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Consideraes iniciais
Programa
1 Parte Introduo ao Metabolismo - Fluxo de energia no mundo biolgico - Ciclo da matria 2 Parte Estudo das principais vias metablicas, quer catablicas que anablicas - Metabolismo dos hidratos de carbono; gliclise, ciclo de Krebs, fosforilao oxidativa; - Metabolismo das gorduras: degradao e sntese de cidos gordos - Metabolismo dos aminocidos: ciclo da ureia e ciclo da glutamina - Metabolismo das protenas: protelise intracelular extralisossmica 3 Parte Integrao metablica e unidireccionalidade das vias metablicas - Padres do metabolismo energtico nos tecidos animais Quanto ao metabolismo dos hidratos te carbono, vo estudar-se vias anablicas e catablicas. O metabolismo dos hidratos de carbono inclui muita coisa. Relativamente aos aminocidos e s protenas, vai estudar-se mais o catabolismo. O anabolismo de protenas estudado na Biologia Molecular. A degradao de muitos compostos, incluindo protenas, d-se nos lisossomas, mas uma outra via de catabolismo das protenas extralisossmica e d-se com intermdio da ubiquitina. O metabolismo constitudo por muitas reaces, anablicas e catablicas, relacionadas. O que interessa no metabolismo estud-lo em termos bioenergticos e conhecer as vias metablicas centrais. As vias centrais so a gliclise e o ciclo de Krebs. Tem de se conhecer as vias e outro aspecto importante a regulao. Tudo tem de ser regulado, tudo tem de estar em equilbrio dinmico, em homeostase ou homeostasia. importante estudar tambm a compartimentao celular.
- Potenciais redox
Objectivo da disciplina
Evidenciar as vias metablicas centrais no que respeita a: 1. Transformaes que nelas ocorrem 2. Sua interrelao 3. Rendimento energtico 4. Regulao 5. Compartimentao celular Procura-se ter uma viso global.
Introduo ao Metabolismo
Metabolismo
Metabolismo, anabolismo e catabolismo Metabolismo a cincia que estuda os processos de sntese e degradao de biomolculas. Os primeiros constituem o anabolismo, e os segundos o catabolismo, sendo a primeira a via biossinttica e a segunda a degradativa. O Metabolismo constitudo por reaces: o metabolismo biossinttico tem reaces anablicas e o metabolismo degratativo tem reaces catablicas. As primeiras requerem energia e as outras libertam energia, de que as outras precisam. No metabolismo h uma transduo de energia, estando em jogo energia qumica. Relao entre metabolismo e anabolismo O anabolismo e o catabolismo so processos opostos que ocorrem nas clulas dos seres vivos e, embora divergentes, esto interrelacionados. Estes processos, apesar de serem opostos, no so independentes. As coisas esto interrelacionadas, podendo os produtos do catabolismo constituir substratos da outra forma. O anabolismo e o catabolismo so processos opostos e isto parece um conflito que no ocorreria em simultneo nas clulas mas, na verdade, ocorre. As vias metablicas, quer catablicas que anablicas, tm regulao independente e, muitas vezes, as vias de regulao esto em compartimentos celulares diferentes. O local onde ocorre cada uma das vias , de um modo geral, diferente. Transduo de energia no metabolismo As protenas, hidratos de carbono e outros compostos so degradados no catabolismo, dando produtos pobres em energia, como gua, Co2 e amnia. Estas reaces degradativas libertam energia que armazenada em energia qumica, numa molcula, o ATP. H transduo de energia, na medida em que ela passa de uma forma para outra. O NADH e o NADPH so molculas importantes, formadas tambm no catabolismo. O anabolismo, o processo biossinttico que requer energia, forma protenas e hidratos de carbono, entre outros compostos, e a energia que estas reaces requerem fornecida pelo ATP formado no catabolismo. O anabolismo e o catabolismo no so processos independentes, relacionandose.
A fotossntese um processo anaerbio que requer energia, que provm da luz. A segunda etapa do fluxo de energia biolgica a fermentao e a respirao. Esta ltima ocorre se houver oxignio e os seres que a praticam so aerbios e heterotrficos. Eles vo utilizar as molculas orgnicas e degrad-las, por oxidao, resultando, desse processo, CO2 e gua, e havendo, tambm, libertao de energia. A equao vem: C6H12O6 + 6 O2 6 CO2 + 6 H2O G0 = 686 Kcal
Os seres anaerbios (ou anaerbicos) no requerem oxignio e, na sua ausncia, fazem fermentao, em que a glucose convertida em cido lcteo. Os vrios tipos de trabalho biolgico consomem a energia produzida, isto , os vrios tipos de trabalho requerem a energia libertada na respirao e na fermentao. O trabalho qumico anablico (catablico), correspondendo biossntese (Relativamente ao trabalho qumico, ele corresponde biossntese). Os organismos elaboram molculas complexas, macromolculas, a partir de molculas precursoras. As protenas so macromolculas formadas por aminocidos ligados por ligaes peptdicas. Outras molculas so os cidos nuclicos, formados por nucletidos, e os polissacardeos, formados por acares simples. O trabalho osmtico relativo ao transporte activo; as ATPases, por exemplo, obtm energia por degradao de ATP. O trabalho mecnico corresponde contractibilidade e motilidade e requer energia. O trabalho mecnico requer energia; o msculo, para contrair, requer energia. O anabolismo e o catabolismo, a biossntese e a degradao, coocorrem na clula, num steady state, um equilbrio. Os processos tm de ser regulados, para que haja homeostase. A regulao muito importante, para no haver desperdcios. Como foi referido, o fluxo de energia no mundo biolgico no tem retoma, unidireccional; parte da energia perde-se, havendo perdas em cada nvel. A energia luminosa, a fonte primria bsica, tem um alto nvel de energia mas, sucessivamente, nesse fluxo, a energia vai-se perdendo. A energia luminosa convertida em energia qumica e esta utilizada para produzir trabalho, mas nem toda a energia qumica sofre essa transformao, havendo sempre uma dissipao e sendo, o fluxo, unidireccional. Parte da energia contribui para o aumento da entropia.
3.2. Ciclo do nitrognio H tambm um ciclo de nitrognio. Como h plantas que fixam CO2, h organismos, bactrias, que fixam nitrognio e, no processo, o N2 reduzido a amnia (NH3). Os organismos que fazem assimilao do nitrato tambm _______________. Ocorre em bactrias, por exemplo, e, neste processo, NO3- reduzido para formar NH4+. H, assim, duas formas de a formar. A NH4+ pode ser usada no consumo por animais, para se produzir aminocidos, e isto reversvel, originando os aminocidos, NH4+. As bactrias nitrificantes formam nitratos a partir da NH4+, oxidando-a. As bactrias desnitrificantes convertem NO3- em N2, e essa parte do ciclo chama-se desnitrificao. Isto ocorre em anaerobiose e as bactrias usam os xidos de nitrognio, em vez de oxignio, como aceitadores de electres. Este ciclo mais complexo. 3.3. Ciclo do ATP No processo de respirao, a energia libertada com a oxidao das molculas orgnicas, que so consumidas no processo respiratrio. A energia libertada utilizada em trabalho biolgico, mas no directamente. A energia libertada na degradao das molculas orgnicas vai ser usada, aproveitada, consumida na forma de ATP. A energia utilizada no trabalho biolgico, a ltima etapa, vem do ATP. Esta a moeda energtica do Metabolismo. O ATP tem de ser hidrolisado para que se liberte a energia. As ATPases so as enzimas que hidrolisam o ATP, e os resultados da hidrlise so o ADP e o fosfato. A energia libertada na respirao vai ser utilizada na sntese ATP, que parte de ADP e fosfato. O sistema ATP-ADP tambm constitui um ciclo, englobado na fotossntese e no catabolismo. Os organismos fotossintticos, no processo de fotossntese, formam ATP, partindo de ADP e fosfato. O processo fotossinttico tambm est, por isso, relacionado com o ciclo de ATP. Os organismos heterotrficos, na respirao, produzem energia conservada no ATP. Tanto os organismos fotossintticos, no anabolismo, como os heterotrficos, no catabolismo, produzem ATP. O ATP , depois, usado no trabalho biolgico. Tudo isto, pode ver-se, est relacionado.
