Taller Basic o CG

Q. Diana Mendoza Olivares. Q. Fernando de Jess Amzquita L.
Cromatografa de Gases
UNIVERSIDAD DE GUANAJUATO
Facultad de Qumica
Impartido por:
Fernando Amzquita Lpez
Diana Mendoza Olivares

2008
Q. Diana Mendoza Olivares. Q. Fernando de Jess Amzquita L. Cromatografa de Gases
CROMATOGRAFIA
LA CROMATOGRAFA ES UN METODO DE SEPARACION EN EL QUE
FISICO LOS
COMPONENTES A DESGLOSAR SE DISTRIBUYEN ENTRE DOS FASES, UNA DE LAS CUALES
CONSTITUYE UN LECHO ESTACIONARIO DE GRAN DESARROLLO SUPERFICIAL Y LA OTRA ES UN FLUIDO QUE PASA A TRAVES O A LO LARGO DEL LECHO ESTACIONARIO.
INTRODUCCION HISTORICA
1850: F.F. RUNGE Comprob que los cationes inorgnicos se separan por migracin diferencial. Observ que al pasar petrleo por un lecho de tierras adsorbentes el lquido resultante presenta distinta composicin que el inicial (indicativo de adsorcin de algunos componentes): Cromatografa en Columna (Primera noticia). Utiliza la Cromatografa en Columna para separar los componentes de extractos vegetales coloreados, derivacin de trmino CROMATOGRAFIA. Separan carotenos y xantofilas en columnas
1890: D.T. DAY
1903: TSWETT
1931: KULN Y LEDERER cromatogrficas. 1941 MARTIN Y SYNGE
Esbozan la idea de Cromatografa de Gases.
1944 Consden, Gordon y Martin Descubren la Cromatografa en Papel 1949: MARTIN Y JAMES Utilizan Cromatografa de Gases por primera vez, separacin de cidos grasos voltiles. Publica una coleccin de cromatogramas que demuestran la posibilidad de extender el campo de la Cromatografa de Gases. Realizan separaciones de componentes en muestras de entre 0.5 y 10 g, inicia la Cromatografa de Gases Preparativa.
1954: N. H. RAY
1955: EVANS Y TATLOW
1958: Sthal 1958: GOLAY
Generaliz el procedimiento de cromatografa en capa fina . Propone columnas capilares sin relleno, comenzando su desarrollo.
TEORA CROMATOGRFICA
EQUILIBRIO DE DISTRIBUCIN
K=
Cs Cm
En donde: K = coeficiente de distribucin coeficiente de particin. Cs = concentracin del soluto en fase estacionaria. Cm = concentracin del soluto en fase mvil
SECCION DE UNA COLUMNA CROMATOGRAFICA.
Fraccin del tiempo que paso en la fase movil =
No. de molculas en la fase mvil No. total de moleculas
C M VM C M VM + C S VS
1 1 = KVS 1 + k' 1+ VM
k es una nueva variable llamada: Factor de capacidad y es igual a: VELOCIDAD DE RECORRIDO:
C S VS C M VM
V=u
1 1+ k'
Por tanto: la velocidad de transporte de un promedio de molculas esta determinado por: 1.- La velocidad de arrastre: igual para todos los componentes. 2.- Relacin de volumen de la fase estacionaria a volumen de fase mvil: igual para todos los componentes. 3.- Coeficiente de Distribucin: UNICO para cada componente.
TIEMPO DE RETENCION (tr). Tiempo que toma un componente en recorrer la longitud de la columna L,
tr =
longitud L = (1 + k ' ) = t M (1 + k ' ) velocidad u
tM = tiempo requerido para arrastrar una molcula en la columna transversal.
VOLUMEN DE RETENCIN (vr).
Vr = t r F
El volumen de fase mvil necesario para transportar una banda de soluto desde el punto de inyeccin a travs de la columna hasta el detector. Por tanto: tr = tiempo F = velocidad de flujo. Sustituyendo: Vr = VM ( 1 + k) = VM + KVs
En donde: VM = volumen fase mvil contenida en la columna. VS = en caso de columnas de adsorcin, puede reemplazarse por el rea superficial del adsorbente. RETENCION RELATIVA ().
t r t M Vr VM K = * = * t r t M Vr VM K *
* = corresponde a una sustancia estndar. = depende de dos condiciones: a) naturaleza de las dos fases. b) temperatura de la columna. La fase estacionaria es la seleccin ms importante intentndose escoger siempre una fase tan selectiva como sea posible para el par de solutos ms difciles de separar. Para que una separacin sea factible, la retencin relativa debe ser superior a la unidad.
PLATOS TEORICOS. El nmero de platos tericos, (n), en una columna es funcin de cmo esta construida la columna y de la naturaleza del soluto, velocidad de flujo, temperatura, mtodo de introduccin de la muestra y otras variables. Por tanto n es nicamente un nmero aproximado til para propsitos comparativos como una descripcin de la eficiencia de la columna. El nmero de platos tericos en una columna es determinado al observar el cromatograma, de la siguiente manera.
Hay dos formas de incrementar el nmero de platos tericos en una columna:
4t n = r W
en donde:
n = platos tericos. tr = tiempo de retencin. W = anchura del pico en la base.
Primero: El nmero de platos tericos es directamente proporcional a la longitud de la columna. Por tanto si se duplica el valor de L duplicaremos el valor de n y esto tambin duplicar el valor de tr. Sin embargo, los picos se volvern ms anchos, en este caso, por un factor de
2.
Segundo: Aumentar el nmero de platos tericos por unidad de longitud de la columna, para aumentar el nmero de equilibrios dentro del mismo tiempo de barrido.
* ALTURA DE PLATO TEORICO (H).
Es ms til medir, para determinar la calidad de la columna, el espacio ocupado por cada plato terico, esto es la longitud de la columna dividido por el nmero total de platos que contiene; lo que se denomina ALTURA EQUIVALENTE A UN PLATO TEORICO, HETP, o simplemente H. Que tambin se puede definir como la cantidad que mide la eficiencia de la columna y que est relacionada con la anchura de los picos.
L L W H= = n 16 t r
en donde: H = altura de plato terico L = longitud de columna
W = anchura de pico en la base (las intersecciones de las tangentes en los puntos de inflexin con la lnea base). n = nmero de platos tericos. tr = tiempo de retencin corregido con respecto al tiempo de transito de un soluto no absorbido o no retenido. Son deseables los valores de H pequeos.
TEORIA DE LA VELOCIDAD El comportamiento de un grupo de molculas en una columna cromatogrfica es verdaderamente catico; no obstante reconocemos tres desviaciones importantes de la idealidad las cuales causan que sea mayor que el valor ideal, cero. 1.- cuando la molcula se mueve de la entrada a la salida de la columna, puede tomar caminos al azar de diferentes longitudes. Esto es cierto si la columna est empacada o est vaca. Si la columna esta empacada con partculas de forma irregular, esto puede dar variaciones bruscas en el flujo. Las diferencias en longitudes de espesor originan que las molculas que han empezado juntas a la entrada de la columna llegaron ala salida con una diferencia de tiempo.
Fig. 1 Perfiles de concentracin a travs de una zona en una columna cromatogrfica (a) cromatografa ideal. (b) Ensanchamiento de banda causada por difusin de la zona. (c) ensanchamiento de banda causada por equilibrio lento entre fases. 2.- Las molculas tienden a difundirse de regiones de alta a baja concentracin. Como las zonas pasan a travs de la columna, es inevitable que sta difusin cause que abra la seal hacia delante y hacia atrs como se indica la figura 1 B. 3.- Un equilibrio dinmico puede establecerse rpidamente pero nunca completamente al instante. El flujo continuo de la fase mvil causa una desviacin del equilibrio: la razn CS/CM siempre ser mas pequea que k en la conduccin de corte de una zona y mayor que k en el corte de transporte como muestra la figura 1 C. Este retraso tambin causa que la zona difiera en ambas direcciones.
Cada uno de estos tres factores opera ms o menos independientemente, y su efecto total sobre H (que es medida directamente del ancho de una banda de L acuerdo a la expresin H = y es una suma de tres trminos: n
H=
Contribucin de sendas + diferentes. (difusin turbulenta) masa)
Contribucin de la difusin a lo + largo de la columna (difusin longitudinal)
contribucin de no equilibrio (Transferencia de
