UNIVERSIDAD AUTONOMA DE AGUASCALIENTES CENTRO DE CIENCIAS AGROPECUARIAS DEPARTAMENTO DE CLINICA VETERINARIA

MANUAL DE PRCTICAS DE REPRODUCCION ANIMAL ASISTIDA

Elaborado: Dr. Efran Islas Ojeda M.C Jos de Jess Gutirrez Gonzlez Autorizado: Departamento de Clnica Veterinaria

DIRECTORIO:

M. C. Q. RAFAEL URZA MACAS Rector De la Universidad Autnoma de Aguascalientes

M. en C. JOS DE JESS GUTIRREZ GONZLEZ Decano del Centro de Ciencias Agropecuarias

C. P. GEORGINA MACIAS MORA Secretario del Centro de Ciencias Agropecuarias

ING. FRANCISCO JAVIER HERNNDEZ DUEAS Secretario de Docencia de Pregrado del Centro de Ciencias Agropecuarias

M. V. Z. ENRIQUE GUILLERMO HERNNDEZ AYALA Secretario de Vinculacin y Difusin del Centro de Ciencias Agropecuarias

DR. ARTURO GERARDO VALDIVIA FLORES Secretario de Investigacin y Posgrado del Centro de Ciencias Agropecuarias

DR. EFRAN ISLAS OJEDA Jefe de Departamento de Clnica Veterinaria del Centro de Ciencias Agropecuarias FRANCISCO FELIX QUESADA Profesor titular de la materia Patologa Sistmica Veterinaria

PRESENTACIN: Hablar de reproduccin animal nos lleva a pensar en las implicaciones de tipo conceptual y evolutivo de esta materia. Para las personas que estudian la reproduccin animal, definen a la reproduccin como un proceso complejo, que involucra a cada uno de los sistemas de un organismo y que le permite a este perpetuar y evolucionar como especie. Si lo vemos desde el punto de vista productivo, la reproduccin animal es la parte medular de toda explotacin productiva. Actualmente dentro de la Medicina Veterinaria, el rea de la reproduccin, ha tenido un gran desarrollo y un impacto decisivo en los procesos de produccin y reproduccin de las especies domesticas, e incluso en la preservacin de especies silvestres. Es importante mencionar que en la mayora de las escuelas y facultades de Medicina Veterinaria de nuestro pas y del mundo han emprendido programas de enseanza e investigacin en esta rea. Uno de los objetivos de nuestro Centro y del Departamento de Clnica Veterinaria es el que el alumno se involucre en el proceso de enseanza-aprendizaje de las ramas que componen esta rea de la medicina e integre los conocimientos de fisiologa, endocrinologa, anatoma y diagnostico clnico que ha adquirido durante los semestres previamente cursados; de ah, nace la necesidad de integrar un manual de prcticas, tanto de campo como de laboratorio, que sirva como herramienta y gua para el estudiante que cursa la materia de fisiopatologa de la reproduccin de los animales domsticos. En el presente manual, se busc plantear al alumno la metodologa indispensable para aprender y poner en prctica los principales tpicos de manejo reproductivo, preservacin de germoplasma y resolucin de problemas clnico-reproductivos en las principales especies domsticas y de laboratorio que sean de inters para la formacin acadmica del estudiante y que a su vez le permita ser competitivo en el mbito laboral externo. Con el fin de eficientar el manejo y uso de este manual se ha tratado de integrar con base al programa actualizado de la materia de fisiopatologa de la Reproduccin de los Animales domsticos que actualmente se imparte en el octavo semestre de la carrera de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Es indispensable que el alumno despierte su inters en el estudio del manejo reproductivo de las especies domsticas, y as, con ayuda de este sencillo manual, despierte en l la chispa del investigador, que busca conocer por s mismo, el funcionamiento y equilibrio de su entorno. Es tambin indispensable la colaboracin de los profesores asignados a la materia para que con su asesora acadmica se cumplan los objetivos que se plantean en el presente manual.

PRACTICA 1

ANATOMIA Y FISIOLOGA DEL APARATO REPRODUCTOR

1.1 Anatoma del Aparato Reproductor Femenino 1.2 Anatoma del Aparato Reproductor Masculino. 1.3 Metodologa de la prctica.

1.1 Anatoma del Aparato Reproductor Femenino Objetivo: El alumno identificar las estructuras que componen los rganos genitales femeninos, as como su fisiologa y las diferencias que existen entre especies. Introduccin: Los rganos genitales de la hembra lo componen genitales internos como son ovarios, oviductos, tero, cervix y vagina y los genitales externos que comprenden el vestbulo, labios vulvares y cltoris. Los rganos internos estn sostenidos por el ligamento ancho formado por el mesovario que sostiene al ovario, el mesosalpinx que sostiene al oviducto y el mesometrio que sostiene al tero. A diferencia de las clulas germinales en el testculo, las clulas germinales femeninas se originan como clulas individuales en el tejido embrionario que despus dan lugar a un ovario.

Ovarios: rgano con funcin dual: producir la clula sexual femenina (ovocito u vulo) y endocrina. Los ovarios producen en etapas prenatales los ovocitos, son responsables de su maduracin y del crecimiento folicular, las clulas de la teca y las clulas de la granulosa producen estrgenos y progestgenos a partir de la molcula de colesterol, las cuales son esenciales para el desarrollo folicular, la expresin de la conducta sexual, la formacin del cuerpo lteo y el mantenimiento de la gestacin. El ovario est compuesto en su parte interna de tejido conectivo, vasos sanguneos y nervios (mdula), en su parte externa (corteza) que consiste en una capa de clulas cuboides y capas tisulares, recubierta de una capa densa y fina de tejido conjuntivo, llamada tnica albugnea del ovario, bajo esta capa se encuentra el parnquima o capa funcional que lo componen los folculos ovricos compuestos por clulas de la teca y granulosa los cuales rodean al ovocito, localizado en la cavidad abdominal unido al peritoneo de revestimiento. En la madurez, despus de que las clulas germinales femeninas se convierten en vulos, los grupos de clulas ovricas que rodean cada ovocito se diferencian en clulas foliculares que secretan nutrientes para el ovocito que contienen. Durante la poca de reproduccin, conforme el ovocito se prepara para la ovulacin, el tejido circundante se ahueca y se llena de lquido formando un antro al que se la llama antro folicular, al tiempo que se desplaza hacia la superficie del ovario; esta masa de tejido, lquido y ovocito, recibe el nombre de folculo de De Graaf a este proceso de le ha llamado foliculognesis. El ovario adulto es una masa de tejido glandular y conjuntivo que contiene numerosos folculos en distintos estadios de maduracin. El nmero de folculos vara segn las especies animales; las especies montocas tienen slo un folculo de De Graaf en un ovario por cada ciclo estrual. En las especies poltocas o multparas (que paren ms de una cra) puede haber un mayor nmero de folculos de De Graaf. Cuando el folculo de De Graaf ha alcanzado la madurez se abre paso a travs de la superficie del ovario liberando al ovocito, proceso que se denomina ovulacin. El ovocito est ya preparado para la fecundacin. El espacio que antes ocupaba el folculo de De Graaf se llena de sangre y pasa a llamarse entonces cuerpo hemorrgico; en cuatro o cinco das es reemplazado por una masa de clulas amarillas denominadas cuerpo amarillo o lteo originadas a partir de las clulas de la taca y granulosa que sufren un proceso de luteinizacin ejercido por la accin de la hormona luteinizante (LH) producida por la hipfisis. Este conjunto de clulas luteinizadas tienen la

capacidad de sintetizar progesterona (P4) a partir de molculas de colesterol hormona encargada de mantener la gestacin as mismo preparan el tero para la recepcin del cigoto despus de la fertilizacin. Si el ovocito no se fecunda, el cuerpo lteo es sustituido por una cicatriz fibrosa llamada cuerpo blanco corpus albicans.1 Los rganos reproductores de la hembra tienen diferentes funciones que impactan en forma definitiva en el proceso reproductivo de los mamferos. Oviductos: Los oviductos llamados tambin (trompas de Falopio o Salpinx) estn conformados por dos aberturas, una anterior o abdominal y otra posterior o uterina y cuatro porciones: la primera rodea o envuelve al ovario (infundbulo) total o parcialmente, segn especie animal, extendindose en sus siguientes porciones (mpula ampolla e istmo) hasta las puntas de los cuernos uterinos, sus funciones son la del transporte de los ovocitos y espermatozoides as como la de proveer el sitio propicio donde se lleva a cabo la fertilizacin, histolgicamente contiene tres capas celulares, la ms externa bsicamente de tejido conjuntivo (tnica albugnea), la capa media formada de clulas de musculatura lisa circular y longitudinal (tnica muscular) y la capa ms interna que contiene clulas epiteliales, secretoras y ciliadas. tero: El tero se extiende desde la unin terotubaria hasta el cervix, conta de cuernos, cuerpo y cerviz cuello. Su funcin principal es la de nutrir al embrin y retenerlo durante la gestacin. Despus de la fertilizacin y antes de que las estructuras embrionarias de adhiera al tero, ste es nutrido con las secreciones de las clulas glandulares de la mucosa uterina (alimentacin histiotrfica), despus de adherirse al tero los nutrientes y los productos de desecho del feto son conducidos a travs de la circulacin sangunea tanto materna como fetal por medio de la interaccin del sistema feto placenta madre que se establece (alimentacin hemotrfica). En los mamferos se encuentran cuatro tipos bsicos de tero, el tero bicorne (cerda, vaca, oveja) el tero bipartido(equinos), el tero doble(rata,coneja, cobayo y otros lepridos) y el tero simple (primates) ver fig (1) Cervix: Aunque es una parte del tero, al cervix se le describe como un rgano distinto por su estructura anatmica y porque posee funciones especficas dentro del proceso reproductivo. Posee paredes gruesas y rgidas, en la mayora de las especies de la granja su longitud vara entre los 5 y los 15 cm de longitud. Su funcin principal es la de prevenir la contaminacin microbiana del tero formando una de las principales barreras sanitarias del aparato reproductor, estudios hechos por 2 Chang et al. demuestran que el cervix juega un papel importante en la seleccin y conduccin de los espermatozoides en las especies con deposicin seminal en vagina ejerciendo una importante presin de seleccin en los gametos masculinos. Vagina: La vagina es de forma tubular, de paredes delgadas, con gran elasticidad lo que permite tanto la copulacin como el proceso de parto. Tiene de 25 a 30 cm de longitud en la vaca y en la yegua; y de 10 a 15 cm en la cerda. Al igal que todo el aparato reproductor tubular posee tres capas: la capa externa o tnica serosa, se contina con una capa de musculatura lisa con fibras circulares y
1"Aparato reproductor", Enciclopedia Microsoft Encarta 99. 1993-1998 Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos.
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longitudinales e internamente una cubierta mucosa que est compuesta de clulas epiteliales escamosas estratificadas, estas clulas se cornifican bajo la influencia de los estrgenos durante el ciclo estrual lo cual permite identificar en muchas especies la etapa del ciclo estrual empleando tcnicas de citologa vaginal En la mayora de los mamferos euterianos (bovino, ovino, conejo y los primates), el semen es depositado en el interior de la vagina durante el apareamiento mientras en otras especies (cerdo, caballo, perro y algunos roedores), el semen es depositado directamente en el tero, o es forzado a travs del canal cervical.

1.4 Anatoma del Aparato Reproductor Masculino Objetivo: El alumno identificar las estructuras que componen los rganos genitales masculinos, as como su fisiologa y las diferencias que existen entre especies.

Introduccin: Los genitales masculinos lo integran los testculos, rganos tubulares, las glndulas accesorias, y el pene, es importante mencionar que existen algunas diferencias entre los rganos genitales masculinos de las distintas especies domesticas, refirindose directamente a la forma y posicin de los testculos, presencia o ausencia de glndulas accesorias y formas del pene.