2. Diversidade
As vias metablicas apresentam tambm uma grande diversidade. Os organismos, para alm das vias metablicas centrais, apresentam tambm uma certa diversidade das vias, pois podem ter adquirido vias metablicas alternativas, para alm daquelas outras. Os organismos apresentam, portanto, uma diversidade metablica.
3. Catlise enzimtica
As vias metablicas so constitudas por sequncias de reaces, todas elas catalisadas por enzimas, que podem estar de vrias maneiras. Pode haver enzimas solveis no citoplasma e, se esto solveis, os substratos ligam-se a elas e os produtos (intermedirios) podem difundir-se. As reaces vo-se passando nesse meio solvel. Algumas enzimas encontram-se em complexos, pelo que os intermedirios vo passando de uma enzima para outra, sem se difundirem. Noutros casos, os complexos multienzimticos encontram-se ligados membrana e as reaces vo-se passando ao nvel desta estrutura. As membranas so uma bicamada de lpidos, pelo que pode haver difuso, mas apenas ao nvel desta estrutura.
4. Complexidade
As vias metablicas so uma sequncia longa de reaces, pelo que h uma grande complexidade nessas vias. A complexidade tem vantagens: - A multiplicidade de reaces d uma grande flexibilidade ao metabolismo; - H um aproveitamento energtico enorme. No metabolismo interessa extrair energia dos nutrientes. A energia libertada de nutrientes, incluindo a glicose, utilizada para formar ATP, e a formao desta molcula requer _______. Na
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gliclise h muita energia libertada. Se a degradao da glicose se desse numa s reaco, apenas se produziria uma molcula de ATP. A existncia de vrias etapas em que a energia conservada permite a formao de muitas molculas de ATP e, assim, um maior rendimento; - A necessidade da regulao metablica, que muito til. O metabolismo, como foi j referido, divide-se em anabolismo e catabolismo, mas um s funciona quando o outro est inibido, no se podendo degradar e sintetizar ao mesmo tempo. A necessidade de regulao torna-se mais fcil devido complexidade; - Podem ocorrer reaces termodinamicamente desfavorveis, desde que estejam acopladas a reaces termodinamicamente favorveis. A complexidade permite o acoplamento de reaces termodinamicamente favorveis que permitem reaces termodinamicamente desfavorveis. A+B G = G0 + RT log [A][B] Se G<0, a reaco espontnea. Uma reaco com variao de energia livre (G) + 5 Kcal/mol desfavorvel, enquanto uma reaco com G 8 Kcal/mol favorvel. Se as duas reaces estiverem acopladas, G pode ser 3 Kcal/mol, pelo que favorvel. C+D [C][D]
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suficiente para a formao de vrios constituintes, isto , todas as grandes molculas podem ser sintetizadas a partir de um pequeno nmero de molculas precursoras.
7. Vias anfiblicas
Algumas vias metablicas so anfiblicas, podendo servir para o catabolismo ou o anabolismo. As vias que podem servir para o catabolismo e o anabolismo tm carcter anfiblico. O ciclo de Krebs um exemplo de uma via anfiblica. Os intermedirios deste ciclo tambm podem ser precursores do catabolismo.
8. Diferenciao
Outra caracterstica das vias metablicas a sua diferenciao. H alguma diferenciao nas vias anablicas e catablicas. H sequncias nessas vias. Se as vias catablicas e anablicas fossem totalmente as mesmas, as reaces seriam reversveis e no se poderia formar ou degradar. Essas vias podem ser independentes em termos de espao e, sendo independentes, podem funcionar de maneira distinta. Um regulador, ao estimular uma via, vai inibir a outra via, e isso pode acontecer porque elas so distintas. H casos em que h reaces reversveis, mas no podem ser todas. Ou todas as reaces so distintas ou pelo menos uma , no podendo haver s reaces reversveis. Um regulador que estimule uma enzima vai regular a via. Pelo menos uma das enzimas tem de ser irreversvel. A regulao leva a que, enquanto uma via est a ser inibida, outra est a ser estimulada.
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Vai iniciar-se o estudo das vias metablicas. Analisar-se- o metabolismo dos acares, das gorduras, dos aminocidos e das protenas. Vai efectuar-se a viso global do processo, depois vo analisar-se as fases do processo e, por fim, fazer-se- uma anlise pormenorizada. Isto ser feito para as vrias vias.
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Gliclise
1. Processo global
Em termos do processo global, verifica-se que o processo de gliclise envolve duas fases. A primeira inclui reaces que formam duas molculas com 3 carbonos a partir da glicose: a dihidroxiacetonafosfato e o gliceraldedo-3-fosfato. A segunda integra reaces muito importantes, que transformam gliceraldedo-3-fosfato em piruvato. O gliceraldedo entra na segunda fase mais o outro produto, dihidroxiacetonafosfato, por isomerizao, pode originar o gliceraldedo. Assim, a segunda parte da gliclise pode ser representada uma ou duas vezes.