Un grupo de Qumicos de la Deutch Petroleum derivaron una expresin matemtica para relacionar lo anterior, conocida como la ecuacin de Van Deemter: B H=A+ + Cu 1 u Cada uno de los tres trminos de la ecuacin 1 es ms complejo de los que aqu se muestra. A, B, C: pueden ser considerados como constantes para una columna determinada, pero cada constante incluye varios parmetros experimentales especficos a cada tipo de cromatografa. La ecuacin Van Deemter merece ms atencin, aqu discutiremos unas cuantas observaciones generales: 1.- El trmino A es una funcin del tamao y uniformidad de las partculas del empaque de la columna. Las partculas pequeas empacadas hermticamente, dan valores de A pequeos. Sin embargo en la mayora de columnas bien empacadas, el valor del trmino A es cercano a cero y pude ser despreciado. 2.- El trmino B est relacionado a la difusin a lo largo de la columna. La difusin en los lquidos es aproximadamente 105 veces ms pequeo que en los gases, as el trmino B es menos importante con una fase mvil lquida. Observe que el trmino B es inversamente proporcional a la velocidad de transporte. A bajas velocidades los tiempos de elucin son mas largos y hay mas tiempo de difusin para abrir la banda. 3.- El trmino C representa el ensanchamiento debido a la falta de equilibrio. Es una funcin compleja de la geometra de la fase estacionaria, el coeficiente de distribucin y las velocidades de difusin en ambas fases. Observe que el trmino C es directamente proporcional a la velocidad de transporte. A altas velocidades hay menos tiempo disponible para el equilibrio. 4.- Para obtener mejores separaciones, H sera minimizada al disminuir n y dara picos ms agudos.
5.- Para reducir la H ms efectivamente, se debe determinar cual de los tres trminos es mayor y tratar de reducir su primer valor. Los valores de A, B y C son determinados como sigue: a) Corra un cromatograma para un pico en particular a tres velocidades de flujo diferentes, razonablemente separados. b) Determine H para cada velocidad de flujo del cromatrograma y la ecuacin 2
L Lw H= = 2 16 TR n c) Ponga tres ecuaciones simultaneas similares a la ecuacin 1 sustituyendo la velocidad de flujo por velocidad si es conveniente. d) Resuelva las ecuaciones para A, B y C.
Las contribuciones relativas de los tres trminos para un cromatograma gas-lquido est graficado como una funcin de la velocidad.
Fig. 2 Grfico de Van Deemter, que muestra las contribuciones relativas de cada trmino como una funcin de la velocidad de la fase mvil. 6.- La nica variable que afecta a la H, que es ms fcilmente controlable por el operador es la velocidad de transporte. A bajas velocidades el trmino B es muy grande y controla el valor de H. A altas velocidades, predomina el trmino C. Ambos extremos deben de evitarse. Hay una velocidad intermedia ptima que
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puede ser obtenida diferenciando la ecuacin 1. Si los valores para A, B y C son conocidos determinados grficamente como se muestra en la figura 2 7.- La velocidad ptima como se determino anteriormente puede ser muy pequea, dando tiempos de retencin largos. Observe que la grfica de Van Deemter sube lentamente justo a la derecha del valor mnimo, de tal manera que las velocidades aumentan al doble el valor ptimo hasta dar separaciones razonables en tiempos ms cortos. 8.- La ecuacin de Van Deemter, como se vio en la ecuacin 1 est basa en muchas aproximaciones. RESOLUCION. En la prctica, el objetivo ms importante de la cromatografa, es la capacidad para separar los componentes de la muestra - no necesariamente construir la columna ms eficiente del mundo. Generalmente nos importa el grado de separacin, o resolucin, de los compuestos de carcter similar.
FIG. 3...Efecto del factor de separacin, y numero de platos tericos en la Columna sobre la resolucin de dos picos.
Los dos componentes de la figura......3a.......son pobremente resueltos y se sobreponen en un grado que hace imposible de identificar o determinar la cantidad de cada uno. Para aumentar la resolucin, podemos: (a) cambiar la temperatura o la naturaleza de las fases para dar una mayor separacin entre nos picos como se muestra en la figura 3b, o (b) reducir la anchura de los picos mejorando la eficiencia de la columna (disminuyendo H, aumentando n), como en la figura 3c, o (c) una combinacin de (a) y (b) como en la figura 3d, donde la resolucin es ms satisfactoria. Cuantitativamente, la resolucin, R de dos picos que tienen tiempos de retencin t1, t2,y anchura de picos W1 y W2, es:
R=
2(t 2 t1 ) W1 + W2
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Fig. 4 Mediciones usadas en el calculo de resolucin de dos picos.
La resolucin de los dos picos mostrado en la figura 4, es cercana a 1,05. Una resolucin de R > 1,5 da la llamada resolucin de lnea base o esencialmente separacin completa de los dos picos de igual tamao. Una resolucin de R = 1,0, con una sobreposicin de picos de aproximadamente el 2%, generalmente se considera adecuada para propsitos analticos. Una resolucin adecuada para muestras complejas que contienen muchos compuestos de propiedades similares o a nivel estrato, puede ser difcil de obtener. Los mejores procedimientos para optimizar la resolucin varan con el tipo de cromatografa; sin embargo, podemos dar algunas generalidades. Para aumentar la resolucin: 1. aumente: tR = t2 - t1 (a) aumente la longitud de la columna, L (b) aumente la cantidad de fase estacionaria, Vs - VL (c) emplee un mejor factor de separacin, = t`s/t`1 i. disminuya la temperatura, T ii. Selecciones una fase estacionaria diferente. iii. Seleccione una fase mvil diferente (si es lquido) 2. disminuya el ancho de banda, W (a) emplee un empaque ms uniforme i. empaque la columna mas cuidadosamente ii. Use partcula mas pequeas (b) aumente el rea entre las dos fases (c) optimice la velocidad de flujo (d) reduzca el tamao de muestra (e) reduzca el espacio muerto en el sistema (f) reduzca la constante de tiempo del detector (g) disminuya el dimetro de la columna Al desarrollar o mejorar un procedimiento cromatogrfico, puede ser importante uno o ms de los siguientes objetivos: 1. alta resolucin: para mezclas complejas 2. tiempo de anlisis rpido
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3.
gran trayectoria: para trabajos componente a nivel de estrato.
preparativos
concentracin
de
Los tres objetivos anteriores no pueden alcanzarse simultneamente; por ejemplo, muestras grandes y/o velocidades de flujo altos dan pobre resolucin. Inevitablemente, el operador debe decidir sobre el mejor compromiso para alcanzar estos requerimientos. Pero para hacer la mejor eleccin, puede ser de gran ayuda la teora cromatogrfica.
VOLUMEN DE RETENCION (VR). VR = VM + KVS En cromatografa de gases, prevalece una circunstancia especial, la fase mvil es un fluido compresible con un volumen dependiente de la presin y la temperatura. Dadas las condiciones de operacin se debe tener la presin
atmosfrica y el flujo del gas de arrastre a condiciones de temperatura ambiente. Se puede hacer una correccin para la diferencia de temperatura a la entrada y salida de la columna, por medio de la ecuacin:
Fc = Fa
Tc Ta
Y T es la
donde F es la velocidad de flujo del gas de arrastre (ml/min).
temperatura absoluta, a y c se refieren a condiciones de columna y ambiente. Se requiere una correccin para la diferencia entre presin de columna y atmosfrica, para tener la presin promedio
p.
pi 2 p 1 3 3 2 p po po 3 o = j = p = i2 2 3 pi po p 2 pi 3 1 po
pi = presin a la entrada.
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po = presin a la salida.
o VR , es el volumen de retencin medido
El volumen de retencin corregido, a presin de columna promedio:

o VR =
po VR = jVR = jFc t r p
VOLUMEN DE RETENCION AJUSTADO. (VR). Para una fase mvil no compresible: VR = KVS = VR -VM En Cromatografa de gases el volumen de retencin ajustado tambin requiere correccin y el volumen de retencin neto (VN) est dado por: VN = j VR = KVS (fase mvil compresible) En la prctica VR se puede determinar en forma directa con facilidad, permitiendo calcular rpidamente VN. Solo es necesario inyectar alguna sustancia que pase a travs de la columna sin ser retenida y observar la seal. El tiempo entre la inyeccin y la aparicin de la seal es tM. pasa tiempo en la columna y se tiene que: VM = tM Fc VR = (tr - tM)Fc = tRFc Variacin del volumen de retencin en funcin de la temperatura de columna: El aire o metano no se retiene y no
G o ln K = RT
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K=
VN t' F V' =j R =j R c VS VS VS
si VS es constante; ln K = lnVN + ( c )1 = ln VR + ( c )2 = ln tR + ( c )3 o ms preciso:
log t' R =
A +B T
ya que:
ln VN ln VR ln tR
Variacin del volumen de retencin en funcin de la presin de vapor para series homlogas de compuestos.
Cada compuesto en una serie homloga difiere de su predecesor por un grupo CH2-. En cualquier serie homloga hay una regularidad en la presin de vapor tal que para una T determinada:
Log p n = K1 +K2n
p n es la presin de vapor saturado del compuesto con n tomos de carbono y donde K1 y K2 son constantes empricas. Si consideramos un comportamiento de solucin ideal tal que, para cualquier compuesto, pM = XS p n donde pM es la presin parcial del soluto en la fase mvil y XS la fraccin mole de soluto en fase
o
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estacionaria, entonces encontramos que K presin de vapor saturado.
es inversamente proporcional a la
K=
CS CM
XS 1 = o pM pn
o
log K - log p n n log tR = An + B
SELECCIN DEL SOPORTE SOLIDO
La funcin del soporte slido es actuar como una plataforma inerte para la fase lquida en la columna. Como tal, el soporte slido debe distribuir la fase lquida en una pelcula delgada.
Las caractersticas son:
1. Inerte (evitar la adsorcin). 2. Fuerza de aglomeracin alta. 3. Area de superficie grande. 4. Forma regular y tamao uniforme.
Los ms utilizados son:
CROMOSORB P
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Es una tierra de diatomeas que ha sido calcinada y cuidadosamente graduada en tamao, con un rea de superficie 4-6 m2/g. Este material es el menos inerte de todos los cromosorb pero ofrece alta eficiencia.
CROMOSORB W
Es una tierra de diatomeas blanca, la cual ha sido calcinada con un 3% de Na2CO3 y tiene una rea de superficie de 1-3.5 m2/g. Estte material es ms inerte pero menos eficiente que el cromosorb P.
CROMOSORB G
Combina las caractersticas de eficiencia y manejo del cromosorb P con la superficie no adsortiva del cromosorb W. Muestra las siguientes ventajas sobre el cromosorb W: Mayor eficiencia de columna; menos superficie de adsorcin;
partculas ms duras y menos rompimiento en el manejo.
CROMOSORB A
Es similar al cromosorb P pero es ms fcil de manejar, tiene mayor rea de superficie, y una capacidad para mantener el lquido sin sitios activos excesivos.
CROMOSORB TRATADO CON DIMETIL CLOROSILANO (DMCS).
Son soportes de cromosorb que han sido cubiertos con dimetilclorosilano para reducir la superficie de sitios activos de la tierra de diatomeas.
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Este tratamiento reduce las colas en los cromatogramas y la cantidad de lquido de recubrimiento.
Var A port30 y CROMOSORB W de alta resolucin:
Tierras de infusorios lavadas con cidos y tratadas con DMCS para minimizar los sitios adsortivos e incrementar la eficiencia. Estos son recomendados para, esteroides, carbohidratos, pesticidas y otros compuestos de alta sensibilidad.
CARACTERISTICAS DE LA FASE ESTACIONARIA LIQUIDA
VISCOSIDAD. No deber ser muy alta a la temperatura de operacin.
TENSION SUPERFICIAL.
Debe mojar bien el soporte, sea relleno o sea pared interior del tubo: adherencia soporte-lquido sea
suficiente.
TENSION DE VAPOR.
Deber ser mnima, para no provocar su paso a la fase mvil.
SELECTIVIDAD RESPECTO A LOS COMPONENTES DE LA FASE MOVIL. Esta condicin es la que define en si a la Cromatografa
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de
Gases,
las
constantes
de
reparto
de
los
componentes a separar entre la fase mvil y la fase estacionaria deber ser suficientemente diferentes.
REVERSIBILIDAD DEL REPARTO.
El reparto de cada componente entre las
fases deber ser reversible.
ESTABILIDAD TERMICA. Es importante que la fase estacionaria sea estable, en si misma y respecto de los componentes de la mezcla a resolver, a la temperatura de trabajo.
INTERACCIONES LIQUIDO-COMPONENTE.
INTERACCIONES DIPOLARES:
Se producen entre molculas de compuestos polares. Keesom ha proporcionado una ecuacin para potencial que se deriva para dos dipolos:
2 i2 s2 E is = 6 3 r KT
= momentos dipolares. K = constante de Boltzmann. T = temperatura absoluta.
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r = distancia entre polos.
LAS FUERZAS DE INDUCCION: Se dan cuando una molcula polar se aproxima a otra no polar. Ecuacin de Debye.
E'is =
1 (a s i2 + a i s2 ) 6 r
donde a son las polarizabilidades respectivas.
FUERZAS DE DISPERSION:
Se deben a la formacin de dipolos instantneos ncleos-electrnes. Ecuacin de London.
E = is
3 a sa i Is Ii (I s + I i ) 2 r2
I = energa de ionizacin.
PUENTE DE HIDROGENO: Estas fuerzas son superiores a las mencionadas, pero