Testculos: Los testculos y los ovarios de los animales maduros difieren mucho en su estructura. Los testculos de los mamferos suelen ser cuerpos ovales englobados por una cpsula de tejido conjuntivo resistente. Las proyecciones de esta cpsula en el interior de los testculos lo dividen en diversos compartimentos, cada uno de los cuales con cientos de tbulos seminferos( Red testicular rete testis). Los espermatozoides maduros se liberan a travs de varios conductos (eferentes) que comunican con el epiddimo, un tubo colector de gruesas paredes donde se almacena el esperma. En todos los vertebrados por debajo de los marsupiales en la escala zoolgica y en los elefantes, focas y ballenas, los testculos permanecen dentro de la cavidad corporal de por vida. En muchos mamferos, como roedores, murcilagos y miembros de la familia de los camellos, los testculos permanecen en el interior de la cavidad corporal durante los periodos de inactividad, pero durante la poca de reproduccin se desplazan hacia bolsas cutneas y musculares externas que reciben el nombre de escrotos. En los marsupiales y los mamferos superiores, incluyendo el hombre, los testculos se encuentran siempre encerrados en un escroto externo. Durante la vida fetal, los testculos se desplazan a travs de los msculos que forman la parte ventral y posterior del tronco, arrastrando con ellos el peritoneo y la piel que rodea estos msculos. El conducto muscular a travs del cual se deslizan los testculos recibe el nombre de

conducto inguinal. ste se suele cerrar despus del nacimiento, aunque en ocasiones permanece abierto y constituye un asiento frecuente de hernias. La porcin del peritoneo que los testculos arrastran consigo forma una pared membranosa doble, entre el escroto y los testculos, la tnica vaginalis. En ocasiones, los testculos no descienden hasta el saco escrotal. Este trastorno, conocido como criptorquidia, origina esterilidad si no se corrige mediante ciruga o administracin de hormonas. La retencin de los testculos en la cavidad abdominal somete a las clulas germinales a temperaturas demasiado elevadas para su desarrollo normal. El descenso de los testculos al escroto en los animales superiores las mantiene a temperaturas ptimas. Epiddimo: Forma el primer conducto externo que sale de los testculos, este rgano en la mayora de las especies se encuentra adherido longitudinalmente al testculo junto con stos se encuentra envuelto en la tnica vaginal, en la mayora de las especies de mamferos se han descrito tres secciones principales del epiddimo desde el punto de vista anatomo-funcional. Se conoce que los espermatozoides de una gran variedad de especies de mamferos hasta ahora estudiados, sufren una serie de modificaciones biomorfolgicas durante su transito a travs del epiddimo, donde fundamentalmente los espermatozoides cambian su patrn de actividad flagelar y 3 adquieren la capacidad de reconocer y fertilizar al ovocito . Este conjunto de modificaciones forma parte del proceso denominado maduracin del espermatozoide. Desde el punto de vista morfolgico durante la maduracin epididimaria ocurre la migracin de la gota citoplasmtica y la maduracin de algunos de los componentes citoestructurales como el acrosoma, el ncleo y el 4 flagelo

Glndulas accesorias: Las glndulas accesorias del proceso de la reproduccin proporcionan un medio lquido donde los espermatozoides pueden vivir, producen moco que reduce la friccin durante la copulacin, emiten olores atractivos para los integrantes del sexo opuesto, y segregan nutrientes para el huevo, el embrin y el recin nacido. Las vesculas seminales del macho, que en algunas especies segregan moco y componentes proteicos, estn abastecidas por la glndula masculina ms importante, la prstata, slo presente en los mamferos placentarios. Esta glndula compuesta se localiza en la base de la uretra, all donde sta sale de la vejiga y penetra en el pene. La prstata segrega un lquido lechoso espeso con un olor caracterstico. Este fluido forma el volumen principal del eyaculado. Las glndulas de Cowper, dos glndulas del tamao de un guisante situadas a ambos lados de la base del pene, producen una secrecin clara y espesa que se piensa que protege a los espermatozoides contra el exceso de cido de la vagina. En el cerdo la secrecin de las glndulas de Cowper es la parte que se coagula durante la eyaculacin, fraccin llamada tambin tapioca. En esta especie dicha fraccin hace la funcin de
Islas O.E., Ambriz G.A.,Lemus M.A.E., Mercado A.E.,RosadoG.A.,(1995)Presencia y distribucin de receptores membranales especficos para progesterona sobre la membrana del espermatozoide en conejo; XXVII Reunin de la Soc. Mexicana de Nutricin y Endocrinologa, p 124.
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Hernndez- Prez O., Rosado A. G. , (1988) Biologa molecular del espermatozoide humano. Ciencia 39:

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empaque lo que ayuda a evitar que los grandes volmenes eyaculados por el macho escapen del conducto cervical.

El pene: El pene es el rgano copulador de los machos, es formado alrededor de la uretra a partir de la porcin saliente de la pelvis, est rgano difiere estructural y anatmicamente entre las diferentes especies. Generalmente esta compuesto por estructuras cavernosas y porciones de fibras musculares bulboesponjosas. Estas reas cavernosas se llenan de sangre durante la excitacin sexual, producindose la ereccin del pene. Tanto el msculo bulboesponjoso como el isquiocavernoso son estriados, esquelticos y sustituyen al msculo liso que se observa en los rganos genitales internos. Es de importancia mencionar que la proporcin de ambos tejidos difiere entre especie lo cual se asocia con la forma tamao y funcionamiento de este rgano en cada macho ver fig. ( ). Prepucio: El prepucio es una invaginacin de la piel que encierra la porcin libre del pene, en las especies como el bovino, ovino, porcino, canino cumple la funcin de proteger y mantener lubricado el pene. Se le puede dividir en una porcin propeniana que forma el pliegue externo y la porcin penil o pliegues internos. En especies como el cerdo el prepucio est complementado con una glndula accesoria llamada glndula prepucial que como las glndulas anales de muchos mamferos segregan tambin sustancias especiales denominadas feromonas, que indican la disposicin a la reproduccin mediante aromas que atraen a los miembros del sexo opuesto. Las feromonas tambin estn presentes en otras secreciones glandulares. Metodologa: 1. La practica ser llevada a cabo por equipos integrados mnimo de 2 y mximo de 4 alumnos. 2. Previamente a la prctica los alumnos seleccionarn la especie que les es de mayor inters con el fin de conseguir y prever los aparatos reproductores de machos y hembras que se requieren para la prctica. 3. Los rganos sern colocados en charolas individuales y sern manipulados utilizando guantes de ltex. 4. Los rganos sern observados y manipulados siguiendo la descripcin propuesta en la introduccin, auxilindose de las figuras que se exponen en el presente manual. 5. Es importante que el alumno observe e identifique las diferentes partes del aparato reproductor que se describen en este manual, tomando en cuenta los trminos que se resaltan en negritas los cuales debern ser manejados por el alumno como vocabulario tcnico bsico en la materia de Fisiopatologa de la reproduccin. 6. Es importante que los alumnos de los diferentes equipos intercambien ideas acerca de las diferencias encontradas entre especies. 7. El alumno reportar en forma individual la descripcin de la prctica realizada y la descripcin anatmica y funcional de los aparatos reproductores de la especie seleccionada en su equipo. 8. Al pie de pagina se han colocado las bibliografas utilizadas las cuales sirven de referencia al alumno como lecturas recomendadas en el curso.

PRACTICA 2

EXAMEN RECTAL EN EL BOVINO Y EQUINO

2.1 Introduccin 2.2 Examen rectal. Condiciones fisiolgicas del tero y ovario durante el ciclo estrual y anestro, identificables por palpacin rectal (Claves e ndices). 2.3 Metodologa y reporte de practica.

2.1 Introduccin:

Tanto en bovinos como en equinos el examen rectal ha sido la metodologa ms practica para la auscultacin, diagnostico clnico y diagnostico de gestacin dentro del manejo reproductivo de esta especie, aunque actualmente los mtodos de laparoscopia y ultrasonografa complementan el examen rectal para la el diagnostico y la toma de decisiones en el manejo reproductivo del ganado, es importante que el alumno que cursa la materia de fisiopatologa de la reproduccin conozca y domine esta tcnica la cual le ser una herramienta til en el desempeo de su vida profesional. Para el empleo de esta tcnica el alumno debe poner toda la paciencia, cuidado y concentracin posible para lograr la identificacin plena de cada rgano del aparato reproductor femenino as como las estructuras ovricas y las anomalas presentes en dichos rganos, con lo cual podr hacer uso de su conocimiento medico para la resolucin de los problemas clnicos que afectan a estas especies. Es indispensable tambin la persona que realiza el examen rectal cuente con el equipo necesario como son overol, botas, guantes de polietileno desechables para palpacin rectal y el equipo de sujecin e inmovilizacin del animal. Dicho equipo le permitir extremar precauciones y te proteger de enfermedades zoonticas como la brucelosis, la leptospirosis y la tuberculosis que en muchas de las ocasiones afectan al ganado que se examina. Es conveniente que se cuente con un ayudante que le auxilie en la sujecin del animal y que tome las anotaciones necesarias hechas por el M.V.Z. con el fin de que se tenga un registro de cada animal examinado. Este examen debe realizarse de manera metdica, tomando como referencia algunas estructuras anatmicas como el piso de la pelvis y el cervix, que permitan tomarse como referencia para la identificacin de otros rganos y estructuras. 2.2 Examen Rectal: Equipo: para realizar el examen rectal es necesario contar con guantes de polietileno desechables, overol, botas y cuerdas de de dimetro por 8m de largo, mismas que servirn para la sujecin del animal, para el caso del ganado equino se recomienda contar con una trampa de inmovilizacin para equinos. Los guantes usados para la palpacin rectal debern ser lubricados con soluciones que no irriten el recto del animal, pueden emplearse soluciones jabonosas o simplemente lubricar el guante con agua. Es indispensable que el operario cuente con todo el equipo ya que esto le permitir realizar su trabajo con seguridad, pudiendo evitar accidentes de consecuencias graves como fracturas contusiones y el riesgo de contraer alguna enfermedad de tipo zoontica. Tcnica: Se introduce la mano por el ano, uniendo las puntas de los dedos tratando de disminuir al mximo el dimetro del puo y realizando movimientos semirotatorios. Una vez introducida la mano, se busca el piso de la pelvis deslizando suavemente la mano e introduciendo el antebrazo, buscando localizar el cervix. Una vez localizado el cervix este servir como punto de referencia para la todo el examen rectal, ya que su ubicacin nos permite la identificacin de otras estructuras del aparato reproductor femenino. Se recomienda, que el alumno que tiene poca experiencia localice y describa el cervix en varios animales antes de continuar las otras estructuras del aparato reproductor; el cervix por su estructura es posible en la mayora de las ocaciones tomarlo con la mano como si se empuara una cacha de cuchillo, se puede manipular suavemente de lado a lado de la cavidad pelviana e incluso retraerlo con el fin de localizar los otros rganos. El operador reconocer que existen distintos cervix, en cuanto a su tamao, forma, consistencia y dimetro, esto va de acuerdo con la etapa fisiolgica en que se encuentre el animal, la edad, el numero de partos, su historial medico y

la raza entre otras, es importante que el alumno describa y / o tome nota del tipo de cervix que muestra cada hembra ya que estos datos al correlacionarlos con datos obtenidos de las otras estructuras examinadas le ser de gran utilidad para el diagnostico de cada caso. Para continuar con el examen ginecolgico, se debe seguir longitudinalmente el cervix hacia delante y hacia abajo, donde se podrn palpar los cuernos del tero, en algunas ocasiones por el tamao y posicin del tero, se dificulta la palpacin de los cuernos; es generalmente aceptado retraer los cuernos uterinos insertando alguno de los dedos entre la bifurcacin de los cuernos y ejercer suavemente la retraccin con la finalidad de examinarlos y as mismo poder acceder al examen de los ovarios los cuales estn localizados al final de los cuernos uterinos y se encuentran suspendidos por el ligamento ancho. Es importante que el examinador, al examinar el tero, describa su tamao, estructura, flacidez o turgencia y contenido, datos que sern de gran importancia para l diagnostico de problemas fsicos y patolgicos como son adherencias, desgarres, tumores, metritis, piometras y estructuras momificadas entre otras. La flacidez o turgencia del tero proporciona informacin acerca de la fase del ciclo estrual del bovino, siempre y cuando estos datos se relaciones con las estructuras ovricas y las caractersticas del moco cervical. Los oviductos pueden ser palpados en toda su longitud, lo que permite detectar algunas patologas como la salpingitis, que frecuentemente son la casa de infertilidad en estas especies. Los ovarios como se menciono anteriormente son estructuras en forma de almendra que pueden ser localizados al final de los cuernos uterinos, estos estn compuestos en su parte interna de tejido conectivo, vasos sanguneos y nervios (medula), en su parte externa (corteza) que consiste en una capa de clulas cuboides y capas tisulares, recubierta de una capa densa y fina de tejido conjuntivo, llamada tnica albugnea del ovario, bajo esta capa se encuentra el parnquima o capa funcional que lo componen los folculos ovricos compuestos por clulas de la teca y granulosa. En el bovino el ovario izquierdo suele ser de menor tamao que el derecho sin embargo no deja de ser funcional. Este rgano para ser examinado se recomienda colocarlo suavemente entre los dedos medio y anular pudiendo ser inspeccionado recorriendo su superficie con el dedo pulgar, dentro del exmenes esencial describir y tomar nota de las principales estructuras que se detectan en la superficie de ambos ovarios como son folculos, cuerpo hemorrgico, cuerpos lteos, cuerpo albicans, cuerpos atresicos y algunas estructuras anormales como son quistes foliculares, quistes lteos, adherencias y neoplasias. Para facilitar la descripcin de estas estructuras Zemjanis 5 describe las abreviaturas ms comunes para las estructuras del ovario durante las etapas del ciclo estrual. (Ver cuadro 1) DESCRPCIN DE ABREVIATURAS ETAPA DEL CICLO ESTRUAL HALLAZGOS (DIAS) Depresin ovulatoria OVD 1-2 Cuerpo hemorrgico de CH 1 2-3 1-2 cm Cuerpo hemorrgico de CH2 3-5 2-3cm Cuerpo hemorrgico de ms de CH3 5-7 3 cm Cuerpo Lteo totalmente CL 3 8-17 desarrollado Cuerpo Lteo firme de 1 2 cm Cl 2 18-20 Cuerpo Lteo duro de menos CL 1 21 de 1 cm Cuadro 1. Estructuras del ovario relacionada con etapas del ciclo estrual. Descrito por Zemjanis, 1977.

