Paraoxonasa, algo ms que una enzima?

88.830

Amaia Canales y Francisco J. Snchez-Muniz

Departamento de Nutricin. Facultad de Farmacia. Universidad Complutense de Madrid. Madrid. Espaa.

Las enfermedades cardiovasculares (ECV) constituyen la primera causa de muerte en los pases desarrollados. La hiptesis de la peroxidacin de las lipoprotenas de baja densidad (LDL) como mecanismo desencadenante del proceso aterosclertico ha promovido estudios a fin de conocer los sistemas de que dispone el organismo para incrementar la defensa antioxidante y, por tanto, frenar la puesta en marcha de la aterosclerosis. Entre ellos se encuentra la enzima paraoxonasa. Esta enzima est principalmente relacionada con las lipoprotenas de alta densidad (HDL) y parece contribuir al mantenimiento y recuperacin de la estructura y estado antioxidativo de las LDL. En este trabajo se revisan los mecanismos implicados en la induccin y accin de esta enzima, as como el lugar de su produccin, los aspectos moleculares que la ligan a las HDL y las modificaciones por factores externos. La aplicacin de tcnicas genticas, el descubrimiento de diferentes polimorfismos de esta enzima, la posibilidad de incrementar mediante farmacoterapia y/o dietoterapia la actividad paraoxonsica ofrecen nuevas perspectivas de actuacin a la hora de tratar y prevenir las ECV. Palabras clave: Paraoxonasa. Dieta. Frmacos. Gentica. HDL. LDL. Peroxidacin.

Paraoxonase, something more than an enzyme?

Coronary heart disease is one of the major causes of death in developed countries. The hypothesis that peroxidation of low density lipoproteins (LDL) may be the initial step of the atherosclerotic process has promoted numerous studies aimed at investigating the mechanisms by which the body protects itself from such oxidative phenomena. Among these mechanisms we find the paraoxanase (PON) enzyme, which is quite thriving the last decades. This enzyme is principally associated with high density lipoproteins (HDL) but it also seems to help LDL to recover their antioxidant status. This paper reviews different aspects concerning the mechanisms implicated in the induction and activity of this enzyme, as well as its production, attachment to HDL, and modifications of its activity due to external factors. The use of genetic techniques, the study of the polimorphisms of the PON enzyme and the possibility of increasing paraoxonase activity by means of pharmacotherapy and/or dietary therapy open new perspectives with regard to coronary heart disease treatment and prevention. Key words: Paraoxonase. Diet. Genetic. HDL. LDL. Peroxidation. Pharmacoterapy.

La enfermedad cardiovascular (ECV) contina siendo la causa ms importante de mortalidad y morbilidad en nuestra sociedad. En el ao 2000, en Espaa, 21.577 mujeres murieron por enfermedades cerebrovasculares y 16.774 por enfermedades isqumicas del corazn. Entre los varones, la causa de muerte ms frecuente sigue siendo la enfermedad coronaria, con 22.541 defunciones durante el ao 20001. En EE.UU., cada ao, cerca de 13 millones de personas presentan ECV, un milln y medio tienen infarto de miocardio y unas 450.000 fallecen por ECV2.
Este trabajo ha sido subvencionado por el proyecto de investigacin del Ministerio de Ciencia y Tecnologa (AGL2001 2398 C03-3-03). Correspondencia: Prof. F.J. Snchez-Muniz. Departamento de Nutricin. Facultad de Farmacia. Universidad Complutense de Madrid. Pl. Ramn y Cajal, s/n. 20840 Madrid. Espaa. Correo electrnico: frasan@farm.ucm.es Recibido el 25-3-2003; aceptado para su publicacin el 27-6-2003.

La enfermedad isqumica est causada por aterosclerosis, un proceso inflamatorio caracterizado por disfuncin endotelial que conduce a un engrosamiento fibrolipdico conocido como ateroma, que se complica la mayora de las veces con calcificacin, trombosis sobreaadida producida por la rotura de la placa y que se agrava por el incremento de los valores de fibringeno que conducen a una marcada estenosis u oclusin arterial. El estrechamiento de las arterias coronarias causa angor pectoris, especialmente durante el esfuerzo, mientras que su oclusin puede causar infarto de miocardio. En ambas situaciones la demanda de oxgeno por el msculo cardaco supera con creces la oferta sistmica, lo que induce un proceso de isquemia3. Multitud de estudios epidemiolgicos han definido la presin arterial, el tabaquismo y la hipercolesterolemia como los 3 factores de riesgo primarios de la enfermedad isqumica4. As, la presin arterial es un factor clave en el desarrollo de la aterosclerosis, ya que este proceso no se desarrolla en el circuito venoso5. El tabaquismo disminuye la oferta de oxgeno6-8 a los tejidos, amn de inducir cambios negativos en el perfil lipoproteico9, trombognesis y agregacin plaquetaria6-8. Tambin la hipercolesterolemia es crtica, ya que la ECV es poco prevalente en sociedades con valores de colesterol inferiores a 4,6 mmol/l5. La piedra angular del tratamiento de las ECV es su prevencin a travs de la modificacin de los factores de riesgo. Metas razonables en la poblacin para prevenir la ECV son dejar de fumar, controlar la presin arterial y disminuir las concentraciones de colesterol, principalmente del colesterol asociado a las lipoprotenas de baja densidad (cLDL)10. No obstante, en la actualidad se han definido muchos otros marcadores de riesgo cardiovascular, entre los que destacan las concentraciones elevadas de homocistena11, la peroxidacin de las LDL12, la presencia incrementada de LDL pequeas y densas13, valores disminuidos de lipoprotenas de alta densidad (HDL) asociados o no con hipertrigliceridemia14, insulinorresistencia15 e hiperfibrinogenogenia16 entre otros. Entre todos ellos destaca la presencia elevada de LDL peroxidadas y existe una amplia aceptacin de que la oxidacin de las LDL desempea un papel patognico significativo en la aterosclerosis. Entre enero de 1991 y finales de 1998 se publicaron ms de 1.000 trabajos en los que se trataba de forma directa o indirecta la oxidacin de las LDL17. Este nmero se ha multiplicado exponencialmente durante los ltimos 4 aos. Las LDL oxidadas contienen multitud de componentes que no estn presentes en las LDL nativas17. Su presencia y cantidad dependen de la naturaleza, tipo y extensin de la oxidacin. Las LDL circulantes pueden estar asociadas a lpidos oxidados, tales como hidroperxidos lipdicos (LOOH) y otros productos de degradacin18. Estas LDL, durante el proceso de oxidacin, pierden cidos grasos poliinsaturados (AGP) y/o antioxidantes, con la aparicin de lisofosfolpidos, oxisteroles y alteraciones marcadas en la apolipoprotena (Apo) B100 (fragmentos proteolticos) que determinan que esta lipoprotena no sea reconocida (o lo sea en menor cuanta) por los receptores de Goldstein y Brown, pero s (o en mayor cuanta) por receptores barrenderos (scavengers en terminologa anglosajona)17.
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Monocito LDL Adhesin Factores quimiotcticos Diferenciacin Captacin por macrfagos LDL oxidada Agregacin plaquetaria Endotelio

Disminucin de la Disminucin de la relajacin (NO) relajacin (NO)

Citotoxicidad

Clulas espumosas

Aumento de la contractibilidad de las clulas del msculo liso

Fig. 1. Formacin de la estra grasa y mecanismos implicados. LDL: lipoprotenas de baja densidad; ON: xido ntrico. (Modificada de Bruckdorfer30.)