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concentrao de glucose diminui. Assim, pode permitir o transporte de glucose para o interior da clula, facilitando este processo. O grupo fosfato adicionado na fosforilao provm de ATP, pelo que esta reaco implica consumo de ATP e, portanto, energia. b) Isomerizao da glucose-6-fosfato a frutose-6-fosfato A segunda reaco converte glucose-6-fosfato em frutose-6-fosfato. A primeira uma aldose, mas, quando isomerizada, passa de aldose a cetose, a frutose-6-fosfato. Estes acares podem ser representados em forma linear ou em anel. A glucose-6fosfato pode formar um anel de piranose e a frutose-6-fosfato pode formar um anel de furanose. Esta reaco de isomerizao catalizada por uma isomerase. A vantagem desta isomerizao que facilita a reaco seguinte de fosforilao e a clivagem (as duas reaces seguintes). Depois da isomerizao, fica livre um grupo hidroxilo, facilmente fosforilado. Alm disso, na fase de clivagem da hexose em duas trioses, a isomerizao facilita o processo, pois o carbono C2 vai activar o carbono C3, facilitando a clivagem. A isomerizao facilita, assim, as reaces seguintes. c) Fosforilao da frutose-6-fosfato a frutose-1,6-bifosfato A frutose-6-fosfato vai ser fosforilada, formando frutose-1,6-bifosfato, com mais um grupo fosfato, que foi adicionado ao grupo OH referido. Mais uma vez, aquele grupo provm do ATP, pelo que h, mais uma vez, gasto de energia. A reaco catalizada pela fosfofrutocinase e um importante ponto de regulao, pois a enzima regulado por vrias substncias. A enzima que cataliza a reaco inibida por ATP, ficando com afinidade baixa para o substrato; sem ATP, a reaco apresenta uma velocidade maior, sendo a afinidade para o substrato maior. O ATP, ao ligar-se enzima, como agente de regulao halostrica, vai diminuir a afinidade da enzima pelo substrato. O ATP um regulado halostrico negativo. O efeito inibitrio do ATP contrabalanado pelo AMP. O ATP, o ADP e o AMP esto sempre em equilbrio na clula, pois h enzimas que os interconvertem. Se houver muito ATP, ele convertido em ADP e AMP; se o ATP for menos concentrado, formase com gasto daquelas substncias. Sendo a enzima dependente das concentraos de ATP e AMP, ela sensvel carga energtica. A enzima ainda regulada por uma substncia semelhante ao produto, a frutose-2,6-bifosfato, que um regulador halostrico positivo da enzima. Na ausncia desta substncia, a afinidade da enzima baixa, e alta na sua presena. A substncia estimula a reaco, pois aumenta a afinidade. Se houvesse simultaneamente os dois reguladores, o halostrico positivo (frutose-2,6-bifosfato), e o halostrico negativo (ATP), os efeitos anulam-se. Estas substncias tm uma aco que se neutraliza, de certo modo. Na interaco entre o ATP e a frutose-2,6-fosfato, h uma menor ou maior inibio ao estmulo, de acordo com os nveis. O efeito inibitrio do ATP menor. A enzima em causa muito importante, sendo regulada halostericamente por duas substncias e constituindo, portanto, o segundo ponto de regulao. H ainda um terceiro. a frutose-2,6-bifosfato que vai, ento, estimular a gliclise. Este composto tambm originado pela frutose-6-fosfato, mas ocorrendo antes a fosforilao na posio 2. A enzima que promove a fosforilao tem dupla funo: tem funo de cinase, provocando a fosforilao, e, funo de fosfatase, removendo o grupo fosfato. Quando h muita frutose-6-fosfato, deve ocorrer gliclise rapidamente. Se houver muita, h estimulao da formao de frutose-2,6-fosfato, que estimula a gliclise. A
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parte bifuncional, de fosfatase, inibe a gliclise. Para alm da regulao por halosterismo, a enzima que cataliza a formao de frutose-2,6-bifosfato regulada por ligao covalente (so estes os dois tipos de regulao): no estado fosforilado, a enzima funciona como fosfatase, enquanto no estado desfosforilado funciona como cinase. Uma enzima, uma protena, quando fosforilada, altera a sua forma, ficando inibida, ou activada. A enzima em causa funciona como fosfatase quando est fosforilada, ou como cinase, quanto est defosforilada. Estando desfosforilada, aumenta-se a velocidade da reaco. A regulao por ligao covalente depende tambm da glucose: se a quantidade de glucose baixa, a enzima est no estado fosforilado, pois deixa de haver frutose-2,6-bifosfato. O estado fosforilado depende da glucose; quando h pouca glicose no sangue, fica fosforilada, ficando a actuar como fosfatase, levando ao desaparecimento da frutose-2,6-bifosfatase, que estimula a gliclise. d) Clivagem da frutose-1,6-bifosfato em dihidroxiacetona e gliceraldedo-3fosfato A reaco seguinte da gliclise a clivagem da frutose-1,6-bifosfato. Continuando o processo glicoltico, h a clivagem desta molcula, uma hexose, nas duas trioses referidas: a dihidrociaxetona-fosfato, uma cetona, e o gliceraldedo-3fosfato, uma aldose. A enzima que cataliza esta reaco uma aldolase. A reaco, a clivagem, o inverso da condensao alcolica, a condensao entre uma cetona e um aldol. O gliceraldedo-fosfato que se forma entra directamente na segunda faz, mas a dihidroxiacetona no perdida. H uma isomerizao, em que a __________, converte a dihidroxiacetona em gliceraldedo-3-fosfato. 2.2. Segunda fase da gliclise Em termos gerais, a segunda fase da gliclise tem cinco reaces importantes. Inicialmente h oxidao e fosforilao: o gliceraldedo-3-fosfato oxidado e forma cido-1,3-bifosfoglicrido. Depois h transferncia de um fosfato para ADP, para formar ATP, e de seguida h um deslocamento do grupo fosfato, e o cido-3fosfoglicrido passa para cido-2-fosfoglicrido. H depois uma desidratao que forma um enol e, depois da transferncia do grupo fosfato, forma-se piruvato. Esta segunda fase da glicose inicia-se no gliceraldedo-3-fosfato, mas a dihidroxiacetona tambm pode ser convertida naquela molcula, pelo que cada molcula de glicose forma 2 moles de piruvato. Energeticamente, a segunda fase da glicose muito importante, pois nesta fase que se forma ATP (conservao de energia). H tambm formao de equivalentes de reduo, NADH, por oxidao do gliceraldedo. Este composto perde electres que tm de ser captados e, desta feita, o so para o NAD+, que reduzido a NADH. O gliceraldedo oxidado, os electres so ____ para NAD+, que reduzido, formando NADH. Os electres vm sobre a forma de ies hidreto, so captados nessa forma. A formao destes NADH muito importante. Os lpidos tm um estado de reduo superior ao dos hidratos de carbono, estes maior que o carbonil, estes maior que o carboxilo e estes maior do que o CO2. Quanto maior o potencial de reduo, mais so os electres que se podem fornecer, podendo formar mais energia. Tendo os lpidos um estado de reduo maior (muito
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grande), maior a capacidade de fornecer energia. Os lpidos, quando metabolizados, podem fornecer mais energia do que at os hidratos de carbono. e) Oxidao e fosforilao do gliceraldedo-3-fosfato a 1,3-bifosfoglicerato O NAD+ a nicotinamida ____ e o NADP+, muito importante, nomeadamente em vias anablicas (catablicas), tem mais um grupo fosfato. Os dois electres so captados em H+, formando-se um io H-, hidreto. No anabolismo participa ____ o NAPH, enquanto o NAD+ participa mais no catabolismo. No catabolismo h recepo de ies por NADP+ que passa para NADPH; no anabolismo, o NADPH oxidado a NADP+. Logo na glicolise, o NAD+ importante. A reaco em que se forma NADH duplamente importante, pois, para alm disso, h uma fosforilao, que implica uma grande conservao de energia. O gliceraldedo-3-fosfato (G3P) oxidado, mas tambm fosforilado, formando-se um acilfosfato, o 1,3-bifosfoglicerato. A enzima que cataliza esta reaco muito importante, pois provoca uma oxidao e uma fosforilao simultneas, formando-se o acetilfosfato, onde se conserva a energia. A enzima uma protena e tem um grupo SH, muito importante. O gliceraldedo-3-fosfato um aldedo e h tambm NAD+. O gliceraldedo vai ser oxidado, e, para haver catlise, vai-se ligar enzima, ao grupo SH, o grupo reactivo. A ligao forma um tioster, e estas ligaes conseguem preservar muita energia. O NAD+ passa a NADH. Nesta primeira fase, a desidrogenase muito importante. Na segunda fase entra o fosfato. A energia conservada na ligao tioster provm da oxidao. A fosforilao forma o acilfosfato, com um alto potencial energtico, onde a energia fica conservada. f) Formao do 3-fosfoglicerato a partir do 1,3-bifosfoglicerato e sntese de ATP Na segunda fase, o cido-1,3-bifosfoglicrido, vai permitir sintetizar ATP a partir de ADP. Este composto vai passar a ATP e o cido forma cido-3-fosfoglicrido (3PG). H uma conservao de energia, feita por um modo designado de fosforilao ao nvel do substrato. Este fenmeno corresponde fosforilao de gliceraldedo-3fosfato a cido-3-fosfoglicrido, sendo NAD+ reduzido a NADH e ATP formado a partir de ADP e Pi. Pode haver um desacoplamento. O arsnio um veneno e o arsenato um desacoplador da gliclise. Pode formar-se 1-arsnio-3-fosfoglicerato, em vez de cido1,3-fosfoglicrido, isto , em vez de fosfato fica l o grupo arsnio. O primeiro composto semelhante ao segundo, mas um acilarcenato, instvel, pelo que a sua energia perde-se logo e, por este motivo, o arseneto um desacoplador da gliclise. Ele permite a oxidao, mas impede a fosforilao e, portanto, mais tarde, a sntese de ATP. A energia no conservada, mas libertada. um desacoplador, no havendo conservao de energia. g) Converso de cido-3-fosfoglicrido em cido-2-fosfoglicrido Depois, o 3-fosfoglicerato forma 2-fosfoglicerato (2GP). O grupo fosforil passa de C3 para C2, e esta converso realizada pela mutase.