Zemjanis, R. (1977) Rreproduccin Animal, Diagnostico y Tcnicas terapeuticas. Ed. LIMUSA, Mxico.

2. 3 Metodologa y reporte de practica. 1. La practica ser llevada a cabo en el rea de corrales de las instalaciones del la empacadora UGASA. 2. Cada alumno deber presentarse con el equipo de proteccin y de inmovilizacin antes mencionado. (indispensable para entrar a practica) 3. El grupo se organizar en equipos de 2 personas para inmovilizar a los animales designados por el instructor, dependiendo de la disponibilidad de animales a sacrificio. 4. Cada animal ser numerado en forma progresiva con ayuda de crayones para marcar ganado. 5. Cada alumno realizar el examen ginecolgico siguiendo las instrucciones del presente manual, a cada uno de los animales inmovilizados por su equipo. 6. Los animales sern alternados entre los equipos con el fin de que el alumno describa la mayor parte de animales que se examinan. 7. En cada animal examinado el alumno deber de realizar las anotaciones que crea pertinentes para la elaboracin del reporte de practicas. 8. La presente practica se subdivide en 4 subpracticas (visitas al rastro) donde reportarn en la subpractica a) descripcin del cervix , subpractica b) descripcin del cervix y cuernos uterinos, subpractica c) descripcin de salpings y ovarios y en la subpractica d) ovarios y estructuras ovricas. 9. El reporte es individual, los reportes sern entregados en por lo menos tres cuartillas y mximo 10 mecanografiadas o en procesador de computadora en la clase siguiente, incluyendo todos los animales examinados por el alumno. No se reciben reportes extemporneos.

PRACTICA 3. EXAMEN VAGINAL

3.1 INTRODUCCIN 3.2 EXAMEN VAGINAL 3.3 METODOLOGIA Y REPORTE DE PRACTICA

3.1 INTRODUCCIN El examen vaginal es en la practica, una herramienta til para el diagnostico de problemas que causan infertilidad, en muchas especies de mamferos incluyendo al hombre, debido muchas veces a lesiones fsicas o problemas patolgicos. Tomando en cuenta que en muchas de las especies de mamferos la deposicin de semen es intravaginal y que en todas las especies la vagina es el conducto por donde se realiza la introduccin peneana, as como donde se encuentra la salida del urter y la ltima porcin del canal de parto, las condiciones fsicas y de salud de la vagina en una hembra son definitivamente importantes desde el punto de vista reproductivo. Hay que tomar en cuenta que el medio ambiente vaginal es condicionante para la supervivencia de los espermatozoides, refirindose a medio ambiente como las caractersticas de pH, presencia de clulas de defensa, bacterias patgenas.

3.2 EXAMEN VAGINAL El procedimiento para el examen vaginal vara de acuerdo con la especie, sin embargo un procedimiento general es el uso de vaginoscopios que varan de forma y tamao segn la especie, por lo general estos instrumentos cuentan con una unidad de luz propia y estn fabricados de metal o acrlico. Se puede implementar un vaginoscopio para bovinos utilizando tubo de PVC de 1 X 40 cm de largo. Y adaptando una lampara de 1.5 voltios como se muestra en la fig. ( )

Vaginoscopio Para Bovino Lampara

1 1/2

40 cm
Para el examen vaginal, es importante que el vaginoscopio de desinfecte antes de su uso, pudindose utilizar una solucin de cloruro de benzalconio al %, es necesario lubricar el vaginoscopio para evitar lesiones o molestias al animal, se puede utilizar solucin salina fisiolgica estril, gel de lubricacin vaginal base agua o glicerina estril. El vaginoscopio se inserta en la vaina suavemente con movimientos giratorios, se va insertando al mismo tiempo que se examina la pared vaginal hasta poder observar la entrada del cervix. En el examen vaginal existen cinco puntos importantes a examinar: 1. Forma del cuello del tero 2. Apertura del cuello del tero

3. Color de la mucosa vaginal 4. Humedad de la mucosa vaginal. 5. Tipo de secrecin vaginal. Con el fin de establecer claves que determinen el estado del conducto vaginal y del cuello uterino se utilizan las siguientes claves: 1. Forma del cuello del tero. C= Cilndrico R = Forma de roseta A= Atpico 2. Apertura del cuello del tero. 0 = cerrado no traspasable 2 = Abierto de una pipeta 3 = Abierto cm 4 = Abierto 1 cm 5 = Abierto ms de 2 cm 3. Color de la mucosa vaginal A= Anmica B= Rosa plida C = Hiepermica (indica inflamacin) D = Ciantica 4. Humedad de la mucosa vaginal. S = Seca H1 = Poca humedad H2 = Humedad media (refleja la luz) H3 = Humedad con filamentos de secrecin (ligera presencia de moco) H4 = Excesiva humedad con presencia y acumulo de moco 5. Tipo de secrecin vaginal. M = Moco MT = Moco turbio MP = Moco purulento P = Pus

3.3 METODOLOGIA Y REPORTE DE PRACTICA 1 2 La practica ser llevada a cabo por equipos integrados mnimo de 2 y mximo de 4 alumnos. Los alumnos previo a la practica seleccionarn la especie que les es de inters con el fin de conseguir y prever los vaginoscopios requeridos para la practica. Cada equipo realizara el examen vaginal en la especie elegida en por lo menos dos hembras, con el fin de realizar una descripcin comparativa. El alumno deber reunir todos los datos del animal incluyendo fase del ciclo estrual, fecha del ltimo parto e historia clnica. El reporte individual debe incluir la descripcin del examen en la especie elegida, los datos e historia clnica del animal, la descripcin en clave ejemplo: R4CH4 MP descripcin de bovino que indica que presenta el cuello del tero en forma de roseta, abierto con dimetro de 1 cm, con mucosa Hiepermica, humedad alta con filamentos de secrecin con presencia de moco purulento, incluir la interpretacin medica del examen segn su criterio

Se evaluar la presentacin del reporte, la descripcin del caso y la interpretacin medica del examen. NO SE RECIBEN REPORTES EXTEMPORANEOS.

PRACTICA 4 INTERPRETACIN DE FROTIS VAGINALES EN PEQUEAS ESPECIES

4.1 INTRODUCCIN 4.2 FROTIS VAGINALES EN CANINOS Y FELINOS 4.3 REPORTE DE PRACTICA

4.1 INTRODUCCIN En los mamferos despus de la pubertad y durante el ciclo estrual, los estrgenos actan sobre el epitelio vaginal preparndolo para la copula, este efecto causa un incremento en el nmero de capas celulares, provocando cambios en la morfologa de las clulas epiteliales pasando de clulas no cornificadas a clulas cornificadas. En las pequeas especies la secrecin endgena de estrgenos por parte de los folculos en crecimiento o los estrgenos secretados por quistes foliculares, tumoraciones ovricas o incluso administracin exgena de estrgenos pueden causar dichos cambios en el epitelio vaginal. Por tanto la citologa vaginal es usada en estas especies, para determinar el estatus estrognico de una hembra. Sin embargo esta tcnica no puede ser 6 usada para determinar el momento de la ovulacin, ni funciona para diagnosticar preez . Es importante que el alumno este consiente que esta tcnica no es funcional en estados de anestro ni tampoco sirve para sustituir la observacin de la conducta sexual, en la cual en caninos y felinos es importante que el alumno la emplee con criterio para el manejo reproductivo de estas especies. Por otro lado, la citologa vaginal es clnicamente usada para determinar el momento optimo de apareamiento en la parra cuando esta no muestra conducta sexual de estro (receptividad, posicin de monta, flexin de la cola). puede ser usada tambin para estimar la progresin del estro y correlacionarlo con estados endocrinos o de conducta en perras infrtiles. 4.2 FROTIS VAGINALES EN CANINOS Y FELINOS Las clulas epiteliales de la vagina, son exfoliadas en cantidades suficientes, frotando la mucosa vaginal con ispos de algodn embebidos con solucin salina fisiolgica estril, el ispo es introducido al conducto vaginal y se frotan suavemente la mucosa de las paredes dorsocraneales vaginales como se muestra en la figura ( ), con el fin de evitar daar del orificiouretral que se encuentra en la parte ventral. Pudiendo obtener en razas pequeas o en gatas, clulas exfoliadas por medio de un Flushing vaginal de 5 mL de solucin salina fisiolgica, con ayuda de un gotero de cristal o una pipeta para Papanicolau. No se recomienda obtener el frotis vaginal tocando la mucosa vestibular de la vagina con laminillas de cristal ya que con esta tcnica no se obtienen resultados confiables o representativos del estado endocrino de la mucosa vaginal. Una vez obtenida la muestra el ispo se rota sobre un portaobjetos de cristal, o en su defecto se depositan unas gotas del flushing realizado. Las laminillas pueden ser teidas con una tincin de Romanovky o por medio de la tcnica de la triple tincin. Sin embargo en la clnica practica se 7 puede realizar una tincin rpida con azul de metilno o tincin Diff-Quik los frotis realizados de esta forma pueden conservarse sin grandes cambios. La interpretacin de los frotis en caninos. Las clulas presentes en los frotis vaginales incluyen clulas despigmentadas, neutrfilos y eritrocitos, el tipo de clulas presentes que sirven para diferenciar el estadio del ciclo estrual en que se encuentra la hembra son las escamas anucleadas, clulas parabasales, clulas superficiales y las clulas intermedias, la forma de estas clulas se muestra en la figura ( ) Clasificacin de las clulas. En general en la literatura los trminos cornificado y no cornificado han sido usados para describir las clulas del epitelio vaginal del canino. Estos trminos fueron originados de trabajos realizados en cuyos, donde el epitelio vaginal es cornificado8. Sin embargo este no es el caso del epitelio Johnston D.S. 1981. Examination of Genital System. Veterinary Clinics of North America: Small Animal Practice . 11:3 543 547. 7 Diff-Quik Stain Set No. 64851, Harleco, Gibbstown, New Jersey. 8 Roszel F. Jeffie 1977. Normal Canine Vaginal Cytology in symposium on reproductive problems.
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vaginal del canino, por lo tanto aunque estos trminos se han utilizados indistintamente en varias especies, el canino en particular presenta clulas morfolgicas bien diferenciadas y epitelio estratificado escamoso. Clulas parabasales: Estas son las clulas ms pequeas del epitelio vaginal, son redondas u ovales. Los ncleos son alargados y el citoplasma se tie de azul. En las preparaciones histolgicas se son encontradas encima de la capa germinal o capa basal. Clulas intermedias: Estas clulas tienen ncleos vesiculares aproximadamente del tamao de las clulas parabasales. Estas varan en tamao pero suelen ser hasta dos veces ms grandes que las clulas parabasales, su abundante citoplasma es teido de azul- verde o azul gris dependiendo de la tincin utilizada. Su localizacin en los tejidos suele ser entra las clulas parabasales y las capas de clulas superficiales. Clulas superficiales: son las clulas epitelilales ms grandes, el ncleo es pequeo sombreado y central, su citoplasma rara ves se tie de azul, solo algunas veces tienen reas azules y naranjas pero generalmente son naranjas, dependiendo de la tincin. Esta lnea celular se localiza en la parte luminal de la superficie de los tejidos. Escamas nucleadas: estas son clulas nucleasdas de un tamao similar al de las clulas intermedias. Estn irregularmente alineadas en el vestbulo durante el estro. Interpretacin en caninos. Proestro: El proestro es la fase folicular del ciclo estrual, durante la cual los folculos ovricos incrementan rpidamente su tamao e incrementan las concentraciones de estrgenos en suero. Durante este periodo las clulas del epitelio vaginal cambian de una forma predominantemente de clulas no cornificadas (clulas intermedias y parabasales) a clulas predominantemente cornificadas (escamas superficiales y anucleadas) clulas que predominan en los frotis tomados al final del proestro cuando los estrgenos estn en su pico de produccin. Los eritrocitos estn presentes generalmente durante el proestro mientras los neutrofilos suelen estar presentes al inicio de esta fase del ciclo. Estro: El estro es el estado de conducta receptiva en la perra, y las clulas exfoliadas del epitelio en este periodo, reflejen el mximo estado de preparacin del epitelio para la gestacin. Muchas de las clulas, predominantemente escamas anucleadas y algunas clulas superficiales estn presentes, los eritrocitos pueden o no estar presentes y los neutrofilos estn ausentes en la mayora de los casos pero pueden encontrarse un da antes de iniciar el diestro. Diestro: es el estado de secrecin de progesterona, seguida de la conducta receptiva de la hembra. El primer da del diestro es el da siguiente el estro, es cuando el frotis vaginal muestra el 50% de clulas intermedias y parabasales y en donde el remanente de clulas son clulas superficiales. Una de las caractersticas de las clulas en el diestro temprano es la presencia de neutrofilos con citoplasma, los neutrfilos son encontrados en los frotis mientras que los eritrocitos se encuentran ausentes, mientras el diestro avanza el nmero de clulas epiteliales encontradas en los frotis disminuye. Anestro: El inicio del anestro el cual ocurre cuando la progesterona en sangre es menor a 1 ng por mL, no es posible distinguir cronolgicamente con el final del diestro. Los frotis estn compuestos por un pequeo nmero de clulas no cornificadas y ocasionalmente neutrfilos. Interpretacin en felinos.

