UNIVERSITATEA DE TIINE AGRICOLE I MEDICIN VETERINAR A BANATULUI TIMIOARA FACULTATEA DE HORTICULTUR

MICROPROPAGARE

Referat

AVANTAJELE I DEZAVANTAJELE MICROPROPAGRII IN VITRO"

AVANTAJELE MULTIPLICRII VEGETATIVE IN VITRO"

n principal, avantajele micropropagrii ,,in vitro" constau n urmtoarele : 1. Tehnicile de multiplicare in vitro" permit nmulirea rapid, cu o rata de neimaginat fa de metodele tradiionale, n ritm extrem de accelerat, a speciilor vegetale. Astfel, pe aceast cale este asigurat propagarea varietilor noi, sau a celor dificil de nmulit pe alt cale, precum i a explantelor elit, atunci cnd nici o alt posibilitate de nmulire conservativ a genotipului, nu exist (de exemplu, la orhidee multiplu heterozigote sau la speciile ori varietile androsterile, cum ar fi la Asparagus, ori n situaiile create din necesitatea meninerii unor linii parentale posibil de realizat numai prin nmulire vegetativ etc). n cele ce urmeaz, vom exemplifica unele din aspectele enumerate mai sus. Orhideele constituie un exemplu clasic de aplicare, cu succes, n producie, a tehnicilor de micropropagare, n scopul nmulirii clonale, rapide, a exemplarelor elit, selecionate de ctre amelioratori. Astfel, la Cattleya, heterozigozitatea a condus la

obinerea prin procedeele tradiionale de nmulire a unor flori fr valoare comercial sau a unor plante a cror nflorire a fost sporadic i necontrolabil. Prin tehnicile ,,in vitro" s-a realizat o donare eficient a hibrizilor de Cattleya, obinn-du-se flori cu o nalt valoare comercial, precum i o cultur cu nflorire uniform, corespunznd unei perfecte programri sezoniere (CHU, 1986). Un alt exemplu l constituie nmulirea plantelor pentru producere de smn hibrid, atunci cnd genotipul parental este inapt de autopolenizare, sau n cazul n care seminele rezultate sunt incapabile de germinare, ori germineaz slab i produc plantule firave, de calitate proast. Un exemplu l constituie Citrullus lanatus genotipul triploid, la care producerea de smn de bun calitate este dificil (seminele rezultate prin polenizarea plantelor tetraploide, cu polen diploid, fiind anormale i atrofice), in vitro" pot fi produse rsaduri folosind ca subiect donator plante triploide, precum i linii parentale, tetraploide. n alte situaii, se solicit, de ctre unitile de producie, juvenili-zarea culturilor, prin multiplicare in vitro", ntruct se cunoate c la numeroase specii micropropagarea determin o substanial mbuntire a ramificaiei tulpinii, o cretere a dimensiunii i a vigurozitii frunzelor i tulpinilor, imprimndu-se un colorit mai intens al frunzelor i florilor. Un astfel de caz l constituie ferigile i o serie de plante cu valoare comercial pentru calitatea ornamental a tulpinilor i frunzelor (de exemplu la Syngonium, Spathiphyllum i Dieffenbachia). I^a cpun, micropropagarea conduce la o mai bogat ramificare a tulpinilor i la o sporire (cu cea 60130%) a numrului total de stoloni, recoltai de la o plant neoformat in vitro", n raport cu totalul stolonilor posibil de realizat la o cultur parental, nmulit vegetativ, prin mijloace tradiionale. Totodat, la cpunul micropropagat, trecut n teren, se observ o sporire a taliei plantelor, cu 40150% (funcie de cultivar), diferena de vigurozitate fiind remanent i n cel de al doilea an de cultur. Dup cum. meniona ZIMMERMAN (1985), cpunul micropropagat ,,in vitro" produce flori i fructe n mai puin de trei luni dup ce tulpiniele nenrdcinate au fost supuse nrdcinrii n mediul septic, n incinte cu ceaa artificial. crete numrul de fructe pe m2, La aceste plante astfel nct producia realizat la cultivarul tradiionale, de numai

Barlinglow a fost de 7,8 kg/m2, n raport cu cantitatea de fructe recoltat de pa o aceeai suprafa la cultura nmulit vegetativ prin metode 5,6kg fructe pe m2; numrul de fructe obinute la cultura derivat din vitro" a fost de

1 080 buc./m2, iar la cultura tradiional a fost de 572 buci/m2.