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h) Desidratao do cido-2-fosfoglicrido a fosfoenolpiruvato De seguida, h uma desidratao que aumenta o potencial de transferncia do grupo fosforil. O 2-fosfoglicerato um ster de fosfato e de um lcool, e isto no facilitada o processo de sntese de ATP, havendo necessidade de o transformar numa substncia capaz de transferir o grupo. O 2-fosfoglicerato forma fosfoenolpiruvato, que tem um alto potencial de transferncia, por desidratao. Esta reaco, de formao de enol, catalizada pela enolase. i) Transferncia do grupo fosforil do fosfoenolpiruvato para ADP, com sntese de ATP e piruvato Por fim h transferncia do grupo fosforil do fosfoenolpiruvato (PEP) para ADP, formando-se ATP (com participao de Pi) e piruvato. Nesta fase h o terceiro ponto de regulao da gliclise. A enzima que cataliza o processo a piruvato cinase, tambm regulada por dois mecanismos. Normalmente, como foi referido, as enzimas so correguladas de dois modos: halosterismo o regulao por ligao covalente, por ligao do grupo fosfato. A enzima em causa regulada halostericamente, no que respeita regulao alostrica positiva, por AMP e frutose1,6-fosfato. A regulao halostrica negativa feita por ATP e analina. O metabolismo um processo muito regulado e as coisas s ocorrem quando necessrio. Por isso h uma grande economia, graas aos mecanismos reguladores. No h ____ dispendiosos. Quando no h glicose, a piruvato cinase no actua, pois no h frutose-1,6-bifosfato. Quando a piruvato cinase esta fosforilada ela sofreu a aco de uma cinase; quando est desfosforilada h aco de fosfatases. O estado fosforilado depende da quantidade de glucose no sangue. Se houver baixa concentrao de glucose no sangue, activa-se o estado de cinase, para ela estar inactiva, pois ela fica menos activa no restado fosforilado.
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Fermentaes
O destino do piruvato, se no houver oxignio, a fermentao.
1. Fermentao lctea
O piruvato, produto final da gliclise, passa a lactato na fermentao lctea, uma reaco muito importante, catalisada pela lactato desidrogenase. O piruvato reduzido a lactato, recebendo, portanto, electres, vindos do NADH, que oxidado, ficando na forma NAD+. Na passagem de gliceraldedo-3-fosfato para 1,3-bifosfoglicerato, o gliceraldedo, sendo oxidado, forma NADH a partir de NAD+. Na formao de lactato, regressa-se a NAD+. A passagem de piruvato a lactato a nica fonte de NAD+ na ausncia de oxignio, uma passagem muito importante, pois s assim se mantm a gliclise. Para manter a gliclise necessrio regenerar NAD+.
2. Fermentao alcolica
Na fermentao alcolica, o piruvato descarboxilado a acetaldedo e, depois, uma desidrogenase converte-o em etanol. Esta reaco tambm regenera o NAD+.
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Ciclo de Krebs
Continuando o metabolismo, o catabolismo, da glucose, vai ver-se o destino do piruvato. Vai analisar-se o ciclo de Krebs.
1. Processo global
Na presena de oxignio, o piruvato resultante das duas fases da gliclise tem outro destino. Ele passa para a mitocndria e, na matriz, ocorre uma sequncia de reaces que continua o metabolismo: o ciclo de Krebs, ciclo dos cidos triglicridos ou ciclo do cido ctrico. Isto passa-se na matriz da mitocndria; l que ocorre a sequncia de reaces que constitui o ciclo de Krebs. Neste ciclo forma-se NADH e GTP. O NADH formado no ciclo e nas fases da gliclise est reduzido e leva electres. Estes vo ser fornecidos membrana interna da mitocndria, onde h transporte destas partculas, que vo levar sntese de ATP e, portanto, conservao de energia. A formao de acetil-Coenzima A a partir de piruvato o elo de ligao entre a gliclise e o ciclo de Krebs. A acetil-Coenzima A condensa-se com o produto final do ciclo, oxaloacetato, formando citrato, que convertido por enzimas em isocitrato. Depois h uma descarboxilao (libertao de CO2) e oxidao do isocitrato, formando-se NADH. uma descarboxilao oxidativa. O -cetoglutarato formado tambm sofre o mesmo processo, convertendo-se (neste processo) em succinilCoenzima A, e formando-se NADH. A succinil-Coenzima A permite a conservao da energia formada na oxidao. Na reaco seguinte, h formao de GTP, que pode ser convertido em ATP. No processo de conservao de energia h um mecanismo de conservao de energia na forma de ATP, pelo que o prprio ciclo de Krebs implica a sntese de ATP e a fosforilao oxidativa a nvel do substrato. Forma-s succinato, que oxidado a fumarato, indo os electres para o FAD+, formando-se FADH2. O fumarato convertido em ____ e este descarboxilado e oxidado a ____, formando-se ____ e sendo o receptor de electres ____. Formam-se, assim, vrios equivalentes de refuo.
