XII-050 ESTUDO DA BIODEGRADABILIDADE DE AMIDO TERMOPLSTICO

Leonardo Garcia da Silva (1) Graduando de Engenharia ambiental pelo Instituto de Estudos Superiores da Amaznia IESAM-PA Brenda Ingrid Silveira de Aviz Graduando de Engenharia ambiental pelo Instituto de Estudos Superiores da Amaznia IESAM-PA Gracielly Emerique de Lima Graduando de Engenharia ambiental pelo Instituto de Estudos Superiores da Amaznia IESAM-PA Rafaella de Souza Menezes Graduando de Engenharia ambiental pelo Instituto de Estudos Superiores da Amaznia IESAM-PA Endereo (1): Rua dos Caripunas, 3241 - Cremao - Belm - PA - CEP: 66063-043 - Brasil - Tel: (91) 3249-7846 e-mail: garciadasilval@yahoo.com.br RESUMO O Amido Termoplstico, tambm chamado de polmero de amido, um material relativamente novo para aplicao como plstico biodegradvel e um dos principais polmeros estudados atualmente. O objetivo desta pesquisa estudar as propriedades de biodegradabilidade do amido termoplstico, principalmente sua vulnerabilidade micro-organismos. Para tanto foram produzidas diferentes amostras de amido termoplstico, realizado um ataque microbiolgico com meio favorvel proliferao de fungos e bactrias, anlise dos organismos e da degradao do material. Sendo assim, este trabalho vem relatar um estudo realizado com estas amostras, onde foi verificada uma maior susceptibilidade do material fungos leveduriformes e alguns fungos dimrficos. PALAVRAS-CHAVE: Amido Termoplstico, Biodegradabilidade, Ataque Microbiano.

INTRODUO O amido normalmente no possui caracterstica termoplstica, porm quando submetido presso e temperaturas especficas e na presena de um plastificante como gua ou glicerol, o amido se transforma em um material fundido, o amido termoplstico. No presente trabalho, o objetivo principal foi o de estudar as propriedades de biodegradabilidade do amido termoplstico, focado principalmente no estudo dos micro-organismos que atuam em sua degradao, para melhor conhecer os mecanismos de degradao biolgica e contribuir com informaes sobre a ao microbiolgica sobre o polmero de amido. O conhecimento dos organismos que degradam o polmero de amido se faz importante em diversas reas de aplicao e sntese deste polmero biodegradvel, como o estudo de reforos, que podem retardar o processo de degradao. Para Brito (2011), a biodegradao pode ser definida como a degradao de um material orgnico causada por atividade biolgica, principalmente pela ao de micro-organismos. Quando um material biodegradado, o mesmo usado como nutriente por um determinado conjunto de micro-organismos, como bactrias e fungos, por exemplo, os quais devem possuir enzimas adequadas para romper algumas das ligaes qumicas da cadeia principal do polmero, sendo necessrias condies favorveis de temperatura, umidade, pH e disponibilidade de oxignio, para a atuao dos micro-organismos. Neste trabalho foram feitos dois ataques microbiolgicos, no primeiro ataque realizou-se um estudo dos organismos que degradaram o polmero e no segundo ataque fez-se um estudo da degradao do amido termoplstico.

