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or CG? 2) Por que prefervel usar uma coluna de HPLC empacotada com partculas de dimetro menor? Como isso se relaciona com a equao de van Deemter? 3) Por que importante ter poros uniformes no empacotamento de uma coluna de HPLC? 4) Por que a fases mveis com pH 8 no devem ser usadas em colunas baseadas em slica? 5) O que uma coluna de proteo? Qual a sua finalidade? 6) Existem disponveis no mercado solventes grau HPLC. Por que isso necessrio? 7) O que uma eluio isocrtica em HPLC? 8) Considere uma anlise cromatogrfica por HPLC usando uma coluna empacotada com uma fase estacionria apolar. Prediga a ordem de eluio dos componentes de uma mistura composta por benzeno, etanol e isopropanol. Justifique a sua resposta. 9) Arrange os compostos representados abaixo de acordo com a sua ordem crescente de tempos de reteno numa anlise isocrtica de HPLC em fase normal usando como fase mvel uma mistura de hexano:isopropanol (80:20 em volume). OH OH OH HO (1) (2) (3) OH (4) CH3 OH OH
10) Uma separao cromatogrfica de uma mistura de compostos foi realizada em uma coluna de fase reversa usando como fase mve uma mistura de metanol:gua na proporo de 80:20 (em volume). Se, em uma segunda anlise, a composio da fase mvel mudar para metanol:gua 70:30, como os tempos de reteno dos solutos sero afetados? Justifique.
11) Cite os dois tipos de detectores mais comuns em HPLC. 12) Considere os dois cromatogramas abaixo:
coluna: DB-5ms
componentes: coluna: AllureTM Basix 1. decano dimenses: 30 m 0,53 m dimenses: 150 dodecano 2. 4,6 mm 3. tetradecano (dim. int.), 1,5 m tamanho de partcula: 5 m 4. hexadecano 5. 60 tamanho de poro:octadecano 6. eicosano lista de picos: 7. docosano 8. tetracosano 1. solvente 9. hexacosano 2. cafena 10. octacosano
3. acetamonofeno 4. pseudoefedrina
tempo (min) tempo (min) a) um dos cromatogramas foi obtido por cromatografia a gs com coluna capilar, e o outro, por HPLC. Identifique qual cromatograma foi obtido por cada tcnica. Explique o seu raciocnio. b) assinale a tcnica correta: tcnica que normalmente tem a menor altura de prato: CG capilar HPLC HPLC tcnica que normalmente tem o maior nmero de pratos tericos: CG capilar
c) calcule a altura de prato e o nmero de pratos para o pico 4 do primeiro cromatograma (pseudoefedrina). Estime os valores das variveis necessrias para o clculo a partir da leitura do cromatograma. O comprimento da coluna 15,0 cm.
cromatograma A
tempo (min)
tempo (min)
Os cromatogramas foram obtidos usando anlise por HPLC em fase reversa. a) d um exemplo de fase mvel que pode ser usada nesse tipo de separao b) d dois exemplos de detectores que podem ser usados para esses compostos c) d um exemplo de fase estacionria que pode ser usada para essas separaes d) o cromatograma B foi registrado na mesma coluna e com a mesma amostra do cromatograma A, mas a separao muito diferente; isso ocorreu porque a fase mvel foi mudada entre as separaes. Explique como a fase mvel foi alterada de modo a afetar a separao to dramaticamente. Seja especfico. Respostas: 8) etanol > isopropanol > benzeno 9) 4 < 1 < 2 < 3 10) mais longos 12) b) HPLC; CG capilar
cromatograma B