Multitud de trabajos han sealado que los antioxidantes de la dieta pueden afectar al valor de antioxidantes de las LDL y del plasma y, por tanto, retrasar la oxidacin de las LDL. De hecho, los carotenoides son los primeros antioxidantes en desaparecer durante la oxidacin, lo que evita a su vez la deplecin muy rpida y excesiva de los tocoferoles de las LDL12. A su vez, numerosos estudios epidemiolgicos plantearon una correlacin negativa entre la presencia de antioxidantes en plasma y la incidencia de ECV19-22. Sin embargo, la relacin entre suplementacin con vitamina E y accidente cardiovascular no se observ en el estudio Heart Outcomes Prevention Evaluation (HOPE)23. Por otra parte, la mayora de estos estudios asumen que los efectos de los antioxidantes sobre las LDL demostrados in vitro pueden ser capaces de inhibir la progresin de la enfermedad coronaria in vivo. La controversia se extiende al hecho de que los antioxidantes, al ejercer como tales, se oxidan y pueden actuar como prooxidantes24-26. Este aspecto ha sido sealado para la vitamina E, particularmente en presencia de peroxidasas24. Tambin se desconoce si la proteccin observada sobre la progresin de lesiones tempranas por el consumo de antioxidantes tendra lugar en lesiones ms avanzadas22. El organismo cuenta adems con mecanismos antioxidantes muy potentes que evitan la propagacin rpida de radicales libres y que son capaces de recuperar muchas estructuras afectadas por el dao peroxidativo27. Entre estos mecanismos ha surgido con una enorme fuerza la enzima paraoxonasa. En los ltimos dos aos esta enzima se ha determinado o tratado en unos 150 artculos cientficos, y por tanto merece que le dediquemos un pequeo captulo enfocado a revisar algunos aspectos de la enfermedad arterial con los que se relaciona. Placa de ateroma y oxidacin de las LDL La aterosclerosis se desarrolla durante aos y tiene un origen multifactorial en el que estn implicados factores genticos y ambientales28,29. Entre estos ltimos cabe destacar la dieta, el ejercicio fsico y el tabaco, que influyen de forma decisiva en la cardiopata isqumica, principal complicacin clnica de la aterosclerosis28,29. Aunque no existe total acuer-

do sobre el orden de acontecimientos que suceden en la aterognesis, existe consenso en aceptar que es una enfermedad consistente en un proceso inflamatorio donde tiene lugar una interaccin entre las lipoprotenas aterognicas, fundamentalmente las LDL, los monocitos y otros leucocitos, las plaquetas y las clulas de la pared arterial29. En la lesin aterosclertica se afectan las clulas endoteliales y los miocitos de la pared arterial, lo que induce la adhesin y migracin transendotelial de los leucocitos circulantes dentro de la pared vascular, la modificacin de los procesos de coagulacin y fibrinlisis28,29. Por ello, es necesario mantener un adecuado funcionamiento del endotelio para evitar el inicio y el desarrollo posterior de la lesin aterosclertica. En la figura 1 se esquematizan algunos de los aspectos clave que acontecen en las primeras fases de la enfermedad arterial. La lesin aterosclertica comienza con un depsito lipdico en la pared vascular, proveniente fundamentalmente de las LDL, aunque tambin participan las lipoprotenas de muy baja densidad (VLDL), lipoprotenas de densidad intermedia (IDL), lipoprotenas (a) (Lp[a]), entre otras. Las LDL ligeramente oxidadas (LDL-MM) son molculas biolgicamente activas, que incluyen, entre otros, 1-palmitoil2-(5-oxovaleril)-sn-glicero-3 fosfocolina (m/z 594.3), 1-palmitoil-2-glutaril-sn-glicero-3-fosfocolina (m/z 610.2) y otra molcula derivada del 1-palmitoil-2-araquidonoil-sn-glicero3-fosfolina31, que inducen a las clulas endoteliales a producir sustancias quimioatractivas para que se produzca la adhesin de molculas y se segreguen factores estimulantes de colonias de monocitos29. De esta forma, algunos monocitos del torrente circulatorio pasarn al interior de la pared arterial y formarn parte del fluido inflamatorio reactivo a la lesin. Los monocitos se transforman en macrfagos que no poseen los mecanismos de retroalimentacin negativa de otras clulas corporales, mediante los cuales la entrada de colesterol en la clula inhibe su colesterognesis y la expresin gnica de receptores para Apo E/Apo B100. Estos macrfagos van cargndose de material lipdico que se deposita en forma de gotas de grasa y se transforman en clulas espumosas (fig. 1). Las clulas espumosas se sitan distalmente con respecto a la luz vascular y se origina la estra grasa. En un futuro, si la lesin contina y el proceso se agrava, aparece una acumulacin fibrolipdica o ateroma. La placa de ateroma es la responsable de la estenosis de los vasos, lo que provocar los sntomas clnicos de la enfermedad cardiovascular. Como hemos comentado, entre los pasos que acontecen en el desarrollo de las lesiones ateromatosas en las paredes entoteliales, la oxidacin de las LDL parece fundamental para el desarrollo de la estra grasa. Enzimas como la xido ntrico sintasa, ciclooxigenasa, lipooxigenasa, citocromo P450, metales como el hierro, productos de la cadena respiratoria y otros sern los causantes de la aparicin y propagacin de especies reactivas de oxgeno en la pared arterial (fig. 2)32. Los radicales libres de oxgeno actan oxidando los fosfolpidos de las LDL que se encuentran en el espacio subendotelial32, zona donde al parecer hay una menor concentracin de antioxidantes33. Consecuentemente, la adicin de oxgeno molecular en diferentes posiciones de los fosfolpidos genera fosfolpidos multioxigenados. Cuando la concentracin de fosfolpidos oxidados se eleva, se produce su fragmentacin formando unas molculas que inducen una respuesta inflamatoria en la pared arterial32. Desde hace un tiempo se ha propuesto que las HDL desempean un papel antiaterosclertico, no slo por ser clave en el metabolismo de las lipoprotenas y en el transporte retrgrado de colesterol, sino porque retiran componentes oxidados de las LDL34 y de la pared arterial, y los transportan al hgado
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CE LIE CML

PA

Ciclooxigenasa Citocromo P450 Oxidacin mitocondrial Hierro... ROO OOR O H HH H R1 C O CH2 CH O C O O R1 C O CH2 CH O C PON

LDL

Fosfocolina CH2 Inactivacin compuestos de las MM-LDL

Fig. 2. Esquema de la peroxidacin de los fosfolpidos de las lipoprotenas de baja densidad (LDL) y su inactivacin por los sistemas paraoxonasa y PAF-AH. CE: clulas endoteliales; LEI: lmina elstica interna; CML: clulas musculares lisas; PA: pared arterial; PAF-AH: factor activador de plaquetas-acetilhidrolasa; MM-LDL: LDL ligeramente oxidadas. (Modificada de Navab et al32.)