inferiores a las de enlace qumico, determinando, en ciertos casos, que el componente se vea excesivamente retenido en la fase estacionaria lquida, perjudicial para una buena separacin.
RETENCIONES CARACTERISTICAS DE FASES LIQUIDAS USADAS EN CROMATOGRAFIA GAS- LIQUIDO. FASE LIQUIDA INDICE DE RETENCION (I) BENZENE BUTANOL 2-PENTANONE NITROPROPANE PYRIDINE
1 Squalane
653
590
627
652
699 --------I 42 41 123 200 305 386 510 791
- - - - - - - - - - PARA LAS SIGUIENTES FASES, I = Isqualane + I I 2 Apiezon L 3 SE-30 4 Dioctyl sebacate 5 OV-17 6 QF 1 7 OV 225 8 Carboxax 20 M 9 DEGS
I 22 53 168 158 233 369 536 733
I 15 44 108 162 355 338 368 581
I 32 64 180 243 463 492 572 833
32 15 72 119 144 228 322 492
* From a paper by W. O. McReynolds: J. Chrom. Sci., 8: 685, 1970
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Columnas capilares
NOMBRE DE FASE NOMBRE QUIMICO RSL - 150 Polydimethylsiloxane POLARIDAD Non-Polar FASE SIMILARES DB-1, SE-30, OV-1, OV-101, SC200, UCW-982, SP-2100, SF-96, SPB-1, BP-1, CPSIL-5CB ULTRA 1, PH-1, GB-1, MS Same as RSL - 150 DB-5, SE-52, SE-54, SPB-5, OV73, BP-5, CPSIL-8CB, ULTRA 2, HP-5, GC-5,MPS-5 DB-17, OV-17, SP-2250, BP-10, PH-17, GB-17, MPS-50 DB-170,CPSIL-19CB,SPB-7,GB1701 Ucon & Pluronic Fluids DB-210, OV-202, OV-210, OV215, QF-1, SP-2401 DB-225, OV-225, HP-225 DB-WAX, Carbowax 20M, CP WAX-51, CP WAX-57CB,BP-20, CW20MS, HP-20M, SUPERCOWAX 10 FFAP, AT-1000, SP-1000, OV-351
RSL - 160 RSL - 200
Polydimethylsiloxane (Thicker Films) Polydiphenyldimethyl-siloxane
Non-Polar Non-Polar
RSL - 300 OV 1701 RSL - 310 RSL - 400 RSL - 500 SUPEROX
Polyphenylmethylsiloxane Polycyanopropylphenyl-methylsiloxane Polyalkyleneglygol Polytrifluoropropylsiloxane Polyphenylcianopropyl-methylsiloxane Polyethyleneglycol
Intermediate Intermediate Polar Polar Polar Polar
SUPEROX - FA
Polyethyleneglycol Ester
Polar, acidic
- ALLTECH ASSOCIATES, CATALOG # 150
DETECTORES Los detectores que se utilizan en cromatografa deben de ser transductores de concentracin en fase vapor, poseer una sensibilidad adecuada, nivel de ruido bajo, ser de respuesta rpida, para ser capaz de mostrar casi instantneamente las variaciones de concentracin.
CLASIFICACION EN CUANTO A RESPUESTA. a) Diferenciales, responden a la primera derivada de la variacin de la concentracin del efluente de la columna en funcin del tiempo. Detecta cantidades muy pequeas de muestras que se manifiesta en forma de picos separados sobre la lnea base continua. i) Conductividad ii) Ionizacin de flama Los detectores del tipo integral ofrecen una seal en funcin del tiempo, proporcional a la cantidad total que ha pasado por el detector. En cuanto a conservacin de la muestra. a) No destructivos b) Destructivos.
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Como ejemplo del gran nmero de detectores, se presentan dos tpicos. El de Termoconductividad, el de Ionizacin de flama y el de captura electrnica. Detector de termoconductividad.
Este detector funciona en base a la variacin de la resistencia elctrica con la temperatura de la forma: R2 = R1[1 + a(T2-T1)] R1 y R2 son los valores de la resistencia a las temperaturas T1 y T2, y a es la constante trmica de resistencia elctrica. En los filamentos metlicos utilizados como elementos sensibles a oscila entre 2x10-3 y 7x10-3 mientras que en los termistores es del orden de 4x10-2/C. Se utiliza He como gas de arrastre debido a su alta conductividad como se puede observar en la grfica y la tabla siguientes:
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Como ejemplos de detectores de ionizacin tenemos al de flama y el captura de electrones Detector de ionizacin de flama. DIF El detector de ionizacin de flama, tiene su fundamento en la ionizacin por la flama de hidrgeno en presencia de aire u oxgeno. En esta llama, se realiza la combustin de los componentes detectados dando lugar stos a la formacin de iones, electrones y radicales libres.
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En los detectores de ionizacin a la llama la respuesta es proporcional a lo que se denomina factor carbono que se define como:
Fc =
Peso moleclar del componente (nmero de tomos de carbono del componente ) x (12)
El factor carbono es caracterstico de cada componente. Parece que es conveniente excluir del recuento de carbonos aquellos que estn unidos a tomos de oxgeno, cuando los haya. Al interpretar el cromatograma se utiliza el factor carbono como un factor de correccin para las reas de pico. DETECTOR DE CAPTURA DE ELECTRONES
Gas portador He (bajo flujo) Gas auxiliar Nitrgeno o argn/metano Sistemas libre de agua y oxgeno Produce lnea base estable Incrementa la vida de la lmina radioactiva Requiere una trampa de Malla molecular S y una trampa para O2
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Preacondicionamiento de la columna sin conectar al detector Sensible al sangrado de columna de fases estacionarias como cyano, trifluoropropil y polietilenglicol Detector no destructivo, maneja eluentes txicos apropiadamente
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ESPECTROMETRO DE MASAS, DETECTOR SELECTIVO DE MASAS Destructivo y universal.
Compuestos bombardeados por electrones y fragmentados en especies cargadas en el modo El

