CATALASA, PEROXIDASA Y POLIFENOLOXIDASA EN PITAYA AMARILLA (Acanthocereus pitaja ya): MADURACIN Y SENESCENCIA LUCA ESTRELLA BAQUERO DUARTE, JHON

ALEXANDER CASTRO RIVERA, CARLOS EDUARDO NARVEZ CUENCA Materiales y Mtodos Los frutos de pitaya amarilla se adquirieron en los principales mercados de Bogo t, Colombia, en estado verde-pintn (verde 90%-amarillo 10%), visiblemente sanos. F ueron desinfectados con hipoclorito de sodio al 10%, y almacenados en condicione s normales de maduracin. Se evalu el CO2 producido por los frutos a travs de la tcni ca cromatogrfica. La cuantificacin se hizo por el mtodo de estndar externo empleando CO2 adquirido en AGA-FANO. La intensidad respiratoria se report como mg de CO2 kg-1 de fruta h-1. La tcnica de extraccin simultnea para las tres enzimas se bas en reportes previos, l os polvos de acetona permitieron que el extracto presentara una alta actividad c on una mayor estabilidad, adems de evitar la inactivacin enzimtica durante la extra ccin. Los polvos de acetona fueron resuspendidos en 25 mL buffer de fosfatos 200 mM, pH 6,8 bajo agitacin continua por 24 h a 2 C. Posteriormente, la suspensin fue centrifugada a 12.000 x g durante 20 min a 2 C; e l slido se desech, el sobrenadante fue mantenido a 2 C durante mximo 2 h, tiempo en el que se efectu la cuantificacin de protena y de actividad enzimtica. Para cuantifi car la protena en los extractos enzimticos se emple el mtodo de Bradford modificado por Zor y Sellinger (1996), en el que se mide la absorbancia a 450 y 590 nm y se interpola la relacin entre las dos absorbancias en la curva de calibracin. Para la medida de actividad CAT se emple el mtodo permanganomtrico (Ulrich, 1974). La mezcla de reaccin con volumen final de 1 mL, contena 100 L de extracto enzimtico (24 40 g de protena), H2O2 500 mM preparado en buffer fosfatos 200 mM pH 7,0; esta mezcla se mantuvo a 40 C. La actividad POD fue estimada por la medida del incremento de la absorbancia a 4 70 nm (Halpin et al., 1989) en un espectrofotmetro Genesys 5 UV-VIS cada 5 s dura nte 120 s. La celda de medida, para un volumen final de 2 mL, contena 200 L de ext racto enzimtico (4880 g de protena) y una mezcla de guaiacol/H2O2 40mM/20mM en buffe r de fosfatos pH 5,5; esta mezcla se mantuvo a 25 C. Para medir la actividad de PFO se efectu lectura de absorbancia a 475 nm (Snchez F errer et al., 1995) en un espectrofotmetro Genesys 5 UV-VIS cada 5 s durante 120 s. Reactivos qumicos empleados 1 Acetona, polvos de acetona: Caractersticas: Frmula: CH3COCH3 M.=58,08 Identificacin de riesgos Fcilmente inflamable. Irrita los ojos. La exposicin repetida puede provocar sequed ad o formacin de grietas en la piel. La inhalacin de vapores puede provocar somnol encia y vrtigo. Mantener alejado de fuentes de ignicin. Los vapores son ms pesados que el aire, po r lo que pueden desplazarse a nivel del suelo. Puede formar mezclas explosivas c on aire. Riesgo de inflamacin por acumulacin de cargas electrostticas. Precauciones individuales: No inhalar los vapores. Procurar una ventilacin apropi ada. Precauciones para la proteccin del medio ambiente: Prevenir la contaminacin d el suelo, aguas y desages. Mtodos de recogida/limpieza: Recoger con materiales abs orbentes o en su defecto arena o tierra secas y depositar en contenedores para r esiduos para su posterior eliminacin de acuerdo con las normativas vigentes. Limp iar los restos con agua abundante. 2 CO2 Caractersticas: Estado fsico a 20C y P atm. : Gas. Color : Incoloro Olor : In odoro Masa molecular : 44,01 g/mol Punto de fusin [C] : -56,6 Punto de ebullic in [C] : -78,5 Identificacin de riesgos: Gas licuado. EL contacto con el gas licuado puede prod ucir quemaduras por fro en la piel o daos en los ojos. La sobre exposicin incrementa la frecuencia respiratoria y cardiaca y puede conducir a estado de coma y muerte . Gas asfixiante - Puede causar asfixia por desplazamiento de oxgeno. Primeras va s de exposicin: Altas concentraciones desplazan al oxgeno del ambiente y causa la