Veterinary Clinics of North America: Small Animal Practice . 7:4 667 681

La mucosa vaginal de los felinos contiene clulas de la misma morfologa de los caninos y responde similarmente a la influencia del os estrgenos. El proestro en los felinos pasado uno o dos das pueden observarse las clulas intermedias y parabasales, sin embargo estas no se 9 encuentran asociadas con descarga sangunea ni presencia de eritrocitos en los frotis vaginales . La cornificacin progresiva de las clulas sigue el ritmo de la elevacin de los estrgenos in los gatos. La mxima cornificacin ocurre en el estro, donde se puede observar aproximadamente el 40% de escamas anucleadas, 40 60 % de clulas superficiales y menos del 10% de clulas intermedias. Las clulas presentes en los periodos entre estros son predominantemente superficiales e intermedias, con pequeos nmeros de clulas parabasales y escamas 10 anucleadas . Los neutrfilos solo se observan ocasionalmente.

4.3 METODOLOGIA Y REPORTE DE PRACTICA 1. La practica ser llevada a cabo por equipos integrados mnimo de 2 y mximo de 4 alumnos.

2. Los alumnos previos a la practica seleccionarn la especie que les es de inters (canino o felino) con el fin de que el alumno y prevea los ejemplares requeridos para la practica.

3. Cada equipo realizar los frotis vaginales de la especie elegida en por lo menos dos hembras, con el fin de realizar una descripcin comparativa de los frotis vaginales.

4. El alumno deber reunir todos los datos del animal incluyendo fase del ciclo estrual, fecha del ltimo estro e historia clnica.

5. El alumno reportar en forma individual el procedimiento de la practica as como dar su informe acerca del estadio del ciclo estrual en que se encuentran los animales, incluyendo su historia clnica.

6. Es indispensable que el alumno traiga los animales para poder hacer la practica. No se reciben reporte extemporneos.

9 Shille, V.M ., Ludstrom, K.E., and stabendeld ,G.H. 1979 . Follicular Function in the domestic cat as determinated by estradiol 17 B concentrations in plasma : relation to estrous behaivor and cornification and exfoliated vaginal epitelium. Biol. Reprod., 21: 3 953- 963.

PRACTICA 5. INSEMINACIN ARTIFICIAL DEL BOVINO

5.1 Introduccin 5.2 Antecedentes 5.3 Ventajas. 5.4 Desventajas 5.5 Inseminacin artificial en la vaca I. Momento Optimo del Servicio II. Tcnica de la Inseminacion Artificial III. Rutina de descongelado IV. El semen Frtil

5.1 INTRODUCCION. La INSEMINACION ARTIFICIAL (I.A.) es la introduccin del semen en los rganos genitales de la hembra sin la intervencin del macho.

El xito de la I.A. termina al depositar semen de alta calidad en el aparato reproductor femenino, el sitio y en las condiciones que ofrezcan las ms altas posibilidades de fertilizacin. La Inseminacin artificial (I.A.) es la tcnica ms importante creada para el mejoramiento gentico de los animales. Esto es posible porque con unos pocos machos altamente seleccionados por su valor gentico se producen suficientes espermatozoides para inseminar a miles de hembras al ao, por lo que desde el punto se vista productivo representa una posibilidad para aumentar la eficiencia en la reproduccin de las especies domsticas. Se han desarrollado mtodos para la inseminacin de bovinos, ovinos, cerdos. caballos, perros, gatos , aves, insectos, etc., siendo diferente en cada una de ellas, debido a caractersticas anatmicas y fisiolgicas propias de cada animal. 5.2 ANTECEDENTES. Existe una leyenda que relata que durante el siglo XIV se realiz la primera inseminacin artificial de una yegua con el semen del valioso garan de una tribu rabe rival. En 1977 Van Leeuwenhoek (holands) descubre con la ayuda del microscopio los animalitos del semen. La aplicacin ms antigua, bien documentada, de la I.A., data de 1780 cuando Spallanzai, italiano, obtuvo cachorros (2 machos y 1 hembra) mediante este mtodo, otros reportes aislados aparecieron en el siglo XIX, como Chelchoeski, Kaldrovics y Leidman (entre 1888 y 1896) que inseminaron 23 yeguas logrando concepcin de 11, pero fue hasta 1900 cuando hubo estudios extensos al respecto en Rusia por varios autores, destacando iIvanow que insemina equinos, bovinos, ovinos, animales salvajes e insectos, fundamenta la dilucin y transporte de semen, realiza cruzas entre especies, y razas diferentes y despus existi abundante investigacin en Dinamarca, Francia, Inglaterra y Japn.

5.3 VENTAJAS DE LA INSEMINACIN ARTIFICIAL 1.- Permite realizar un mejoramiento gentico acelerado, mediante el uso de sementales probados. 2.- Mejor utilizacin del semental, ya que de un solo eyaculado se inseminan gran nmero de hembras. 3.- Evita la presencia del macho en el hato, el gasto de manutencin y elimina el peligro que representa el semental. 4.- Facilita la implementacin de programas de sincronizacin y cruzamientos. 5.- Posibilita la adquisicin de dosis de animales valiosos por parte de ganaderos de escasos recursos.

6.- Control de las enfermedades venreas. 7.- Posibilidad de contar con registros o informacin exacta, para facilitar el manejo del hato. 8.- Econmico. 9.- Facilita el transporte y distribucin del semen. 5.4 DESVENTAJAS DE LA INSEMINACIN ARTIFICIAL. 1.- Se requiere de capacitacin para desarrollar la tcnica. 2.- Se requiere Instalaciones, aunque mnimas, y equipo. 3.- Se requiere deteccin de Estro. 4.- Puede diseminar caractersticas genticas indeseables.

5.5 INSEMINACIN ARTIFICIAL DE LA VACA Para alcanzar porcentajes ptimos altos de concepcin mediante el uso de la tcnica de Inseminacin Artificial en los bovinos es importante tener en cuenta en forma ESTRICTA los siguientes elementos: I. II. III. IV. Determinar el MOMENTO OPTIMO del servicio. Desarrollar la TECNICA ADECUADAMENTE Utilizar correctamente las tcnicas de DESCONGELAMIENTO Utilizar semen frtil.

En cuanto a tipo de Semen, es posible utilizar: a) Semen Fresco, pudiendo ser: a.1. diluido a.2. Sin diluir b) Semen Conservado: b.1. Refrigerado b.2. Congelado Es conveniente hacer el sealamiento que en el presente material de estudio, nos referimos a la utilizacin de SEMEN CONGELADO, por ser ste el de mucho mayor utilizacin, y con el que se cumplen las VENTAJAS o Beneficios que se enunciaron al inicio. I. MOMENTO OPTIMO DE SERVICIO.

Para considerar o determinar el momento ptimo de servicio o sea la decisin de Servicio, es conveniente tener presente lo relacionado con la etapa de RECEPTIVIDAD SEXUAL del bovino que es la etapa del ESTRO; etapa que constituye parte del ciclo Estral qu en su conjunto dura 18 a 23 das, frecuentemente de 21 das, durando especficamente la etapa de Estro, Calor o Celo de 18 a 24 horas. Existen diferencias entre el ganado productor de ganado lechero. carne y lechero, durando algo ms en el

Podemos sealar algunos SIGNOS externos e internos que caracterizan el Estro: SIGNOS EXTERNOS DEL ESTRO: Los signos de Estro que en la vaca se presentan son variables, no observandose ninguno de ellos en el 100% de las vacas en celo. por lo que es conveniente asociar signos para poder detectar el mayor nmero de animales en Estro real. Cuando inicia una vaca en Estro generalmente: a.- Cambia de comportamiento b.- Monta y deja de montar (homosexualidad temporal) c.- Pierde el apetito d.- Brama e.- Baja produccin Lctea f.- Genitales externos edematizados (hinchados) Cuando la vaca se encuentra a la mitad del estro: a.- ms frecuentemente se deja montar. b.- tiene secrecin de moco por la vulva c.- ms inquietud d.- moco en cola, nalga y/o pierna SIGNOS INTERNOS DE ESTRO: El tcnico inseminador puede ayudarse en la deteccin de signos de estro, utilizando el examen rectal para diferenciar las hembras que se encuentran en Estro y no han mostrado claramente los signos externos de estro. En una vaca en Estro, se puede palpar la consistencia del tero, el cual se siente turgente como manguera, al hacer un suave masaje generalmente puede salir moco. El implementar la Inseminacin Artificial en vacas lecheras o productoras de carne, sean estabuladas o en praderas inducidas o naturales, conlleva la NECESIDAD de implementar un eficiente esquema de DETECCION DE CALORES , el cual es posible mediante. a.- Observacin detallada del grupo de vacas vacas, preferentemente dos veces al da, por la maana muy temprano y por la tarde. b.- Uso de toros marcadores o celadores , sean con el pene desviado, vasectomizados, penectoma o con mandil o arns. c.- Uso de hembras androgenizadas o machorras d.- Uso de detectores de cpsulas con tinta (Kamar), colocadas en el maslo de la hembra para que estalle en caso de que sta sea montada. e.- Uso de marcador o tinta en maslo, que denote mediante desaliado si fue montada. f.- Uso de perros adiestrados para oler ferhormonas del estro. Todas las formas de auxilio en la deteccin del estro ofrecen ventajas, pero ninguno sustituye al buen observador

DECISION DE SERVICIO: El decidir si el bovino que se presenta ser inseminado o no, ser debido a la conjuncin d elos siguientes elementos: a:- Informacin: se detectar si por este concepto es suceptible a ser inseminada, si es ternera si cumple con la edad y/o peso requerido para ser inseminada; si es vaca valorar el tiempo que tiene post-parto, revisar si tiene servicios previos y sus intervalos as como si es vaca repetidora su historial reproductivo previo. b.- Informacin sobre hora de inicio de estro. c.- Hallazgos a la palpitacin rectal, con la deteccin de los signos internos de estro. d.- Valoracin de la condicin sanitaria del Estro, mediante la observacin del moco el cual debe ser claro, traslcido, adherente y viscoso, cualquier modificacin a stas caractersticas se considera anmalo. MOMENTO DE SERVICIO: Aunque es difcil determinar la hora exacta de inicio de Estro, es conveniente sealar que el momento ideal de servicio es entre 14 y 18 horas despus de haber iniciado el Estro; aunque por motivos prcticos el Esquema de DOS SERVICIOS es adecuado, esto es, a todos aquellos animales que son observados en calor por la maana (8:00) y que se determina cumplen con los requisitos para ser servidos, se inseminan por la TARDE de ese mismo da; y todas las hembras que son detectadas en calor a partir del medioda hacia la tarde (0):00-20:00) sern candidatas a ser inseminadas por la maana lo ms temprano posible. SEMENTAL ELEGIDO: Para obtener de la Inseminacin Artificial sus ms amplios beneficios se recomienda utilizar sementales aprobados, esto es que cuenten con Prueba de Progenie para produccin y tipo, confiables y positivas, o sea que el semental a elegir tenga la habilidad de transmisin gentica adecuada para la vaca que ser inseminada para pretender tener un(a) descendiente mejorado(a) en rasgos productivos como reproduccin de leche, grasa o protena, fsicos como pata, hueso, ubre, etc..

II.- TECNICA DE NSEMINACION ARTIFICIAL. Desde El comienzo de la I.A. se han desarrollado tres mtodos o tcnicas diferentes de inseminacin: A.- Inseminacin Vaginal: las primeras inseminaciones se realizaron por ste mtodo, consistiendo simplemente en introducir una pipeta, tubo catter en la vagina y depositar el semen, simulando la cpula natural, por sta tcnica se logran muy bajos resultados, con las condiciones actuales de dosis de semen con escaso volumen (0.5-1.0 mL) y con nmero reducido de espermatozoides mviles (10-40 millones). B.- Inseminacin Cervical: Mediante la Introduccin de un espejo estril en la vagina, y ayudado con una luz de una lmpara se inserta un catter o pipeta en el orificio cervical, depositando ah el semen, se tiene regular efectividad, pero es grande la desventaja con el siguiente mtodo, adems C.- INSEMINACION RECTO VAGINAL: Llamado tambin como Fijacin Cervical. Es la tcnica RECOMENDADA por su relatividad facilidad, economa y grandes resultados de efectividad si se

realiza adecuadamente. Los ndices de concepcin son ms bajos en principiantes pero a medida que se domina la tcnica se mejora grandemente la fertilidad. TECNICA: 1.- colocarse el guante desechable en la mano y brazo izquierdo, para quien es diestro y viceversa. 2.- Introducir la mano enguantada en el recto previamente humedecida o lubricada y desalojar las heces mediante: A.- Sin sacar la mano del recto previamente las heces por bajo de la mano. B.- Puados de excretas C.- Permitir la entrada de aire a recto para estimular que el animal defeque por s slo. 3.- Limpieza del rea con un papel desechable. 4.- Abertura de labios vulvares, mediante retraccin de esfnter rectal hacia abajo y con el dedo pulgar hacia fuera. 5.- Colocar la punta de la pipeta, catter o pistola de I.A., en la parte superior del techo vestibular. 6.- Introducir el brazo, localizar el cervix, y SUJETARLO agarrndolo con toda la mano, o bien con los dedos ndice, medio y pulgar, EMPUJAR lo ms posible el cervix hacia delante, con el fin de que los pliegues de vagina se eliminen. 7.- Deslizar la pipeta o pistola de I.A., por la parte SUPERIOR de la vagina hasta topar con el cervix, ello para evitar la introduccin de la pipeta en la uretra hacia vejiga urinaria. 8.- GUIAR la pipeta o pistola de I.A. hacia el orificio cervical mediante el dedo o los dedos libres, sea el meique o ste y el anular, hasta lograr insertar la punta en la entrada del orificio cervical. 9.- Manteniendo la pipeta o pistola de I.A. firme, y tomada de su media hacia atrs, con movimientos ONDULANTES y de ligera retraccin se INTRODUCE EL CERVIX EN LA PIPETA, dado que el conducto es irregular por la disposicin de los anillos existentes, se subraya que es necesaria la minupulacin en todas las direcciones para lograr pasar el instrumento de inseminacin a travs del cervix. 10.- A medida que la pipeta o pistola de I.A. avanza a travs del cervix, mover todos los dedos incluyendo el pulgar hacia delante de modo que la manipulacin ocurra un poco adelante del extremo de la pipeta o pistola. 11.- DETENER la pipeta o pistola de I.A. tan pronto como llegue al final del cervix, teniendo la precaucin de colocar un dedo en la abertura cervical-uterina que no permita que la pipeta vaya a cuerpo o a cuerno uterino. 12 DEPOSITAR el semen lentamente.