Dar, la plantele

derivate din vitro", n primul an de producie, s-a observat o scdere a mrimii fructelor; n cel de al doilea an de cultur n teren, acest caracter dispare, plantele prezentnd fructe de mrime normal. O situaie asemntoare a fost descris de ctre ZIMMERMAN i la cultivrii Redchieff i Guardian. O mrire a vitezei de cretere i o sporire a vigurozitii plantelor rezultate din micropropagare sunt citate i la mur, mr, piersic etc. De exemplu, la mr majoritatea plantelor provenite din cultur ,,in vitro" au fructificat dup al 34-lea sezon de cretere a lor n teren. Precocitatea n fructificare i producia de fructe variaz foarte mult n funcie de cultivar. Mrimea fiecrui fruct s-a dovedit a fi invers proporional cu producia de fructe, nregistrat la un pom; pe msura avansrii pomilor n vrst, crete producia de fructe/individ. I/a soiul material Golden Delicios, de plantat generat ,,in vitro" i introdus n cultur in anul'1979, crescut pe

rdcini proprii -nemaifiind altoit- , dup 6 ani de cultur, a dat o producie de 52,2 kg mere/pom; la soiul Jonathan plantele generate ,,in vitro" i introduse n cultur n anul 1981 au fructificat n 1985 i au produs 29 kg 'mere/pom. I/a piersic plantele generate ,,in vitro" i plantate n teren, fructific n al doilea an de cultur, producnd cea 1011 kg fructe/pom (dup ZIMMERMAN, 1935). MARTIN (1984) relata c piersicul plantat pe propriile rdcini, n al doilea an de la trecerea plantelor micropropagate in vitro" la condiiile mediului septic, a produs 13 kg fructe/planta, n al treilea an 30 kg fructe iar n al patrulea an 40 kg. Se acord o atenie din ce n ce mai mare problemei plantrii de livezi, cu puiei generai ,,in vitro" i crescui pe propriile lor rdcini, renunndu-se din ce n ce mai mult, la nmulirea vegetativ tradiional, prin altoire i butire. Plantele obinute ,,in vitro" prezint nu numai avantajul unei juveniliti i al unei viguroziti n cretere, sau al sporirii productivitii, ci i al obinerii de plante cu un foarte ridicat grad de sntate; nu trebuie s scpm din vedere faptul c, prin operaiunile tradiionale de nmulire vegetativ se vehiculeaz din plantele donatoare de material nmulitor, ctre planta nou format o serie de boli, n special viroze i micoplasme astfel nct planta nou format chiar de la nceputul vieii este tarat de prezena n ea a germenilor fito-patogeni. n asemenea situaii, de exemplu la butai, nrdcinarea este de proast calitate iar materialul de plantat rezultat, n final, este epuizat fiziologic. Nu trebuie omis nici faptul c n nmulirea vegetativ clasic, odat cu materialul iniial,

folosit ca punct de plecare pentru viitoarea plant, se grefeaz n corpul ei esuturi adulte sau chiar aflate ntr-un oarecare grad de regresie biologic i funcional, ceea ce acioneaz negativ asupra plantei nou formate. n tehnicile de micropropagare se folosesc ns explante infime ca mrime, de regul meristeme, iar celulele care nu sunt de tip meristematic se de difereniaz i ajung meristeme, fapt care confer plantelor neoformate in vitro" un grad de juvenilitate i de vigurozitate, comparabil cu acela obinut prin utilizarea plantelor derivate din semine, embrionare. Data fiind posibilitatea obinerii n timp scurt, prin tehnicile de micropropagare, a unor cantiti mari de material de plantat, uniform ca grad de dezvoltare, n pomicultura modern se pune din ce n ce mai serios problema .plantrii de livezi cu o densitate crescut de cea 4 000 exemplare/ha. Acest fapt asigur mecanizarea lucrrilor de ntreinere, aferente unei culturi de excepie, facilitnd recoltarea mecanic a fructelor. Culturile ,,in vitro" servesc i la obinerea de portaltoi, dat fiind calitatea de excepie a materialului de plantat, generat prin tehnici de micropropagare. Portaltoii se produc anual n cantiti de milioane, n Italia, la piersic, mr, cire, prun etc. (dup ZIMMERMAN, 1986). La piersicul-migdal prin procedeele tradiionale, se pot realiza anual un numr mic de descendeni; dintr-un unic subiect. n timp ce prin micropropagare se obin mii de exemplare, dintr-un unic meristem (dup MARTIN, 1980). Portaltoii de piersicmigdal sunt deosebit de valoroi, datorit rezistenei lor n terenuri cu exces de umiditate sau n cele calcaroase ; dezavantajul folosirii piersicului-migdal n practic ca portaltoi a derivat numai din dificultatea de nmulire vegetativ a acestuia; actualmente, prin tehnicile de micropropagare, se pot obine milioane de plante, ntrun singur an. Metodele de micropropagare se aplic cu succes i la nmulirea zmeurului. Dintr-un subiect, ntr-un an, prin procedeele tradiionale, se pot obine maximum 50 de descendeni, n timp ce prin tehnicile de micropropagare se pot realiza cea 50 000 de plante, dintr-un unic meristem. (MARTIN, 1980). Dintre arbutii ornamentali, trandafirul a marcat o revizuire a procedeelor tradiionale, de nmulire" graie tehnologiei de micropropagare, stabilite de ctre M O R EL i colab., n 1981. Pornind de la explante meris-tematice, n .decurs de un an, respectiv din meristeme