muerte por asfixia. Bajas concentraciones de CO2 pueden causar agitacin respirat oria y dolor de cabeza 3 Buffer de fosfatos Caractersticas: Agua, desionizada Balance no disponible, Fosfato de Sodio Dibsico 0.95 - 1.05 no disponibles, Fosfato de Potasio Monobsico <1.0 Identificacin de peligros: No txico, anticorrosivo. No presenta ninguna peligrosi dad para la salud significativa. reas de la colada del contacto con agua. rganos d e blanco: ojos, piel. Contacto visual: Puede Causar Irritacin leve. Inhalacin: No es peligroso por inhalacin. Contacto de la piel: Puede Causar Irritacin leve. Inge stin: Nusea, Vmito, diarrea y Puede Causar calambres. Efectos crnicos/Cancergenos: N inguno Material biolgico empleado Frutos de pitaya amarilla: planta rstica xeroftica de la familia de las cactceas; o riginaria de Amrica tropical. Las plantaciones pueden llegar a tener una vida til superior a los 10 aos, dependiendo de las condiciones agroclimticas y del manejo q ue se d al cultivo. Albmina srica bovina Identificacin de peligros: No han sido investigados. Rutas de exposicin: Exposicin ocular: Contacto puede ocasionar irritacin transitori a. Contacto con la piel: Puede causar sensibilizacin, reaccin alrgica. Ingestin: de bajo peligro para manejo industrial, puede causar reaccin alrgica. Inhalacin: bajo riesgo en el manejo industrial. Material radiactivo: No se utiliz Medidas de bioseguridad para la realizacin de experimentos Antes del experimento: Realizar medidas de esterilizacin de instrumental y asegur arse de trabajar en condiciones de asepsia. Durante el experimento: Manejar con cuidado la acetona, ya que es inflamable, ut ilizar EPI (bata, guantes, zapato cerrado, as como un cubre bocas para evitar inh alaciones peligrosas). Despus del experimento: Desechar los residuos en contenedores apropiados, esteril izar el material de laboratorio utilizado. Nivel de bioseguridad del laboratorio: II Conclusiones: En los resultados obtenidos se observa que la disminucin en la temp eratura de almacenamiento retarda la maduracin, siempre y cuando sta no se ubique por debajo de la temperatura crtica. EFICACIA DE SEROCONVERSION Y DURACION DE LA INMUNIDAD DE LA VACUNA FRENTE AL MEN INGOCOCO SEROGRUPO C. ESTUDIO INCLUIDO DENTRO DE LA EVALUACION DE LA VACUNACION MASIVA DE LA POBLACION DE LA COMUNIDAD DE MADRID COMPRENDIDA ENTRE 18 MESES Y 19 AOS DE EDAD. ROSA RAMREZ FERNNDEZ Materiales y Mtodos Muestras de sangre en pacientes con grupos de edades comprendidos en: 18 meses a 4 aos, 5 a 9 aos, 10 a 19 aos, que hayan aceptado previamente ser vacunados con la vacuna antimeningoccica A+C. En nios menores de 5 aos se obtendrn cuatro muestras d e sangre, en nios mayores de 5 aos, tres. La primera previa a la vacunacin y las re stantes despus de la misma. Las muestras de sangre se centrifugan para la obtencin de suero y separacin en alcuotas. Se analizar con el Ensayo Bactericida (suero de conejo para obtener complemento), el cual determina la concentracin de anticuerpo s contra