SITIO PARA DEPOSITAR EL SEMEN Dentro de la tcnica de Inseminacin rectovaginal se pueden sealar dos sitios posibles de Inseminacin. a.- Depsito cervical medio: en ste se hace la penetracin de la pipeta o pistola de I.A. por uno o dos anillos en parte central de cervix, depositar el semen.

b.- Depsito uterino: mediante la trasposicin de todos los anillos el extremo de la pipeta o pistola de I.A. se toca en la luz uterina, y ah se deposita el semen. Se seala que existe poca diferencia en cuanto ndices de fertilidad en el desarrollo de los dos sitios de depsito seminal, sin embargo ningn dato indica que el sitio cervical medio sea mejor que el uterino. No se recomienda el depsito seminal uterino profundo a nivel del cuerno uterino debido a posible traumatismo, infeccin o ambos. Para los principiantes como posiblemente sea Usted, yo recomendara de manera general que realizara el depsito seminal cervical por las siguientes razones: 1.- Es ms fcil y por consiguiente ms rpido se realiza la tcnica completa. 2.- Se disminuye el riesgo de daar la pared del tero. 3.- Se utiliza la accin antibacteriana de las secreciones cervicales. 4.- Se disminuye el peligro de interrumpir la preez cuando esta existiera y no se percatara de ello el inseminador.

POSIBLES PROBLEMAS Y RECOMENDACIONES Durante el desarrollo de la tcnica pudieran presentarse algun(os) problema(s) como los que a continuacin detallo y su posible resolucin: A.- Cuando se est inseminando una vaca por ningn motivo se saque la pipeta o pistola de I.A. de la vagina, sea porque la vaca orine, puje o defeque, el hacerlo contaminar la punta de la pistola o pipeta lo cual es muy perjudicial. B.- La vaca intentar expulsar la mano de recto por medio de contracciones paristlticas, las cuales inician en la unin del intestino grueso con el recto, dirigindose hacia el ano, al llegar a la mano la contraccin se para, pero los msculos continan apretando la mano, NO OPONER RESISTENCIA, porque se cansar rpidamente la mano, soltar el cervix y empujar la mano a travs de la contraccin, el recto se relajar y se podr manipular de nuevo el cervix. c.- Por introduccin de aire en el recto los msculos del recto pueden contraerse formando una gran pared dura de aspecto de tambor, en estas condiciones no se puede sentir o manipular el cervix, para resolverlo, alcance la unin del recto con el intestino grueso, una los dedos y jale la mano hacia el ano, es casi seguro que el msculo rectal contrado se relaje, o sea expulsado el aire y se podr manipular de nuevo el cervix, el hacerlo sin la debida relajacin de recto har que se sangre y sea dificultosa la maniobra. D.- Ocasionalmente la vagina se llena de aire, impidiendo o dificultando que la mano agarre el cervix y lo manipule, PRESIONE FUERTEMENTE la mano hacia la vulva, para empujar que el aire escape y se restablezcan las condiciones favorables. E.- Eventualmente la vejiga est extremadamente llena, dificultando la minipulacin de cervix, apresin sobre vejiga o masaje de cltoris har que orine. F.- Aunque pretendiera utilizar el sitio de depsito seminal uterino, pero no pudiera pipetear o tranponer todos los anillo cervicales en un tiempo aprox. de 5 minutos, realizar el depsito seminal ah en el cervix, no prosiga su intento o extraiga la pipeta o pistola de I.A. si hacerlo.

EQUIPO DE INSEMINACION El equipo bsico requerido para desarrollar con eficiencia la tcnica de Inseminacin Artificial en vaca es el siguiente: 1.- Thermo crognico o tanque de Inseminacin 2.- Guantes desechables obstricos 3.- Termmetro rango 0-100 grados Centgrados 4. Papel desechable 5.- Recipiente para descongelado. PARA PARRILLA FRANCESA: 6.- Pistola Cassou para parrilla francesa 7.- Funda plstica para pistola para pajilla francesa Cassou PARA AMPULA O AMPOLLETA: 6.- Pipeta semirgida para inseminacin 7.- Jeringuilla o bulbo para aspirar-expeler OPCIONAL: 8.- Portapipetas

MECANICA DE USO DE EQUIPO DE INSEMINACION Consideraciones generales: A.- Mantener con nitrgeno lquido en cantidad suficiente el thermo criognico, evitando que el nivel nunca sea menor a 10 cms. de altura, para lo cual recomiendo checar semanlmente el nivel, anotar y programar su recarga. B.- No usar para la limpieza del equipo, desinfectantes o antispticos ya que todos ellosmatan los espermatozoides, hacer el aseo con agua sola, o alcohol. C.- Durante el proceso considerar la temperatura del equipo que se utilizar, si est fro, mediante friccin tibiarlo, adems proteger siempre al semen de los rayos directos al sol, los daa.

III.- RUTINA DE DESCONGELADO 1.- Elegir la dosis a utilizar desde antes de destapar el thermo, mediante los registros de dosis existentes y ubicar previamente la canastilla que la contiene. 2.- Poner en un recipiente agua a temperatura de 37 grados contgrados, en volumen para cubrir 15cms. de largo de la pajilla.

3.- Abrir el thermo, ubicar la canastilla, presentarla a la boca del thermo, sin sacarla , ubicar el bastn, sacar la dosis con unas pequeas pinzas e inmediatamente pasarla al recipiente de agua tibia a 37 grados centgrados. 4.- En el agua a 37oC, cuidando que cubra toda la dosis, deber durante un minuto, sacarla con cuidado, secarla con papel desechable. En caso de pajilla francesa: 5.- colocar la pajilla dentro de la pistola, y quedar 1 cm. ms larga la pajilla que la pistola, con el extremo que tiene el algodn hacia adentro y con el extremo que est cerrado con ultrasonido o polivinilo hacia arriba, cuidar que la burbuja de aire quede arriba, CORTAR en forma perpendicular a nivel del extremo sellado electrstticamente. 6.- tomar la funda, introducirla en la pistola, INSERTAR la pajilla en la unin interior plstica de la funda, introducir totalmente la funda fijandola con el arillo pltico que en forma de O existente en el extremo del mango. 7.- Est lista la pistola, protegerla del sol, e inmediatamente desplazarse para realizar en la vaca la inseminacin , realizando el pipeteo y estando en el BLANCO se hace el depsito de semen empujando la barra de acero inoxidable contra el sello de la pajilla, la cual acta entonces como mbolo que deposita o expulsa totalmente el semen en el sitio de inseminacin. En caso de ampolla o Ampula: 5.- Romper el mpula del cuello, haciendo fuerza en el punto sealado comnmente con un punto de pintura. 6.- Calzar la pipeta semirgida a la jeringuilla, introducir un poco de aire (0.5 ml.), succionar el semen, colocarlo en la parte media de la pipeta y completar con poco de aire, que nunca pase semen a la cmara de la jeringuilla. 7.- Est lista la pipeta, protegerla del sol, e inmediatamente desplazarse para realizar la inseminacin, realizar el pipeteo, ubicarse en el BLANCO y depositar el semen empujando el mbolo de la jeringuilla. IV.- SEMEN FERTIL Dado que es una condicin que est fuera de nuestro alcance, se recomiendara solamente adquirir el semen con algn proveedor serio y establecido, adems de alguna compaa reconocida en el medio, para asegurar que al menos el manejo del semen ha sido en forma profesional, cuando se tenga dudas sobre la calidad del semen no dude en realizar una revisin de viavilidad del mismo, localmente en la Universidad autnoma de Aguascalientes se realizan.

PRACTICA 6 DIAGNOSTICO DE GESTACIN EN EL BOVINO

6.1 Introduccin 6.2 Diagnostico de Gestacin por Palpacin Rectal 6.3 Otros Mtodos de Diagnostico 6.4 Metodologa

6.5 Reporte de practica

6.1 Introduccin En la mayora de las especies domsticas el establecimiento y mantenimiento de la gestacin requiere que la fase lutenica del ciclo sexual se prolongue por persistencia de un nico cuerpo 10 lteo (CL) o de varios cuerpos lteos . Como resultado de la persistencia del cuerpo lteo las concentraciones se mantienen altas, determinando un Feed-Back negativo en la hipfisis anterior lo que inhibe la produccin de (Hormona Folculo Estimulante) FHS y por tanto el crecimiento folicular y por tanto en las especies poliestricas como el bovino la anulacin de presentacin de estros. Se ha postulado que la presencia del embrin viable determina la permanencia del cuerpo lteo, al parecer el sinciciotrofoblasto produce una protena, con accin de gonadotrofica que mantiene la persistencia del cuerpo lteo esta protena en los primates se la ha llamado Like HCG. El cuerpo Lteo. En la vaca el cuerpo lteo es mantenido durante toda la gestacin, en la practica es difcil diferenciar un cuerpo lteo de gestacin de un cuerpo lteo de diestro, sin embargo cuando se examinan despus del sacrificio de la hembra, una de las caractersticas principales que son observables es que la estructura del CL sobresale de la superficie ovrica y existe una cicatrizacin del tejido que rodea al CL, por otra parte es frecuente observar en CL cclicos una cavidad llena de liquido mientras que en los CL de gestacionales esta cavidad esta llena de tejido conectivo. El tero. En cuanto a las caractersticas del tero, durante el primer tercio de la gestacin, puede apreciarse un aumento de tamao del tero, lo cual es signo claro de gestacin. Para el reconocimiento de estos cambios es necesario que el alumno diferencia las dimensiones de un tero vaco con un tero gestante y las diferencias existentes entre animales con diferente edad y nmero de partos. A los 28 das de gestacin el amnios es esfrico y tiene aproximadamente 2 cm de dimetro, ocupa todo el cuerpo gestante, el alantoides mide aproximadamente 18 cm de largo, pero la cantidad de lquido es insuficiente para dilatarlo por lo que se torna difcil percibir a la palpacin, en este momento el embrin tiene casi un centmetro de largo por lo cual es inapreciable. Hacia los 35 das de gestacin el cuerpo fetal tiene una longitud de 1.8 cm y el dimetro de la vescula amnitica es de 3cm 11. El producto ocupa ya el cuerpo del tero y una parte del cuerno no gestante. A los 60 das de gestacin la longitud occipitococgea del feto es de 6 cm, el saco amnitico se torna oval y tenso, cuenta con un dimetro transversal de 5cm lo que permite que la anchura del cuerno uterino gestante tenga unos 6.5 cm diferencia significativa si se compara con el dimetro de un tero no gestante que solo es de 2 3 cm tanto en la vaquilla como en la vaca joven. A los 80 das el feto mide 12 Cm y la cantidad de lquido es de aproximadamente de 1 L , es definitiva la diferencia en la longitud del cuerno gestante. A los 90 das la dilatacin del feto en el tero permite sin dificultad detectar la preez, el cuerno gestante tiene una anchura de 9 cm y el no gestante de 4.5 cm, el tero se encuentra en el borde plvico y en muchas ocasiones en vacas multparas se requiere retraer el tero para la palpacin. El Feto.

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Artur G.H., Noakes D.E y Pearson H.1991 Reproduccin y Obstetricia en Veterineria. Ed. Interamericana McGRAW-Hill p.p. 65 90.

En cuanto al feto a partir de los 120 a 160 das de gestacin el tero cae por debajo del borde plvico y es fcil apreciar el tamao del feto por simple palpacin rectal en un 50%, al principio de este periodo el feto puede palparse delante y debajo del borde plvico, despus de este periodo el feto puede palparse transitoriamente al principio de la exploracin, pero despus se desplaza hacia abajo en la profundidad del tero haciendo difcil su palpacin. Entre los 5 y 7 meses y medio de gestacin el feto se detecta con menos frecuencia que en los periodos anteriores ( 40%), a menudo cuando se toca el feto suelen provocarse movimientos reflejos. Despus de este periodo y hasta el final de la gestacin el feto puede detectarse fcilmente, excepto algunos casos de vacas multparas con una cavidad abdominal desarrollada solo puede palparse hasta el final de la gestacin. Cuadro 2. Longitud del cuerpo fetal de acuerdo al momento de gestacin. GESTACIN MESES LONGITUD DEL CUERPO FETAL (cm) 0.8 6.0 15 28 40 52 70 80 90

1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 Tomado de G.H Artur (1991) Carnculas.