Fosfocolina-CH2 O HOO O Biolgicamente activo R1 C O CH2 Inactivacin O compuestos de las CH O C C PAF-AH MM-LDL Fosfocolina-CH O
2

O(O)H

O(O)H

Biolgicamente activo Progresin de la oxidacin Compuestos biolgicamente muy oxidados en LDL altamente oxidadas

para su eliminacin por la bilis35. Tambin las HDL disponen de mecanismos para controlar el estado antioxidante de las LDL32. Si por diversos motivos los mecanismos protectores y/o antioxidantes fueran insuficientes, la lesin progresara y la placa aterosclertica se ira poco a poco instalando en la pared arterial. Dado que, como hemos comentado, los lpidos que se oxidan provienen fundamentalmente de las LDL, es lgico pensar que la grasa de la dieta condicione tanto la concentracin como la susceptibilidad de las LDL a la oxidacin33. Los AGP son los cidos grasos ms fcilmente oxidables, mientras que los saturados didcticamente podemos decir que no se oxidan. No obstante, aunque los AGP disminuyen la concentracin de LDL, la ingesta elevada de estos compuestos acompaada de consumo deficitario de antioxidantes puede afectar negativamente al estado oxidativo de estas partculas e incrementar su riesgo peroxidativo17,22. En la actualidad se est resaltando la importancia del consumo de aceites y grasas ricas en cidos grasos monoinsaturados (AGM), ya que ejercen un efecto hipocolesterolemiante potente36,37 e inducen adems un menor riesgo peroxidativo que la ingesta elevada de AGP. A su vez, los AGM disminuyen la sntesis del ADN de las clulas musculares y por tanto reducen la lesin, ya que en la lesin aterosclertica se produce una marcada proliferacin de clulas musculares lisas28,29. Se han definido otros muchos aspectos positivos derivados del consumo de AGM, tales como el incremento de la fibrinlisis38, la mejora de la resistencia a la insulina39 o la disminucin de la presin arterial40, pero escapan del contenido de esta revisin. HDL y enzimas asociadas Multitud de estudios epidemiolgicos han sealado una relacin inversa entre la concentracin de HDL y el riesgo cardiovascular5. No obstante, estas lipoprotenas son muy heterogneas, habindose definido varias subpoblaciones de diferente composicin lipdica y proteica y, por tanto, con
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densidad, tamao y propiedades diferentes41-43. De Oliveira e Silva et al44 sealan que el 70 y el 20% de la masa proteica de las HDL est integrada, respectivamente, por Apo AI y Apo AII. Dicha relacin no es estable. Snchez-Muniz et al45 comprobaron que esta relacin variaba en mujeres posmenopusicas dependiendo de la insaturacin de la grasa diettica, incrementndose el porcentaje de Apo AII al ingerir una grasa ms saturada, fundamentalmente en las mujeres hipercolesterolmicas. Segn Fruchart et al41, existen 2 familias mayores de HDL que contienen Apo AI y Apo AII; las que tienen slo Apo AI se conocen como LpAI, mientras que las que incluyen las 2 Apo A se denominan LpAI:Apo AII46. Estas lipoprotenas presentan entre s diferencias importantes. As, resulta relevante que las protenas que estimulan el transporte reverso de colesterol (lecitincolesterol acetiltransferasa [LCAT]) y la protena transferidora de steres de colesterol (CETP) estn presentes fundamentalmente en las LpAI, pero no en las LpAII. Por otro lado, se cree que la relacin inversa existente entre el riesgo de presentar lesiones cardiovasculares y los valores de HDL probablemente se debe a la accin de enzimas asociadas a las HDL. As, la enzima paraoxonasa 1 (PON-1) y el factor activador de plaquetas acetilhidrolasa (PAF-AH) protegen las LDL de la peroxidacin31,32, mientras que la LCAT participa en el transporte reverso del colesterol. Ambas acciones son beneficiosas a la hora de evitar o mejorar la lesin ateromatosa. Adems, se ha sealado en roedores una correlacin elevada y significativa entre los valores de PON-1 y LCAT, lo que apunta a una importante interrelacin entre ambas enzimas49 (fig. 3). Sin embargo, hoy da an no podemos explicar con certeza la relacin inversa entre enzimas ligadas a las HDL y el riesgo cardiovascular. Se sabe, adems, que estas enzimas estn asociadas solamente a una pequea fraccin de las partculas HDL, aspecto que explica que algunos pacientes con concentraciones bajas de colesterol HDL no manifiesten clnicamente aterosclerosis, mientras que otros con valores normales de colesterol HDL presenten lesiones aterosclerticas prematuras50.
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45 40 LCAT ([mol CE/l.h]) 35 30 25 20 15 30 r = 0,77 p < 0,0001

40

50

60

70

80

90

100 110

Paraoxonasa ([mol/l].[min])
Fig. 3. Correlacin entre las enzimas lecitincolesterol acetiltransferasa (LCAT) y paraoxonasa 1 (PON-1). (Tomada de Kudchodkar et al49, con permiso del Journal of Nutirition.)

C2H5O C2H5O

S PO

NO2

C2HO C2HO

Paratin Citocromo P450 C2H5O C2H5O

O PO

POH

insecticida paratin50, el diazoxn y gases nerviosos como el sarn y somn entre otros sustratos)51. El esquema de la reaccin de hidrlisis del parathin se presenta en la figura 4. En el organismo existen otras enzimas, como la seudocolinesterasa y la acetilcolinesterasa, que al actuar frente al paraoxn o diazoxn se unen a ellos de forma irreversible, lo que imposibilita su futura actuacin en reacciones en las que stas participan de forma habitual50. Por ello, a estos sustratos se los denomina sustratos suicidas. Sin embargo, el organismo ha desarrollado mecanismos para evitar tal bloqueo enzimtico. As, la enzima PON es la enzima que protege frente a la intoxicacin por compuestos tales como los organofosforados. Dado que la unin que se establece entre la enzima PON-1 y tales sustratos es reversible, una vez transcurrido un tiempo dicha enzima volver a su estado original para ejercer su accin habitual50. La enzima PON-1 es una enzima que se ha identificado en los mamferos y que no se encuentra en peces e invertebrados50. De hecho, hay una gran similitud en la organizacin estructural de los genes PON-1 de humanos y de ratones, de lo que se deduce su importancia metablica en los mamferos52-55. No obstante, todava no podemos hacer nada ms que especular sobre esta enzima metabolizadora de ciertos xenobiticos y sobre su forma de actuacin. Por ello se estn realizando estudios con el objetivo de conocer su ubicacin exacta, su actividad, el sustrato fisiolgico sobre el que acta, factores que modulan su accin, su expresin gnica, etctera. Sntesis, distribucin y almacenamiento de PON-1

Dietilfosfato NO2 Paraoxonasa 1

OH

+
NO2 p-nitrofenol

Paraoxn

Fig. 4. Hidrlisis del paraoxn por la enzima paraoxonasa 1 (PON-1).

