Pruebas cualitativas

Reaccin de Molisch
(da positiva con todos los glcidos, sean o no reductores) Fundamento: Todos los glcidos por accin del cido sulfrico concentrado se deshidratan formando compuestos furfricos (las pentosas dan furfural y las hexosas dan hidroximetilfurfural). Estos furfurales reaccionan positivamente con el reactivo de Molish (solucin alcohlica de alfa-naftol) dando un producto coloreado.

Reaccin de Benedict
Una de las reacciones ms comunes en la identificacin de carbohidratos es la reaccin de Benedict. Esta reaccin es especfica para azcares con grupo reductores libres (C=O). Todos los monosacridos poseen un grupo reductor libre. Los disacridos maltosa y lactosa tienen grupos reductores libres, pero la sacarosa no los posee, ya que se pierden los grupos reductores de sus componentes cuando sta es formada. Esta prueba se basa en la capacidad del carbohidrato de reducir el Cu2+ en un medio alcalino a Cu+. Este Cu+ se oxida y precipita en forma de Cu2O, lo que proporciona la coloracin positiva de la reaccin. La coloracin producida va desde verde, amarillo, anaranjado o rojizo, dependiendo de la concentracin de xido de cobre y sta a su vez de la cantidad de cobre reducido.

Reaccin de Fehling
(da positiva con todos los glcidos reductores) Fundamento: El catin cprico (Cu++) del reactivo de Fehling reacciona con los glcidos reductores pasando a xido cuproso, que es un precipitado de color rojo ladrillo. Esta es una reaccin que resulta positiva slo si el glcido es reductor. Los glcidos reductores se manifiestan en medio alcalino, pero el Cu++ en ese medio tiende a precipitar espontneamente como xido cprico (que en esa forma no reacciona), de manera que es necesaria la presencia de tartrato doble de sodio y potasio en el reactivo para "secuestrar" al catin Cu++, a fin de evitar la formacin del xido cprico, y permitir que reaccione con los glcidos reductores

Reaccin del Lugol

(da positiva con los polisacridos) Fundamento: El color que dan los polisacridos con el lugol (solucin de I2 y de IK) se debe a que el I2 ocupa espacios vacos en las hlices de la cadena de unidades de glucosa, formando un compuesto de inclusin que altera las propiedades fsicas del polisacrido, especialmente la absorcin lumnica. Esta unin del I2 a la cadena es reversible, y por calentamiento desaparece el color, que al enfriarse reaparece. El lugol da con el almidn color azul y con el glucgeno color rojo caoba.

Reaccin de Seliwanof
(da positiva con cetosas y negativa con aldosas) Fundamento: Los glcidos que se clasifican como cetosas tienen en el carbono 2 una funcin cetona, en presencia de un cido fuerte producen rpidamente derivados furfricos que reaccionan con un difenol llamado resorcina. La sacarosa (un disacrido formado por glucosa y fructosa) y la inulina (un polisacrido de la fructosa) dan positiva la reaccin, ya que el HCI del reactivo provoca en caliente la hidrlisis del compuesto liberando fructosa (responsable de la reaccin positiva).

Reaccin de Bial
(da positiva con pentosas) Fundamento: Esta reaccin permita reconocer pentosas (glcidos de 5 carbonos) y sustancias que las contengan. Se basa en la formacin de un compuesto furfrico que se condensa con el orcinol del reactivo.

Prueba de Barfoed
Sirve para distinguir monosacridos reductores de disacridos reductores, basndose en la velocidad de reaccin; en los monosacridos la formacin del oxido cuproso es mas rpido que en los disacridos. La reaccin consiste en utilizar acetato cprico y cido actico en solucin cida con lo que los monosacridos son capaces de reducir al cobre de manera ms rpida y en condiciones menos drsticas. Por supuesto que al tener la solucin un pH cido resulta necesario controlar rigurosamente el tiempo de reaccin, pues si ste se prolongara se producira la hidrlisis cida del enlace glucosdico con la consiguiente liberacin del carbono anomrico y la aparicin de nuevos grupos reductores que falsearan el resultado.