prin subculturi repetate, se pot obine cea 200 000400 000 de indivizi (n funcie de cultivar), descendeni ai unui unic subiect. La 6 luni de la transferarea plantelor n mediul septic, acestea nfloresc. n cel de al doilea an de via, plantele respective prezint cu 20% mai multe flori, iar florile sunt mai bogate, mai viu colorate i mai parfumate. Prin aceast metod se realizeaz nu numai o sporire a calitii plantelor i florilor, dar i o descretere a preului de producie, ntruct prin cultura tradiional durata de obinere a unor plante cu dezvoltare similar, dar derivate din plante altoite, este de 2,5 ani. DURON (1977) a operat cu succes multiplicarea ,,in vitro" a o serie de ali arbuti ornamentali, prin cultura de meristeme, n vederea devirozrii, la Forsythia i Buddleia. Nenumrate plante ornamentale lemnoase snt propagate, actualmente, pe aceast cale. Dintre ele> citm: Deutzia, Weigelia, Hydrangea, Ribes etc. (D E B E R G H i MAE NE, 1982). 2. Micropropagarea faciliteaz productorilor realizarea de material de, plantat n regim programat, productorii fiind eliberai" de dependena nmulirii, de sezonul optim i de fenomenele de laten, ntruct materialul biologic iniial este oricnd la dispoziia lor, stocat fiind n depozite frigorifice. n acest mod, se poate livra la termen fix orice comand, chiar imprevizibil fiind, productorul nedepinznd de recoltarea din teren, a explantelor. Un exemplu edificator l avem n cazul cartofului, plant" care prin procedeele tradiionale poate atinge o rat anual de multiplicare de cea 60 de ori, prin nmulirea tradiional a cartofului de smn n teren; prin tehnicile de micropropagare se poate atinge o rat programat, de multiplicare de 80 de ori, n numai 40 de zile (dup NG, 1986). O garoafe, dintr-o plant-mam se pot recolta n sezonul optim cea 20 de butai pe an; o microplanta, multiplicat in vitro", furnizeaz anual cea 50 000 de descendeni (dup MART IN, 1980). La Asparagus, plant micropropagat cu succes prin tehnici in vitro", se apreciaz c n decursul unui an, dintr-un unic mugure apical, se pot obine cea 300 000 de plante ; la actualul nivel tehnic, cea 70 000 de plante pot fi produse in vitro'' de ctre o persoan, muncind 200 zile pe an (dup CONGER, 1981), independent de sezon. 3. Micropropagarea plantelor constituie o metod nu numai eficient de nmulire, dar i o metod mbuntit de munc (n raport cu practicile de. programare vegetativ prin procedee tradiionale), activitatea desfurndu-se n condiii de igien perfect, n spaii modern dotate, munca fiind deosebit de agreabil.

4. Culturile ,,in vitro" ofer posibilitatea stocrii, respectiv a con-serv arii materialului, constituind o surs pentru obinerea de material iniial sntos, utilizabil apoi n operaiunile de micropropagare i de meninere a unui stoc de plante la adpost de recontaminare, uspendndu-se cheltuielile inerente aplicaii tratamentelor fitosanitare, precum i a polurii terenurilor cu insectofungicide. 5. nmulirea plantelor prin metode de micropropagare permite realizarea unor economii. Aceste economii i au originea n diferite compartimente implicate n procesul de producie. Tehnicile de micropropagare permit amelioratorilor s-i valorifice mai eficient eforturile n direcia creaiei de noi soiuri, fcnduse,,economie de timp" ntruct prin procedeele de multiplicare in vitro" se poate realiza o condensare" a timpului afectat producerii unui stoc din plantele rezultate n ameliorare, n scopul lansrii lor n cultur. De exemplu, pentru obinerea unui lot 4e bulbi n vederea omologrii i a comercializrii unor noi varieti de lalele, prin tehnicile tradiionale, sunt necesari cea 20 de ani de munc; prin tehnicile in vitro" perioada respectiv poate fi scurtat la 246 ani att la lalele, ct mai ales la gladiole, freesii, narcise etc. La pomii fructiferi, la cartof, la trandafir .a.m.d., introducerea unui nou soi n cultur, prin practicile tradiionale, presupunea o durat de cea 10 ani; prin tehnicile de micropropagare se realizeaz o scurtare considerabil a perioadei de formare a unui stoc de plante (dup' M A RT I N, 1984). Prin micropropagarea plantelor se realizeaz i o economie de energie, atunci cnd comparm o cultur meninut ca stoc de plante - mame, cit condiii de ser, cu o cultur similar, meninut in vitro". Astfel. n literatur se citeaz c pentru climatizarea a 9 m2 spaiu n care poate crete o cultur stoc de plante echivalentul a 2 500 m2 de ser se apreciaz un consum de 5 kWh energie electrica; pe o etajer de 60 X 125 cm pot fi cultivate in vitro" cea 1 000 de plantule (dup AUGE i colab., 19.S2). DEBERGH i MAE NE (1981) dau un exemplu asemntor privind economia de energie posibil de realizat prin micro-propagarea ,,in vitro", i anume : ei apreciaz c 2 500 m2 de ser pot fi nlocuii cu numai 10 m2 n care sunt cultivate plante pe medii aseptice, realizndu-se o eficien maxim i prin suprimarea oricror manopere de ntreinere a culturilor (udri, tratamente fitosanitare etc.) nlturn-du-se i eventualii factori de risc (atacuri fitopatogene sau ali ageni capabili s produc calamiti), ceea ce mrete rentabilitatea per global. Un alt exemplu, prezentat de ctre MARTIN (1980), este acela care se refer la analizarea eficienei economice n