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Constatou-se que nas condies em que foi conduzido o trabalho, o polmero termoplstico de amido foi mais suscetvel degradao por fungos do que por bactrias, pois os fungos se enraizaram mais profundamente no material e competiram com outros organismos de forma mais eficiente, sendo que o polmero de amido foi a fonte primaria de nutrientes. MATERIAIS E MTODOS Existem vrios mtodos de avaliar a biodegradao, basicamente esses mtodos se baseiam em, monitorar o crescimento de micro-organismos, o consumo do polmero e mudanas nas propriedades do polmero. Fechine (2010), diz que dentre os mtodos utilizados encontra-se o crescimento de colnia de fungos e de bactrias, consumo de O2, produo de CO2 e perda de massa. Neste trabalho utilizou-se o mtodo de crescimento de colnia microbiana, para isso, fez-se amostras e posteriormente realizou-se ataques microbianos para estudar a o nvel de degradao do material. Na produo das amostras utilizou-se amido, gua e glicerina, balana semi-analtica, Becker, placa de petri, basto de vidro, placa de vidro para a conformao, chapa aquecedora (Quimis) e Estufa (Quimis). Na fase de estudos do material e experimentos de ataque microbiano, foi utilizado microscpio ptico composto, equipamentos de vidraria como erlenmeyers, Becker, placas de petri, lminas e vidros de relgio, estufa, balana analtica e phmetro. Foram utilizados reagentes biolgicos e reagentes qumicos como: caldo de Lactose, caldo de escherichia coli e uma soluo tampo com ph 5,8 e ph 7,0. O caldo de Lactose (cat. M1003-500G) utilizado para deteco de bactrias coliformes em gua, alimentos, produtos lacticnios de acordo com o mtodo padro. Esta substncia recomendada pela American Public Health Association - APHA na execuo e confirmao de teste presuntivo para bactrias coliformes em gua, alimentos e leite. Este meio foi usado como um alternativo para o caldo lauril sulfato no teste presuntivo de MPN (Nmero Mais Provvel) de coliformes padres. Tambm foi usado para os testes o caldo de EC (escherichia coli, cat. M127-500G). O caldo de EC recomendado para a enumerao seletiva de escherichia coli presuntivo pela tcnica MPN. A tabela 1 mostra a composio dos reagentes. Tabela 1: Composio (g/l) dos reagentes Caldo de Lactose Caldo de EC Digesto pptica de tecido animal: 5.00 Extrato de carne bovina: 3.00 Lactose: 5.00 pH final (a 25 C): 6.9 +- 0.2 Casena enzimtica hidrolisada: 20.00 Lactose: 5.00 Mistura de sais Biliares: 1.50 Fosfato Dipotssico: 4.00 Fosfato Monopotssico: 1.50 Cloreto de Sdio: 5.00 pH final (a 25 C): 6.9 + - 0.2 Fonte: Himeia Laboratory Preparou-se soluo de amido, gua e glicerol e aqueceu-se a mistura at que ela obtivesse consistncia viscosa. Aps a reao, colocou-se a mistura em uma placa de vidro para que conformar-se em forma de um filme e deixou-se maturar na estufa 30C por um dia. Preparou-se duas amostras de 7 x 2 x 1 cm e vinte amostras padronizadas 2 x 1 cm. Realizaram-se dois estudos microbiolgicos com as amostras de polmeros termoplstico. O primeiro com as amostra de 7 x 2 x 1 cm, que aps a preparao, colocou-se em duas placas de petri, um com solues de caldo de EC (escherichia coli, cat. M127-500G) e outra de caldo de Lactose. Colocou-se em uma estufa em temperatura ambiente e foram retiradas oito dias depois. Para a realizao do segundo estudo microbiolgico, realizou-se um novo ataque microbiano atravs dos seguintes procedimentos:

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 Prepararam-se vinte placas de petri e com adesivos numeraram-se as placas para identificao e ordem; Em cada da placa de petri colocou-se uma amostra de 2 x 1cm; Prepararam-se solues de caldo de Lactose e caldo de EC (escherichia coli, cat. M127-500G) para produo de meios favorveis proliferao de microrganismos como fungos e bactrias utilizando um Becker de 50ml com H2O destilado, quatro Beckers de 50ml cada, contendo soluo de caldo de Lactose com as seguintes quantidades: 0,5g, 1,0g, 1,5g e 2,0g e quatro Beckers de 50ml cada, com soluo de caldo de EC contendo, respectivamente, as mesma quantidades de caldo de lactose colocado nos outros beckers. Uilizando um phmetro, encontraram-se os pHs de acordo com a tabela 2: Tabela 2: pHs com os caldos para cultura nos beckers, antes de serem tamponados EC (escherichia coli) 0,5g 1,0g 1,5g 2,0g pH 7,3 7,3 7,2 7,2 Temperatura (C) 21,7 21,8 21,8 21,7 Lactose 0,5g 1,0g 1,5g 2,0g pH 7,1 7 7 7 Temperatura (C) 21,9 22,1 21,9 21,9