En la tabla 1 se resumen algunas de las caractersticas y funciones de las enzimas asociadas a las HDL. Como se comentar en detalle, la enzima PON-1 se encarga de eliminar los productos de la oxidacin de los fosfolpidos de la LDL, mientras que sobre estos ltimos actuara la PAF-AH promoviendo la hidrlisis de estas molculas (fig. 2) para que no se d la respuesta inflamatoria promovida por las LDL-MM31. Caractersticas generales de PON-1 Se ha propuesto a la enzima PON-1 (PON-1, EC3.1.8.1. arildialquilfosfatasa) como una enzima que ejerce un efecto antiaterognico50. La enzima PON-1 es una enzima que hidroliza el enlace ster O-P del paraoxn (un metabolito del TABLA 1 Enzimas asociadas a las lipoprotenas de alta densidad
Enzimas Abreviatura EC

Aunque no se tiene certeza total, parece ser que la PON-1 es sintetizada, almacenada y secretada fundamentalmente por el tejido heptico36. Aunque podemos encontrarla en hgado, cerebro, pulmn, corazn, riones, intestino delgado y aorta57,58, no sabemos si la enzima PON de estos tejidos contribuye a la actividad plasmtica49. Puesto que la actividad de la enzima PON-1 se correlaciona con los valores hepticos del ARNm PON-1, se cree que la actividad srica se debe a la expresin heptica de esta protena59,60. No se cree que circule libre en el plasma61. En recin nacidos, la actividad de la enzima es del orden de la mitad que en el adulto; de hecho, durante el primer ao es cuando se adquiere la actividad que se mantendr relativamente elevada el resto de la vida62,63. A pesar del estrs oxidativo que implica el nacimiento, los valores bajos de PON-1 presentes en el recin nacido probablemente se deban a las bajas concentraciones de VLDL y LDL en ellos encontradas64,65, requirindose por tanto menos sistemas antioxidantes para proteger a las LDL del neonato. No obstante, sera interesante comprobar si dicha enzima es inducida cuando se presenta un estrs oxidativo incrementado, tal como ocurre en recin nacidos pequeos para su edad gestacional.

Funcin

Paraoxonasa 1 Paraoxonasa 2 Paraoxonasa 3 Acetilhidrolasa-factor activador de plaquetas Lecitincolesterol acetiltransferasa

PON-1 PON-2 PON-3 PAF-AH LCAT

EC 3.1.8.1 EC 3.1.8.1 EC 3.1.8.1 EC 3.1.1.47 EC 2.3.1.430

Antioxidante, protector del estado antioxidante de las LDL Antioxidante, protector del estado antioxidante de las LDL Lactonasa Antioxidante, eliminador de los productos e hidrlisis de los fosfolpidos de las LDL Esterificacin del colesterol

EC: Enzyme Commission; LDL: lipoprotena de baja densidad; PAF-AH: factor activador de plaquetas-acetilhidrolasa.

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PON-1 y su relacin con las HDL y apolipoprotenas AI, AII, E y J Al igual que la enzima PON-1, la Apo AI est estrechamente relacionada con las HDL. Es el principal componente proteico de las HDL, ya que supone aproximadamente el 70% del total proteico de estas partculas45,49. Se trata de una Apo que en mamferos se sintetiza en el hgado e intestino66. La Apo AI madura es una protena de 243 aminocidos, que entre sus residuos 99 y 230 est compuesta de una estructura repetitiva de 22 aminocidos separados por residuos de prolina66. Estas zonas tienen caractersticas anfipticas, siendo la zona polar la que entra en contacto con los lpidos de la partcula HDL66. La Apo AI consta de un extremo aminoterminal66. En 1961 Uriel67 detect por primera vez, mediante electroforesis del suero humano, la actividad de la enzima PON-1 en inmunoprecipitados de HDL. Posteriormente otros investigadores confirmaron tales hallazgos. Sin embargo, no se conoca con certeza si la enzima PON-1 era un componente intrnseco de las HDL. Estudios posteriores de filtracin en gel fast protein liquid column chromatography (FPLC) revelaron que la enzima PON-1 est ntimamente asociada a la fraccin de HDL en el suero humano. Dado que la enzima PON-1 se localiza exclusivamente en la superficie de las partculas de HDL, se ha planteado que la Apo AI es un factor que condiciona dicha ubicacin68. De hecho, al purificarla a partir de suero humano es muy difcil separar la enzima PON-1 de la Apo AI, lo que indica una estrecha asociacin61,69. No obstante, el uso de detergentes no inicos ha permitido separarlas70,71. La enzima PON-1 se asocia preferentemente a las partculas de HDL de tamao normal; sin embargo, la estabilidad tanto de la actividad como de la unin se ve reducida en ausencia de Apo AI72. En el suero de personas cuyas HDL carecen de Apo AI, carencia muy rara de la que hasta la fecha slo se conocen 6 casos en el mundo73, tambin existe PON-1. Sin embargo, su actividad es menos estable a 37 C72. De igual manera, en enfermedades como la de Tangier o enfermedad en ojo de pez en las que los valores de Apo AI y HDL estn disminuidos, la actividad de la enzima PON-1 se compromete, pero no llega a desaparecer totalmente61,74. Actualmente todava no se dispone de estudios que confirmen la ubicacin y estabilidad de la enzima PON-1 humana en situaciones de carencia completa de Apo AI, pero se piensa que es probable que la inestabilidad en la unin a las HDL ayude en la transferencia de la enzima PON-1 a las clulas de la pared arterial para proteger de la oxidacin lipdica a los fosfolpidos de las LDL72. La relacin Apo AI-PON-1 est bastante bien establecida; en cambio, la relacin entre Apo AII y PON-1 no se conoce bien. La Apo AII es la segunda mayor lipoprotena de las HDL y, por tanto, constituyente principal de las HDL49,75. Se sintetiza en el hgado como prepoapo AII y tras sufrir una serie de modificaciones se convierte en Apo AII, para circular en plasma en forma de dmero de 2 cadenas de 77 aminocidos unidas por puentes disulfuro76. Entre las subpoblaciones de HDL, como hemos comentado, existe una que contiene Apo AI y Apo AII, denominada LpAI:AII, y otra que slo contiene AI (LpAI)41,75. La Apo AII est ubicada en una subpoblacin de HDL junto con la Apo AI. Sin embargo, a diferencia de la Apo AI, la Apo AII no puede considerarse marcador exacto de la enzima PON-1 en las HDL porque, aunque la distribucin de la Apo AII coincida en una gran proporcin con la de la enzima PON-1, esta proporcin es inferior a la encontrada para la Apo AI75.
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En la actualidad se piensa que la Apo AII es inhibidora de la LCAT, protena de las HDL implicada en el transporte reverso de colesterol75. De hecho, aunque el consumo de aceites saturados (en forma de olena de palma) en mujeres posmenopusicas aumenta las concentraciones de HDL, el incremento de Apo AII se ha asociado con un incremento del riesgo aterognico45. Es posible que, dado que la enzima PON-1 se asocia a HDL enriquecidas en Apo AI y no a las ricas en Apo AII, el efecto promotor de la formacin de estras grasas de las LpAI:AII41 est asociado a su vez a la deficiencia de PON-1 de estas HDL. Sera de indudable inters comprobar tal hiptesis. Al considerar la Apo E vemos que su distribucin no coincide en la fraccin de las HDL al 100% con la de la enzima PON-1. Esto es debido a que la Apo E se encuentra tambin en otras lipoprotenas, tales como quilomicrones, VLDL o IDL72. Por tanto, es lgico que la distribucin de la enzima PON-1 no se solape al 100% con la de Apo E. Este aspecto apoya la creencia de que la PON-1 no se encuentre en las LDL o en las VLDL, al contrario que la PAF-AH, que s aparece en las LDL56. De hecho, la mayor parte de la actividad PAF-AH reside en las LDL, mientras que la actividad detectada de esta enzima en las HDL es muy baja77,78. Estudios epidemiolgicos han demostrado satisfactoriamente que existe una correlacin positiva y significativa entre la actividad de la PON-1 y los valores de colesterol HDL (r = 0,473), de Apo AI (r = 0,947)69 y de Apo AII (r = 0,637)79. Por tanto, estos datos apuntan a que la enzima PON-1 no est distribuida homogneamente en todas las subpoblaciones de HDL, sino que est asociada especficamente a algunas de ellas56. PON-1, HDL y Apo J Estudios ms recientes proponen que la enzima PON-1 obtenida por inmunopurificacin se localiza en una subfraccin de las HDL donde, a su vez, se hallan la Apo AI y la Apo J o clusterina68,80. La Apo J es una glucoprotena muy glucosilada de unos 70 kD48 secretada por las clulas HepG2 como lipoprotena, lo que indica su habilidad para asociarse a estructuras lipdicas81. Se ubica junto con la Apo AI y la PON en una subpoblacin de HDL, concretamente en las HDL3, y tambin en las lipoprotenas de muy alta densidad (VHDL)80,82. Se ha planteado que la Apo J pudiera tener adems capacidad de asociarse a otras estructuras83,84. La Apo J interviene en la regulacin y prevencin de la histlisis85, el transporte lipdico86, la apoptosis87,88 y la proteccin de las membranas donde se expresa89,90. Todo esto hace pensar que la Apo J es un factor protector del endotelio. De hecho, la concentracin de esta Apo est aumentada en las fases agudas de la aterosclerosis. Algunos autores conjeturan adems que la Apo J circula unida a las HDL con el propsito de regular el transporte y la redistribucin lipdica91. El estudio de Navab et al92 puso de manifiesto la actividad antioxidante de la Apo J al incubar las LDL de las clulas de la pared arterial con Apo J purificada. Esta Apo inhibi, de forma dependiente de la dosis, la formacin de hidroperxidos de las LDL, la produccin de la protena-1-quimiotctica para monocitos (MCP-1) y la migracin de monocitos. Todos estos datos hacen pensar que la Apo J puede reducir el potencial oxidativo de las LDL en la pared arterial. El mecanismo ms probable consistira en la eliminacin por la Apo J de los productos de la oxidacin lipdica asociados a las LDL o que son producidos por las clulas33,93,94. Navab et al92 han planteado que un aumento de la relacin Apo J/PON-1 en pacientes con cociente de riesgo colesterol toMed Clin (Barc) 2003;121(14):537-48