bacterias, y la tcnica de ELISA (anticuerpos monoclonales anti IgG, IgM e IgE humana, conjugados con peroxidasa y revelados con TMB) para determinacin de anticuerpos totales antipolisacrido C. Soluciones y Reactivos qumicos empleados: No reportados Material biolgico empleado 1 Vacuna antimeningoccica Polisacrido purificado liofilizado de Neisseria meningitidis grupo A. 50 g Neisseria meningitidis grupo C 50 g - Lactosa (excipiente de liofilizacin) Contraindicaciones: Hipersensibilidad. Reaccin febril grave y aguda. Advertencias y precauciones: No protege de infeccin por meningococo de serotipo diferente al

A o C. Riesgo de respuesta ineficaz en pacientes con inmunodeficiencia. Prever p osible reaccin anafilctica. Nunca administrar va IV. 2 Muestras de sangre 3 Suero de conejo (Ensayo Bactericida) 4 Anticuerpos monoclonales anti-IgG, IgM e IgE humana, HPR/TMB (ELISA) Material radiactivo: No se utiliz Medidas de bioseguridad para la realizacin del experimento: Antes: Utilizar EPI al tomar muestra de sangre de los pacientes, almacenarlas en refrigeracin y debidamente rotuladas. Durante: En la centrifugacin, asegurar que los tubos de micro centrfuga estn correc tamente cerrados. Utilizar guantes para evitar el contacto con las muestras. Tra bajar en condiciones de asepsia. Despus: Esterilizar y desechar los residuos en contenedores especiales para muest ras biolgicas. Nivel de bioseguridad del laboratorio: III Conclusiones: El estudio de la eficacia de la seroconversin, as como la duracin de la inmunidad, contribuirn a las medidas de vacunacin masiva a la toma de medidas d e control en poblaciones que as lo requieran. DIAGNSTICO RPIDO DE LA MENINGOENCEFALITIS HERPTICA MEDIANTE PCR CARMEN MUOZ-ALMAGRO, ARACELI GONZLEZ-CUEVAS, FRANCISCO JOS CAMBRA, TERESA JUNCOSA, AUREA MIRA Y CRISTINA LATORRE Materiales y Mtodos Durante el perodo de estudio, comprendido entre el 1 de marzo de 1996 y el 31 de abril de 2000 se procesaron 123 muestras de lquido cefalorraqudeo de 114 pacientes peditricos con sospecha clnica de meningoencefalitis vrica o inters en descartar la etiologa herptica. Las muestras de LCR se procesaron inmediatamente despus de la e xtraccin o se conservaron a 4 C durante un mximo de 3 das. Se aadieron 50 l de LCR a 150 l de una solucin de resina Chelex 100 al 20%. Los ADN extrados fueron amplifica dos seleccionando los primers marcados con digoxigenina que amplifican un produc to de 91 pares de bases de una regin altamente conservada del gen ADN polimerasa comn a herpes 1 y 2. Se aadieron 20 l del extracto de ADN a 80 l de mezcla maestra q ue contena 10 mmol/l de Tris-HCL, 50 mmol/l de KCL, 1,5 mmol/l de MgCl2, 0,2 mmol /l de dATP, 0,2 mmol/l de dCTP, 0,2 mmol/l de dGTP, 0,19 mmol/l de dTTP y 0,01 m mol/l de DIG-dUTP, 0,5 mol/l de cada primer y una unidad de Taq polimerasa. Soluciones y Reactivos Qumicos empleados 1 Resina Chelex 100: Composicin 500 g, cation exchange resin, sodium form, 1% cro sslinkage, 50100 dry mesh size, 3001,180 m wet bead size, ~3,500 MW limit. Identificacin de riesgos: a la salud= 0, Incendio= 0, Reactividad= 0 Rutas de exposicin: Inhalacin: Tomar aire fresco, consultar al mdico en caso de mal estar, Piel: Generalmente el producto no causa irritacin, Contacto ocular: Lavar con agua abundante, Ingesta: Inducir vmito y llamar al mdico. 