cazul unui mare productor de garoafe; n acest caz, pentru obinerea unui stoc de plante mame, n condiii obinuite, este nevoie de cea 4. ani, timp n care serele sunt ocupate cu cultura respectiv; prin tehnici in vitro" se realizeaz o condensare" a etapelor de nmulire, prin operaiuni de mi ero-propagare, ceea ce permite obinerea stocului similar de plante, n nu mai doi ani iar calitatea plantelor i a florilor rezultate aduce venituri substaniale, n urma comercializrii acestora. n alte cazuri, de exemplu la trandafir i la Saintpaulia, se obine, pe ling o sporire a calitii ornamentale a plantelor, si o scurtare a duratei intrrii acestora n antez (de exemplu la Saintpaulia cu 12 luni). Acest lucru permite dezafectarea spaiilor i reintrarea, lor n cultur mai repede, dect dac pe terenul respectiv ar fi fost cultivate plante, prin procedee tradiionale. Un alt exemplu referitor la eficiena meninerii lotului de plante mame ,,in vitro" este urmtorul: din 24 plantule de garoafe (care au fost stocate timp de 24 de sptmni n camera frigorific, la 4C i o intensitate luminoas de 1 2Kluci, n fotoperioad de 12 ore lumin/24 ore), se pot obine - n decurs de 24 sptmni dup scoaterea lor din camera rece .137 750 plante (innd seama de un procent de pierderi de 20%, rezultat n urma seleciilor operate la primul repicaj i de o pierdere de 10%, marcat la fiecare repicare) ; rata de multiplicare este de 6 iar intervalul ntre dou repicri este de 4 sptmni (dup A U G E i colab. 1982). n concluzie, ciclul de multiplicare al plantelor micropropagate este mult scurtat, n comparaie cu nmulirea speciei respective pe cale vegetativ, tradiional. Dac adugm la acestea dificultile muncii n teren, n raport cu munca n laborator, preul ridicat i eficiena sczut a tratamentelor fitosanitare, precum i costul lucrrilor de ntreinere ale unei culturi n teren, comparativ cu avantajul calitii i omogenitii culturilor derivate din micropropagare ,,in vitro" i valoarea comercial ridicat a produsului agricol rezultat, vom avea un tablou edificator cu privire la avantajele pe care le prezint aceast metod modern de propagare a plantelor (MINIER, 1980). n general, preul unei plante depinde de o serie ntreag de factori implicai n procesul de producie al acesteia, nu numai de eforturile materiale i de consumul energetic, ci i de numrul persoanelor angajate i salarizate, pentru generarea produsului vegetal utilizat n circuitul economic, precum i de valoarea la care materialul final poate fi comercializat. Atunci cnd se are n vedere trecerea n producie, la nivel industrial, a unei tehnici puse la punct n laborator, mai ales cnd se