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PON-1

Apo AI
Fig. 5. Posible unin de la enzima paraoxonasa 1 (PON-1) a las lipoprotenas de alta densidad (HDL) a travs de un extremo aminoterminal () en colaboracin con la apolipoprotena (Apo) AI. (Modificada de Sorenson et al61.)

tal/colesterol HDL normal sera un predictor de riesgo de presentar aterosclerosis. Por tanto, parece muy probable que la composicin de las Apo de las HDL, posiblemente a travs de su relacin con la enzima PON-1, pueda afectar el desarrollo de fenmenos aterosclerticos. Unin de PON-1 a las HDL Se piensa que la enzima PON-1 se une a las HDL para poder distribuirse por el organismo de forma idnea y as llegar de forma ptima al lugar donde ejercer su accin61. En la figura 5 se presenta un esquema hipottico de la unin de la enzima PON-1 a las HDL. La secuencia terminal hidrofbica, compuesta por varios aminocidos de la PON-1 parece necesaria para su unin con las HDL61. Al parecer, se trata de una unin directa a los fosfolpidos, en lugar de a travs de la Apo AI (que tambin cuenta en su estructura con una secuencia terminal hidrofbica a travs de la cual se une a las HDL). No obstante, la Apo AI permite la presentacin ptima del fosfolpido para que se una la enzima PON-1 y se estabilice su actividad61. De esta forma, la PON1 se une a las HDL por los fosfolpidos y es retenida por el pptido hidrofbico terminal, que posibilita que la enzima PON-1 pueda transferirse desde las HDL a otras superficies fosfolipdicas61. Por otro lado, el extremo aminoterminal permite la unin directa a los fosfolpidos, incluso en ausencia de Apo61. A su vez, la lipofilia del resto N-aminoterminal facilita la unin de la enzima a los sustratos que son hidrofbicos61. Mecanismo de accin de PON-1 Como ya hemos comentado, ni la estructura ni el sitio activo de la enzima PON-1 se han determinado por el momento59. Adems, no se sabe si esta enzima contiene una trada cataltica de aminocidos similar a la encontrada en otras hidrolasas59,95. Por otro lado, es interesante resaltar que para la accin cataltica de compuestos organofosforados la PON-1 requiere condiciones diferentes que para ejercer la accin antioxidante. De hecho, durante la hidrlisis del pa-