Segundo Tortora (2005) preparou-se duas solues tamponadas, uma com pH 7,0 com o objetivo que se desenvolvessem colnias de bactrias, e outra com pH 5,8 para proliferao de fungos. Usaram-se derivados fosfatados para fazer as solues tampo, que foi recomendado pela literatura e assim estabilizou-se o pH das solues. Prepararam-se as solues tamponadas com pHs e constituintes conforme a tabela 3. Tabela 3: Preparo das solues tampo KH2PO4 (Di-Hidrogenofosfato de potssio) 0,1N NaOH (Hidrxido de Sdio) 0,1N 50 ml 3,72 ml 29,63 ml

pH 5,8

17,0 50 ml Fonte: Manual de Solues, Reagentes e Solventes - Tkio Morita

Colocaram-se as amostras dentro das placas de petri e acrescentaram-se os meios de culturas caldo de EC e caldo de Lactose e a soluo tamponante de acordo com a tabela 4. Tabela 4: Organizao e composio dos meios de cultura pH BACTRIAS FUNGOS Numerao das Amostras Lactose 001 7,0 003 005 007 011 5,8 013 015 017 Escherichia coli (EC) 002 004 006 008 012 014 016 018

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Para o primeiro estudo, as duas amostras de 7 x 2 x 1 cm colocadas somente com os reagentes de caldo de Lactose e caldo de EC (escherichia coli, cat. M127-500G), aps o perodo citado, retirou-se da estufa e com o auxilio de um microscpio ptico composto, analisou-se os microorganismos que haviam se formado sobre as amostras e obteve-se as seguintes imagens das estruturas microbiolgicas encontradas no material, ampliadas x40, onde foi identificado alguns micro-organismos conforme as figuras de 1 a 4.

Figura 1:Levedura em brotamento com presena de Clamidsporos e Blasto condios

Figura 2: Fungo dimrficos

Figura 3: Esporos recobrindo hifa Figura 4: Hifas areas e vegetativas cenoctica As estruturas observadas foram de fungos leveduriformes e tambm fungos filamentosos, com hifas areas bem desenvolvidas. As colnias leveduriformes encontradas foram pastosas e/ou cremosas, formadas por microrganismos unicelulares que cumpriram funes vegetativas e reprodutivas. As colnias filamentosas foram do tipo algodonosas e aveludadas, e constitudas principalmente de estruturas em forma de tubo, predominantemente de hifas no septadas. Foi constatada tambm a presena tanto de miclios vegetativos no interior do polmero, quanto de miclios areos reprodutivos, de talocondios como o clamidsporo e o blasto condio, sem a presena de artrocondios. Foi observada a presena de clamidsporos intercalares, tanto em miclios somticos quanto em condios, para ajudar na sobrevivncia dos fungos no ambiente, funcionando como reservas energticas. Para o segundo estudo microbiolgico, aps os quatro dias, retiraram-se as amostras da estufa as vinte placas de petri por ordem numrica das placas, observou-se que as amostras nmero 009 e 010 que estavam com gua e 019 e 020 com a soluo tampo com pH propicio para fungos, tiveram uma baixa degradao e permaneceram com o mesmo formato e tamanho. Sendo que as amostras nmero 009 e 010 no apresentaram

