REPLICACIN DEL ADN

DOGMA CENTRAL BIOLOGA MOLECULAR

F. Crick 1970

TEMIN: NOBEL 1975

Retrotranscriptasa

DOGMA CENTRAL DE LA BIOLOGA MOLECULAR DOGMA CENTRAL DE LA BIOLOGA MOLECULAR

3
Hebra molde Hebra molde Transcripcin Transcripcin

8.1.Traduccin Traduccin

Watson and Crick

1953 article in Nature

Directionality of DNA
You need to number the carbons!
it matters!
5 CH2
This will be IMPORTANT!!

PO4

nucleotide

N base

O 4 3 OH

ribose
2

Azcar (Pentosa)

Base nitrogenada

Fosfato

The DNA backbone

Putting the DNA backbone together
refer to the 3 and 5 ends of the DNA
the last trailing carbon
Sounds trivial, but this will be IMPORTANT!!

PO4 base O
1
2

5 CH2 4

C
3

O O P O O 5 CH2
4
3

base O
1 2

OH

Estructura primaria de los cidos nucleicos

5fosfato

Enlace fosfodiester

3hidrxilo

Double helix structure of DNA

It has not escaped our notice that the specific pairing we have postulated immediately suggests a possible copying mechanism for the genetic material. Watson & Crick

Caractersticas del modelo de Watson y Crick (1953)

3,4

Surco menor

Una vuelta (10pb) 34

Pares de bases Esqueleto de azcarfosfato

Surco mayor

Dos Representaciones de la doble hlice del DNA

20

DIMENSIONES DEL ADN

CROMOSOMAS
Son estructuras que se forman cuando va a ocurrir la divisin celular, y que consisten en la condensacin progresiva de la cromatina, constan de un centrmero y sendos brazos. Centrmero

Brazos

CROMOSOMA

Cariotipo Humano

CARIOTIPO

COMPOSICIN DE LOS CROMOSOMAS

Los cromosomas eucariticos se componen de ADN (cido desoxirribonucleico) y protenas.

REPLICACIN DEL ADN

La clave de la constancia

PROCESO

La replicacin del ADN

Es el proceso mediante el cual la molcula de ADN hace copias de s misma (y, por tanto del cromosoma). En el ncleo hay muchos nucletidos libres que son los bloques de construccin del nuevo ADN .

El Modelo de Watson y Crick reune las caractersticas que deben de tener las molculas hereditarias

ESTABILIDAD: Gran cantidad de puentes de hidrgeno e interacciones hidrofbicas y electrostticas.

INFORMACIN: Que viene dada por la secuencia lineal de las bases, sin ningn tipo de restriccin.
REPLICACIN: Exacta por simple separacin de las dos cadenas que servirn de molde para sintetizar la complementaria. TRANSMISIN: Si una vez replicadas, las dos molculas de ADN resultantes se reparten 1:1 en la descendencia. EXPRESIN: Mecanismos sencillos de expresin de su mensaje. Se lleva a cabo en dos pasos: Transcripcin, al generarse una molcula de ARN simplexa, idntica en secuencia a una de las dos hebras de la molcula duplexa de ADN. Traduccin, convirtiendo la secuencia de nucleotidos del ARN en la secuencia de aminocidos de una protena. CAMBIO: Por Mutacin, al cambiar las secuencias de bases, o por intercalacin o por delecin. Por Recombinacin, si se produce el intercambio de segmentos de ADN entre dos molculas.

HIPTESIS SOBRE LA REPLICACIN DEL ADN

CONSERVATIVA: La cadena madre se duplica y la

original va a una clula y la rplica a otra clula. DISPERSIVA: Fragmentos de la cadena madre se van a una clula y fragmentos de la nueva a otra. SEMICONSERVATIVA: Una hebra de la molcula madre se duplica y va a una clula junto a la duplicada, mientras que la otra hebra de la molcula madre se duplica y junto a su rplica, va a la otra clula.

TEORA CONSERVATIVA

TEORA DISPERSIVA

ADN copia

TEORA SEMICONSERVATIVA

Meselson y Stahl en 1958 demostraron que la replicacin del DNA es semiconservativa

Molcula inicial CONSERVATIVA SEMICONSERVATIVA DISPERSIVA

Replicacin Primera generacin

Replicacin Segunda generacin

SIGNIFICADO DE LA REPLICACIN DEL ADN

- La replicacin es un proceso previo a la divisin celular. Si una clula se va a dividir NECESITA replicar el ADN
La replicacin consiste en la formacin de nuevas cadenas de ADN a partir de desoxirribonucletidos y utilizando la informacin existente en una molcula de ADN vieja. Estas nuevas cadenas se van a repartir de manera equitativa entre cada una de las dos clulas hijas formadas en el proceso de divisin celular

