ISOLAMENTO, CARACTERIZAO E IDENTIFICAO DE BACTRIAS

Identificar um dado organismo como espcie baseia-se no preenchimento das caracters ticas atribudas quela espcie. O reconhecimento da fonte ou origem do espcime (ambien te, espcie animal, tipo de patologia e localizao) do organismo s vezes fundamental p ara identificao. A execuo inadequada de um teste preliminar pode confundir e prejudi car todo processo de identificao. Na rotina laboratorial so utilizados certos teste s chaves para reduzir o trabalho, o custo e abreviar o tempo requerido para diag nstico. O processo de identificao dos microrganismos efetuado atravs da determinao de um nmer mnimo de propriedades. Portanto, quanto menor o nmero de observaes efetuadas, maior o risco de erros de identificao. Usualmente necessrio utilizar organismos como con troles positivos e negativos para a execuo de cada teste. A correta caracterizao cultural do organismo em meios de isolamento primrio, assim como a execuo e interpretao da colorao e reao ao Gram so vitais para esse sistema de tificao. O perodo de incubao varia usualmente com o organismo que est sendo isolado, m as a maioria dos organismos pode apresentar crescimento visvel aps 48 horas. Para a atmosfera de incubao tambm se aplica o mesmo princpio, i.e., para organismos aerbio s e anaerbios facultativos utiliza-se a atmosfera ambiente, e para o isolamento d e microrganismos microaerbios e anaerbios obrigatrios torna-se necessrio obter a atm osfera adequada atravs de mtodos especiais, conforme visto no captulo anterior. O objetivo deste experimento fornecer os meios e mtodos de semeadura, contagem, isolamento e identificao de microrganismos encontrados no ambiente e processos inf ecciosos do homem e animais. Desta forma, no pretende ser completo e, quando nece ssrio, trar as referncias bibliogrficas que o aluno deve consultar para obter inform aes mais detalhadas. Isolamento e caractersticas culturais

Aps escolher ou receber o espcime a ser estudado procede-se ao isolamento em meios slidos apropriados. Para exemplificar usaremos o gar simples e uma cultura mista composta de bactrias conhecidas. Para isolar o microrganismo efetua-se a inoculao o u semeadura, utilizando a tcnica do esgotamento do inculo por estrias, tendo-se o cuidado de usar inteiramente toda a rea do meio para garantir a separao das bactrias , de modo que aps a incubao cada clula separada origine uma colnia. Tambm so empregada as tcnicas de semeadura por disseminao com ala de Drigalsky ou a tcnica de pour-plat e quando, alm do isolamento, pretende-se quantificar a populao microbiana presente originalmente na amostra. O processo de identificao propriamente dito comea com a observao das caractersticas da s colnias isoladas (a olho nu, com lupa ou microscpio, usando a objetiva de menor aumento). Os seguintes critrios so utilizados para a caracterizao colonial: 1. Forma - punctiforme (at 1 mm de dimetro); circular, com mais de 1 mm de dim etro; irregular; filamentosa; radiada, dentre outras; 2. Tamanho - ...em milmetros; 3. Elevao - achatada (alta, baixa), espraiada, convexa, umbilicada ou umbonad a, mamilonada, papilfera, etc.; 4. Bordos - inteiros, ondulados, lobados, denticulados, franjados, etc.; 2. Superfcie - lisa, rugosa; 3. Estrutura - amorfa, granulosa, filamentosa; 4. Caracteres pticos - opaca, translcida e transparente; 5. Cromogenia ou Pigmentao - amarela, branca, preta, rsea, etc.;

Em outros meios podem ser observadas outras caractersticas como hemlise (gar Sangue ), reduo de telurito (meio para corinebactrias, estafilicocos), fermentao de acares (m io de MacConkey, gar SS, dentre outros. As caractersticas culturais podem ser observadas tambm em meios lquidos e slidos inc linados (em tubos). As principais caractersticas observadas em meio lquido so: 1. Tipo de crescimento na superfcie - sem crescimento, pelcula, grumosa, mem branosa, anel (circular); 2. Opacidade ou turvao - nula, ligeira ou suave, regular, intensa, transitria,

persistente; 3. Cheiro - nenhum, pronunciado, semelhante a ...; 4. Sedimento - compacto, grumoso, viscoso, granular, escamoso, quantidade d o sedimento (abundante, escasso, nulo); 5. Pigmentao. As principais caractersticas observadas em meio slido inclinado so: 1. Crescimento - nulo, escasso, abundante; 2. Pigmentao - cor ....; 3. Lustro ou brilho - fosco, luzidio; 4. Caracteres pticos - transparncia, translcido ou opaco; 5. Fluorescncia - positiva, negativa (em fonte de luz UV); 6. Consistncia - butirosa, viscosa, membrancea, quebradia; 7. Emulsionabilidade - nula, fcil, difcil; 8. Odor - ausente, presente, semelhante a ....

Aps a observao dessas caractersticas devem ser feitos esfregaos para coloraes especiai , para observao da morfologia microscpica (forma, arranjos, tamanho e reao ao Gram), presena ou ausncia de esporos (forma e localizao, com deformao ou no do corpo bacteria o), flagelos (nmero e localizao), cpsulas, granulaes metacromticas (comum em corinebac ias) e colorao bipolar (freqente nas pasteurelas e yersinias). Tambm pode ser verifi cada a motilidade por exame a fresco. A motilidade verdadeira consiste no desloc amento do organismo em diferentes direes, no devendo ser confundido com o movimento Browniano ou metablico, i.e., o organismo vibra mas no se desloca. Os procediment os seguintes envolvem a caracterizao metablica, tolerncia a agentes qumicos e fsicos, a antimicrobianos e fagos (fagotipagem), bem como propriedades antignicas ou soro lgicas e patogenicidade atravs da inoculao em espcies animais susceptveis (apropriadas ).