Los fragmentos son separados en base a su relacin masa/carga Monitoreo del in seleccionado (SIM) para incrementar la sensibilidad y la selectividad. Intervalo dinmico lineal: 105. Aplicaciones: desarrollo de mtodo, anlisis de drogas y ambiental.
Corte transversal de la Cmara de inyeccin
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27
CLASIFICACIN DE LOS DETECTORES BASNDOSE EN LA DEPENDENCIA DE CONCENTRACIN Y FLUJO DE MASA
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EL CROMATOGRAMA Y SU INTERPRETACIN
El Cromatograma, es la plasmacin grfica de los resultados de la cromatografa de gases, y es muy importante su interpretacin. En realidad la tcnica de Cromatografa de gases en una tcnica Cromatogrfica por elucin. Dentro de los cromatogramas obtenidos por elucin cabe distinguir dos tipos que dependen de la naturaleza del detector: cromatogramas de escalones cuando el detector es del tipo acumulativo, y cromatogramas de picos cuando el detector es instantneo. Siendo stos los de interpretacin ms sencilla; ello explica que, en la mayora de los casos, los cromatogramas a interpretar sean de picos
CROMATOGRAMA DE ESCALONES: INTERPRETACION
Como se ha indicado anteriormente, los cromatogramas de escalones resultan cuando se hace uso de un detector acumulativo. Uno de estos registros escalonados se muestra en la FIG. 1.
FIG. 1 Cromatograma de escalones obtenido de una mezcla de los componentes A,B y C.
El tiempo de retencin en estos cromatogramas es el que corresponde a un aumento de volumen. El volumen detectado de un componente viene dado por la altura del escaln correspondiente La concentracin de un componente, expresada en volumen y en moles, vendr dada por la siguiente ecuacin:
%i =
Li 100 L
(1 a)
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siendo L i la altura del escaln del componente, y de todos los componentes de la mezcla analizada.
la suma de las alturas de escaln
CROMATOGRAMA DE PICOS: PARALELOS
Los detectores instantneos ponen de manifiesto, en el cromatograma, el paso de un componente en un registro con forma de pico, este tipo de registro es el ms frecuente, y sobre el mismo se centra el resto del presente. La FIG.2, muestra un cromatograma de picos, con los parmetros caractersticos. A continuacin se pasa revista a tales parmetros.
FIG. 2. Cromatograma de picos con indicacin de los parmetros caractersticos.
El pico del aire es el que corresponde a la deteccin de una cantidad muy pequea de aire que entra en la columna cuando se introduce la muestra en el cromatgrafo. En muchas ocasiones se toma como origen de tiempos de retencin corregidos, tal como se defini anteriormente. La lnea de base es la parte del registro que corresponde al gas portador puro, o sea, a la seal de base. Anchura de pico (h) es la distancia entre la cima del pico y la prolongacin de la lnea de base. En el caso de que el pico sea de vrtice redondeado se trazan rectas tangentes a los puntos de inflexin de las laderas; el punto de corte de las dos lneas trazadas determina la altura del pico, tal y como muestra el cuarto pico de la FIG. 2. Anchura de pico en la semialtura (ah/2) es la distancia, paralela a la lnea de base, entre las dos laderas del pico, tomada a la altura mitad a la total de pico.
30
Area del pico (S) es la comprendida entre el pico y la prolongacin de la lnea de base. Precisamente a obtener el valor de este parmetro, en los picos del cromatograma, se dedican los dispositivos integradores.
DETERMINACION DEL AREA DE PICO
Aun cuando existen en el mercado dispositivos destinados a la medida del rea de pico, o sea, a obtener sobre el cromatograma el valor de la integral:
S i = Edt
(1 b)
donde S es el rea del pico; E, el parmetro elctrico registrado, en general d. D. P., y t el tiempo. Dejando de lado los dispositivos mencionados, que proporcionan directamente el valor de la integral, se van a considerar a continuacin algunos mtodos sencillos para determinar el rea de los picos.
Si el papel utilizado para realizar el registro es homogneo puede realizarse la determinacin del rea pesando el pico, cuidadosamente recortado, en una balanza de precisin, y comparando el peso obtenido con el de un recorte que se tome como unidad de rea. Utilizando una comparacin semejante puede obtenerse el rea del pico haciendo un recuento de las unidades de superficie, cuadros, que comprende el pico considerado. Entre los mtodos geomtricos, el ms primitivo y de menor exactitud considera el pico como un tringulo de rea:
Si =
axh 2
(2)
siendo a la anchura del pico considerada sobre la prolongacin de la lnea de base, y h la altura del pico. En la base del pico es donde ms pronunciadas suelen ser las distorsiones que hacen inexacto el considerarlo como un tringulo. Por ello es mucho ms aproximado obtener el rea de acuerdo con la ecuacin: (3) Si = h x ah
2
siendo
ah
la anchura del pico en la semialtura.

2
En el caso de que el pico sea
asimtrico, es ms recomendable la ecuacin:
Si = h
a o , 5 + a o ,1 + a o , 9 3
(4)
31
siendo
ao,5 , ao,1 y ao,9
las anchuras de pico tomadas a 0,5, 0,1 y 0,9, respectivamente,
de la altura total del pico. Utilizando las ecuaciones (3) y (4) se pueden determinar reas con error menor del 2 por 100, aparte de la comodidad de medir solamente dimensiones lineales. Es interesante considerar el caso de que dos compuestos no se encuentren bien resueltos en el cromatograma, como muestra la FIG. 3. Se considera que esto ocurre cuando el valle intermedio no llega a la lnea base.
FIG. 3 Picos mal resueltos
Para resolver tales casos se acta de la forma siguiente: bjese una lnea recta vertical desde el valle hasta la lnea de base; trcese una paralela a la lnea de base tangente al valle. Determnese el rea de cada pico considerando como lnea de base la ltima trazada. Hllese el rea de las dos zonas que quedan bajo la lnea acb. Se considerar como rea de cada pico la suma de las dos superficies comprendidas bajo el mismo. Como se ve fcilmente, este procedimiento supone repartir la interferencia entre los dos compuestos, por partes iguales.
DETECTOR Y CROMATOGRAMA
La seal de fondo se manifiesta en el cromatograma y estableciendo un nivel superior para dicha seal, se la tiene en cuenta a la hora de interpretarlo. Respecto de la sensibilidad del detector hay que decir que, generalmente, no es la misma para diferentes componentes, lo cual motiva la necesidad de calibrar el cromatgrafo para que las respuestas de stos sean comparables entre s. A continuacin se van a considerar las relaciones existentes entre el rea de pico y diferentes parmetros del detector y de las condiciones de operacin. Se tendrn en cuenta dos tipos de detectores, vistos ya en el apartado anterior.
32
En el caso de detectores sensibles a la concentracin, de conductividad trmica, por ejemplo, es: (5) E i = KC i siendo E la seal registrada; C, la concentracin, y K, el factor de respuesta, para un componente i. El rea de pico vendr dada por:
S i = Edt
(6)
Con la ecuacin (5) en la (6), resulta: Pero, por otro lado,
S i = K Cdt
(8)
(7)
Cdt =
1 dM i q
Donde q es el caudal volumtrico de la fase mvil a travs del detector, y Mi, la masa de componente i. Con la ecuacin (8) en la (7), una vez integrado a caudal constante, resulta:
Si =
K Mi q
(9)
y despejando la cantidad de componente:
M i = 1 K x q x Si
(10)
que demuestra la relacin existente entre el rea del pico y la cantidad de componente detectada. Las unidades utilizadas ms frecuentemente en las magnitudes citadas son: E (mV), M (mg), S (mV.min), q (ml/min), t (min) y K (mV/mg/ml). Cuando el detector es sensible a la velocidad de introduccin del componente, por ejemplo detectores de ionizacin, la respuesta es:
E = K
dn i dt
(12)
(11)
siendo ni el nmero de moles del componente i. El rea de pico en este caso es:
S i = E dt
sustituyendo (11) en (12) e integrando resulta: (13) S i = K ni finalmente, despejando ni, resulta:
ni =
1 Si K
(14)
con lo que queda demostrada la relacin entre cantidad de componente y rea de pico para este tipo de detectores.
33
Las deducciones anteriores se han realizado suponiendo constantes algunas condiciones de operacin, como son el caudal volumtrico de la fase mvil (y, por tanto, la temperatura en el detector), la alimentacin elctrica al detector, etc. Un parmetro relacionado con el detector y, lgicamente, propio de cada componente, es la respuesta relativa, considerando ya en el apartado anterior, que se define, sobre el cromatograma, como la razn entre las reas de pico, del componente considerado y de otro componente que se toma como patrn, cuando hay igual nmero de molculas de ambos. Obsrvese la similitud entre esta definicin y la de retencin relativa, hecha anteriormente, no dejando de considerar las diferencias que entre ambas existen. La respuesta relativa es una constante para un compuesto dado respecto de un patrn, sin que intervenga en el valor de la misma el tipo de columna ni las condiciones de operacin, siempre que sean iguales al determinar las dos reas. S depende del tipo de detector utilizado. Al igual que los datos de retencin relativa, los de respuesta relativa se encuentran tabulados para muchos compuestos.
INTERPRETACION CUALITATIVA DEL CROMATOGRAMA
Como se ha considerado anteriormente, la visin cualitativa de una muestra que proporciona el cromatgrafo se debe principalmente a la accin separadora de la columna, haciendo el detector meramente de informador. La columna separa los componentes de la muestra que emergen a distintos tiempos de retencin o volmenes de retencin, definidos, que se manifiesta en el eje de abscisas, tiempos, del cromatograma de acuerdo con la situacin, sobre dicho eje, de los picos que corresponden a los componentes. Como ya se vio, los tiempos de retencin son difcilmente reproducibles, incluso en una misma columna, y cmo se define la retencin relativa de un componente dado, que es reproducible siempre que las condiciones de operacin sean iguales, y las columnas utilizadas, muy semejantes. Para realizar la antedicha identificacin se procede frecuentemente a comparar el cromatograma obtenido con los de compuestos conocidos y puros, existiendo varias formas de realizar tal comparacin y confirmar la presencia de un componente. Cuando en una mezcla se sospecha que un componente ya identificado corresponde a un pico dado se aade a la muestra problema algo de componente puro, y se realiza un cromatograma. Si en el registro obtenido aparece el pico del componente aumentado en su dimensin, entonces se ha acertado en la prediccin. Si aparece un nuevo pico, la prediccin era errnea.
34
Los datos de retencin pueden de la bibliografa, o tambin por determinacin experimental usando compuestos puros. Muchas veces los componentes a analizar no son apropiados para la cromatografa de gases, procedindose, en tales casos, a someterlos a reacciones previas de acondicionamiento que los transformen en otros compuestos cromatrografiables. Un ejemplo de esto es el caso de los cidos orgnicos, a los que se debe someter a esterificacin previa, por lo que los datos de retencin correspondientes vienen dados para los steres, como puede consultarse en la bibliografa especializada. Es interesante consignar aqu la relacin dada por H. Oster, para series homlogas hidrocarbonadas, segn la cual el logaritmo del tiempo de retencin de un miembro de una de tales series es, con gran aproximacin, funcin lineal de su nmero de carbonos:
log t i = N i
(15)
siendo Ni el susodicho nmero de tomos de carbono y una constante propia de la serie homloga, de la columna y de las condiciones de la determinacin cromatogrfica. Segn lo anterior, es sencillo determinar experimentalmente la constante de proporcionalidad realizando un cromatograma de algunos compuestos de una serie homloga y representando, en papel semilogartmico, ti frente a Ni; deber obtenerse una receta, extra e interpolable, de pendiente igual a . Un parmetro cualitativo para caracterizar los componentes, de gran utilidad por su buena reproducibilidad, es el ndice de retencin propuesto por Kovts. Se considera que la serie homloga de los hidrocarburos saturados de cadena lineal constituye una escala de retencin que puede servir como referencia para los dems compuestos. Se define el ndice de retencin de un componente i como:
log t i log t N I i = 100n + 100m log t N + M log t N