raoxn se necesita calcio, en primer lugar para mantener el sitio activo y, en segundo lugar, para eliminar el dietilfosfato del sitio activo, mientras que no se necesita la presencia del grupo sulfidrilo libre de la cistena de la posicin 28355. No obstante, este catin no parece ser imprescindible para que la PON-1 ejerza un papel importante en la inhibicin de la formacin de perxidos96. Sin embargo, s lo es la existencia de un resto de cistena en el aminocido 28397. Adems, la modificacin qumica de la cistena inhibe la PON-159, lo que podra deberse a que se requiere SH para mantener los residuos del centro activo en una disposicin espacial ptima59. Por tanto, teniendo en cuenta estas conclusiones, puede conjeturarse que: a) acontecen cambios diferentes en la estructura de la molcula enzimtica al actuar sobre uno u otro sustrato, o b) que la enzima cuenta con dos sitios activos: uno antioxidante dependiente de la presencia de cistena en la posicin 283 y otro para la hidrlisis de compuestos organofosforados dependiente del calcio. Por el momento no hay evidencia alguna que muestre que se produzca la unin directa de la enzima PON-1 a las LDL, lo que apunta a que la proteccin antioxidante de las LDL que ejerce la enzima PON-1 se produce mediante un intercambio lipdico entre estas 2 lipoprotenas, o que la enzima PON-1 capta los productos resultantes de la oxidacin lipdica61. La PON-1, adems de actividad paraoxonsica, tambin tiene actividad arilestersica97 y lactonsica98; de hecho, durante la purificacin de dicha enzima tiene lugar un incremento muy marcado tanto de la actividad paraoxonsica como arilestersica. Adems, las dos isoformas Q y R pueden hidrolizar diversos compuestos, entre ellos algunas lactonas aromticas como la dihidrocumarina y la 2-cumarona98. Se desconoce si el sitio activo de ambas es o no el mismo, pero se piensa que tienen caractersticas comunes del sitio activo. Expresin gnica de PON-1 Recientemente se ha demostrado que el gen PON-1 es miembro de una familia de multigenes en los que tambin se encuentran los genes PON-2 y PON-3, cuyas secuencias aminoacdicas codificadas de la PON-2 y PON-3 son similares a la del gen PON-158. De hecho, las tres PON comparten aproximadamente un 65% de los aminocidos99,100. Estudios de hibridacin in situ han demostrado que el gen PON-1 se localiza en los seres humanos en la posicin q21. 3-q22.1 del brazo largo del cromosoma 799,101,102 y en el del cromosoma 6 en ratones99,100. La enzima PON-1 tiene 354 aminocidos y un peso molecular de alrededor de 43 kD58,59. Muestra polimorfismo gentico, de ah que la actividad frente a los sustratos sea diferente en funcin de la isoforma que acte. Hasta la fecha se han definido 2 polimorfismos asociados a variaciones en los codones para los aminocidos 192 y 55103: el de la posicin 192 (posicin 191 para otros)104 lleva alanina/glutamina (A/Q), y el polimorfismo del aminocido 55, donde puede hallarse una leucina o una metionina (M/L)104. Al referirnos al aminocido de la posicin 192, hablaremos de la isoenzima Q (de baja actividad frente al paraoxn) cuando la posicin 192 est ocupada por la glutamina, y de la aloenzima R (de alta actividad frente al paraoxn) cuando el aminocido es la arginina105. Con anterioridad se les llamaba alelos A y B, respectivamente. Alrededor del 30% de los caucasianos son individuos homocigotos para la aloenzima R, mientras que cerca de un 40% son heterocigotos QR92. La aloenzima R es ms activa frente a sustancias como el paraoxn56 y el metilparaoxn, mientras que la aloenzima Q
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TABLA 2 Diferentes isoformas de la paraoxonasa 1 y sustratos que hidrolizan

Isoforma Q (A) Ms activa con Diazoxn Sarn Somn Perxidos lipdicos Paraoxn Meilparaoxn Clortion oxn EPN oxn Armina Fenilacetato Clopirifos oxn 2-naftilacetato

Isoforma R (B)

Ms activa con

Isoformas Q y R

Actividad similar con

Adaptada de Mackness et al56.

TABLA 3 Distribucin (%) de portadores de los alotipos Q y/o R y L y/o M en controles y en pacientes con hipercolesterolemia familiar
Genotipo Hipercolesterolemia familiar Controles

Alotipos Q/R QQ QR RR Alotipos L/M LL LM MM

Adaptada de Toms et al110.

62,0 32,0 6,0 26,0 62,0 12,0

49,7 39,7 10,6 32,7 50 17,2

lo es frente al diazoxn56 y los gases nerviosos sarn y somn. Ambas presentan una actividad similar cuando se trata del fenilacetato y 2-naftilacetato. Por tanto, no debe desdearse, como ya hemos comentado, que el mecanismo de accin antiaterognico de la enzima PON-1 sea diferente del cataltico que manifiesta frente a steres aromticos y compuestos organofosforados (tabla 2)97. A pesar de la informacin cientfica existente sobre los polimorfismos de la enzima PON-1, sta no parece suficiente para asociar la expresin gnica de la PON-1 con el riesgo de presentar ECV. Adems, no slo puede ser importante a este respecto la enzima PON-1, ya que la enzima PON-2, con sus polimorfismos, y posiblemente la enzima PON 3 y otros genes interaccionan entre s, de forma que si el sistema se desequilibra, la susceptibilidad de riesgo de presentar ECV se incrementa. Con anterioridad se crea que el polimorfismo de la posicin 55 no influa en el papel de la enzima PON-1 en el proceso aterognico; por ello, la mayora de los estudios han centrado su atencin en el polimorfismo a nivel del aminocido 192. Sin embargo, se ha observado que el polimorfismo 192 modula la actividad de la enzima PON-1 frente a algunos sustratos exgenos, pero no frente a todos105,106. Leview TABLA 4

et al104 y Garin et al107 vieron que los portadores del alelo L (leucina en la posicin 55) tenan concentraciones de PON1 significativamente superiores a los portadores del alelo M (metionina), lo que implicaba diferencias en la actividad de la enzima PON-1 frente a ciertos sustratos. Entre las diferentes hiptesis que se barajan para explicar estos resultados figuran las siguientes: a) que la sntesis, expresin y/o degradacin de la enzima PON-1 sea diferente en funcin del alelo que lo exprese, o b) que la estabilidad de los pptidos codificados por los alelos L y M sea diferente, pudiendo incluso llegar a afectar a la asociacin de la enzima PON con las HDL104. Hasta la fecha se desconoce el mecanismo por el que el polimorfismo PON-1 puede influir en la susceptibilidad de presentar ECV. No obstante, se cree que la expresin de los distintos alelos explica diferencias en las concentraciones sricas de PON-1103. As, puede afirmarse que los individuos homocigotos QQ/MM metabolizan ms lentamente el paraoxn que los homocigotos RR/LL, mientras que los heterocigotos manifiestan una actividad intermedia56,105,108,109. En las tablas 3 y 4 se recogen datos referentes a la distribucin de los alelos en pacientes con hipercolesterolemia familiar frente a controles, y la variacin de la actividad PON-1 en funcin del genotipo y el tratamiento farmacolgico. Como hemos comentado, las HDL protegen a las LDL-MM del dao oxidativo, pero el grado de proteccin es diferente en funcin de la combinacin de alelos existentes. Aunque se trata de investigaciones aisladas, no de estudios prospectivos, se ha visto que la presencia del alelo R suele incrementar la probabilidad de presentar ECV56,103. Al parecer, los portadores del alelo 192R PON-1 manifiestan una menor hidrlisis de perxidos103,111 y por ello sera ms efectivo emplear como sustrato diazoxn que paraoxn, por lo que la actividad diazoxonsica pudiera ser un mejor indicador de ECV que la paraoxonsica. Otras paraoxonasas: PON-2 y PON-3 Recientemente se ha comprobado que el producto del gen PON-2 se localiza de forma abundante en hgado, cerebro, riones, testculos, etc.101. Adems, el ARNm de la enzima PON-2 se halla mayoritariamente en hgado, pulmones, placenta, testculos y corazn100. No obstante, al contrario que para las enzimas PON-1 y PON-3, la PON-2 no se detecta por anlisis Western-Blot en las HDL ni en las LDL100. No se conoce exactamente la funcin de la enzima PON-2, pero la similitud de aminocidos con PON-1 y PON-3 induce a pensar que debe de tener propiedades similares a aqullas. Pudiera ser que la PON-2 indujese una actividad antioxidante innata en la mayora de las clulas, independiente de su secrecin100. Aunque aparentemente la protena codificada por el gen PON-2 carece de actividad paraoxonsica, tiene capacidad antioxidante, ya que previene de la peroxidacin a los fosfolpidos de las LDL, revierte la oxi-

Actividad de PON-1 en pacientes con hipercolesterolemia familiar, antes y despus del tratamiento con simvastatina en funcin del polimorfismo gentico
Actividad PON-1 (U/l) Antes Despus Efecto del frmaco (p) Incremento de la actividad (%) Efecto del alelo Q frente a R L frente a M

QQ QR + RR LL LM + MM

118 (49) 262 (103) 236 (134) 148 (78)

128 (49) 291 (133) 266 (166) 162 (80)

0,058 0,033 0,028 0,058

8,5 11 12,7 9,5

p = 0,28 p = 0,44

Adaptada de Toms et al110.

