, a Praa de Alimentao, o Almoxarifado Central e a Biblioteca Central no apresentaram relevncia de seus valores em ambos os perodos (Fig. 2).

Legenda: SA - Sala de Aula I-03; BC - Biblioteca Central; AC Almoxarifado Central; PA Praa de Alimentao e AP rea Preservada. *ordem Agonomycetales

Fig. 2 - Nmero mdio de colnias fngicas por rea analisada durante os perodos seco e chuvoso.

Tabela 3 - Nmero total de colnias desenvolvidas durante o perodo seco (Grupo I) e chuvoso (Grupo II). Perodo Grupo I Grupo II No de colnias 2.350 1.736 Mdia sd 69,44 29,18 94,00 84,60 CV (%) 42,02 90,00

A evoluo do nmero de colnias/ms, por ambiente pesquisado, mostrou que entre agosto e novembro de 2004 a Praa de Alimentao e a rea Preservada apresentaram pouca quantidade e qualidade de colnias em comparao aos meses de dezembro de 2004 a maio de 2005 (Quadro 1). Essa variao coincidiu com o incio de duas construes nas reas prximas desses ambientes, o Centro de Controle de Zoonose pertencente Secretaria de Sade da Cidade de Fortaleza, CE, situado na regio sudoeste do

Quadro 1 - Nmero de colnias e diversidade de gneros no perodo A (agosto a novembro de 2004) e perodo B (dezembro de 2004 a maio de 2005), respectivamente os perodos antes e depois das construes do Centro de Controle de Zoonose e do Departamento do Mestrado de Geografia. Local de coleta Praa de alimentao rea preservada Perodo A B A B Nmero de colnias 142 424 76 278 Diversidade de gneros 1 gnero 8 gneros 2 gneros 7 gneros

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Campus, afetando diretamente a rea Preservada e tambm se iniciou a construo de um novo departamento de estudos pertencente ao Mestrado de Geografia da UECE, afetando a Praa de Alimentao. Ambas as construes iniciaram-se em dezembro de 2004, podendo relacionar esse fato h provvel existncia de uma fonte externa de bioaerossis, tais como materiais de construo midos, os quais proporcionam condies ideais para a proliferao de microrganismos. Assim, parece-nos, que as diferenas encontradas na concentrao de fungos no ar de nossa regio deva estar mais relacionada com desequilbrios das atividades humanas do que com fatores climticos. Visto que, os ambientes mais populosos e com maior disponibilidade de substratos orgnicos foram os mais biocontaminados, indicando que a implementao de prticas de remoo mecnica da poeira e da instalao de equipamentos eficientes que promovam a filtrao e renovao do ar, principalmente nos ambientes com o maior fluxo de indivduos devam ser estimuladas. Os fungos filamentosos hialinos, em especial o gnero Aspergilllus sp., so os principais constituintes da microbiota area analisada, e o fato desses fungos comportarem-se tanto como patgenos primrios, mas principalmente como patgenos oportunistas, sinaliza para a necessidade da realizao de estudos mais aprofundados, tornando-se rotineiro o monitoramento da qualidade fngica do ar e o controle ambiental de fungos viveis como marcador epidemiolgico da contaminao microbiana, o que poder contribuir na diminuio de impactos ambientais na vida das pessoas. AGRADECIMENTO Prof. Dra. Clia Maria de Souza Sampaio e ao Prof. Ms. Aldeney Andrade Soares Filho pela disponibilidade de equipamentos e reviso do texto; Universidade Estadual do Cear pela bolsa IC-UECE e Fundao Cearense de Meteorologia e Recursos Hdricos FUNCEME, pelo acesso aos dados.
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Recebido em 25/1/07 Aceito em 1/4/07

Biolgico, So Paulo, v.69, n.1, p.41-47, jan./jun., 2007

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