log riN I i = 100n + 100m log rN + M , N
(16)
donde n es el nmero de carbonos de la parafina normal N, y m es el nmero de carbonos en que la parafina N +M aventaja a la M. (17)
Segn estas definiciones, las parafinas normales que se toman como patrones tienen un ndice de retencin que es igual a su nmero de carbonos multiplicado por 100, (rNM=1). Si se define que:
35
b=
log rN + M , N m
(18)
y se considera que su valor es precisamente el de para los hidrocarburos saturados de cadena lineal cuando se aplica la ecuacin (15) a las parafinas N y N+M, la ecuacin (17) quedar convertida en:
log riN I i = 100 + n b
(19)
el coeficiente b es una constante para una columna y unas condiciones dadas, y si los miembros considerados de la serie homloga son cercanos, o sea, si m es bajo. En muchos casos se toma el n-nonano como patrn de referencia a la hora de establecer valores del ndice de retencin. En este caso, la ecuacin (19) quedar:
log ri 9 I i = 100 + 9 b
M=2 tN < ti < tN+M (21)
(20)
En otros se toman dos parafinas normales, tales que:
en cuyo caso la ecuacin (17) pasa a ser:
log riN I i = 100n + 200 log rN + 2, N

y la (18):
(22)
b=
log rN + M , N 2
(23)
Las ecuaciones (19), (20), (22) y (23) son fcilmente aplicables a problemas concretos para calcular el Ii a partir de valores de retencin relativa. Se dispone de hidrocarburos lineales saturados dentro de una gama muy amplia de tiempos de retencin, por lo que se pueden aplicar las relaciones (21), (22) y (23) a la mayora de los componentes orgnicos.
36
Las diferencias entre los valores de los Ii de una sustancia cuando se usa una fase estacionaria lquida polar y cuando se usa una no polar tienen aplicacin en determinaciones de estructuras orgnicas.
CALIBRADO
Para poder interpretar correctamente de forma cuantitativa los cromatogramas analticos es necesario obtener correcciones a las alturas y reas de pico, de forma que las de todos los componentes de una mezcla sean cuantitativamente comparables. Los experimentos y operaciones posteriores de clculo destinado a establecer las relaciones existentes entre altura o reas de pico y composiciones reciben conjuntamente el nombre de calibrado del cromatgrafo. El calibrado se traducir en una relacin entre el parmetro de pico que se elija y la composicin de la muestra o, supuesta una relacin terica entre ambos, en unos coeficientes empricos de correccin. En el primer caso, si la relacin es grfica, se tiene una curva de calibrado; en el segundo se obtienen unos factores de calibrado. Aunque el calibrado del cromatgrafo se encuentra muy ligado a la interpretacin cuantitativa del cromatograma incluso en ciertos casos se ver que ambos se hallan mezclados -, se prefiere tratarlos por separado, para que cada uno de los dos procesos conserve, en lo posible, su identidad particular, facilitndose as su comprensin. Varios son los mtodos que se pueden seguir para realizar el calibrado y, como ocurre muchas veces en la Ciencia, la mayor exactitud en esta operacin y en la posterior interpretacin de los cromatogramas se paga con una mayor laboriosidad en las mismas. El mtodo de calibrado absoluto es el ms sencillo, pero menos exacto y ms delicado en su realizacin y utilizacin posterior. Se lleva a cabo introduciendo en el cromatgrafo mezclas de calibrado, en proporciones conocidas, de los compuestos que contiene el problema que posteriormente se vaya a analizar. Los componentes se reconocen cuantitativamente por sus tiempos de retencin, y se anotan las alturas de pico a que dan lugar distintas proporciones de los mismos. Obtenidos los datos, se realizarn curvas de calibrado representando alturas de pico frente a concentraciones porcentuales en moles, peso o volumen.
37
Se sugiere efectuar ms de un calibrado si las muestras contienen varios componentes a diferentes porcentajes conocidos. Por ejemplo, para tres componentes es conveniente llegar a una representacin como la de la FIG. 4
FIG. 4 Calibrado de una mezcla de tres componentes mayoritarios.
Las condiciones que han de cumplir los ensayos de calibrado para que puedan utilizarse con xito en la interpretacin posterior de los cromatogramas analticos que se obtengan, son: Igual volumen de muestra en el calibrado y en los ensayos analticos Comprobacin frecuente del calibrado ( se suele hacer una vez por semana) Las mezclas de calibrado deben contener todos los componentes que cabe esperar en las mezclas problema. Generalmente, basta con que se encuentren los mayoritarios. Tanto en los ensayos de calibrado como en los analticos se debern controlar con el mayor cuidado la igualdad y constancia de las condiciones operativas (temperatura, caudales, etc.)
El mtodo de calibrado relativo o por patrn interno se efecta por comparacin de las reas, de los picos resultantes, entre los componentes del problema y una cantidad conocida de un compuesto puro, denominado patrn interno.
38
Para realizar el calibrado se siguen las siguientes etapas: a) Se eligen columnas y condiciones de operacin adecuadas al anlisis que se va a realizar. b) Se realiza un ensayo cromatogrfico previo, aproximativo, de la muestra a analizar, interpretando el cromatograma resultante de acuerdo con la ecuacin:
%i
Si 100 Si
(24)
c) Se preparan varias muestras de calibrado con la misma sustancias que el problema en cantidades conocidas y proporciones semejantes a las estimadas en b) d) Se aade a cada muestra una cantidad conocida, Mp, del patrn elegido, tal que su pico tenga un rea intermedia a las determinadas en b) e) Se realizan varios cromatogramas de cada muestra. f) Se calcula el factor, para cada cromatograma de cada muestra, de acuerdo con la ecuacin:
f ijk =
Mi Sp M p Si
(25)
indicando i el componente, j la muestra y k el cromatograma; p se refiere al componente elegido como patrn interno.
FIG. .5 Grfica de calibrado por patrn interno.
g) Se calcula el valor medio de los factores obtenidos relativos a cada componente, y este valor medio ser cada uno de los factores de
39
calibrado aplicable a las ecuaciones (31) y (32) para la interpretacin posterior de los cromatogramas, de la cual se obtendrn valores ms exactos de %i que los estimados en b). Se pueden realizar calibrados para diferentes valores de Mi/Mp. En el caso de que la representacin sea recta, esto se simplifica an ms por el hecho de que el factor sea constante e igual, de acuerdo con la ecuacin (25), a la pendiente de dicha recta. Las condiciones que debe cumplir una sustancia para servir como patrn interno son las siguientes: - No encontrarse en el problema que se desea analizar. - Tener similitud con los componentes del problema. - Proporcionar, en s y con el problema, picos bien resueltos y de buena forma. - Eluir en un tiempo cercano al de los componentes el problema. Este tipo de calibrado, que proporciona la interpretacin posterior ms exacta, requiere buena resolucin en los cromatogramas, por lo que se suele aplicar a mezclas sencillas. Un mtodo de calibrado menos complicado, y tambin menos exacto, es el de normalizacin interna, en el que unos componentes actan como patrones de los dems, por lo que no se requiere aadir ninguna sustancia ajena al problema. Para realizar el calibrado siguiendo este mtodo se seguirn los pasos siguientes: a) se eligen columnas y condiciones de operacin adecuadas al anlisis que se desea realizar. b) Se realiza un ensayo cromatogrfico previo aproximativo de la muestra problema, igual que en b), el mtodo anterior, estimndose, de forma similar, los %i. c) Se preparan varias muestras como en c) del mtodo anterior. d) Sin aadir sustancia alguna, se realizan varios cromatogramas de las muestras de calibrado preparadas. e) Se calcula el factor, para cada cromatograma de cada muestra, de acuerdo con la ecuacin:
40
f ijk =
Mi S M Si
(26)
f) Se calculan los valores medios de los factores obtenidos, uno para cada componente. Estos valores medios sern los factores aplicables a la ecuacin(30) en la interpretacin posterior de cromatogramas, de la que resultarn valores ms exactos que los obtenidos en b). Tanto el mtodo de patrn interno como el de normalizacin interna presentan la ventaja de que no requieren como dato el valor exacto del tamao de la muestra lleva a anlisis. En ambos mtodos, los ensayos de calibrado deben efectuarse en el mismo da y en iguales condiciones experimentales que las determinaciones analticas, pues, en caso contrario, se introducen errores considerables.
INTERPRETACION CUANTITATIVA DEL CROMATOGRAMA
Si la seal del detector fuera siempre igualmente proporcional a la cantidad o concentracin de todos y cada uno de los componente, o dependiese de parmetros moleculares sencillos, la interpretacin cuantitativa del cromatograma sera sencilla. En la realidad ocurre que, aun en los casos de respuesta proporcional, la proporcionalidad es diferente para distintos componentes, por lo que es preciso efectuar correcciones a la manifestacin grfica de la seal (altura o rea de pico) para poder conocer correctamente las cantidades realmente presentes en una muestra problema. Se puede decir que la interpretacin cuantitativa de un cromatograma obtenido consiste en transformarlo en otro que indique realmente las cantidades o proporciones de los componentes en la muestra. Como parmetro de pico pueden utilizarse la altura o el rea del mismo, segn los casos. El uso de la altura de pico presenta como ventaja la comodidad de medida, pero solamente proporciona una exactitud aceptable en el caso de mezclas sencillas de pocos componentes que den lugar a picos agudos, estrechos y claramente separados. Adems, la altura de pico es muy sensible a variaciones en las condiciones de operacin, por lo que el uso de este parmetro exige un control cuidadossimo de dichas condiciones. Las medidas de altura de pico son interesantes para los anlisis de rutina, en los que se puede sacrificar algo de la exactitud a favor de la sencillez y rapidez de las determinaciones.
41
Generalmente, para las determinaciones segn la altura de los picos se suele utilizar el calibrado absoluto, por el cual se habrn obtenido previamente curvas de calibrado, como se vio, de las que se har uso para interpretar los cromatogramas que se obtengan. Los ensayos de anlisis deben cumplir las condiciones que se indicaron al tratar de este mtodo de calibrado. El uso, como parmetro grfico, del rea de pico es ms acertado cuando se requiere mayor exactitud en las determinaciones cuantitativas. Se ha visto cmo el rea de pico es funcin de la cantidad de componente o de la concentracin del mismo. En el caso ideal de que la proporcionalidad, entre seal y cantidad o concentracin, fuese la misma para todos los componentes de una muestra, el porcentaje en peso de un componente vendra dado por la ecuacin:
%I =
SI 100 SI
(27)
pero como se ha dicho esto raramente ocurre. Para interpretar cuantitativamente el cromatograma se requiere un calibrado del cromatgrafo que permita conocer la relacin real que, para cada componente, existe entre el rea de pico y la cantidad de componente presente en una muestra , de forma que todos los picos, adecuadamente corregidos sean comparables. El calibrado, se ha visto en el apartado anterior; proporciona una curva de calibrado, en la que se pueden hacer lecturas directas, o bien unos factores de calibrado que se pueden definir como la razn existente entre el rea de pico que resultara si la proporcionalidad fuese la misma para todos los componentes y el rea de pico que realmente se obtiene en el cromatograma:
fi =
S i Si
(28)
Siendo S el rea corregida. En realidad, la ecuacin (27) ser correcta si se establecen las reas corregidas:
%i =
S i 100 Si
(29)
Introduciendo en la ecuacin (29) los factores de calibrado definidos en la ecuacin (28) se obtiene:
%i =
f i S i 100 f i Si
(30)
que se utilizar para la interpretacin cuantitativa de los cromatogramas.
42
Los factores de correccin a utilizar en la ecuacin (30) pueden proceder de distintos orgenes. La posibilidad mas sencilla est en suponer que los factores son iguales a la unidad, pero utilizando moles en vez de pesos. Slo tiene valor para una estimacin rudimentaria de la composicin. Se utiliza, a veces, como tanteo previo a una elaboracin posterior de los datos que sea mas correcta. Como mtodo aproximativo rpido puede utilizarse el inverso de la respuesta relativa, comentada anteriormente como factor para la correccin de reas. El producto del rea del pico de un componente por el inverso de la respuesta relativa se llama rea relativa de pico. Cuando se utiliza un detector de ionizacin por flama de hidrgeno, la multiplicacin de las reas de pico por los valores correspondientes del factor de carbono, ya definido, proporciona resultados relativamente buenos en la interpretacin cuantitativa de los cromatogramas. Es conveniente realizar posteriormente un calibrado, basado en las reas corregidas, para obtener resultados ms exactos. Cuando el calibrado se hace por el mtodo de normalizacin interna, se obtienen factores de calibrado que se utilizan en la ecuacin (30) para obtener los porcentajes en peso de los componentes del problema. Cumpliendo las especificaciones hechas para este mtodo se determinan con posiciones con errores relativos inferiores al 10 por 100 . El calibrado por el mtodo de patrn interno elimina la influencia de factores exteriores, ya que los resultados quedan referidos a una sustancia patrn , que estar influida por dichos factores en igual medida que los componentes del problema. En este mtodo no se puede utilizar la ecuacin (30) , para interpretar los cromatogramas, debido a la intervencin y presencia de la sustancia patrn. Se obtienen los pesos desconocidos de los componentes, de acuerdo con la ecuacin:
M i = f i
Si Sp
(31) en la ecuacin (3l) a la
y los porcentajes en peso aplicando los obtenidos ecuacin:
%i =
Mi Mi
32
43
Siguiendo este mtodo de calibrado, dentro de sus especificaciones caractersticas, se pueden realizar determinaciones cuantitativas con errores relativos por debajo del 3 por ciento. Se exige en este mtodo, que la resolucin sea muy buena, por lo que suele aplicarse al anlisis de muestras sencillas. Aun pecando de reiterativos, se debe tener siempre en cuenta que, tanto en el calibrado por patrn como en el de normalizacin interna, las determinaciones deben hacerse en el mismo da y bajo las mismas condiciones experimentales que el calibrado, pues en caso contrario se da lugar a errores de importancia. Sobre los distintos mtodos a utilizar en la determinacin cuantitativa de los componentes de una mezcla por interpretacin de cromatograma, as como sobre mtodos de calibrado, es muy interesante el trabajo de Keulemans y col.3, en el que se discuten posibilidades y diversos criterios a seguir.
CROMATOGRAFA DE GASES UNA APLICACIN DEL ANALISIS CUANTITATIVO