apreciaz o producie anual de peste 100 CC0 de plante, se impune o analizare" competent a situaiei, din toate punctele de vedere. Preul de producie poate fi substanial diminuat prin introducerea unor dispozitive automate, n ct mai multe compartimente ale lanului tehnologic de micropropagare in vitro". Cele mai simple automatizri presupun operaiunile de splare i presterilizare s. sticlriei, precum i de repartizare porionare a mediilor de cultur. Pentru evitarea fracionrii timpului de lucru n laborator, prepararea mediilor de cultur se va face utiliznd formulri standardizate, n care toi compuii indispensabili creterii optime a unei anumite culturise afl nglobai ntr-un unic amestec, astfel nct prepararea mediului const n simpla dizolvare a unei pulberi ntr-o cantitate fix de ap cerut n reet. Asemenea amestecuri sunt comercializate de ctre diferite firme, pe piaa mondial. Pentru asigurarea unei automatizri eficiente este ns necesar standardizarea recipientelor de cultur, a containerelor de transport i de ncrcare a autoclavelor. Pentru mrirea eficienei unitilor profilate pe producerea industrial a materialului de plantat generat in vitro" trebuie s se aib n vedere o ealonare calendaristic a tuturor operaiunilor dintr-o astfel de unitate, corespunztoare att unui an, ct i pentru perspectiv (mai ales cnd se stocheaz n camera frigorific inoculi cultivai ,,in vitro", aflai n diferite stadii de dezvoltare), precum i elaborarea graficului de livrare n concordan cu livrri conforme contractelor ferme sau celor poteniale , care s serveasc la evitarea timpilor mori i la folosirea ntregului potenial de producie, al unitii, cu un randament maxim. ntruct una din condiiile de baz la culturile de esuturi ,,in vitro" o constituie asepsia, automatizarea operaiunilor care de regul se execut manual constituie o msur deosebit de important, care poate mri nu numai viteza desfurrii lanului operaional, ci i calitatea acestuia, respectiv randamentul muncii. Cele mai dificile etape de lucru n ceea ce privete automatizarea constau n prelevarea explantelor i inocularea lor ,,in vitro" ; operaiunile de transplante dintr-un recipient, In alt recipient, pentru asigurarea subculturilor pot fi, ntr-o msur mai mare, automatizate. Din acest punct de vedere, micropropagarea i respectiv, nmulirea plantelor prin intermediul seminelor artificiale, venerate din embrioni somatici, ofer o soluie excelent, atunci cnd urmrim automatizarea. operaiunilor de recoltare a materialului biologic, M scopul folosirii lui pentru propagarea plantelor. Astfel, WAI^KBR SI, UI (1983) (dup S I, U I S i WAIyKER, 1985) menionau

c milioane de embrioni somatici pot fi recoltai din numai cteva grame de calus, ceea ce poate conduce la obinerea de exemplare vegetale la un pre. czut, SLUIS i WALKER (1985) concludeau c prin automatizata operaiunilor de recoltare i semnare a embrionilor somatici se poate 4junge la un pre de producie al materialului generat in vitro", competitiv cu acela rezultat prin tehnicile tradiionale de nmulire a plantelor. Din acest punct de vedere, semnarea embrionilor somatici cu dispozitive de antrenare a lor n medii semifluide, fr ncapsulare ofer soluii mai economice de valorificare a acestora la un pre mai sczut dect acela al seminelor ncapsulate. Costul materialului biologic generat in vitro" va L U I S i WALKER (1985), marea depinde foarte mult de a plantelor tehnologia adoptat, respectiv de automatizarea operaiunilor. Dup majoritate micropropagate ,,in vitro" pot fi produse la un pre de zece ori mai ridicat dect prin intermediul cilor tradiionale. Cu toate acestea, la culturile la care se are n vedere obinerea de material de plantat elit, cu certificat de sntate garantat, plante care s prezinte uniformitate n cultur, juvenilitate i vigurozitate precum, i nflorire mai timpurie , concomitent cu o calitate superioar a produsului agricol (mai ales a fiorilor, n flori cultur), eforturile financiare sunt compensate. De exemplu, n cazul cartofului, pentru producerea tuberculilor de smn, sau dezvoltat industrii de micropropagare a clonelor devirozate prin culturi de meristeme. Cu toate c costul de producie al cartofului in vitro" este ridicat, calitatea i productivitatea plantelor respective n cultur compenseaz cheltuielile de multiplicare. Din costul final al materialului generat in vitro" se apreciaz c 40% din cheltuieli revin compartimentului laborator, 10% materialelor folosite 20% diverselor cheltuieli nenominalizate si 30% cheltuielilor de vnzare (dup WALKER i . S L U I S, .1983). Laboratoarele amenajate pe amplasamente deja existente sau pe ling sere deja funcionale faciliteaz scderea costului final al, produselor, ntruct cea mai costisitoare parte din investiie este amortizat. Construirea de la baz a ntregului ansamblu mrete preul de producie. Pentru creterea operativitii fazelor de inoculare in vitro" este recomandabila folosirea unor recipiente cu deschidere larg, efectundu-se mai multe inoculri, pe un acelai recipient; n acest mod, crete

