3.

Metabolismo Bioenergtico
AULA 18 BIOQUMICA

O CICLO DOS CIDOS TRICARBOXLICOS OU DO CITRATO

Metabolismo energtico das clulas

Gliclise

Beta-oxidao

Ciclo dos cidos tricarboxlicos

Cadeia respiratria e fosforilao oxidativa ATP

Metabolismo Energtico
CICLO DOS CIDOS TRICARBOXLICOS

O ciclo TCA (tricarboxilic acid cycle), dos cidos tricarboxlicos, de Krebs, do cido ctrico/citrato

O TCA uma via central do metabolismo das clulas anabolismo e catabolismo Localiza-se na matriz mitocondrial uma via cclica, que alimentada por entrada de acetil-CoA Serve para produo de energia (equivalentes redutores NADH, FADH2 e tambm ATP) Serve para produzir precursores de vias de sntese diversas (oxaloacetato, succinil-CoA e -cetoglutarato)

Viso global do TCA Fase descarboxilativa

2 C (acetil-CoA) Conjugao de 1 molcula de 2C (o acetilo do acetil-CoA) com uma de 4C (oxaloacetato) 6 C (citrato)

9 reaces 2 fases

Nesta fase gera-se 1 NAD(P)H Isomerizao de 1 1 NADH lcool 3rio a lcool 2 CO2
2rio, possvel de ser oxidado

6 C (Isocitrato) Descarboxilao oxidativa n 1 5 C (-cetoglutarato) Descarboxilao oxidativa n 2 Enzimas Citrato sintase (1) Aconitase (2 a e b) Isocitrato desidrogenase (3) -cetoglutarato desidrogenase(4)

Viso global do TCA

Fase de regenerao do oxaloacetato
Nesta fase gera-se 1 FADH2 1 NADH 1 ATP/GTP

Vrias reaces de oxidao para transformar o succinato em oxaloacetato

4C (oxaloacetato)

4C (malato)

4C (Fumarato) Enzimas Succinil-CoA sintetase (5) Succinato desidrogenase (6) Fumarase(7) Malato desidrogenase(8)

4C (Succinato)

O TCA passo a passo fase descarboxilativa

Reaco de condensao aldlica
O C metlico do grupo acetilo perde 1 H+ O carbanio resultante faz ataque nucleoflico ao C do grupo carbonilo do oxaloacetato

Citrato sintase (acetil-CoA: oxaloacetato C-acetil transferase) EC 2.3.3.1

Este um dos pontos de regulao da via

O intermedirio citroil-CoA instvel e hidroliza espontaneamente a ligao tioster, libertando muita Energia

O TCA passo a passo fase descarboxilativa

Reaco 2 e 3
Aconitase Citrato (Isocitrato) hidroliase EC4.2.1.3 Reaco de isomerisao em que ocorre a transformao de um lcool tercirio em secundrio Esta reaco reversvel, mas o consumo rpido do isocitrato formado mantm a direco do fluxo da via

O intermedirio cis-aconitato no se liberta do enzima

O TCA passo a passo fase descarboxilativa

Descarboxilao oxidativa

6 C 5 C + CO2

Isocitrato:NAD+ oxidoreductase (EC 1.1.1.41)

Desidrogenao do isocitrato

Intermedirio instvel (oxalosuccinato)

Descarboxilao espontnea Reaco exergnica

O TCA passo a passo fase descarboxilativa

Segunda descarboxilao oxidativa (fim da fase descarboxilativa)

5C

2-oxoglutarato: [di-hidrolipoilo lisina succinil transferase] lipoilo lisina 2-oxidoredutase (EC 1.2.4.2)

4C

Este sistema enzimtico muito semelhante ao sistema piruvato desidrogenase Tem tambm 3 componentes enzimticos : E1-a-cetoglutarato desidrogenase Os Co-factores so os mesmos: NAD+, E2-di-hidrolipoilo transacetilase FAD, TPP, lipoato e CoA-SH E3-dihidrolipoilo desidrogenase

O TCA passo a passo fase de regenerao do oxaloacetato

Reaco de tilise do succinil-CoA a succinato

ou ADP

ou ATP

Sintetase

Esta reaco apresenta uma variao de energia de Gibbs muito negativa, sendo acoplada fosforilao de GDP ou ADP, originando GTP ou ATP Succinil-CoA Sintetase especfica de GTP (EC 6.2.1.5) Succinil-CoA Sintetase especfica de ATP (EC 6.2.1.5)