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nenhum sinal de micro-organismos. Entretanto, nas amostras nmero 019 e 020 observaram-se a formao de pequenas colnias de fungos nas bordas das placas de petri. Dentre as placas de petri com meio de cultura com caldo de EC, a nmero 016 que estava tamponada para fungos e a placa numero 006 com soluo tamponada para bactrias tiveram uma degradao maior que as amostras nmero 009, 010, 019 e 020, as solues estavam j esbranquiadas, pois as amostras j estavam se decompondo, porm houve apenas uma pequena alterao na rigidez. As placas de petri nmero 011, 015 e 017 contendo meio de cultura com caldo de Lactose e a numero 005 com soluo tamponada para bactrias, demonstraram-se com um maior nvel de degradao, as solues se apresentavam com uma cor muito amarelada com pedaos da amostra misturados, o formato das amostras se alterou, estavam indefinidas e quase liquidas. Observou-se ento, que das vinte amostras, as que estavam com meios de cultura tamponados para bactrias apresentaram, em geral, menor degradao. O que possivelmente foi consequncia do tempo decorrido, pois no primeiro experimento de ataque microbiano, as amostras no foram colocadas em placas com soluo tamponante, permanecendo durante oito dias na estufa e percebeu-se uma variedade visivelmente maior de micro-organismos, neste caso, os fungos. Entretanto no segundo experimento, em que as solues foram tamponadas, o perodo que as amostras ficaram na estufa foi de apenas quatro dias, durante a anlise microbiolgica percebeu-se que o desenvolvimento de colnias de micro-organismos foi menor que no primeiro experimento. O nvel de degradao encontrado foi o analisado e de acordo com a tabela 5 e a figura 5 a 7. Tabela 5: Resultado da Degradao pH 7,0 Quantidade (g) 0,5 1,0 1,5 2,0 0,5 1,0 1,5 2,0 Lactose (amostras) 001 003 005 007 011 013 015 017 Nvel de Degradao Baixo Baixo Alto Baixo Alto Baixo Alto Alto Escherichia coli (EC) (amostras) 002 004 006 008 012 014 016 018 Nvel de Degradao Baixo Baixo Alto Baixo Baixo Baixo Alto Baixo

5,8

Figura 5: Nvel Baixo CONCLUSES

Figura 6: Nvel Mdio

Figura 7: Nvel Alto

No primeiro ataque microbiolgico, a proporo de caldo de EC e de caldo de lactose, foi menor do que o nvel de absorbncia das amostras de polmero de amido, e no foi controlado o pH dos meios de cultura. A falta gradativa do meio nutritivo forou os micro-organismos a usarem o polmero de amido como fonte primaria de alimento, degradando-o mais rapidamente. A proliferao de fungos foi predominante o que conclumos que foram causados por seu grau de enraizamento nas amostras do material, os fungos estavam

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profundamente enraizados nas amostras na forma de hifas vegetativas com presena marcante de clamidsporos e blasto condios. No segundo ataque as propores dos meios nutritivos foram superiores ao nvel de absorbncia das amostras, e foi acrescentado solues tamponantes. Este mtodo foi utilizado para se estudar o processo de degradao com variaes de pH favorveis tanto para fungos quanto para bactrias, e os resultados apontaram que o polmero foi degradado predominantemente por fungos apesar do pH desfavorvel em metade dos meios de cultura. Portanto considera-se que o polmero de amido degradado de forma mais eficaz em ambientes em que h livre crescimento de microrganismos e foi mais suscetvel degradao por fungos do que por bactrias, pois os fungos se enraizaram mais profundamente no material e competiram com outros organismos de forma mais eficiente, levando-se em conta o contexto em que o polmero de amido foi usado como fonte primaria de nutriente. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS 1. BRITO, G. F. et al; Biopolmeros, Polmeros Biodegradveis e Polmeros Verdes, Departamento de Engenharia de Materiais Universidade Federal de Campina Grande, 2011. 2. TORTORA, Gerard J.; FUNKE, Perdell R.; CASE, Christine L.,Microbiologia, Ed. ArtMed, 8 edio, Porto Alegre, 2008. 3. MORITA, Tokio; ASSUMPO, Rosely Maria V. Manual de Solues, reagentes e solventes. Ed. Blucher, 2 edio, So Paulo, 2007. 4. FECHINE, Guilhermino J. M. A Era dos Polmeros Biodegradveis. So Paulo, 2010.Disponivelem:<http://www.plasticomoderno.com.br/revista/pm423/tecnica/tecnica01.html> Acesso em 14/05/2011.

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