productivitatea muncii, n unitatea de timp. Acest tip de manoper mrete ns foarte mult pericolul contaminrii culturii. Avnd n vedere necesitatea reducerii costului, fr a face rabat la calitatea produsului, concomitent cu eliminarea muncii manuale (care presupune scderea n timp a randamentului muncii, ct i un anumit grad de nesiguran n calitatea operaiunilor) i a riscului generat de pericolul interveniei unor infecii, s-a pus cu seriozitate i responsabilitate problema robotizrii lucrrilor. Dup DE BRY (1986), n anul 1985, la o expoziie internaional de roboi, o companie european a prezentat un dispozitiv automat de cultivare in vitro" a celulelor. Se menioneaz c un grup de cercettori francezi au imaginat un robot pentru producerea in vitro" de plante de Eucalyptus. Eforturile au fost ncununate de succes, ntruct robotul recunotea plantele cu caliti acceptabile pentru a fi transferate, iar dup identificarea acestora se realiza subcultivarea lor. n general, - se apreciaz c un muncitor care inoculeaz meristeme poate executa cea 120 de inoculri pe zi (D A M I A N O 1980) iar un operator care execut transferri (subcultur) poate ajunge la un numr de 2500 operaiuni de inoculare pe zi munc (SLUIS i W A I K E R, 1985). Un calcul care s-a fcut privind amortizarea cheltuielilor n decurs de 5 ani a condus la urmtoarele concluzii: n timp ce un operator execut cea 2500 inoculri pe z i m u n c , un robot atinge performana a 1000 de operaiuni de transfer pe or; n consecin, munca robotului devine de 4,3 ori mai ieftin, dect transferul manual. Dac adugm la aceasta, pe ling calitatea excepional a materialului rezultat i scderea factorilor de risc, i faptul c roboii lucreaz n flux continuu i fr rebuturi ne dm seama de impactul pe care-1 va avea robotizarea, n tehnologia de micropropagare, n viitor. H-ARTNEY i KABAY (1984, dup R O W E, 1986) au publicat un raport cu privire la implicaiile roboticii n culturile in vitro" i au ajuns la aprecierea posibilitii construirii de roboi cu performana de a produce o plant/secund (deci 3 600/or); chiar. dac se transfer cte o plant la interval de 5 secunde, se realizeaz, cu uurin, o producie de 5 milioane plante pe an. Robotul poate fi programat s recunoasc morfologia plantei nod, internod, mugure etc. fapt care va revoluiona tehnologia micropropagrii. Industria profilat pe micropropagare, respectiv pe producere de rsaduri ,,in vitro" sau de embrioni somatici (ca atare, ori sub form de semine artificiale), nu se

limiteaz numai la nmulirea speciilor ornamentale, ci metoda poate fi extins la o gam larg de plante de cultur, chiar i la acelea care, n mod normal se propag prin semine. Factorii care decid comercializarea materialului produs in Vitro" sunt, n principal, urmtorii: rata de multiplicare posibil de realizat, mai ales cnd deinem un genotip care nu poate fi reprodus prin nici o alt cale; abilitatea de a menine plantele neoformate in vitro" n stoc, material biologic care s serveasc ca donator de inoculi, pentru iniiere de culturi, n scopul obinerii de plante libere de boli; performanele economice i competitivitatea pe piaa de desfacere. Nu .trebuie scpat din vedere c, culturile de explante in vitro" sunt energointensive, consumul de energie fiind necesar operaiunilor de auto-clavare, iluminare i climatizare a camerelor de cretere sau a celor frigorifice. BHOJWANIi RAZDAN (1983) menioneaz c n pepinierele cu scop comercial, de micropropagare ntr-un spaiu minimal (de cretere sau de stocare), de cea 3mx3m X 5m, pe rafturi, n recipiente, pot fi meninute n cultur miliarde de plante. La crizantem cultivarea prin metode tradiionale permite recoltarea de la o plant pe an, a cea 2024 de butai, recoltare care se face sezonier, pe msura lstririi plantei mam. Densitatea maxim de plantare a plantelor mam este evaluat la 100 exemplare/m2. Deci, de pe un m2 de ser pot fi recoltai n teren, pe parcursul unui an, 2 400 de butai, asigurndu-se ntreinerea culturii pe toat durata vegetaiei. n condiiile cultivrii pe medii aseptice a unui lot de plante mame se poate asigura o densitate de 25 CC0 exemplare/m2 (la nevoie chiar i mai mult). De pe fiecare plantul de crizantem generat in vitro", la interval de 6 sptmni, se pot recolta 12 13 minibutai. Procesul se poate repeta cu ritmicitate din 6 n 6 sptmni, pe timp nelimitat. n consecin, in vitro" se realizeaz o densitate pe unitatea de suprafa de 25 ori mai mare a plantelor stoc, n raport cu cultura tradiional de plante mam. n plus, nmulirea n condiii aseptice a crizantemelor ofer i avantajul evitrii dependenei de sezon, asigurndu-se producerea de material sdi-tor, n flux continuu. Privind problema prin prisma eficienei unui loc n spaiu, respectiv a suprafeei climatizate, destinate cultivrii unei singure plante, se poate constata c o plant mam cultivat dup metode tradiionale poate da natere, n decursul unui