O TCA passo a passo fase de regenerao do oxaloacetato

Reaco de oxidao do succinato a fumarato

Succinato:ubiquinona oxidoreductase (EC 1.3.5.1)

COMPLEXO II da cadeia respiratria Este o nico enzima que est associado membrana da mitocndria. um ponto comum cadeia respiratria. 2 Domnios: Domnio de oxidao do succinato a fumarato Domnio de Transferncia de electres do FADH2 para a ubiquinona

O TCA passo a passo fase de regenerao do oxaloacetato

Reaco de hidratao do fumarato a malato

Fumarato hidratase ou malato hidroliase EC4.2.1.2

Enzima muito semelhante, no centro activo, aconitase

Cataliza a trans-hidratao estereoespecfica da ligao dupla

O TCA passo a passo fase de regenerao do oxaloacetato

Reaco de oxidao do malato a oxaloacetato --- ltima reaco

L-malato:NAD+ oxidoreductase EC 1.1.1.37

G0=29,7 kJ/mol

Esta reaco muito pouco favorvel (muito endergnica), mas ocorre porque a seguinte, catalizada pela Citrato sintase (reaco 1 do ciclo) muito exergnica. Como uma reaco em equilbrio, o consumo do oxaloacetato favorece a reaco a ocorrer na mitocndria Os nveis de oxaloacetato so muito baixos na mitocondria

Anlise e Balano Energtico do TCA

Primeira entrada de acetil CoA Segunda entrada de acetil CoA Terceira entrada de acetil CoA
CO2 CO2

Sada dos C da primeira entrada

3 NADH 1 GTP (ou ATP) 1 FADH2

3x 2,5 ATP 1 ATP + 1,5 ATP 10 ATP

O TCA mais do que produo de Energia tambm desempenha funes biossintticas

Reaces cataplerticas Reaces que removem intermedirios do ciclo para fins de biossntese
Aminocidos Glucose Grupo hemo c gordos

Reaces anaplerticas Reaces que repem intermedirios no ciclo

Piruvato carboxilase converte piruvato em oxaloacetato

Citrato Oxaloacetato -cetoglutarato Succinil-CoA

transaminases

Vias anaplerticas a partir de aminocidos

Leu, Ile, Lys, Fen, Tyr, Trp, Thr Aspartato Asparagina Acetil-CoA
Citrato

Oxaloacetato

isocitrato

malato

-ceto glutarato

Glutamato Glutamina Prolina Histidina Arginina

Fenilalanina Tirosina

fumarato succinato

SuccinilCoA

Metionina Isoleucina Valina

Regulao do Cilco dos cidos Tricarboxlicos

Citrato Sintase Inibio por produto

Nveis energticos da clula Isocitrato desidrogenase

ATP NADH ADP

Moduladores alostreos Km para os substratos

-cetoglutarato desidrogenase
Nveis de citrato e succinil-CoA controlam a via

Inibio por produto

bibliografia
Captulo 26

Questes
1. Quantas molculas de ATP so geradas quando duas molculas de acetil-CoA so convertidas em quatro molculas de CO2 atravs do ciclo do cido ctrico? 2. Um dos pontos de regulao do ciclo do cido ctrico a -cetoglutarato desidrogenase. Quais os moduladores da actividade deste enzima? Que tipo de regulao se trata? 3. Caso ocorra um dfice de oxaloacetato, como que possvel repor este intermedirio para que o ciclo do cido ctrico funcione? 4. O ciclo do cido ctrico transforma uma molcula de citrato numa molcula de oxaloacetato, a qual necessria para o ciclo continuar. Se um dos intermedirios do ciclo do cido ctrico for utilizado como precursor para a biossntese de glucose ou de aminocidos, pode ocorrer a sntese de novo de oxaloacetato a partir de acetil-CoA com os enzimas do ciclo do cido ctrico? 5. Quantos ciclos so necessrios para converter os C do acetil-CoA em CO2? 6. Descreva a reaco catalizada pelo citrato sintase? 7. Se a citrato sintase estiver inibida, qual dos metabolitos tender a acumular-se, oxaloacetato ou malato. Porqu?