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dacin de las LDL-MM e inhibe la induccin quimiotctica de los monocitos por las LDL-MM100. Recientemente se ha descubierto la existencia de polimorfismos genticos para la enzima PON-2 que posiblemente tambin estn implicados en el riesgo de presentar ECV. Estos polimorfismos se localizan en el codn 311 (cistena o serina) y el codn 148 (alanina/glicina) (A/G) del gen PON-2101. Tambin recientemente se ha identificado el producto del gen PON-3 en conejos. Se trata de una lactonasa que se localiza en las HDL112. La enzima PON-3, al igual que el PON1, parece asociarse a las HDL99. Despus de clonar el gen PON-3, se ha visto que la protena que codifica dicho gen no metaboliza el paraoxn99. Se trata de una protena de unos 40 kDa, sintetizada en el hgado, de la que hasta la fecha no se han identificado polimorfismos genticos99. Su accin consiste en evitar la formacin de las LDL-MM e inhibir la quimiotaxis de monocitos inducida por estas lipoprotenas modificadas en la pared vascular99. Por otro lado, sera interesante conocer si las PON-1 y PON3 coexisten en las mismas o en diferentes subpoblaciones de HDL. La PON-3 se encuentra en el rin, pero no la PON-1, por lo que a pesar de lo que se cree podran tener distinta funcin metablica99. A diferencia de la enzima PON-1, la PON-2 y PON-3 carecen de actividad PON y arilestersica (o tienen muy poca), por lo que no podemos considerar la actividad PON una caracterstica comn de los miembros de la familia PON98. Es por tanto necesario dilucidar el porqu de la distinta forma de actuacin de estas 3 protenas en la aterognesis. Principales factores que afectan a la actividad y concentracin de PON-1 En la actualidad se ha defendido que la actividad y concentracin srica de la enzima PON-1 pueden variar debido a otros factores diferentes del genotipo61. As, se ha definido que la actividad paraoxonsica es menor en situaciones metablicas relacionadas con ECV, como la diabetes mellitus113,114 y la hipercolesterolemia113. Tambin la actividad PON-1 disminuye con la edad, debido probablemente a un incremento del estrs oxidativo110 que comporta el envejecimiento115 o a la tendencia a las concentraciones ms bajas de HDL en ancianos116. La actividad y concentracin de la enzima PON-1 vara dependiendo del sexo. Adems, la mayor concentracin de Apo AI y HDL en las mujeres podra hacer que los complejos PON-1-Apo AI-Apo J formados fueran en ellas ms estables117. Adems, los cambios hormonales parecen estar relacionados con dichas modificaciones, ya que la actividad PON vara paralelamente al uso de anticonceptivos orales117. A su vez, el embarazo, las alteraciones hormonales y los trastornos metablicos que condicionan cambios en las concentraciones de la Apo AI modifican los parmetros relacionados con la enzima PON-161. Por otro lado, no abundan los estudios que analicen el posible efecto de frmacos sobre la actividad y concentracin de la enzima PON. Se ha visto que los individuos con hipercolesterolemia familiar que no estn tratados con frmacos hipolipemiantes muestran una actividad srica de la enzima PON-1 inferior a la de sujetos normolipmicos110. Al someterlos a un tratamiento con simvastatina, la actividad srica de dicha enzima se eleva hasta alcanzar valores similares a los de los individuos control110. Se desconoce el mecanismo exacto por el que esto ocurre, pero se ha postulado que dicho frmaco ejerce un efecto antioxidante sobre los lpidos oxidados de las LDL a travs de las HDL, concretamente a travs de las poblaciones Apo J-HDL y no AI-HDL, ya que la

simvastatina no modifica los valores de Apo AI110. Adems, la simvastatina disminuye el estrs oxidativo y por ello aumenta la actividad de la enzima PON-1110. Al estudiar en ratas la cerivastatina (estatina recientemente retirada del mercado por los problemas relacionados con la randomilisis y muerte sbita), se vio que el efecto antioxidante de las estatinas era independiente de las concentraciones de colesterol118. Por un mecanismo an no conocido, la cerivastatina disminua la actividad de la enzima PON en estos animales, resultado algo desconcertante si partimos de la base de que la enzima PON protege frente a la aterosclerosis y que las estatinas son los frmacos antiaterosclerticos por excelencia. Este descenso pudiera ser fruto de un mecanismo adaptativo, consecuencia de la disminucin producida por la cerivastatina de los triglicridos y perxidos lipdicos, por lo que desapareceran los sustratos para que actuara la enzima PON-1118. Se desconoce el mecanismo y si este efecto es reproducible para otras estatinas. Por ello, cabe pensar que entre los frmacos hipolipemiantes y la actividad de la PON-1 existe cierta relacin, todava no esclarecida. As, algunos estudios97,110 conjeturan un aumento de la actividad de PON-1, mientras que otros no119,120. En la tabla 5 se resumen los datos relativos a la actividad de la PON-1 y tratamientos hipolipemiantes en 3 estudios. Al igual que los frmacos, la dieta modula tambin la actividad y concentracin de la enzima PON-1. Hasta el momento los datos de que disponemos son escasos para poder generalizar y, por ello, se requiere un mayor nmero de investigaciones relacionadas. As, podra pensarse que el consumo de antioxidantes mejora el estado paraoxonsico, pero los datos son controvertidos, ya que, mientras que la ingesta de vitaminas C y E parece incrementar la actividad de la enzima PON-1120, el consumo elevado de vegetales, tericamente ricos en antioxidantes, disminuye su actividad122. La razn de esta divergencia se desconoce, pero podra ocurrir que la enzima PON-1 no comience a actuar hasta que los antioxidantes se agoten. Por tanto, en individuos que ingieren dietas vegetarianas que aportan concentraciones suficientes de antioxidantes, no se requerira la actuacin de la enzima PON-1 y, por tanto, no sera necesaria su induccin gnica. Este planteamiento parece lgico; sin embargo, slo podemos formularlo como hiptesis. En humanos se ha encontrado que el consumo de alcohol, independientemente del tipo de bebida alcohlica, aumenta los valores de PON-1123. Por otro lado, en humanos tambin se ha visto un descenso de actividad de la enzima PON-1 de alrededor de un 16% cuando se ingieren dietas que contienen aceite reutilizado de frituras repetidas124. Tambin se ha observado un descenso en la actividad PON-1 de ratones cuando se les administra una dieta aterognica125,126. Kudchodkar et al49 han sealado que la actividad paraoxonsica en ratas es ms elevada en animales que consumen aceite de oliva que en los que reciben grasas saturadas o aceites de pescado. El mecanismo no est claro y los autores sealan que el incremento de la actividad PON-1 est altamente correlacionado (r = 0,77; p < 0,0001) con la esterificacin del colesterol a travs de la enzima LCAT (fig. 3). Dado que el aceite de oliva incrementa la concentracin de HDL y de LCAT, podra postularse que el aumento de PON-1 promovido por el consumo de aceite de oliva sera dependiente per se de las concentraciones de HDL ms que de la peroxidacin. Por su parte, el aceite de pescado inducira valores mas bajos de HDL y la mayor insaturacin de la grasa redundara en mantener bajos los valores de PON-1. Menos claros son los valores ms bajos de PON-1 en el perodo de ingesta de olena de palma, pues las concentraciones de HDL se incrementan. No obstante, se ha
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TABLA 5 Efectos del tratamiento con frmacos hipolipemiantes sobre la modificacin de la actividad de PON-1
Estudio Durrington et al119 Balogh et al121 Toms et al110

