TCNICAS BACTERIOLGICAS BSICAS

DIAGNSTICO DE LABORATORIO
SEMINARIO Microbiologa General 2010
Bioq. Mara Viviana Bojanich

Para llegar al correcto diagnstico de laboratorio hay que conocer:

Tcnicas o mtodos a utilizar (TBB) RAZONAR 1- muestras
2- precauciones para recuperar y diagnosticar m.o. asociados a la patologa y no FN 3- conservacin de la muestra 4- tcnica diagnstica a utilizar en cada caso 5- interpretacin de los resultados 6- utilidad en el contexto del cuadro del paciente.

Ciclo o etapas del diagnstico microbiolgico

Orden de anlisis Consulta al mdico Recoleccin adecuada de la muestra Envo al laboratorio Transporte y conservacin

Interpretacin del informe e instauracin de la terapia

Ingreso de los datos

Interpretacin del resultado Informe final Identificacin bacteriana

Procesamiento de la muestra Interpretacin de cultivos

RECOLECCIN DE MUESTRAS
CONCEPTOS BSICOS La muestra debe ser material del verdadero sitio de infeccin. Debe recogerse con un mnimo de contaminacin (ej. saliva, piel, orina) Momento o perodo ptimo para tener la oportunidad de aislar los m.o. Obtener suficiente cantidad de muestra. Uso de dispositivos de recoleccin de muestras y medios de cultivo adecuados.

Obtener las muestras antes de la administracin de ATB. Rotular correctamente el envase que contiene la muestra
Nombre N de ID Material de .. Mdico Da/Hora Diagnstico presuntivo CUANDO LA MUESTRA NO ES BUENA POCO PUEDE HACER EL LABORATORISTA PARA LLEGAR A UN BUEN RESULTADO. TENER CLARO SI EL AISLAMIENTO EST ASOCIADO AL CUADRO CLNICO

Transporte de muestras
Tiempo lmite de dos horas entre la recoleccin y su procesamiento. Medios de transporte ( Stuart, Amies, CareyBlair). Funcin: preservar la viabilidad sin permitir multiplicacin significativa de m.o. Transporte externo embalar y rotular .

Embalaje/envasado y etiquetado de sustancias infecciosas de la categora A

OMS 2005- Manual de bioseguridad en el laboratorio

Embalaje/envasado y etiquetado de sustancias infecciosas de la categora B

Ejemplos de sistemas de embalaje/envasado triple (Ilustraciones amablemente cedidas por la IATA, Montreal (Canad))
OMS 2005- Manual de Biseguridad en el laboratorio

Algunas consideraciones
Inoculacin: proceso de introduccin de bacterias viables en un medio de cultivo lquido o sobre la superficie de un medio slido. Cultivo puro: poblacin bacteriana homognea. Colonia: masa visibles de bacterias que se replicaron luego de ser diseminadas en la superficie de un medio de cultivo slido. Clon: las bacterias que se encuentran en una colonia y derivan de una nica clula. UFC (unidad formadora de colonias)

Identificacin: permite encuadrar un organismo en un grupo taxonmico especfico, dentro de una clasificacin previamente establecida. Nomenclatura: forma en que se puede definir y comunicar las caractersticas taxonmicas de un grupo de bacterias, denominadas especies. Especie: bacterias agrupadas y estudiadas segn sus aspectos genticos, morfolgicos, fisiolgicos y culturales. (Sistema binomial de Ligneo, Gnero y especie, ms variedades, biovares, tipos, etc) Ejemplo: Staphylococcus aureus, Escherichia coli

Procesamiento de muestras
MUESTRA

EXAMEN MICROSCPICO

EXAMEN MACROSCPICO

CULTIVO para aislamiento primario e IDENTIFICACIN

Examen microscpico directo

Examen Microscpico DIRECTO

Fresco
Observacin directa entre porta y cubre

Gram

Ziehl-Neelsen Kinyoun

Examen en Fresco
Permite ver: Calidad de la muestra Grado de inflamacin (neutrfilos, piocitos, hemates) Elementos levaduriformes y miceliales Estructuras parasitarias Movilidad bacteriana

Coloraciones
Gram Zielhl-Neelsen Giemsa Azul de metileno

Coloracin de GRAM

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Cultivo para aislamiento primario

Medios de cultivo slidos

Medios generales o enriquecidos

Medios selectivos

Medios diferenciales

Tcnicas de siembra
Estra Agotamiento Recuento semi-cuantitativo de colonias

Condiciones de cultivo
1) Seleccionar temperatura y atmsfera de incubacin - Temperatura 35-37C - Atmsfera :(de acuerdo a las exigencias de O2 y CO2) Aerobiosis o aire: 21% O2 Lata con vela: 12 a 17% O2 y 3 a 5 % CO2 Microaerofilia: porcentaje constante de 10% CO2 y 5% O2 Anaerobiosis: sistemas que provean 5% CO2, 85% N2, 10% H2 y NADA de O2 de manera constante. - Humedad 2) Tiempo necesario para visualizar el desarrollo En general: 24-48 hs Mycobacterium tuberculosis ms de 30 das

Estudio de colonias

Caractersticas macroscpicas de las colonias Observar: bordes o margen, color, hemlisis, textura, forma, elevacin Coloracin de gram o gram de colonia

Identificacin preliminar basada en caractersticas metablicas

Pruebas rpidas de identificacin Trabajar siempre con una colonia aislada y previa coloracin de gram Son pruebas que se realizan en poco tiempo (de 2 min a 30 min) Permite entrar en los algoritmos de identificacin. Ejemplos: catalasa, oxidasa, PyR, coagulasa en portaobjeto o ligada.

Catalasa

Oxidasa

PyR

Pruebas de identificacin bioqumica

Consiste en el estudio de sistemas enzimticos que son nicos para cada especie y sirven como marcadores de identificacin. Ejemplos: utilizacin y/o fermentacin de azcares (lactosa, glucosa, manitol), movilidad, actividad de Dnasa, coagulasa libre, reduccin de nitratos, solubilidad en bilis, crecimiento en NaCl, etc.

Existen sistemas comerciales. Ejemplos: galeras API

Siembra en tubo pico de flauta

Pruebas de susceptibilidad a antibiticos

Se realiza con la bacteria identificada No se aplica a todos los aislamientos