Se basa en el hecho de que la cantidad de determinada sustancia es directamente proporcional al rea del pico obtenido en el cromatograma y que corresponde a dicha substancia. Se debe encontrar entonces el valor del rea del pico y un factor de proporcionalidad que nos permita determinar la concentracin. Existen varios mtodos para calcular el rea de los picos, siendo los ms empleados los directos que usan un sistema electrnico o electromecnico para efectuar la integracin del pico. Se puede efectuar esta integracin manualmente usando un planmetro. El mtodo manual ms aceptado es el de triangulacin, en que se asemeja el pico a un tringulo y se halla su rea multiplicando la altura del pico por su ancho a media altura: Ai = h x Wh (23) Se debe hacer notar que el rea as obtenida no corresponde exactamente al tringulo formado por el pico, y se puede comprobar que para un pico de forma gaussiana perfecta: Ai = 0.94 At En que Ai corresponde al rea encontrada por el mtodo anterior y At el rea verdadera del tringulo. Se puede emplear el mtodo de triangulacin con las siguientes restricciones: a) Si se aplica el mtodo de triangulacin, se debe emplear este mtodo en todos los picos del cromatograma; el rea obtenida por este mtodo no puede relacionarse directamente por integracin. b) En el caso de picos asimtricos el rea obtenida por triangulacin no puede relacionarse con el rea obtenida para picos asimtricos. c) En el caso de picos no resueltos no se aconseja el empleo de este mtodo sino con curvas de calibracin o con un patrn interno. Una vez obtenida el rea del pico se debe calculara el rea relativa de cada pico en base a la siguiente frmula: Ax Ax (%) = ----- x 100 Ai
44
En que Ax(%) representa el rea relativa porcentual del componente xy Ai=A1 +A2+A3+....An. De este clculo se obtienen reas relativas porcentuales que estn relacionadas pero no siempre son iguales a la concentracin de los componentes de la mezcla. Cuando la mezcla contiene compuestos similares con diferencias muy pequeas de pesos moleculares siendo estos elevados se puede tomar el rea relativa como el Porcentaje en peso de los componentes de la mezcla. En el caso de componentes muy diferentes o con un rango de pesos moleculares muy grandes se debe aplicar un factor de correccin. De la relacin anterior podemos deducir que: %X = Fx.Ax(%)
En que Fx representa el factor de correccin. Este factor depende tanto de la naturaleza qumica de la muestra como del detector empleado. Para el caso ms sencillo supongamos que la muestra tenga nicamente dos componentes: Sabemos que: % X1 = Fx1 . Ax1(%) y % X2 = Fx2 . Ax2(%) dividiendo miembro a miembro obtendremos: % X1 ---% X2 Fx1 . Ax1(%) = ----------Fx2 . Ax2(%)
Si le asignamos a Fx1 un valor arbitrario de 1, tendremos que: Ax1(%).%X2 Fx2 = -------------Ax2(%).%X1 Se puede preparar una mezcla de concentraciones conocidas de los dos compuestos y determinar el valor del factor. En general los anlisis van a incluir ms de dos componentes; damos a continuacin dos ejemplos de clculo de factores de respuesta, el primero para el clculo de respuesta relativa molar con detector de ionizacin por llama, y el segundo para respuesta relativa para pesos iguales con detector de conductividad trmica.
Valores de respuesta relativa molar. Se analiza una muestra que en el presente caso corresponde a una mezcla de hidrocarburos, de composicin conocida y que incluya todos los compuestos que contendr la muestra. Se determinan las reas del cromatograma y se toma uno de los compuestos como base (en el presente caso se tom el n-heptano =700). La siguiente tabla da los valores obtenidos:
Peso molecular
Compuesto
% peso
Area
Area Respuesta para un relativa mol molar
45
86.172 100.198 100.198 98.182 78.108
3-metil pentano n-heptano 2,2 dimetil pentano Metilciclo-hexano Benceno
23.15 21.22 18.36 16.50 20.77
1830 1614 1424 1202 1769
6812 7621 7771 7152 6652
626 700 714 657 611
Ejemplo de clculo: para el metil-ciclohexano. Area para 16.50 mgr = 1202 Area para un mol (98.182 mgr) = 1202 x 98, 182/16.50 = 7152 Respuesta relativa molar = 7152 x 700/7621 = 657 Valores de respuesta para pesos iguales. Se analiz una muestra de cuatro componentes conociendo el % en peso y sabiendo que son las substancias que se esperan en la muestra problema. Se miden las reas y luego se calcula el rea para pesos iguales (25%) asignando un valor arbitrario a uno de ellos (en el ejemplo se asign un valor de 100 para el benceno). Composicin % 18.25 30.45 40.05 11.25 Area obtenida 3680 3622 1454 998 Area para pesos Factor de iguales respuesta 5041 100 2974 59 908 18 2218 44
Compuesto Benceno n-butanol Acetato de metilo Acetona
Ejemplo de clculo: para el n-butanol: Area para 30.45% = 3622 Area para 25% = 25.0 x 3622/30.45 = 2974 Respuesta relativa = 2974 x 100/5041 = 59 Los factores de respuesta as encontrados permiten calcular los valores reales de concentracin a partir de valores del rea de los picos. Se debe primero calcular las reas reducidas que son: Ar(i) = A(i)/Fi El rea reducida ser entonces el rea encontrada, divida por el factor de respuesta para el componente. Para encontrar la concentracin % de un componente en particular basta dividir su rea reducida por la suma de todas las reas reducidas y multiplicar por 100 i.e.
Ax/Fx Cx(%) =-------- x 100 Ai/Fi El siguiente ejemplo servir para aclarar los clculos. Se trata de una mezcla de cidos analticos con un detector de ionizacin por llama, los factores de respuesta relativa para pesos iguales han sido encontrados previamente siguiendo los mismos pasos indicados anteriormente. La tabla de valores es la siguiente: Compuesto rea F.(pesos iguales) Area reducida Conc. % peso
46
Ac. Actico Ac. Propinico Ac. Butlico Ac. Enntico Ac. Caprlico Suma de reas reducidas
1204 1627 1668 3104 3068
48 69 86 100 103
x 100 2508 2358 1939 3104 2979 12888
19.46 18.30 15.50 24.08 23.11 100.00
Ejemplo de clculo para el ac. Butlico: Area obtenida = 1668 Factor de respuesta pesos iguales = 86 Area reducida x 100 = 1668 x 100/86 = 1939 Suma de reas reducidas = 12888 939 x 100 Concentracin (% peso) = ------------ = 15.05% 12888 En la literatura se encontrarn otros factores que debido a las denominaciones pueden presentar confusiones. Sensibilidad relativa Es igual a la respuesta relativa para un detector de ionizacin por llama tomando como referencia el valor de 1.00 para el n-heptano y en base a pesos iguales.
Respuesta trmica es igual a la respuesta relativa molar para un detector de conductividad trmica tomando como referencia el valor de 100 para el benceno.
Factor de peso (weight factor) es igual al recproco de la respuesta relativa de un detector de conductividad trmica en base a pesos iguales; se toma el valor de referencia de 0.70 para el nheptano. Al calcular el rea relativa se debe multiplicar por estos factores el rea original. Al emplear los factores de respuesta hallados en el laboratorio o en la literatura se pueden presentar varios problemas. En primer lugar se tiene el rango de concentraciones, si se tiene una muestra con un componente en muy baja concentracin y otro a alta concentracin, se debe estar seguro que la respuesta del detector sea linear incluso a altas concentraciones. En caso de no poder disminuir el tamao de la muestra es posible que se est trabajando el detector en zona no linear, y los factores de respuesta no son vlidos. Se debe recurrir al mtodo de adicin de un patrn interno que se explica ms adelante. El segundo problema es de determinar si los factores de respuesta obtenidos en un instrumento son aplicables a otro. Se admite que los factores de respuesta para detectores de conductividad trmica s pueden aplicarse a instrumentos con caractersticas similares, en tanto que es necesario emplear los factores de respuesta para ionizacin por llama solamente despus de haber comprobado la validez de los mismos en el instrumento en que se efectuarn los anlisis. El tercer problema que se presenta se refiere a detectores de ionizacin por llama. Se ha dicho que estos detectores no dan respuesta para el agua y gases inorgnicos; pero si la substancia a analizar aparece simultneamente con la substancia no detectada se producir de todos modos un cambio en la caracterstica de respuesta del detector no pudiendo aplicarse factores de respuesta. Tambin en este mtodo se debe recurrir al empleo de patrn interno.
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Empleo de un patrn interno. Es el mtodo ms empleado para anlisis cuantitativo por Cromatografa de gases. Sus principales ventajas son que al fijar la concentracin del patrn interno se pueden establecer grficas de la relacin de reas de los picos de las substancias vs. El pico del patrn y la concentracin de las substancias a analizar.
La mejor descripcin del mtodo lo dar el siguiente ejemplo: Se trata de determinar el contenido de pequeas concentraciones de ter isoproplico en agua hasta un rango de 100 ppm. Se escoge como patrn interno el alcohol isoproplico de tal manera que su concentracin en la muestra sea siempre constante e igual a 50 ppm (vol./vol.). Primero se prepara una solucin de 5 mL de alcohol isoproplico y se diluye a 100 en un matraz volumtrico con agua destilada, se toman 10 mL y se llevan nuevamente a 100 mL con agua destilada. Esta solucin contiene 0.5 mL de alcohol isoproplico en 100 mL de agua o 5000 ppm (vol./vol.). Se preparan soluciones de ter isoproplico con un rango de concentraciones de 0 a 100 ppm vol./vol. Las soluciones se preparan en frascos volumtricos de 100 mL y antes de aforar se agrega a cada frasco exactamente 1 mL de la solucin de 5000 ppm de alcohol isoproplico de forma tal que cada frasco contenga 50 ppm de la solucin. Se efecta el anlisis de cada muestra con un detector de ionizacin por llama y los resultados se pueden apreciar en la tabla siguiente:
Concentraciones (ppm) ETER ALCOHOL 25 50 50 50 75 50 100 50
Areas ETER 340 653 958 1251
ALCOHOL 590 565 552 543
Rel. de reas ter/alcohol 0.576 1.156 1.735 2.304
Se grafican los valores de relacin de reas vs. Concentracin de ter y se obtiene la figura:
10080604020 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 * * *
REA DEL ALCOHOL ISOPROPILICO-AREA DEL ETER ISOPROPILICO