Reaccin de Hbl

Investigacin de dobles ligaduras Los cidos grasos pueden ser saturados o no saturados. Los no saturados se caracterizan por tener en su molcula uno o ms dobles enlaces. Como consecuencia de ello pueden adicionar oxgeno, hidrgeno, cloro, bromo, yodo; utilizndose la cantidad de sustancia fijada para determinar su grado de insaturacin. El cido graso insaturado que se halla con mayor frecuencia es el cido oleico, cuya frmula es C18H34O2 con doble enlace en C9. Fundamento: El reactivo de Hbl est formado por yodo en alcohol (con bicloruro de mercurio como catalizador). El yodo se fija sobre la cadena carbonada de los cidos grasos etilnicos a razn de dos tomos por cada doble ligadura, por lo tanto el reactivo se decolora al perder yodo (mientras el cido graso lo gana).

Reaccin de Salkowsky

(caracterizacin de colesterol) En un tubo de ensayo, medir 2 ml de la solucin clorofrmica de colesterol de la experiencia anterior, inclinar el tubo y deslizar por su pared interna un volumen igual de cido sulfrico concentrado, cuidando que los lquidos no se mezclen. Observar la formacin de un anillo coloreado en la internase.

Reaccin de LiebermanBurchard
(caracterizacin de colesterol) En un tubo de ensayo colocar 2 ml de solucin clorofrmica de colesterol, aadir 10 gotas de anhdrido actico, y luego 3 gotas de cido sulfrico concentrado

Prueba de Fusin

Para investigar fsforo Se utiliza Molibdato de amonio. La positividad de esta reaccin indica la presencia de fsforo inorgnico. Las sustancias orgnicas dan la reaccin positiva, siempre que se haga una hidrlisis previa. La reaccin positiva se manifiesta por la reaccin de un precipitado amarillo de fosfomolibdato de amonio.

Reaccin de la Ninhidrina

(caracteriza a todos los aminocidos) Fundamento:

Todas las aminas primarias (y por lo tanto tambin los alfa-aminocidos) reaccionan con la ninhidrina en presencia de calor dando dixido de carbono, amoniaco y un aldehdo que contiene un tomo de carbono menos que el compuesto original El amoniaco reacciona con otra molcula de ninhidrina formando un compuesto azul violceo denominado prpura de Ruhemmans.

Reaccin de tiogrupos

caracterizacin de aminocidos azufrados) Fundamento: Esta reaccin dar positiva con aquellos aminocidos que presenten azufre en su estructura, como son la cistina, la cistena y la metionina. La reaccin consiste en someter la muestra a una hidrlisis alcalina con hidrxido de sodio, segn la siguiente ecuacin: R-SH + 2 NaOH R-OH + Na2S + H2O De esta manera el sulfuro de sodio se encuentra libre para reaccionar con el acetato de plomo del reactivo de Courtone: Na2S + (CH3-COO)2Pb 2 CH3-COONa + PbS (precipitado)

Reaccin de Hopkins-Cole

(caracterizacin del aminocido triptfano) Fundamento: El grupo indol del aminocido triptfano se condensa con el cido glioxlico del reactivo, formando compuestos coloreados. El agregado de una pequea cantidad de cido sulfrico concentrado puro, aumenta la sensibilidad de la reaccin

Reaccin xantoproteica

(caracterizacin de aminocidos aromticos) Fundamento: Se produce la nitracin del anillo bencnico presente en los aminocidos tirosina, fenilalanina y triptofano, obtenindose nitrocompuestos de color amarillo, que se vuelven anaranjados en medio fuertemente alcalino (formacin del cido picrmico o trinitrofenol)

Reaccin de Millon

(caracterizacin del aminocido tirosina)

Fundamento: Los compuestos mercricos en medio fuertemente ntrico (reactivo de Millon) se condensan con el grupo fenlico del aminocido tirosina, formando complejos de color rojizo.

Reaccin de Sakaguchi

(caracterizacin del aminocido arginina)

Fundamento: El grupo guanidino del aminocido arginina se condensa con el alfanaftol del reactivo, y luego forma un complejo coloreado con el hipoclorito de sodio.

Reaccin del Biuret

(caracterizacin de tripptidos en adelante) Fundamento: Los pptidos y protenas producen una reaccin coloreada muy usada para la valoracin de los mismos, llamada reaccin del Biuret. Las protenas por sus uniones peptdicas reaccionan con los iones cpricos del reactivo en medio alcalino formando un complejo de color violeta. Se necesitan 2 ms uniones peptdicas para que se forme el complejo coloreado.