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b) Condensao de Perkin, entre a acetil-Coenzima A e o oxaloacetato, formao de citril-Coenzima A e sua converso em citrato No ciclo de Krebs j est a acetil-Coenzima A formada. Ela vai entrar no ciclo de Krebs e formar citrato. A acetil-Coenzima A vai condensar-se com o oxaloacetato, o produto do ciclo, e a reaco, a condensao de Perkin, catalisada pela citrato sintase. A condensao forma citril-Coenzima A, que instvel, e a hidrolase do tioster converte-o em citrato. Na condensao h um ataque nucleoflico e forma-se o produto instvel, que convertido em citrato. Uma primeira forma de regulao do ciclo aparece logo aqui. Quando h muito NADH, no ocorre esta reaco. c) Isomerizao do citrato a isocitrato O citrato um lcool tercirio, difcil de oxidar e, por isso, isomerizado a isocitrato, mais fcil de sofrer aquele processo. O isocitrato uma lcool secundrio, fcil de oxidar. Nesta isomerizao, h primeiro uma desidratao catalizada pela aconitase, em que sai uma molculas de gua, formando-se o aconitato. Para se formar isocitrato, h uma rehidratao. Parece um contra-senso desidratar-se para hidrtar logo dse seguida, mas no . O fluoroacetato uma substncia perigosa. uma substncia mais ou menos inerte, mas, se for ingerida, entra no metabolismo, no ciclo de Krebs, metabolizada, e, graas a acetil-Coenzima A sintetase converte-se em fluoroacetil-Coenzima A, que a citrato sintase converte em fluorocitrato, que j perigoso, pois um inibidor potente da aconitase. A inibio desta enzima leva ao fim do ciclo. H quem compare esta substncia ao cavalo de Tria. d) Descarboxilao oxidativa do isocitrato a -cetoglutarato O isocitrato descarboxilado a -cetoglutarato. uma descarboxilao com uma oxidao, uma descarboxilao oxidativa, havendo duas reaces sucessivas. O isocitrato oxidado ( fcil de oxidar), numa reaco catalizada pela isocitrato desidrogenase (todas as oxidaes so catalizadas pelas desidrogenases), formando-se -cetocido, instvel, que sofre uma descarboxilao, tornando-se em cetocido. (Forma-se, aquando da oxidao, isocitrato desidrogenase). e) Descarboxilao oxidao do -cetoglutarato a succinil-Coenzima A O -cetoglutarato origina succinil-Coenzima A, numa reaco importante para a conservao de eneriga. A acetil-Coenzima A tem dois carbonos: um sai na reaco anterior, e o outro sai agora. A energia que se liberta via ser conservada na succinil-Coenzima A. H necessidade de Coenzima-A, que entrou e que, atravs do grupo reactivo SH, se liga, formando-se o succinil-Coenzima A, um composto rico em energia. Mais uma vez forma-se NADH, por oxidao. A reaco catalizada pela cetoglutarato desidrogenase.
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f) Formao do succinato a partir da succinil-Coenzima A e formao de GTP A energia libertada na oxidao do -cetoglutarato preservada na ligao tioster da succinil-Coenzima A. Depois, a energia vai ser conservada em GTP e, portanto, em ATP. Tambm ao nvel do ciclo de Krebs pode haver sntese desta molcula. O que interessa conservar a energia libertada no catabolismo dos hidratos de carbono. A fosforilao ao nvel do substrato, na passagem de succinil-Coenzima A a succinato permite a conservao da energia. O substrato, succinil-Coenzima A, que vai fornecer a energia para a fosforilao, convertendo-se GDP em GTP. uma fosforilao ao nvel do substrato, pois usa a energia do substrato para provocar a reaco. Nos Mamferos, o GTP pode ser convertido em ATP. No succinil-Coenzima A, a Coenzima-A deslocada, passando o succinilCoenzima A a succinil-fosfato. A Coenzima A foi libertada. O resduo de histidina da enzima que catalisa a reaco, succinil-Coenzima A sintetase, recebe o grupo fosforil de succinil-fosfato, e vai-se formar, na enzima, uma fosfohistidina. O que resta da catlise da enzima succinil-Coenzima A sintase o succiniato. A fosfohistidina vai transferir o grupo fosforil para GDP, para se formar GTP, e, no caso dos Mamferos, o GTP pode originar ATP, graas enzima nuclesideo difosfato cinase. O substrato rico em energia e essa energia que usada para se proceder fosforilao. O tioster convertido em succinil-fosfato, cujo grupo fosfato passa para a histidina da enzima, formando fosforil-histidina. Este grupo fosforil passa para o GDP, formando-se GTP, e deste passa para o ADP, formando-se ATP. g) Oxidao do succinato a fumarato O succinato vai ser depois oxidado, formando-se fumarato. Nesta oxidao o FAD que recebe os electres, passando a FADH2. Os electres no so recebidos por NAD+ porque as reaces de passagem de alcano a alceno no tm energia suficiente para o reduzir, mas apenas ao FAD+. A enzima que catalisa a passagem de succinato a fumarato a succinato desidrogenase. atravs do resduo de histidina que se d a ligao com o FAD+; o resduo de histidina estabiliza a ligao com FAD+. O FAD+ pode dar logo de seguida os electres para a cadeia respiratria e isto devido existncia de clusters, aglomerados, com ferro, importantes na captao de electres. Os electres so recebidos pelo FAD+, nos clusters, e ele fornece-os imediatamente cadeia respiratria. Isto possvel tambm porque a enzima j est ligada membrana.
+
h) Hidratao do fumarato a malato De seguida, o fumarato passa a malato, e h dois mecanismos possveis para fazer esta reaco de hidratao. Pode haver uma protonao do fumarato, entrando um proto e, depois, o OH adicionado, estando a hidratao completa. Aps a protonao, forma-se um io carbnio, positivo, e, depois, forma-se o malato. Noutro caso, pode antes haver um primeiro ataque por gua ou OH-. Forma-se um carbanio, carregado negativamente, e s depois h uma protonao. S ento se forma malato.
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Pode ento haver dois modos: primeiro protonao e depois ataque pela gua, ou primeiro ataque pela gua e depois a protonao. i) Oxidao do malato a oxaloaxtato A passagem de malato a oxaloacetato d-se por uma oxidao que reduz NAD+ a NADH, cujos electres so usados na cadeia respiratria. A reaco de oxidao, como todas, catalizada por uma desidrogenase, a malato desidrogenase Fecha-se assim o ciclo, e o oxaloactetato pode condensar-se com a acetilCoenzima A.
Coenzima A SH + 3 NADH + [FADH2] + GTP + 2 CO2 + 3 H+ A simples combusto do acetato vem: acetato + 2 O2 + H2 2 CO2 + 2 H2O
A enzima, neste ltimo passo, liberta a energia. No metabolismo, a energia no deve ser desperdiada, deve haver muito aproveitamento energtico.
4. Importncia no anabolismo
At agora abordou-se o ciclo de Krebs em termos catablicos, mas este ciclo tambm importante em termos anablicos. O ciclo de Krebs tem uma natureza anfiblica, pois tanto pode servir o catabolismo como o anabolismo. Os intermedirios do ciclo so muitas vezes precursores de aminocidos. A ornitina, a citrulina e a arginina formam-se a partir do -cetoglutarato. A partir da succinil-Coenzima A pode sintetizar-se a porfirina e o fumarato, caso seja necessrio, atravs de outro precursor pode formar aspartato e outros aminocidos. De outra precursor mais tardio, intermedirio no ciclo de Krebs, podem formar-se aminocidos aromticos. De outros intermedirios podem formar-se outros aminocidos. Todas estas snteses de aminocidos vo buscar os precursores ao ciclo de Krebs. Por reaces de transaminao, o -cetoglutarato e a alanina formam _____________________. A __________________ formam _______________________.