Para anlisis de una muestra desconocida se toman aproximadamente 50 mL, de la muestra, se pasan a un baln aforado de 100 mL, se agrega 1 mL de la solucin de 5000 ppm de alcohol y se diluye a la marca. (No es necesario conocer el volumen inicial de la muestra ya que el agua no aparece en el cromatograma; en caso de tener una muestra con otros componentes que s aparecen en el cromatograma es necesario conocer exactamente el volumen inicial). Se toma la
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muestra necesaria para el cromatgrafo y se analiza en las mismas condiciones que las empleadas para obtener la grfica anterior. Se obtuvieron: Area del alcohol = 572 Area del ter = 538 Relacin de reas = 538/532 = 0.94 De acuerdo con la grfica la concentracin de ter corresponde a 40.5 ppm. El mtodo de patrn interno tiene varias ventajas: a) Solo se requiere un anlisis. b) No se necesita determinar factores de respuesta. c) Al ser un mtodo relativo no se necesita reproducir exactamente las condiciones analticas. Para recoger el patrn interno se deben seguir las siguientes recomendaciones: a) El pico del patrn debe encontrarse prximo al pico de la substancia a analizar y completamente separado de ella. b) La concentracin del patrn interno se debe escoger de tal manera que no sea necesario cambiar atenuacin. c) Se pueden emplear dos o ms patrones internos. d) Se debe cubrir todos los rangos de concentracin esperados al preparar la grfica: no se puede extrapolar. e) El patrn debe tener estabilidad qumica y trmica para las condiciones de anlisis, su composicin debe ser semejante a la substancia a analizar Se puede emplear un solo patrn para determinar la composicin de ms de una substancia en el cromatograma, para lo cual ser necesario preparar una grfica por cada substancia a analizar.
ANALISIS CUALITATIVO Y CUANTITATIVO RESUMEN
ANALISIS CUALITATIVO METODO DIRECTO Agregar a la muestra compuestos puros cuya presencia se sospeche. Efectuar a distintas condiciones de temperatura y columna.
METODO GRAFICO Usar grficas en las cuales se tiene datos de retencin en funcin de propiedades fsicas o qumicas de series homlogas. INDICES Usar retenciones relativas a substancias patrones o el mtodo de Kovats.
ANALISIS CUANTITATIVO AREA. Usar integradores mecnicos, electromecnicos o electrnico. Triangulacin para picos simtricos. Tambin recortando y pesando picos.
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FACTORES DE PROPORCIONALIDAD. No son necesarios para substancias semejantes con poca diferencia de pesos moleculares y peso molcula elevado.
Respuesta relativa molar relaciona las reas para 1 mol de cada componente. Determina % molar. Respuesta para pesos iguales relaciona reas para pesos iguales. Da % en peso. Patrn interno se debe usar cuando hay diferencias muy grandes en concentracin de los componente o interferencias de fondo (agua en detectores de ionizacin por llama).
PROGRAMACION DE TEMPERATURA.
Para efectuar un cromatograma de una muestra con substancias con puntos de ebullicin o pesos moleculares muy diferentes se tendr dificultades al operar la columna isotrmicamente; por una parte si la columna est a una temperatura suficientemente baja como para separar los primeros componente, la aparicin de los ltimos componentes corresponder a un tiempo de retencin muy grande. Por otra parte, si se eleva la temperatura para obtener los ltimos componentes en un tiempo razonable no se obtendr separacin para los primeros componentes. La solucin est en una la temperatura baja para separar los componente iniciales y luego aumentar la temperatura para permitir la aparicin de los ltimos componentes en un tiempo corto.
Se conoce como Temperatura Inicial la temperatura inferior o de partida. Tiempo Inicial el tiempo durante el cual la temperatura inicial permanecer fija. Velocidad de Programacin o ms propiamente el cambio de temperatura por unidad de tiempo ser la pendiente temperatura/tiempo, generalmente dada en C/minuto. Temperatura Final ser la temperatura superior hasta la cual llegue el programa; en algunos cromatgrafos se tiene tambin el Tiempo Final que representa el tiempo durante el cual la temperatura final permanece estable.
BIBLIOGRAFA: 1.- J. M. Storch de Gracia, FUNDAMENTOS DE LA CROMATOGRAFA DE GASES, Primera Edicin, Editorial Alhambra, S. A., Madrid, Espaa, 1968. 2.- Fecsok, Shields, Cairns, McWilliam, MODERN METHODS OF CHEMICAL ANALYSIS, Segunda Edicin, Editorial John Wiley & Sons, New York, 1968. 3.- Hobart H. Eillard, Lynne L. Merritt, Jr., John A. Dean, Frank A. Settle, Jr., INSTRUMENTAL METHODS OF ANALYSIS, Sptima Edicin, Editorial, Belmont, California, 1988. 4.- Henry H. Bauer, Gary D. Christian, James E. OReilly, INSTRUMENTAL ANALYSIS, Primera Edicin, Allyn and Bacon, Inc., Toronto, 1978. 5.- Gary C. Christian, QUIMICA ANALTICA, Segunda Edicin, Editorial Limusa, Mxico, 1981. 6.- Dennis G. Peters, John M. Hayes, and Gary M. Hieftje, CHEMICAL SEPARATIONS AND MEASUREMENTES, Theory and Practice of Analytical Chemistri., Ed. Saunder Golden Series, Toronto, 1974.
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Q. Diana Mendoza Olivares. Q. Fernando de Jess Amzquita L.

Diana Mendoza Olivares

Q. Diana Mendoza Olivares. Q. Fernando de Jess Amzquita L. Cromatografa de Gases

LA CROMATOGRAFA ES UN METODO DE SEPARACION EN EL QUE

COMPONENTES A DESGLOSAR SE DISTRIBUYEN ENTRE DOS FASES, UNA DE LAS CUALES

Q. Diana Mendoza Olivares. Q. Fernando de Jess Amzquita L. Cromatografa de Gases

1890: D.T. DAY

1931: KULN Y LEDERER cromatogrficas. 1941 MARTIN Y SYNGE

Esbozan la idea de Cromatografa de Gases.

1955: EVANS Y TATLOW

1958: Sthal 1958: GOLAY

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SECCION DE UNA COLUMNA CROMATOGRAFICA.

Fraccin del tiempo que paso en la fase movil =

No. de molculas en la fase mvil No. total de moleculas

k es una nueva variable llamada: Factor de capacidad y es igual a: VELOCIDAD DE RECORRIDO:

longitud L = (1 + k ' ) = t M (1 + k ' ) velocidad u

tM = tiempo requerido para arrastrar una molcula en la columna transversal.

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VOLUMEN DE RETENCIN (vr).

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Hay dos formas de incrementar el nmero de platos tericos en una columna:

n = platos tericos. tr = tiempo de retencin. W = anchura del pico en la base.

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* ALTURA DE PLATO TEORICO (H).

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Contribucin de sendas + diferentes. (difusin turbulenta) masa)

Contribucin de la difusin a lo + largo de la columna (difusin longitudinal)

contribucin de no equilibrio (Transferencia de

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Fig. 4 Mediciones usadas en el calculo de resolucin de dos picos.

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gran trayectoria: para trabajos componente a nivel de estrato.

donde F es la velocidad de flujo del gas de arrastre (ml/min).

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El volumen de retencin corregido, a presin de columna promedio:

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si VS es constante; ln K = lnVN + ( c )1 = ln VR + ( c )2 = ln tR + ( c )3 o ms preciso:

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estacionaria, entonces encontramos que K presin de vapor saturado.

log K - log p n n log tR = An + B

SELECCIN DEL SOPORTE SOLIDO

Las caractersticas son:

Los ms utilizados son:

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partculas ms duras y menos rompimiento en el manejo.

CROMOSORB TRATADO CON DIMETIL CLOROSILANO (DMCS).

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Var A port30 y CROMOSORB W de alta resolucin:

CARACTERISTICAS DE LA FASE ESTACIONARIA LIQUIDA

VISCOSIDAD. No deber ser muy alta a la temperatura de operacin.

Deber ser mnima, para no provocar su paso a la fase mvil.

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REVERSIBILIDAD DEL REPARTO.

El reparto de cada componente entre las

fases deber ser reversible.

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r = distancia entre polos.

donde a son las polarizabilidades respectivas.