Poblacin de estudio Edad (aos) IMC (kg/m2) Enfermedad Tipo de estudio Frmacos estudiados Sustrato(s) PON-1 Variacin de la actividad PON-1 (%) Conclusin

22 varones 7 mujeres 56 (intervalo, 35-68) 28,4 (intervalo, 24-40) Hiperlipoproteinemia IIb Cruzado, doble ciego y placebo en control Bezafibrato Gemfibrozilo Paraoxn Gemfibrozilo: +7,1%; NS Bezafibrato: +10,6%; NS Sin efecto negativo

22 varones 34 mujeres 56,27 (8,91) 28,87 (4,65) Diabetes mellitus tipo 2 Intervencin farmacolgica, sin placebo, en control Gemfibrozilo Paraoxn +18,5%; p < 0,001 La elevacin significativa no alcanz la actividad PON-1 de los individuos control

25 varones 39 mujeres 56,98 (11,42) (intervalo, 21-86) 26,83 (84,17) (intervalo, 15,04-35,63) Hipercolesterolemia familiar Intervencin farmacolgica, control aleatorio, sin placebo en control Simvastatina Paraoxn Fenilacetato PON-1: +12,3%; p = 0,005 AE: +8,8%; NS La actividad PON-1 es similar en controles y pacientes con HF despus de tratamiento

IMC: ndice de masa corporal; PON-1: paraoxonasa 1; NS: no significativo; AE: actividad arilestersica; HF: hipercolesterolemia familiar.

constatado que el estado oxidativo de las LDL es ms bajo9, lo que demandara una menor proteccin antioxidante y, por tanto, menores concentraciones de PON-1. El tabaco es otro factor cuyo impacto es relevante en la actividad de la enzima PON-1. Segn diversos estudios, el tabaco parece disminuir su actividad127,128. Cabe tambin conjeturar que ciertas enfermedades relacionadas con una mala ventilacin y en las que se produce estrs oxidativo modifiquen la actividad paraoxonsica, como la enfermedad pulmonar obstructiva crnica. Sin embargo, esto es slo una hiptesis. De hecho, en nuestra bsqueda bibliogrfica no hemos encontrado datos al respecto. Conclusin y futuros estudios Si bien es cierto que cada experimento revela algo nuevo sobre la PON-1 en cuanto a ubicacin, actividad, polimorfismo, etc., los datos disponibles en la actualidad no parecen totalmente fiables y slo son orientativos. Los ltimos estudios aportan novedades que, ms que verificar las hiptesis planteadas en el pasado, lo que hacen es plantear nuevas hiptesis que requieren confirmacin, mientras que las postuladas en un pasado siguen sin dilucidarse. As pues, han pasado aos desde que se descubri la PON1 y, a fecha de hoy, todava se desconoce su ubicacin exacta. Se sabe que se relaciona con las HDL, la Apo AI y la Apo J pero, en situaciones especiales como en las deficiencias de Apo AI, se desconoce el mecanismo por el que esta enzima se asocia a las HDL. A este respecto se han apuntado posibles mecanismos, pero nada ha sido confirmado, siendo por tanto slo hiptesis. En cuanto al polimorfismo gentico que aparece para dicha enzima y que influye sobre la susceptibilidad de presentar ECV, los datos disponibles a da de hoy son ms bien contradictorios. La mayora de las investigaciones han planteado que la relacin entre polimorfismo y ECV se debe principalmente al polimorfismo a nivel del aminocido 192, y que el polimorfismo 55 parece no estar relacionado con la susceptibilidad de presentar ECV. Sin embargo, segn los ltimos estudios104,107 podra ser que el polimorfismo 55 influyera en dicha susceptibilidad incluso ms que lo que lo hace el 192. Es tal el desconocimiento en este campo que los diferentes investigadores ni siquiera coinciden en la nomenclatura de las isoformas de la PON-1. Algunos hablan de la isoforma Q cuando aparece una glutamina en el aminocido 192, lo que otros denominan alelo A, y de isoforma
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R o alelo B cuando el aminocido existente es arginina. Coinciden en la nomenclatura para el polimorfismo 55, donde los aminocidos que varan son la metionina o la leucina. El genotipo parece no ser suficiente a la hora de establecer una relacin fiable en cuanto a la susceptibilidad o no a presentar ECV. Por ello, parece razonable recurrir al estudio del fenotipo, en espera de descubrir nuevos parmetros que permitan dilucidar las cuestiones que hoy por hoy carecen de respuesta. Por otro lado, la relacin dieta-PON-1 goza de un inters especial. Como ya se ha dicho anteriormente, valores elevados de actividad de la PON-1 parecen indicar cierto grado de proteccin aterosclertica; de hecho, en enfermedades como la diabetes tipo 2 o en hiperlipemias los ttulos bajos de PON-1 incrementan la probabilidad de padecer un trastorno aterosclertico. Segn esto, parece lgico pensar que valores bajos de PON-1 impliquen susceptibilidad aterosclrotica. Sin embargo, tambin sabemos que una dieta sana, que incluye el consumo de cantidades elevadas de vegetales, ayuda a proteger frente a la aterosclerosis. Paradjicamente, se ha visto que en individuos con una dieta rica en productos vegetales los ttulos de la PON-1 son inferiores a los de los individuos controles118. Se ha intentado explicar estos resultados subrayando el hecho de que las dietas saludables llevan ms antioxidantes y, por tanto, en estas condiciones la enzima PON-1 puede no ser necesaria. Tambin se ha empezado a trabajar con los productos de los genes PON-2 y PON-3, de los que se conoce bastante menos que los de la PON-1. Por tanto, podemos concluir que hacen falta ms estudios que confirmen las hiptesis formuladas hasta la fecha, as como otros datos que permitan solucionar las dudas existentes sobre la PON-1, enzima que, aunque todava no bien conocida, desempea muy probablemente un papel importante en la proteccin de la ECV. Agradecimiento
Agradecemos la aportacin de los datos facilitados por algunos autores, como M. Toms y M.I. Mackness.

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