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5. Compartimentao
Em termos de compartimentao, importante, muitas vezes, a relao entre compartimentos da clula, no que respeita reaces. Entre a mitocndria e o citosol podem haver relaes metablicas muito importantes. O citrato, um intermedirio do ciclo de Krebs que ocorre na mitocndria, forma-se nesse compartimento. A sua membrana permevel a este composto, que pode vir para fora, para o citosol, podendo ser usado para formar oxaloacetato, numa reaco que consome energia. Este forma acetil-Coenzima A e uma liase que cataliza este processo. Esta formao de acetil-Coenzima A permitida pelo citrato que vem da mitocndria para o citosol e importante porque o composto formado pode ser usado na sntese de cidos gordos, que feita no citosol. Tudo aproveitado, e o oxaloacetato resultante pode ser convertido em malato, numa reduo catalizada pela malato desidrogenase. Aquele composto, por descarboxilao oxidativa, pode ser convertido em piruvato. O malato e o piruvato podem atravessar a membrana, podendo ser utilizados nos processos que l ocorrem. O piruvato pode originar acetil-Coenzima A, que origina citrato. Atravs do piruvato, numa ____ de CO2, pode formar-se oxaloacetato. O malato que entra na mitocndria pode ser reoxidado, formando oxaloacetato. Estes ciclos levam a que nada se perca e a que se forme acetil-Coenzima A para a sntese de cidos gordos no citoplasma. Permitem a entrada de piruvato na mitocndria, permitindo a formao de citrato. Se houver necessidade de energia, o oxaloacetato condensa-se com a acetil-Coenzima A.
6. Reacs anaplerticas
As reaces anaplerticas permitem a reposio de intermedirios no ciclo de Krebs, quando eles so gastos. Se esto a ser usados na sntese, tm de ser repostos, por reaces anaplerticas. O malato e o oxaloacetato so intermedirios e podem ser repostos numa reaco em que o piruvato repe o malato quando gato, uma reaco catalizada pela enzima mlica. O piruvato reduzido a malato, passando o NADPH a NADP+. O malato pode dar origem a oxaloacetato. Noutra reaco anaplertica, o piruvato, por aco da piruvato carboxilase, pode originar oxaloacetato, com gasto de energia. Outra reaco anaplertica importante, que tambm leva formao de oxaloacetato, a reaco catalizada pela fosfoenolpiruvato carboxilase, que converte o fosfoenolpiruvato em oxaloacetato. A regulao muito importante e estas enzimas so reguladas. A piruvato carboxilase regulada por alosterimo positivo por acetil-Coenzima A. Se houver muita acetil-Coenzima A, importante que o ciclo funcione e, para repor oxaloacetato, a enzima funciona para permitir o andamento do ciclo de Krebs. Na fosfoenolpiruvato carboxilase h um alosterismo negativo por aspartato, o que permite regular a concentrao daquele aminocido na clula. O oxaloacetato forma aspartato e, se houver muito, ele inibe a fosfoenolpiruvato carboxilase, regulando-se a produo daquele aminocido. A enzima mlica regulada por NADH, sendo sensvel s suas concentraes. Estas reaces anaplerticas repem os intermedirios do ciclo de Krebs, mas no ocorrem em todos os organismos. A da fosfoenolpiruvato carboxilase existe em 25
bactrias, leveduras e plantas; a da piruvato carboxilase ocorre em ___________________________; a da enzima mlica ocorre em plantas e animais.
7. Regulao
A regulao importante e cada uma das enzimas so pontos de regulao, pois so reguladas alostericamente. Geralmente as enzimas so sensveis quantidade de ATP, de ADP e NAD+. Os reguladores da succinato desidrogenase so o ATP e o Pi, reguladores negativos, o succinato, um regulador positivo, e o oxaloacetato, outro regulador negativo. A succinil-Coenzima A tem uma aco negativa sobre a primeira enzima. Um produto tardio pode ter um retrocontrolo negativo. O clcio estimula uma fosfatase que, por desfosforilao, torna a piruvato ____ activa, enquanto o acetil-Coenzima A e o NADH levam fosforilao, por uma cinase, desta enzima. Alguns reguladores, indirectamente, regulam as enzimas.
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Ciclo do glioxilato
1. Processo global
O ciclo do glioxilato importante em certos organismos. semelhante ao ciclo de Krebs, no existindo, no entanto, certas reaces, como as de descarboxilao, deste outro ciclo. H uma reaco de condensao de acetil-Coenzima A para formar citrato, depois forma-se isocitrato, mas as descarboxilaes que se seguem no ocorrem. Os carbonos da acetil-Coenzima A saem como CO2 nessas reaces e nos organismos em que o ciclo do glioxilato ocorre desvantajoso perder os dois carbonos. As sementes de certas plantas, como no podem realizar fotossntese, dependem dos carbonos do acetato para fazer a biossntese de substncias, incluindo os hidratos de carbono. A Natureza arranjou forma de fazer um bypass e eliminar essas reaces. A isocitrato liase leva formao de glioxilato e succinato. O primeiro vai reagir com uma outra molcula de acetil-Coenzima A, por catlise da malato____, originando malato, que pode passar a oxaloacetato. O succinato, produzido por aco da succinato liase (____ ____), forma fumarato, que origina malato, que, por sua vez, d origem a oxaloacetato. O que se elimina so, portanto, as reaces de descarboxilao. O oxaloacetato pode formar fosfoenolpiruvato, por reaces anaplerticas, que forma glucose. As sementes esto dependentes do carbono do acetato para proceder fotossntese. Tm muitos lpidos, pelo que podem produzir muito acetato, resultante de _:___. ____ ____ formar-se muito acetil-Coenzima A. Como no h descarboxilao, para no se perder carbono, o oxaloacetato pode formar-se por introduo de uma acetilCoenzima A. O oxaloacetato pode formar fosfoenolpiruvato, que origina glucose. A gluconognese leva formao deste acar. O ciclo do glioxilato importante para manter os carbonos, impedindo as duas reaces de descarboxilao.
2. Comparitmentao
O ciclo do glioxilato passa-se em dois organitos celulares: uma parte passa-se nas mitocndrias e a outra nos glioxissomas. Estes ltimos existem nas sementes enquanto esto a germinar, no sendo necessrios depois do crescimento inicial e do incio da fotossntese. Quando o ciclo do glioxilato importante existem glioxissomas. A acetil-Coenzima A, que provm do catabolismo dos lpidos, forma citrato, que origina isocitrato, que condensa com o acetil-Coenzima A e segue o processo at oxaloacetato. O succinato que se forma, na reaco da isocitrato liase, pode passar pela membrana, permevel a este composto, para a mitocndria. Neste compartimento, o succinato passa a fumarato na matriz, este passa a malato, que origina oxaloacetato. A succinato cinase, a fumarase e a malato desidrogenase s existem na mitocndria. Uma vez formado o oxaloacetato, numa reaco de transaminao em que necessrio glutamato forma-se aspartato e -cetoglutarato. Este vai para o glioxissoma, juntamente com o acetato. O glutamato resultante da reaco do acetato com o cetoglutarato vai para a mitocndria. Dessa reaco resulta tambm oxaloacetato. O malato formado no glioxissoma sai e sofre reaces no citoplasma.