an, la cea 24 plante fiice (respectiv 24 de butai), n timp ce planta mam din eprubet, prin tehnica micropropagrii, folosind explante nodale, va genera peste 100 de plante anual (respectiv: n decurs de 52 de sptmni, la intervale de 6 sptmni, se pot obine aproximativ 8 cicluri de minibutiri, cu generarea a 1213 minibutai, la o recolt). Deci in vitro" randamentul este de 4 ori mai mare iar calitatea plantelor introduse n cultur este net superioar n raport cu a materialului de plantat, derivat prin butirea tradiional. Din acest exemplu rezult c prin micropropagare in vitro'' se realizeaz o mai bun valorificare a suprafeelor n spaiile nclzite, i o reducere a numrului de persoane antrenate n munca de ntreinere a culturii, n teren. Deci, se obine o mai eficient exploatare a terenului i a spaiilor nclzite, producndu-se un acelai numr de exemplare de material sditor, pe o suprafa de 100 de ori mai mic, ntruct ntr-o ncpere cu suprafaa de 22,5 m2 pot fi crescute in vitro" n jur de 480 000 plantule de crizanteme (cultivate. n eprubete, cu deschiderea de 2,5 cin), realizndu-se o densitate de 25 eprubete/100 cm2, respectiv 2 500 eprubete pe m2; ntro asemenea ncpere, pe etajere cu rafturi, poliele pot totaliza o suprafa de 192 m 2 (ceea ce ar corespunde la 5 etajere, a 2,4 m nlime, 4 m lungime i cu polie de 1 m lime, etajerele avnd 12 polie). Prin subculturi repetate, folosind ca material iniial minibutai .constnd din noduri, pornind de la un meristem, n decursul unui an, se pot produce 137 plante (clone derivate din meristemul folosit ca material iniial). Prin tehnicile tradiionale, o astfel de cultur de plante mame; de crizanteme, ar necesita cea 63 ha de sere, iar pentru cultivarea butailor n vederea nrdcinrii, pe parapete, ar fi necesar 192 m2, corespunztor obinerii a 480 mii de plante de crizanteme (dup KHAZAL i CACHIT, 1985). Dar, i la plantele de ser multiplicarea i creterea se fac n spaii protejate, nclzite. Pentru scderea costului de producie, n vederea sporirii ctigului final n momentul livrrii produsului vegetal (ghivece, flori tiate, rsaduri, bulbi, butai etc), s-a adoptat sistemul obinerii materialului de plantat n ri cu clim cald; ntruct s-a apreciat c prin eliminarea din fluxul tehnologic a spaiilor nclzite se realizeaz o economie de energie. n cazul micropropagrii se estimeaz c generarea materialului sditor ,,in vitro" compenseaz lejer cheltuielile, iar materialul de plantat devine competitiv cu cel produs n rile calde (n acest calcul s-au avut n vedere i pierderile financiare pe care le implic transportul i mna de lucru) (HOLDGATE, 1982).

Se apreciaz c micile firme horticole i cifreaz producia anual de plante in vitro" la cea 100000 de exemplare ; firmele de mrime mijlocie, la cea 500 000 de plante anuale (dintre acestea aproximativ 98% snt specii ornamentale) ; iar marile firme productoare de material sditor in vitro" i cifreaz producia de plante la milioane de exemplare anual. Una din condiiile de baz este aceea a stabilitii profiturilor i a valorificrii la maximum a ntregului potenial de producie, pe tot parcursul anului, precum i asigurarea pieelor de desfacere sau a valorificrii plantelor generate ,,in vitro", n circuit intern, pn la livrarea produsului final. Numai n acest mod se poate amortiza investiia, ntr-un timp scurt. Un exemplu n ceea ce privete calcularea eficienei economice a plantelor generate in vitro" a fost prezentat de ctre J A C O B i colab.(1980), la Saintpaulia. Dup metoda de multiplicare a acestei plante descris de VASQUEZ i colab. (1977), dintr-un cm2 de explant foliar, o singur persoan poate realiza anual un numr de 80 000 exemplare de Saintpaulia, care nfloresc la cea 67 luni de la inocularea iniial. Pentru obinerea acestor plante sunt necesare urmtoarele spaii de producie : 80 m2 de laborator, 20 m2 camer de vegetaie i 600 m2 ser. La 4 sptmni de la inoculare se remarc apariia mugurailor pe suprafaa fragmentului inoculat ; dup 3 luni de cultur, ei au fost separai n cea 105 propagule, care au fost transferate pentru nrdcinare pe mediu aseptic, lipsit de fitohormoni; nrdcinarea dureaz cea 3 sptmni, dup care plantele pot fi trecute n sol. Procentul de reuit n aclimatizarea plantelor este de 100%. Prin nmulire vegetativ tradiional, un mare productor floricol livreaz cea 23 500 plante Saintpaulia pe an; un horticultor care are o producie de 10 000 plante pe an poate produce ghiveciul de Saintpaulia la un cost de 1,4 ori mai ridicat, iar prin micropropagare ,,in vitro" costul de producie este de 1,6 ori mai sczut (acesta constnd din : 38,5% cheltuieli revenind minii de lucru, 16% materiilor prime i altor produse anex, 4% consumului de electricitate, 34% consumul energetic constnd n nclzirea mediului i 7,5% cheltuielilor administrative, comerciale i de ntreinere (n calcul s-a avut n vedere un procent de 10% pierderi). Potrivit autorilor, investiia fcut, chiar de ctre o singur persoan (fr calificare deosebit), se amortizeaz n scurt timp i devine competitiv i concurent cu marile firme productoare de Saintpaulia prin tehnici tradiionale.