La observacin de cotiledones hipertrofiados es un signo claro de gestacin, estos varan en su tamao de acuerdo al individuo y al momento de la gestacin, esto al parecer est de acuerdo con nmero de carnculas. Estas uniones carnculocotiledonarias se van desarrollando, hasta que en las ltimas faces de la gestacin alcanzan de 5 a 6 cm de dimetro. Arterias uterinas La gestacin puede ser confirmada, mediante la identificacin de la hipertrofia de las arterias uterinas medias y el cambio de las caractersticas de sus ondas pulsatiles, que cambian de su pulso normal a detectarse un <<frmito>>. El periodo comprendido entre los 100 y 175 das de 11 gestacin el frmito es claro , durante este examen la presin ligera sobre la arteria permite detectar el frmito mientras una presin mayor permite detectar la onda pulsatil. Al final de la gestacin las arterias se muestran hipertrofiadas y tortuosas, mismas que son fcilmente detectables a la palpacin 6.2 Diagnostico de Gestacin por Palpacin Rectal La palpacin rectal es una tcnica que se utiliza desde hace ms de 50 aos como un mtodo seguro y convencional en el manejo reproductivo del bovino de leche, es factible que el productor utilice en combinacin con esta tcnica otros mtodos indirectos para el diagnstico de gestacin, como es el caso del retorno al estro, es importante que el estudiante aprenda a relacionar y a conjuntar todos los datos existentes para el diagnostico. El diagnostico de gestacin por palpacin rectal consiste, en detectar estructuras fetales y cambios en las caractersticas dimensionales del tero, arterias y carnculas, dependiendo del estadio de gestacin en la que se encuentra la hembra.

Es importante considerar das las precauciones y extremar cuidados en el manejo de las vacas ya que fcilmente se pueden causar daos serios al producto en gestacin lo que trae como consecuencias abortos o reabsorciones fetales, lo que impacta directamente con los parmetros reproductivos del hato. Es indispensable tambin que el M.V.Z. encargado del manejo reproductivo del hato ofrezca al productor las opciones de diagnostico de acuerdo con las condiciones y caractersticas que este tenga; hay que recordar que no siempre la precocidad con que se realice el diagnostico mejora la eficiencia reproductiva, hay que tomar en cuenta la precisin que se tiene con cada tcnica de diagnostico de acuerdo al tiempo en que se realiza. Ver cuadro 3.

Cuadro 3. Mtodos de diagnostico de gestacin y precocidad del diagnostico

Mtodo No retorno al celo y persistencia del CL Concentracin de Progesterona en plasma y leche Ultra sonido a tiempo real imagen directa Palpacin de alantocorion (desplazamiento de membranas)

Precocidad 21 das 21 a 24 das 28 das 33 das

Aumento de tamao del cuerno gestante, fluctuacin de lquido, 35 das adelgazamiento de la pared uterina Palpacin precoz del feto cuando el amnios pierde turgidez Palpacin de las carnculas / cotiledones Hipertrofia de la arteria uterina media y presencia de fremito Sulfato de estrona en sangre o leche Palpacin del feto 45 60 das 80 das 85 das 105 das 120 das

6.3 Otros Mtodos de Diagnostico Existen otros mtodos que conllevan al diagnostico de gestacin, el examen vaginal con ayuda de un especulo vaginal como se explica en la practica 3, permite reconocer algunos signos de gestacin como la palidez y la sequedad de las mucosas, as como la secrecin presente en el orificio posterior del cuello del tero, ya que durante la gestacin la secrecin de las clulas cervicales se torna gelatinosa y forma un tapn que sella el cuello uterino. Por otra parte las tcnicas de ultrasonido han tomado importancia en los ltimos aos debido la reduccin de las dimensiones de los aparatos y la accesibilidad comercial. Actualmente la utilizacin de transductores de disposicin lineal tipo B de 5 a 7.5 Mhz, es posible detectar hacia el da 26 la enlongacin del blastocisto y el tamao del mismo manteniendo entre los 28 y los 30 das

una seguridad global de 98.3 %. muerte embrionaria y fetal. 6.4 Metodologa

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Los errores, ms comunes presentados en esta tcnica es por

1. La practica ser llevada a cabo en las instalaciones de la Posta zootecnica de la UAA. 2. La vacas previamente seleccionadas, sern colocadas en las trampas de exploracin y sern marcadas con nmeros progresivos. 3. En equipos de dos alumnos, se explorarn a los animales por medio de palpacin rectal explicando el estadio de gestacin en que se encuentran. 4. Cada equipo tendr la oportunidad de examinar lacas que se encuentren el los tres principales estadios de gestacin. 5. Cada alumno realizar las anotaciones pertinentes para la elaboracin del reporte de practica. 6.5 Reporte de practica 1. Se reportar las caractersticas observadas en cada uno de los animales explorados. 2. Reportar las diferencias que el alumno encontr entre las vacas en diferente estadio de gestacin. 3. Reportar el tiempo aproximado de gestacin de cada vaca explorada. 4. El reporte de practica es individual. No se reciben reportes extemporneos.,

11

White I.R., Russel, A.F.J. y Fowler, O.G. (1984) Vet. Rec 115: 140 . 147.

PRACTICA 7. DIAGNOSTICO DE GESTACIN EN CANINOS Y FELINOS.

7.1 Introduccin

7.2 Mtodos de diagnostico de gestacin el la perra.

7.3 Mtodos de diagnostico de gestacin en la gata.

7.4 Metodologa de la practica.

7.5 Reporte de practica.

7.1 Introduccin Endocrinologa de la perra. Generalmente las perras presentan una fase luteal prolongada con persistencia del cuerpo lteo durante 70 a 80 das, durante este periodo los niveles de progesterona se mantienen en niveles 12 muy similares a las perras gestantes ( 27 ng /mL vs 29 ng /mL, respectivamente ) por tanto los efectos de esta hormona durante este periodo desde el punto de vista citolgico son tambin 13 similares . Este efecto a diferencia de otras especies no permite diagnosticar por medio de los niveles de progesterona ni de citologa vaginal la gestacin ( Ver practica 3). Los valores totales de estrgenos son ligeramente ms altos en la perra gestante que en la no 14 gestante, con un claro aumento en el momento de la implantacin . Estos niveles permanecen constantes durante casi toda la gestacin, descienden poco antes del parto y son muy bajos despus del parto. La evidencia de que los ovarios de la perra son necesarios para el mantenimiento de la gestacin, explica la evidencia de aborto al retirar los ovarios an despus de los 56 das de gestacin.

Endocrinologa en la gata. En la gata la ovulacin tiene lugar de 23 a 30 horas despus de la copulacin, las concentraciones de progesterona se aumentan rpidamente, pudiendo llegar hasta 100 n Mol / L entre la primera y 15 cuarta semana de la gestacin . Pasadas las tres o cuatro semanas las hembras muestran signos claros de hiperemia en la mamas, observndose marcadamente en las hembras primerizas. Durante este periodo es posible observar en esta especie conducta de celo e incluso acoplamiento a pesar de los niveles altos de progesterona que existen. Durante la ltima fase de la gestacin las unidades fetoplacentarias asumen el control de la gestacin auspiciadas por la produccin de progesterona en cada unidad, en este caso la ovarectoma causara aborto en esta especie solo si se realiza antes del da 46 de la gestacin. Es importante mencionar que la progesterona desciende desde su punto mximo alcanzado durante las proximas semanas de la gestacin hasta niveles bsales dos das antes del parto. Debido a que la ovulacin varia en tiempo despus de la copula, se ha descrito una variacin en la duracin de la gestacin que e va de 50 hasta los 70 das. Cuando las camadas llegan a ser de una sola cra se puede esperar una reabsorcin debido al poco aporte de progesterona y relaxina por parte de la unidad fetoplacentaria. As mismo un gran nmero de gatas pueden presentar celo durante la gestacin e incluso copular y ovular, de lo que es frecuente observar casos de superfetacin en esta especie.

7.2 Mtodos de diagnostico de gestacin en la perra. Como se ha mencionado anteriormente la perra por ser una especie policclica la gestacin no puede ser diagnosticada por la ausencia de celo. Por otra parte uno de los principales problemas Concanon, P.W.,Hansel,W. Y Visek, W.J. ( 1975) Biol. Reprod 13: 112 117. Johnston D.S. (1981). Examination of Genital System. Veterinary Clinics of North America: Small Animal Practice . 11:3 543 547. 14 Artur G.H., Noakes D.E y Pearson H.(1991) Reproduccin y Obstetricia en Veterineria. Ed. Interamericana McGRAW-Hill p.p. 65 90. 15 Schille, V.M. Munro, C., Walker Farmer, S., Papkoff, H. Y Stabenfeld, G.H., (1983) J. Reprod Fertil 68:29 223-227.
13 12

en l diagnostico de gestacin en la perra es la frecuencia de Pseudogestacin, estadio que puede variar entre individuos y razas. Por otra parte existen otros problemas que por causar distensin abdominal dificultan tambin el diagnostico de gestacin tal es el caso de piometras, ascitis, peritonitis con derrame, hipertrofia especnica y neoplasias del hgado, ganglios abdominales y tero. Este tipo de patologas es importante que el alumno las identifique con el fin de utilizar el mtodo ms conveniente para l diagnostico de gestacin en esta especie. A continuacin se mencionan algunos de los mtodos ms comunes para l diagnostico de gestacin en esta especie. Palpacin Abdominal. Este mtodo permite identificar la estructura del tero y las estructuras embrionarias dependiendo del estadio de gestacin. Es importante enmarcar que existen algunos factores que determinan la seguridad la facilidad de la aplicacin de esta tcnica. 1.- El tamao del animal: Es ms fcil en las razas pequeas. 2.- Temperamento. 3.-periodo de gestacin donde se realiza la palpacin. 4.- Nmero de fetos. 5.- Condicin corporal del animal. A continuacin se mencionan algunas de las caractersticas de cada estadio de la gestacin que 16 de pueden determinar con esta tcnica, como las describe Artur y col (1989) . Desde los 18 a los 21 das. En este periodo los embriones constituyen un grupo de vesculas distendidas de 12mm de largo por 9 mm de dimetro. En las razas pequeas mediante esta tcnica es posible palpar el nmero de vesculas distendidas. Desde los 24 a los 30 das. Este periodo es el ms adecuado para realizar un diagnostico de gestacin ya que las vesculas distendidas pueden medir hasta 30 mm lo que permite identificarlas fcilmente. Desde los 35 a los 44 das. Durante este periodo las reas comprimidas del tero pierden tono debido a la distensin de las vesculas las cuales se alargan y se tornan suaves. En este periodo es difcil detectar la presencia de fetos y dar un diagnostico positivo. Desde los 45 a los 55 das. Este periodo se caracteriza por el crecimiento fetal, lo que permite la deteccin clara de los fetos entre los dedos del explorador. Debido a la extensin de los cuernos uterinos en el abdomen, este se dilata dando signos claros de gestacin. Desde los 55 a los 63 das. Durante este periodo la palpacin abdominal es relativamente fcil, debido al tamao fetal y a su acomodo es factible por medio de palpacin digital rectal, palpar las extremidades fetales. Seguridad de la tcnica. Muchas de las veces, se han criticado la seguridad de esta tcnica sobre todo en los casos de Pseudogestacin. Por otra parte existen trabajos que describen una seguridad de 52% diagnosticando a los 25 das contra 87% al diagnosticar de los 26 a los 35 das. Es recomendable establecer como momento optimo para l diagnostico de gestacin por palpacin el periodo comprendido entre los 26 y los 35 das. Mtodo radiogrfico.

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Artur G.H., Noakes D.E y Pearson H.1991 Reproduccin y Obstetricia en Veterineria. Ed. Interamericana McGRAW-Hill p.p. 65 90.

La radiografa es un mtodo utilizado en gran parte durante el ltimo tercio de la gestacin, esto permite l diagnostico en perras de razas grandes y obesas, as como diagnosticar la presencia de un solo feto y evitar as una posible gestacin prolongada. Este mtodo es de gran valor en caso de distocia ya que permite al medico conocer la situacin de los fetos con respecto al canal de parto. En muchos casos una sola radiografa con la perra en decbito lateral basta para el diagnostico de gestacin, sin embargo si se desea conocer el nmero de fetos es necesario tomar placas posicin dorsoventral. Para la interpretacin de las radiografas se necesita identificar primeramente las masas intestinales desplazadas por el tero grvido, la identificacin del tero y la presencia de esqueletos fetales.

Mtodos de Ultrasonido.