REPLICACIN DEL ADN

COMPONENTES NECESARIOS:
DESOXIRRIBONUCLEOTIDOS TRIFOSFORILADOS: dATP, dGTP, dCTP y dTTP (millones) PROTENAS: Protenas de iniciacin y fijacin SSBP (Single Strand Binding Protein = Fijacin a la cadena) ENZIMAS:
HELICASA: Rompe puentes de hidrgeno TOPOISOMERASA: Elimina tensiones y superenrrollamientos RNA POLIMERASA: Sntesis de Cebador: ARN (10-30) DNA POLIMERASA III : LA REINA REPLICA: Conductora DNA POLIMERASA I: Reparadora y sustituye al cebador LIGASA: Une los fragmentos de Okazaki de la retrasada (2.000)

2. REPLICACIN ADN
FASES REPLICACIN PROCARIOTAS

1)

INICIACIN

2)

ELONGACIN

3)

TERMINACIN

Overview of bacterial DNA replication

Autoradiography: Radioactivity darkens film

Radioactive bacterial colonies on an agar petri dish

Replication Starts at an Origin and is Bidirectional

Directionality of the DNA strands at a replication fork

Fork movement Lagging strand Leading strand

REPLICACIN DEL ADN EN PROCARIOTAS

En las bacterias existe un solo origen de replicacin, denominado Ori C y, a partir de este nico punto de origen, la replicacin progresa en dos direcciones, de manera que existen dos puntos de crecimiento (PC) u horquillas de replicacin.

REPLICACIN ADN EN PROCARIOTAS

1) INICIACIN
- Reconocimiento del sitio de inicio de la replicacin.

- Separacin de las cadenas parentales de ADN

- Estabilizacin parcial de esas cadenas como cadenas sencillas de ADN (Protenas SSB).
- Se forma el Complejo de iniciacin: Comienza la sntesis del ARN cebador tanto en la cadena retardada como en la cadena conductora

REPLICACIN SEMICONSERVATIVA DEL ADN

La replicacin del ADN en procariotas es bidireccional, ya que a partir del punto de origen progresa en dos direcciones opuestas, existiendo dos puntos de crecimiento (PC) u horquillas de replicacin. Cuando se mira solamente una de las horquillas de replicacin, una de las hlices se sintetiza de forma continua, la hlice conductora (tambin llamada hlice lder), mientras que la otra hlice se sintetiza de manera discontinua, hlice retardada (tambin llamada hlice retrasada), a base de fragmentos cortos o fragmentos de OKAZAKI. Como una hlice se sintetiza de forma continua y la otra lo hace de forma discontinua, se dice que la replicacin es semidiscontinua

Initiation of Replication at oriC

DNA replication is initiated by the binding of DnaA proteins to the DnaA box sequences

causes the region to wrap around the DnaA proteins and separates the AT-rich region

Uses energy from ATP to unwind the duplex DNA

SSB

SSB

SSB

SSB

 DNA helicase separates the two DNA strands by breaking the hydrogen bonds between them This generates positive supercoiling ahead of each replication fork
DNA gyrase travels ahead of the helicase and alleviates these supercoils

Single-strand binding proteins bind to the separated DNA strands to keep them apart Then short (10 to 12 nucleotides) RNA primers are synthesized by DNA primase
These short RNA strands start, or prime, DNA synthesis

DNA Polymerase Cannot Initiate new Strands

5 Unable to covalently link the 2 individual nucleotides together

Fig. 11.9a(TE Art)

3 5 5 3 5

Able to covalently link together

3 5

5 3

Energy of Replication
The nucleotides arrive as nucleosides
DNA bases with PPP
P-P-P = energy for bonding

DNA bases arrive with their own energy source for bonding bonded by enzyme: DNA polymerase III

ATP

GTP

TTP

CTP

Innermost phosphate

DNA Polymerase III- does the bulk of copying DNA in Replication

REPLICACIN ADN

2) ELONGACIN
- La ADN Polimerasa III acta en ambas cadenas. - Se forman la cadena contnua y fragmentos de Okazaki discontnuos.

Schematic representation of DNA Polymerase III

Structure resembles a human right hand Template DNA thread through the palm; Thumb and fingers wrapped around the DNA

Direction of synthesis on leading strand

3 5 3

5 3 5

Two dimensional view of a replication fork

Three Dimensional view of Replication Fork

Direction of synthesis of leading strand

Direction of synthesis Of lagging strand

Direction of fork movement

2. REPLICACIN ADN

REPLICACIN DEL ADN

REPLICACIN ADN

3) TERMINACIN
- La ADN Polimerasa I degrada los cebadores y los reemplaza por ADN complementario. - La ADN ligasa une todos los fragmentos de ADN de Okazaki.

REPLICACIN DEL ADN

Model of replication in E. coli