Rentabilitatea i costul de producie, ori cel de livrare al materialului ,,in vitro", depind foarte mult de specie, de valoarea cultivarului i metoda de cultur ,,in vitro" (adoptat pentru micropropagare), precum i de scopul urmrit n final, prin ntemeierea unei astfel de culturi. De exemplu, SWARTZ i LINDSTROM (1986) menionau, la cpun, c materialul generat in vitro" a fost de cea 47 ori mai scump dect cel obinuit i de 2,5 ori mai costisitor dect n cazul generrii lui n condiii naturale, din plantemame stoc. Cu toate acestea, 350 000 de plante de cpun se produc anual n America de Nord, prin culturi de esuturi. .Aceiai autori apreciau c la zmeur, mur i afin costul materialului de plantat generat prin tehnicile de micropropagare in vitro" a fost sensibil egal cu acela al materialului generat prin metode tradiionale de nmulire vegetativ. La via de vie, cea 300 000 de plante se produc anual in vitro" ntruct, n acest mod, se poate obine o juvenilizare a culturilor .a.m.d.

RISCURILE MICROPROPAGRII IN VITRO" A PLANTELOR

Cunoscnd avantajele multiplicrii in vitro" a plantelor trebuie s lum n considerare i anumite riscuri pe care le implic aceast tehnic n condiiile unei producii lrgite, de tip industrial, de generare a materialului de plantat, prin operarea de subculturi, respectiv prin micropropagare, i anume : 1. Exist pericolul introducerii explozive" n" cultur, ntr-un anumit sezon sau an, a speciilor sau soiurilor atunci la mod", ceea ce poate cauza o saturare a pieei cu un acelai tip de produs i conduce la o scdere a cererii. 2. Rspndirea n cultur a unui numr redus de clone, sau chiar nfiinarea de culturi monoclonale, duce la o srcire genetic" a speciilor sau varietilor aflate n cultur; n astfel de situaii, apare pericolul selectrii naturale de duntori care pot decima, ntr-un timp scurt, exemplarele unei anumite clone. Pentru evitarea acestor riscuri se recomand ca, anual, s se afle n cultur un numr minim de 810 clone. Stocarea n bnci de gene a clonelor permite, ns conservarea acestora i restabilirea n cel mai scurt timp a culturii, populnd zona calamitat, cu plante

provenind din stocul conservat pentru rezisten la duntorul fitopatogen semnalat n cultur. Pentru evitarea accidentelor de acest tip se impune adoptarea i a unor forme de cooperare i de control internaional, att al calitii i cantitii materialului de plantat produs anual, a speciilor i clonelor introduse n cultur ct i al certificrii fitosanitare a acestora. 3. n condiiile micropropagrii ,,in vitro" mai ales a anumitor specii , se remarc prezena unor fenomene fiziologice nedorite, nc n mic msur stpnite, cum este cazul vitrificrii sau al necrozelor, n calculele de rentabilitate trebuie avute n vedere i pierderile provocate n astfel de situaii. 4. Pierderi pot fi cauzate i din lipsa de profesionalism i de contiinciozitate a persoanelor angajate n operaiunile implicate n lanul tehnologic de micropropagare in vitro". 5. Trebuie ns s avem n vedere posibilele accidente, precum i procentul de pierderi datorat fazelor de aclimatizare. Pentru evitarea riscurilor, pe durata ntregului lan operaional, implicate n procedeele de micropropagare, numeroi autori s-au preocupat de analizarea i descrierea stadiilor de lucru, respectiv a fazelor celor mai importante care trebuie urmrite cu strictee, marcnd deosebirea calitativ dintre ele, i msurile care trebuie luate pentru ca o cultur sa aib evoluia dorit.

BIBLIOGRAFIE

1. Dr.Dorina Cachi Cosma Metode in vitro la plantele de cultur Editura

Ceres Bucureti 1987.

2. Dr.Dorica Botu Biotehnologii horticole Editura Eurobit Timioara

2006.
3. SAVATTI, M., G. NEDELEA, M. ARDELEAN, 2004, Tratat de ameliorarea plantelor, Ed. Marineasa, Timioara 4. PANFIL, D., 1980, Cultura de meristeme in vitro, Horticultura 5. CACHI-COSMA, DORINA, 1987, Metode in vitro la plantele de cultur, Ed. Ceres, Bucureti 6. http://www.univagro-iasi.ro/Horti/Lucr_St_2005/33_cristea%20t.pdf 7. http://www.icashd.rdslink.ro/research.html 8. http://research.bitnet.info/duchefa_index.html 9. http://209.85.129.104/search?

q=cache:49Lqxccv4h8J:www.cnmp.ro/documente/biotech/Raport_final_Bi otech.doc+micropropagare+in+vitro&hl=ro&ct=clnk&cd=26&gl=ro
10. http://209.85.129.104/search?

q=cache:6SK12WXg1ckJ:frf.cncsis.ro/documente/260AT55.doc.doc+micro propagare+in+vitro&hl=ro&ct=clnk&cd=30&gl=ro