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Respirao
1. Rendimentos energticos da gliclise e do ciclo de Krebs
O metabolismo muito importante em termos bioenergticos. No caso do ciclo de Krebs, a partir de acetil-Coenzima A ocorre: Acetil-CoA + 3 NAD+ + [FAD+] + ADP + Pi + 2 H2O
2 CO2 + 3 NADH + 3 H+ + [FADH2] + ATP + CoASH Formam-se 3 NADH, 1 FADH2 e 1 ATP. Em termos energticos, o que importante a formao destas molculas. Todos os equivalentes de reduo so importantes pois vo lanar electres na cadeia, para se formar ATP. Deve tambm entrar-se em linha de conta com o que se passou na gliclise. Forma-se, no ciclo de Krebs e na gliclise, um total de 10 NADH, 2 FADH2 e 4 ATP. O ciclo de Krebs ocorre duas vezes; 2 ATP da gliclise mais 2 dos dois ciclos de Krebs resultam em 4. Os 10 NADH e os 2 FADH2 so equivalentes de reduo importantes por lanarem electres na cadeia respiratria. Cada NADH que fornece electres mitocndria pode formar, na cadeia respiratria, 3 ATP, em termos estequiomtricos. Cada FADH2 forma menos, 2. Havendo 12 Coenzimas resulta ____ ATP do NADH. ____ ____, cada molcula de glucose catabolizada produz 38 molculas de ATP.
2. Mitocndria
A cadeia respiratria processa-se ao nvel da membrana interna da mitocndria, a que se d a grande sntese de ATP. um mecanismo diferente do da fosforilao ao nvel do substrato, que produz menos ATP. A mitocndria tem uma membrana dupla, uma membrana interna e uma membrana externa. A primeira forma invaginaes que constituem cristas, dentro das quais h a matriz. A membrana externa constituda por lpidos e protenas, como todas as biomembranas, mas a composio varia. Tem colesterol e rica em fosfatidilinositol. Tem uma grande permeabilidade para molculas de peso molecular superior a 10.000 e a sua funo manter a forma da mitocndria, no sendo importante em termos metablicos. A membrana interna no tem colesterol, sendo muito rica em protenas, ____ ____ ____ transportadores, por onde entram os substratos. Tem tambm todas as protenas da cadeia respiratria. A matriz, dentro da mitocndria, o local onde se processa o ciclo de Krebs. Apresenta as vrias enzimas que participam no ciclo de Krebs, excepto a succinato desidrogenase, que est frouxamente ligada membrana e que transfere electres para o FAD+. H tambm DNA, que fornece a informao para a sntese de certas protenas, produzidas nos ribossomas pequenos da mitocndria. No entanto, a grande maioria das protenas da mitocndria sintetizada no citoplasma, a partir da informao do ncleo
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e apenas algumas so sintetizadas na prpria mitocndria, pelos mecanismos existentes na prpria mitocndria. O espao intermembranar importante pois tem enzimas que podem ____ o ATP, a creatina-cinase e a adenil-cinase. uma estrutura onde ocorrem processos importantes, embora as membranas sejam mais importantes.
3. Equivalentes de reduo
Os equivalentes de reduo so ento o NAD+, o NADP+ e o FAD+. Estas so as molculas importantes para fornecer electres cadeia respiratria da mitocndria. NAD resume nicotinamida dinucletido. Um H do NAD+ substitudo por PO43- no NADP+, que mais usado no anabolismo, enquanto o outro mais usado no catabolismo. O FAD+ tambm um equivalente de reduo e tem vrias partes; tem trs molculas diferentes: a riboflavina, com ____ e ____. Se houver s riboflavina e o grupo fosfato ____ (FMN), enquanto que, se houver flavina, adenina e dinucletido h o FAD+. O FAD+ tudo isto. A molcula que lana os electres nas molculas todo o FAD+, flavina-adenina dinucletido. A forma oxidada do FAD+ amarela. Quando for parcialmente reduzido, com mais um H, forma uma quinona, com cor azul; fica FADH, ou FMNH. Se receber outro electro, se for do io hidreto, fica na forma de FADH2, no estado completamente reduzido, e nesta situao incolor. O estado de semiquinona depende do estado de associao. A um alto pH perde-se um proto e estabiliza-se um io semiquinona, vermelho.
4. Cadeia respiratria
O que se produz no ciclo de Krebs e na gliclise, equivalentes de reduo, vo ser lanados na cadeia respiratria. A cadeia respiratria consiste num conjunto de reaces de oxidao-reduo. 4.1. Reaco de oxidao-reduo H uma equao que permite relacionar a alterao de energia livre ____ com a alterao do potencial de reduo. G = -nFE0 A alterao de energia livre vem em Kcal/mol. n o nmero de electres a serem transportados e F a constante de Faraday. E0 a alterao de energia entre o dador e o aceitador de electres, a alterao no potencial de reduo. O potencial E0 a fora electromotriz quando em condies padro; este o potencial que se mede em condies padro. Os potenciais de reduo medem-se de uma forma ____, num sistema com duas semiclulas separadas por uma ponte de gar e em que h um voltmetro que mede a alterao de potencial. Tem de se ter, em cada clula (numa das clulas), o par redox, (cada um) em concentraes de 1 M. A referncia o par H+/H2, em equilbrio.
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X- + H+
X + H2
Na segunda: H+ + e H2
X- pode perder electres, pois est muito negativo; tem muitos electres que pode dar. Na semiclula de referncia est o H+, que recebe electres. Se uma substncia tem um potencial de reduo muito negativo, tem possibilidade de doar (esses) electres, que flem da primeira semiclula para a segunda. Se ocorrer o contrrio, o potencial positivo e a primeira semiclula tem tendncia a receber electres. Na oxidao do entanol: etanol E0 = -0,197 V Como o potencial negativo, os electres flem da amostra, o etanol, para a referncia, pois os electres podem ser cedidos. Na reduo do fumarato, ele recebe electres e origina succinato: acetaldedo + 2 H+ + 2 e-
O potencial redox positivo, o que quer dizer que os electres flem da referncia para a amostra, reduzindo o fumarato, vido de electres, a succinato. Na reduo do ferro, com o par Fe3+ e Fe2+, o potencial positivo, o que quer dizer que h reduo de Fe3+ a Fe2+, pelos electres vindos da referncia. Todos os potenciais so medidos de acordo com a referncia, H + em equilbrio com H2. O potencial de referncia 0, por definio. A pH fisiolgico (___), -0,421 V. O oxignio tem um potencial alto (baixo), o que mostra a sua avidez por electres. O -cetoglutarato (tambm) tem um potencial baixo, pelo que tem tendncia a dar electres, recebidos pelo NAD+. 4.2. Reaces de oxidao-reduo no metabolismo As reaces de oxidao-reduo, no metabolismo, esto acopladas. A oxidao do isocitrato a -cetoglutarato est acoplada reduo de NAD+ a NADH. Nas semiclulas ocorre: NAD+ + 2 H+ + 2 eNADH + H+ isocitrato E0H = - 0.32 V E0H = - 0.38 V
-cetoglutarato + 2 H+ + 2 e-