Actualmente los ultrasonidos de tipo B representan el mtodo de diagnostico de gestacin ms seguro en la perra, el nivel ms alto de seguridad para la identificacin positiva se ha encontrado utilizando un aparato de ultrasonido de tipo lineal colocado en el abdomen, 28 das despus de la cubricin I.A.17 Durante este periodo de puede obtener un porcentaje de seguridad del 99.3 %. Mediante este mtodo es difcil estimar con seguridad el tamao de la camada, especialmente en perros de razas grandes o demasiado obesos. Es importante que el alumno tome en cuenta algunos puntos importantes para el uso del aparato de ultrasonido: 1.- El animal a explorar deber estar debidamente sujeto y lo ms tranquilo posible. 2.- Es importante contar con un gel adecuado de contacto con lo que se obtendr mejor resolucin durante l diagnostico. 3.- Es preferible que el rea del abdomen donde se colocar la sonda del aparato este desprovista de pelo, o en su defecto es necesario colocar suficiente cantidad de gel de contacto para evitar interferencias en la imagen. 4.- la sonda se coloca en el abdomen y se mueve lentamente con el fin de identificar estructuras conocidas, como la vejiga de las cuales podamos partir para reconocer le cuerpo del tero y las estructuras embrionarias. 5.- en caso de que el alumno no conozca el funcionamiento bsico del aparato, deber pedir asesora a su instructor y consultar el manual de uso.

7.3 Mtodos de gestacin en la Gata.

La gata en particular es una especie que por sus caractersticas de conformacin corporal, y estructura anatmica, es relativamente l diagnostico de gestacin por medio de la palpacin. En esta especie a partir del da 16 y hasta el da 26 despus de la cubricin es el periodo ms idneo para l diagnostico por palpacin, ya que durante dicho periodo las vesculas embrionarias de distinguen fcilmente, antes del da 13 los embriones pueden confundirse con los bolos fecales.
17

Butterfield,R.M, y Mathews,R.G. (1979) j. Reprod. Ferti. 27:447

Despus de las seis semanas la vescula embrionaria se difunde en los cuernos uterinos haciendo difcil su palpacin. Los ultrasonidos permiten hacer un diagnostico precoz de la gestacin, esta tcnica al igual que en la perra tiene gran confiabilidad y relativa facilidad para la identificacin de las vesculas embrionarias.

7.4 Metodologa de la practica. 1.- La practica ser llevada a cabo en el laboratorio de reproduccin animal del Departamento de Clnica Veterinaria 2.- Se organizarn en equipos de 4 personas con la finalidad de que cada equipo lleve a la practica una hembra de la especie canina o felina en diferentes estadios de gestacin. 3.- Se realizar l diagnostico por medio de la tcnica de palpacin, donde el alumno reconocer las vesculas embrionarias mediante la palpacin abdominal, posteriormente utilizar el ultrasonido para corroborar su diagnostico. 4.- Es importante que el alumno conozca la historia clnica del animal, el tiempo de que tiene desde la cubricin. 7.5 Reporte de practica.

1.- Se reportar la metodologa utilizada para el diagnostico. 2.- Reportar l diagnostico realizado incluyendo la historia clnica del animal, y el posible y la etapa de gestacin en la que este se encuentra. 3.- El reporte ser en forma individual. NO SE RECIBEN REPORTES EXTEMPORANEOS.

PRACTICA 8. OBTENCIN Y EVALUACIN DE SEMEN DE BOVINO, PORCINO Y CANIDEO 8.1 Introduccin 8.2 Tcnica de obtencin de semen de Bovino 8.3 Tcnica de obtencin de semen de Ovino

8.4 Tcnica de obtencin de semen de Porcino 8.5 Tcnica de obtencin de semen de Canideo 8.6 Reporte de practica.

8.1 Introduccin.

La obtencin y evaluacin del germoplasma de las diferentes especies de mamferos domsticos, demanda de manera primordial la estandarizacin, precisin, reproductibilidad, reelevancia y validacin de las metodologas aplicadas al proceso del anlisis de fluidos seminales.

Los criterios para la evaluacin de semen se basan normalmente en patrones que reflejan fertilidad en cada especie, obtenidos general mente de machos que han probado tener ndices de fertilidad superiores dentro de su especie y raza. Por tanto es importante que el M.V.Z. conozca los las metodologas y los procedimientos estandarizados existentes en un laboratorio dedicado a la reproduccin animal, as mismo integre y establezca criterios que le permita definir las caractersticas reales y aceptables del germoplasma de las distintas especies de mamferos domsticos. 8.1.2 Procedimiento y cuidados generales para la obtencin de semen. a) Frecuencia de eyaculacin. Debido caractersticas de espermatogenesis, espermiogenesis y maduracin epididimaria las Nota cuales son parte esencial de la formacin espermtica . Se han tomado como base la duracin del ciclo del epitelio seminfreo de cada especie para la determinacin de la frecuencia de eyaculacin . Por tanto muy importante que se tenga conocimiento de dicha informacin para la obtencin de muestras de semen de buena calidad. Al aumentar la frecuencia de recoleccin del semen disminuye el nmero de espermatozoidez en cada una de ellas, pero aumenta el nmero en unidad de tiempo. De esta manera pueden obtenerse miles de millones de espermatozoidez por semana de cualquier animal de granja siempre y cuando se manejen adecuadamente y se tengan estuiados los ciclos del epitelio seminfero. Un ciclo completo, determinado por los estadios, llamado ciclo del epitelio seminfero, se define como una serie de cambios en un rea dada del epitelio seminfero entre dos asociaciones celulares o estadios, as los pasos de la espermiogenesis sirvenpara clasificar los diferentes estadios del ciclo. El tiempo para completar un ciclo del epitlio seminfero varia con cada especie por ejemplo en el toro dura 13.6 das y en esta especie las organizaciones de reproduccin artificial a menudo manejan la recoleccin de semen dos veces al dia y en dos ocaciones por semana. En los carneros y machos cabros la duracin del ciclo del epitelio seminal es de 10.3 das y normalmente se le asignan a un carnero adulto 30 hembras mientras que a un macho cabro normalmente se le asignan 50. En el porcino la duracin del ciclo seminfero es de 8.6 das (Swierstra ,1968) Asi mismo la duracin del transito de los espermatozoides por el epididimo es de unos 10.2 das, generalmente es recomendado hacer la recoleccin en esta especie dos veces por semana. En el garaon la duracin del ciclo seminfero es de 13 das pudiendo ser trabajados dos veces por semana durante la poca de apareamiento Es importante mencionar que segn la especie, se requieren de cuatro a cinco ciclos antes que una espermatogonia tipo A del primer ciclo haya completado la metamorfosis del la espermiogenesis y la maduracin epididimaria.
18

b) Proceso de coleccin del semen. Uno de los puntos crticos del de la obtencin y procesamiento del semen, es definitivamente el proceso de coleccin, aun que cada especie tiene
Nota:

Entiendase por maduracin espermatica al proceso que se inicia, con la espermiacin continua con su paso por el epididimo, donde el espermatozoide experimenta cambios tanto en la estructura como en la composicin de componentes membranales. Dicho proceso continua despues de la eyaculacin y le confiere finalmente al espermatozaoide la capacidad de fecundar al ovocito.

Swierstra, E.E. (1968) Cytology and maduration of the cycle of the epitelium of the boar; duration of spermatozoatransit thougt epiddidymis. Anat.Rec. 161 . 171.

18

diferentes caractersticas existen algunos puntos que el MVZ debe cubrir y que son esenciales tales como la temperatura, el proteger de la luz solar y el mtodo propio de coleccin inciden definitivamente el la calidad de muestra obtenida. c) Las muestras al ser colectadas debern ser transportadas al laboratorio, en contenedores de plstico o de policarbonato cnicos protegidos de la luz solar en un tiempo mximo de veinte minutos de no ser as deber utilizarse un medio lquido de transporte que le permita a los espermatozoides protegerse del medio exterior. d) Los contenedores o tubos conicos usados debern reunir las especificaciones de limpieza y toxicidad del material, si se usan tubos de vidrio es necesario que tengan un proceso de recubrimiento de silicon asi como haber sido lavados con una solucin de extran al 2% y enjuagados en dos ocaciones con agua destilada. e) Una vez colectada la muestra el contenedor deber etiquetarse con la identificacin del macho su procedencia, propietario, fecha y hora de la obtencin. 8.2 Tcnica de obtencin de semen de bovino. Para la obtencin de semen de Bovino se utilizan los mtodos de electroeyaculacin y el uso de vaginas artificiales, siendo este ltimo mtodo el ms usado. Para la obtencin de semen con vagina artificial es necesario tener una vaca en celo o bien un maniqui para toros entrenados. Para este procedimiento se deben extremar precauciones sobre el manejo del toro ya que se tiene el riesgo de ser aplastado, pateado e incluso embestido por el semental. Material: Vagina artificial (VA). Fundas de recoleccin Tubos recolectores Medio protector de transporte. Hielera. Termmetro. Termo. Papel aluminio Guantes de latex. Consideraciones: Es ms importante al preparar la VA la temperatura que la presin que la funda de latex ejerce sobre le pene, se llena la VA con agua y finalmente se le da la presin adecuada insuflando aire. Es importante que la temperatura del agua no sobrepase los 55 y que la temperatura del interior C de la VA no sea mayor a 45c. Es importante mantene r el tubo de recoleccin a la misma temperatura del semen 34 36 para evitar el choque trmico durante l a recoleccin. C Una vez obtenida la muestra es importante llevarla lo ms rpido posible al laboratorio protegida de la luz solar y de las variaciones de temperatura, para este ltimo aspecto se pude utilizar un medio lquido de transporte que que da proteccin membranal a los espermas.

8.3 Tcnica de obtencin de semen de Ovino. Para la obtencin de semen en los carneros se siguen los mismos pasos que para los bovinos, considerando que las dimenciones de las vaginas artificiales son diferentes.

Sin embargo es factible utilizar tambin hembras en celo o maniques para la recoleccin, es importante mencionar que los carneros son mucho ms rpidos para la monta e intromisin y que el operario tendr que adquirir la destreza suficiente para coordinar los movimientos del carnero a la hora de la monta. A continuacin se enlista el material bsico para la obtencin de semen de ovino el cual solo cambia en las dimenciones de la VA. Material: Vagina artificial (VA). Fundas de recoleccin Tubos recolectores Medio protector de transporte. Hielera. Termmetro. Termo. Papel aluminio Guantes de latex. Gel lubricante vaginal sin espermicida. 8.4 Tcnica para la obtencin de semen de Porcino. Los porcinos particularmente expulsan grandes volumenes de semen y el proceso de eyaculacin llega a durar hasta 25 minutos, por tanto la metodologa de recoleccin es diferente. En esta especie se recomienda recolectar dos veces por semana periodo en el cual la cantidad y calidad de las muestras obtenidas me mantienen estables. Para la obtencin de la muestra es necesario tomar en cuenta que en esta especie a diferencia de los bovinos y ovinos la presin que se ejerce sobre el glande es ms importante que la temperatura. Esto ultimo se debe a que en la copulacin natural la punta enroscada del pene se acopla a los pliegues cervicales de la cerda los cuales ejercen una presin ritmica durante la eyaculacin. Dentro de los procedimientos de obtencin de muestra el que ms se ha usado es el de la tcnica 19 esta consiste en hacer que el cerdo monte un maniqu y al de que el de la mano enguantada semental hace movimientos de intromisin, se toma la punta del pene con la mano enguantada y se hace presin rtmica hasta lograr que el verraco desenvaine en su totalidad e inicie la eyaculacin, una vez iniciada esta se mantiene la presin y se inicia la recoleccin. El eyaculado del cerdo consta del tres fracciones: a) fraccin preespermatica que es una fraccin en forma de gel (tapioca) que contiene gran cantidad de colgeno la cual es necesario separar o eliminar de la muestra. Esto se logra por medio de filtracin con ayuda con ayuda de una gasa que se coloca en el termo de recoleccin, b) Fraccin rica en espermatozoidez posterior a la primera fraccin es impotante recolectar el total de la fraccin rica en espermas la cual es lquida de apariencia lechosa, c) Fraccin pos espermtica, esta fraccin al igual que la primera es una fraccin en forma de gel la cual debe ser separada de la misma forma. Tanto la fraccin preespermatica como la fraccin pos espermatica en la naturaleza cumplen una funcin muy importante la cual es la de evitar que la fraccin rica en espermatozoidez escape hacia el lumen vaginal y pueda ser forzada a travs del canal cervical. Una vez recolectada la muestra debera ser llevada de inmediato al laboratorio para ser evaluada. Material Necesario:
19 Islas Ojeda E., Gutierrez Gonzlez J.J, Lemus Bravo A.E (1998) Distribucin de receptores a Progesterona Sobre la Superficie Celular del Espermatozoide Eyaculado de Cerdo Cuarto Simposio Estatal de Ingvestigacin Aguascalientes Ags Mxico.