2 Tris-HCL: Tris (hydroxymethyl)aminomethane HCl Frmula molecular:C4H11NO3.HCl; Peso molecular: 157.60 Identificacin de riesgos: Puede causar irritacin de pies y ojos. Ingestin: puede oc asionar irritacin gastrointestinal con nusea y vmito. Inhalacin: puede ocasionar irr itacin del tracto respiratorio. Las propiedades txicas de esta sustancia no han si do investigadas. 3 KCL: Cloruro de Potasio Peso molecular: 74.55 g/mol Identificacin de riesgos: No inflamable. Puede causar irritacin en caso de contact o con la piel, ojos y mucosas. Prolongada exposicin puede ser txica para la sangre y el sistema cardiovascular. 4 MgCl2: Cloruro de Magnesio Peso molecular: 95.21 Health Rating: 1 Slight, Flammability Rating: 0 None, Reactivity Rating: 1 Sligh t, Contact Rating: 1 Slight, Lab Protective Equip: GOGGLES; LAB COAT; PROPER GLO VES, Storage Color Code: Green (General Storage) Identificacin de riesgos: Ingestin e inhalacin puede ocasionar irritacin en las memb ranas mucosas. Material biolgico empleado:

1 Muestras de lquido cefalorraqudeo (LCR) 2 dATP, dCTP, dGTP, dTTP 3 Taq polimerasa Material radiactivo: No se utiliz Medidas de bioseguridad para la realizacin del experimento Antes: Como se trabajar con material biolgico, usar EPI al tratar las muestras y r otularlas correctamente. Durante: Trabajar en condiciones de esterilidad al hacer la PCR, cuidar cada uno de los reactivos y las cantidades tomadas, utilizar slo material estril, refriger ar la Taq polimerasa antes y despus de su uso. Despus: Esterilizar y desechar residuos en contenedores apropiados. Nivel de bioseguridad del laboratorio: III Conclusiones: La aplicacin de esta tcnica de PCR, con un formato sencillo y rpido, adecuado a la rutina diaria de un laboratorio de microbiologa, contribuye a reali zar un diagnstico precoz o, en su defecto, la exclusin de la etiologa por herpes si mple de la meningoencefalitis, incrementando la calidad de la asistencia a los p acientes.

TOXOCARIOSIS HUMANA: SEROPREVALENCIA EN POBLACIN DE LIMA MEDIANTE LA TCNICA DE ELI SA YRMA ESPINOZA, PEDRO HUAPAYA, CARLOS SEVILLA, ALINA HUIZA, SUSANA JIMNEZ, CSAR NQUI RA Materiales y Mtodos Se examin 553 individuos de diversas edades, se obtuvo una muestra de sangre de a proximadamente 8 mL de cada individuo, que se dividi en 2 alcuotas: 5 mL para la o btencin de suero y 3 mL con anticoagulante para realizar el recuento de leucocito s y la frmula diferencial. Las muestras de suero fueron procesadas mediante la tcn ica de ELISA para detectar anticuerpos especficos contra Toxocara, mediante el mto do estandarizado en el IMTDAC en estudio previo. Tambin, se solicit dos muestras d e heces de cada individuo, que fueron procesadas para buscar parsitos intestinale s que pudieran originar reacciones cruzadas en el examen serolgico. Reactivos qumicos empleados: No se especifica Material biolgico empleado 1 Muestras de sangre de los pacientes 2 Muestras de heces de los pacientes 3 Antgenos provenientes de Toxocara (ELISA) para detectar Ac Material radiactivo: No utilizado Medidas de bioseguridad para la realizacin del experimento Antes: Como se trabajar con material biolgico, usar EPI al tratar las muestras y r otularlas correctamente. Durante: Usar equipo de proteccin individual para evitar el contacto con las mues tras. Despus: Esterilizar los residuos y desecharlos en contenedores apropiados

Nivel de bioseguridad del laboratorio: III Conclusiones Podemos concluir que la toxocariosis humana es frecuente en la poblacin de Lima ( 23,3%) y la mayora de los participantes manifest ser asintomticos. Es necesario des arrollar programas de difusin para detectar precozmente la infeccin, as como para p revenirla.