Guantes de latex Termo recolector. Bolsas de polietileno Ligas de latex Gasas esteriles 8.5 Tcnica de Obtencin de semen de Canideo La especie canina es una de las especies con ms diversidad de conductas y comportamientos tanto fisiolgicos como reproductivos por tanto los parmetros de obtencin y caractersticas del semen, varan segn la raza. Existen dos tcnicas para la obtencin de semen en esta especie la primera de ellas en por medio del uso de vagina artificial y el segundo por manipulacin digital, para efecto de este manual hemos decidido desarrollar la tcnica de manipulacin digital. Para dicha tcnica se requiere que el animal se encuentre lo ms tranquilo posible y de preferencia en compaa de su propietario, es necesario con ayuda de un guante de latex iniciar la manipulacin digital haciendo presin en la parte posterior del bulbo peneano para lograr asi la ereccin completa del pene . una vez lograda la ereccin se desva el pene con direccin caudal pasando entre los dos miembros posteriores (ver Fig. ), posterior a esta accin normalmente se inicia la eyaculacin la cual consiste en una fraccin preespermatica y una fraccin rica en espermas, la forma de diferenciar una fraccin de otra es que la primera fraccin es transparente casi en su totalidad y la segunda tiene una apariencia turbia a lechosa,. Es importante solo recolectar solo la segunda fraccin debido a que la primera contiene generalmente factores que afectan la estabilidad membranal de los gametos. La muestra de semen debe recolectarse en bolsas de polietileno o en contenedores de plstico protegidos de la luz solar y los cambios bruscos de temperatura. Una vez obtenida la muestra se transporta al laboratorio para su anlisis.

Figura....

8.6 Reporte de practica. El alumno reportar la metodologa que sigui para la obtencin de semen de al menos una de las especies descritas en el manual as como los resultados obtenidos de la aplicacin de la metodologa empleada.

PRACTICA 9. BASES PARA LA EVALUACIN DE FLUIDOS SEMINALES.

9.1 Introduccin 9.2 La primera Observacin

9.3 Evaluacin microscopica 9.3.1 Evaluacin de la movilidad 9.3.2 Calidad de Movimiento

9.1 Introduccin El presente manual trata de exponer las bases para la evaluacin de fluidos seminales, para la cual los autores han echado mano de una serie de tcnicas descritas de forma seria y desde un punto puramente cientfico, aunado a la seleccin de cada una de dichas tcnicas en base a la experiencia profesional y de campo de los autores. Este conjunto de tcnicas han sido estandarizadas en el laboratorio de investigacin del departamento de clnica veterinaria y se pone a su consideracin en el presente manual, teniendo como objetivo principal que el alumno haga uso de ellas de manera fcil y objetiva pudiendose utilizar y/o solicitar en un futuro. 9.2 La primera observacin. Una vez obtenida la muestra de semen es importante observar algunas caractersticas que pueden desde un inicio determinar la calidad y la posible aceptacin de la muestra. Dentro de los puntos principales a observar son los siguientes: Color. El color aunque es una observacin objetiva nos puede dar una idea de la concentracin espermatica o de algunos componentes indeseables en la muestra como son la presencia de Sangre ( coloracin rojiza), presencia de pus, presencia de orina, estircol, presencia de tierra, partculas indeseables o incluso presencia de agua debido a la existencia de fugas en las vaginas artificiales. Olor. El olor que se percibe en una muestra de semen aunque es caracterstico para cada especie, nos puede dar indicios de que existi alguna contaminacin antes o despus de la extraccin, tal es el caso de la presencia de orina, o presencia del contenido de las vesculas prepusiales en el caso del verraco o bien olores caracteristicos de la presencia de pus o de alguna infeccin Volumen. El volumen obtenido de cada muestra nos ayuda a calcular la cantidad de espermatozoidez obtenidos de cada muestra, as como a diagnosticar anomalas o patologas del aparato reproductor masculino. Para cada especie se puede adaptar algunos sistemas para conocer el volumen, por lo general en especies que eyaculan gran volumen como el cerdo, el bovino, los equinos y los caninos los volumenes deben expresarse en mililitros ( mL) mientras que en especies que eyaculan volumenes pequeos estos son expresados en microlitros (l). A continuacin se presenta en el cuadro( No. 4 ) que muestra por especie el volumen promedio de eyaculado y el mtodo sugerido para la medicin del volumen. Cuadro 4. Mtodo para la medicin de volumen de eyaculados Especie Volumen Mtodo sugerido para la medicin promedio Porcinos 120280 mL Conversin de peso a volumen, Utilizacin de mtodo de cubicacin o medicin del volumen directo con ayuda de un Matraz de polipropileno Bovinos 8 15 mL Utilizacin de tubos cnicos graduados Equinos 70 130 mL Conversin de peso a volumen, medicin del volumen directo con ayuda de un Matraz de polipropileno Ovinos 0.8 1.2 Recoleccin en micro tubos cnicos graduados tipo eppendorf, por dilucin y diferencia de volumen.

Caprinos Caninos Conejos

Recoleccin en micro tubos cnicos graduados tipo eppendorf, por dilucin y diferencia de volumen. 10 40 mL Medicin directa en Matraz de polipropileno. 300 600 l Recoleccin en micro tubos cnicos graduados tipo eppendorf, por dilucin y diferencia de volumen.

0.6 1.0

9.3 Evaluacin Microscopica.

Antes de inicio de cualquier examen microscopico de los fluidos seminales, es absolutamente necesario que la muestra se encuentre perfectamente mezclada o resuspendida ya que los espermas al y igual que otros componentes del fluido seminal tiendes a precipitarse. Para resuspender la muestra puede utilizarse un vortex utilizando una velocidad baja por un periodo de 5 a 10 segundos ( Belsey, 1980). En forma alterna puede utilizarse tambin una pipeta de toma de polietileno, hacuendo movimiento de aspiracin se logra una mezcla homognea del fluido seminal.

Para iniciar el anlisis se coloca una pequea gota de aproximadamente 2-3 mm de dimetro sobre un portaobjetos siliconizado previamente entibiado en la platina caliente. Esta preparacin puede ser examinada a una magnificacin de 10 40 X, utilizando un microscopio compuesto comn, sin embargo es preferible la utilizacin de microscopios de contraste de fases los cuales nos permiten observar de una manera ms clara las preparaciones teidas que se describen ms adelante. La movilidad cualitativa, la movilidad cuantitativa, la concentracin espermtica, la presencia de particulas extraas o de detritus celulares , las aglutinaciones espermticas as como la viabilidad espermatica pueden evaluarse como se describe a continuacin.

9.3.1 Evaluacin de la Movilidad. Para esta evaluacin se requiere tener prever algunos factores que pueden llevarnos al error, como por ejemplo la colocacin de cubre objetos los cuales por su peso n permiten expresar la forma y vigor de movimiento que presentan las muestras. Las muestras deben de ser evaluadas inmediatamente despus de ser colocadas en los portaobjetos, de no ser as se corre el riesgo de de tener error por el secado parcial que presenta la muestra. Por tanto las temperaturas como los tiempos en que se procesan las muestras son de suma importancia para las evaluaciones de movilidad. Movilidad cualitativa. Este parmetro es el resultado de una evaluacin subjetiva de la movilidad masal que presenta la muestra, por tanto es importante tomar en cuenta que esta evaluacin deber realizarse observando el muestra a una magnificacin de 10 X en donde solo nos permita observar el movimiento que presenta la muestra en su conjunto. Debido que la evaluacin es subjetiva la graduacin es de tipo no paramtrico es decir solo utilizaremos una escala de apreciaciones que no corresponden a un valor nominal. Las graduaciones que se han considerado para la evaluacin de semen en nuestro laboratorio son no-movimiento, movimiento pobre, movimiento bueno, movimiento muy bueno y movimiento excelente los cuales son interpretados en el cuadro (4). Cuadro 4. Graduacin de la escala subjetiva para la movilidad cualitativa.

TIPO DE MOVIMIENTO

GRADUACIN

Sin Movimiento Movimiento Pobre Movimiento Bueno Movimiento Muy Bueno Movimiento Excelente

0 X XX XXX XXXX

Movilidad Cualitativa La movilidad cualitativa es determinada por el computo tonto de los espermatozoides mviles como los no mviles, contando cien espermas en diez campos al azar de la muestra observada. El porcentaje de espermatozoides mviles es calculado a partir del nmero de espermas mviles computados. Belsey y col. (1980) describen que este calculo puede ser redondeado al siguiente mltiplo de 5 ( e.g. 84% = 85%).

El criterio empleado en nuestro laboratorio es que muestras con 70% o mayor porcentaje se consideran como aceptables, ya que en su mayoria presentan movimientos progresivos los cuales undican una buena calidad de movimiento, los cuales pueden mantenerse de hasta cuatro horas despus de la eyaculacin. Mientras los fluidos que muestran 40% o menos porcentaje de movilidad presentan movimientos no progresivos antes o despues de 48 72 H, en ocaciones se puede observar tambin muestras que en un inicio presentan buena movilidad pero esta declina rpidamente lo cual generalmente indica que existen problemas inherentes al macho como puede ser la frecuencia de monta o eyaculacin , problemas de madurez de membrana o bien problemas de tipo patolgico.

9.3.2Calidad de Movimiento Generalmente este parmetro nos describe el tipo de movimiento que presenta el espermatozoide de manera individual, los cuales nos pueden dar datos principalmente de madurez de membrana que presenta el espermatozoide, as por ejemplo un espermatozoide que no completo su nota presenta movimientos que no son progresivos o rectilineos despues maduracin epididimaria 20 de la yaculacin y durante la capacitacin (Islas ; 1996) . Dentro de los movimientos se pueden clasificar tres movimientos principales en los espermatozoides. Movimiento Progresivo Lineal: Este tipo de movimiento lo presentan muestras de buena a excelente calidad en la cual se puede observar que los espermatozoides se mueven a travs del campo en forma progresiva y unidireccional, este tipo de movimiento se logra en su totalidad despus de que el espermatozoide es capacitado dentro del tracto genital femenino. Movimiento Progresivo No lineal (en forma de estrella): Este tipo de movimiento lo pueden tener las muestras de buena calidad que generalmente no han sido capacitadas, o bien muestras que tienen un movilidad pobre.

Entindase por maduracin epididimaria el proceso que sufre el espermatozoide a su paso por el epididimo el cual involucra cambios importantes en la composicin de la membrana , dentro de los cuales se inckluye el cambio en su fluidez, insercin y perdida de carbohidratos y glicoportenas de superficie de membrana. Esto permite o da la capacidad de movimiento progresivo al esperma
20 Islas Ojeda Efran (1996) Determinacin de Receptores a Progesterona Sobre la Superficie Membranal de Espermatozoides Epididimarios de Conejo Tesis de Maestra Universidad Autnoma Metropolitana Iztapalapa Departamento de Biologa de la Reproduccin Animal. Mxico D.F

nota

Movimiento en crculos sin desplazamiento de cabeza: Este tipo de movimientos lo presentan muestras con calidad de movimiento pobre, generalmente es un indicador de falla del proceso de madurez epididimaria o bien en muestras de animales que han tenido un exceso en la frecuencia de eyaculacin o bin toros a los que se les da una carga excesiva de hembras en la poca de apareamiento Ver Figura ( ).

Figura . Muestra el tipo de movimiento que se evala

Movimiento progresivo lineal

Movimiento progresivo en crculo sin desplazamiento de cabeza

Movimiento progresivo no lineal

9.4 Estimacin de la concentracin espermtica. El mtodo para estimar la concentracin espermtica que a continuacin discutimos requiere de las observaciones anteriores para poder determinar la dilucin que se realizar ya que con las evaluaciones iniciales podemos observar a simple vista si la muestra esta poco concentrada o no, por experiencia propia la dilucin que se realice determinara la facilidad con que haga el conteo espermticos y el anlisis morfolgico de la muestra. Esta evaluacin se estima con ayuda de un hemocitometro o cmara de Neubauer. Las muestras resuspendidas deben ser diluidas dependiendo de la especie y concentracin a 1:10,1:20,1:50 o 1: 100, el diluyente utilizado consiste en 50g de NahCo3, 10ml de formalina al 35%, 5mL de solucin saturada de violeta de genciana y Nota . las diluciones se realizan agua destilada en cantidad basta para 100 mL (Belsey y col. , 1980) en micro tubos con ayuda de micropipetas (10,50,100 200 l), con la muestra una vez diluida se llenan ambas secciones de la cmara y se cubren con un cubre objetos. La cmara se deja reposar durante 1 minutos para permitir que las clulas se precipiten y posteriormente se pasa al microscopio para el conteo.

Nota

Esta solucin evita que los espermatozoides se muevan, as mismo se losgra una mejor precipitacin en la cmara y la tincin permite una mejor visualizacin en el momento del conteo.

La concentracin espermatica se expresa en trminos de nmero de espermatozoides por mL se semen, mientras la cifra final se expresa por el total de espermatozoides en el eyaculado. Las bases del conteo de espermas se basa en los siguientes clculos: La cmara se encuentra dividida en nueve secciones de las cuales se han numerado cinco cuadros, el cuadro central cuadro 5 subdividido a su vez en 25 cuadros contiene 0.1 mm3 (Ver figura ) para el calculo del nmero de espermatozoides de utiliza la siguiente formula:

No. Epz/ mL = FD *FM * No. Epz contados en Cmara

De donde: FD= Es el factor de dilucion utilizado que puede ser 20,50 , 100 y 200 para las diluciones 1:20, 1:50, 1:100 y 1:200 respectivamente. FM = Fa

Figura__. Cmara de Neubauer hemocitmetro: La cmara se encuentra dividida en nueve secciones de las cuales se han numerado cinco cuadros, el cuadro central cuadro 5 subdividido a 3 su vez en 25 cuadros contiene 0.1 mm