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O potencial diferente para cada reaco. A alterao no potencial , por conveno, a diferena entre o potencial de reduo do aceitador de electres e o potencial de reduo do dador de electres. O aceitador de electres tem um potencial mais positivo, enquanto o outro tem potencial mais negativo. Neste caso, o dador o isocitrato e o aceitador o NAD+. E0 = E0(aceitador) - E0(dador) E0 = - 0.32 V - (- 0.38 V) = 0.06 V G = -nFE0 G = -2 (96,485 KJ/Vmol) (0,06V) = - 11,58 KJ/mol Como a alterao de energia livre positiva, a reaco espontnea. Sempre que a alterao de potencial for positiva, a reaco espontnea, pois a alterao de energia livre negativa. Quando as condio no so padro, G vem: [C][D] G = G0 + RT ln [A][B] Da mesmo forma, relativamente aos potenciais: [ox] E = E0 + (RT/nF) ln [red] G0 e E0 so relativos s condies padro. Quando no se trabalha com condies padro, tem de se entrar em linha de conta com as concentraes. Depois disto, simples calcular a diferena de potencial entre o dador de electres, o NADH, e o aceitador, o oxignio. A reaco global : NADH (redutor) + H2+ + O2 (oxidante) As semi-reaces envolvidas so: NAD+ + 2 H+ + 2 e O2 + 2 H+ + 2 eNADH + H+ H2O E0 = - 0.32 V E0 = + 0.816 V NAD+ + H2O
O que se mede sempre o potencial de reduo, pelo que as reaces aparecem sempre no mesmo sentido. O oxignio est vido de electres e vai ser reduzido __ __ a gua. E0 = 0,816 - (- 0.32) = 1,136 V (aceitador - dador)
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(1 J = 4,18 Kcal)
Mostra-se assim que a transferncia de electres na cadeia respiratria espontnea. Os constituintes da cadeia respiratria esto dispostos ao longo da cadeia de acordo com os potenciais redox e os componentes esto organizados em complexos. Os electres vo fluindo ao longo dos coinstituintes da cadeia e fazem-no de uma maneira favorvel. Os electres vo fluindo de potenciais de reduo muito negativos, do complexo I, para o complexo II e depois para complexo III. Dentro destes vo fluindo atravs das subunidades. O potencial ____ de ser negativo e os electres, do complexo III, passam para o IV, e deste para o oxignio. 4.3. Constituintes da cadeia respiratria O complexo I a NADH ubiquinona redutase e tem mais de 30 subunidades. Os grupos prostticos mais importantes so o FAD+ e o FMN. O complexo II mais pequeno e tem cinco grupos prostticos. O complexo III grande (9-10 subunindades) e tem como grupos prostticos grupos heme. O citocromo C uma molcula simples com MC como grupo prosttico e serve apenas para activar os electres. A citocromo oxidase apresenta uma massa grande (mais de 10 subunidades) e os grupos prostticos so o MA e o MA3. Em termos moleculares, existem vrias molculas importantes que formam os complexos da cadeia respiratria. Umas so as flavoprotenas, que contm FAD ou FMN como grupos prostticos e que so importantes no transporte de electres na mitocndria. H Coenzima Q ou ubiquinona, responsvel por transferir um ou dois electres. A Coenzima Q, na forma oxidada, designada de ubiquinona; com um electro, designada de semiquinona; se receber dois, fica na forma completamente reduzida, designada ubiquinal. Os citocromos b, c, c1, a e a3, so muito importantes na cadeia e contm grupos prostticos heme, responsveis pela transferncia de um electro. As protenas sulfuro-ferrosas transferem um electro de cada vez e as protenas cpicas tambm s transferem um electro de cada vez, envolvendo os estados Cu+ Cu2+. So estas as molculas responsveis pela transferncia de electres na cadeia e podem transferir um ou dois electres, no caso da Coenzima, ou s um, nos restantes casos. 4.4. Fluxo de electres na cadeia respiratria Os electres flem de potencias mais negativos para potenciais mais negativos. Os complexos que constituem a cadeia respiratria esto organizados de acordo com o potencial de reduo, e os electres podem deslocar-se de potenciais mais negativos para potencias mais positivos, at ao oxignio. O complexo I passa os electres para o complexo II, este para o complexo III, este para o citocromo C e este para o complexo (citocromo) IV. Este passa-os para o O2. O complexo I recebe os electres do NADH e diz-se que ele , por isso, uma desidrogenase. Ele oxidado e os electres vo para a ubiquinona. O complexo II designa-se de succinato-Coenzima C-oxidorredutase e, aqui, quem fornece os electres cadeia respiratria o succinato. O acil CoenzimaA, resultante do metabolismo dos cidos gordos fornece os electres a uma desidrogenase que participa __ __ catabolismo dos cidos gordos. H ainda mais um complexo, que transfere os
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electres para a ubiquinona. Eles vo depois para o complexo III, da para o citocromo C e da para o complexo IV. 4.5. Conservao de energia A cadeia respiratria produz energia usada no trabalho, seja biossntese, ____ ou ____. A conservao de energia consiste na formao de ATP, que a moeda energtica da clula. Na gliclise e no ciclo de Krebs forma-se ATP, mas a energia dos equivalentes de reduo NADH e FADH2 tambm aproveitada. Na respirao sintetiza-se ATP por fosforilao oxidativa. O mecanismo mais importante, faz-se na membrana interna da mitocndria e permite a sntese de maiores quantidades de energia. A cadeia respiratria leva ejeco de protes, formando-se um gradiente quimismtico que leva produo de ATP. 4.6. Anlise dos fluxo de electres ao longo da cadeia respiratria a) Complexo I O NADH fornece os electres ao complexo I. Este complexo formado por vrias subunidades: h uma parte maior com flavoprotenas e protenas sulfuroferrosas, e uma protena hidrofbica embebida na camada de lpidos. O NADH est reduzido e fornece os electres flavoprotena FMN, que passa a FMNH2, formando-se NAD+. O FMNH2 est reduzido e passa os electres aos centros sulfuroferrosos, que ficam reduzidos. Estes centros s recebem os electres, e no os ies hidreto. Os electres vo reduzir os centros, mas libertam-se 2 protes (H+). Os electres que esto agora nos centros sulfuroferrosos vo ser transportados para a ubiquinona na forma de ies hidreto, indo buscar dois protes. A ubiquinona reduzida, com os electres, vai transportar os electres para outros componentes, centros sulfuroferrosos, que s recebem electres, libertando-se, para o exterior, dois protes. Este movimento de electres ao longo dos componentes deu origem a uma ejeco de protes. Entretanto, os electres dos centros vo reduzir ubiquinona, tendo de se buscar mais protes. O fluxo de electres neste complexo leva ejeco de protes para o exterior e a captao de dois protes (electres) do interior, contribui, tambm, para o gradiente. Dois dos protes no saem, mas a captao equivale sada. Assim, pode dizer-se que, para cada 2 electres transportados no complexo I, transportam-se 4 H+ para fora. A ubiquinona funciona como intermedirio e como aceitador dos electres do complexo I. O complexo I importante pois contribui para a formao do gradiente. b) Complexo II Quem fornece os electres ao complexo II o succinato. Na oxidao deste composto a fumarato, os electres vo para o FAD+, formando-se FADH2, que pertence a uma enzima do ciclo de Krebs ligada frouxamente membrana (a nica do ciclo nesta situao). Os electres do FADH2 vo reduzir a ubiquinona, indo tambm protes. Tudo se passa ao nvel da membrana e os protes __ __ de espaos matriciais. Os protes no saram pois a alterao de energia livre muito baixa, no havendo fora para os transportar (transportar os electres) contra o gradiente. O complexo II no contribui para a formao do gradiente de protes, ao nvel da membrana.
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c) Complexo III O complexo III ainda mais importante para a formao do gradiente. A Coenzima Q - citocromo reductase traz os electres da ubiquinona para o citocromo C. Nos componentes h um ciclo Q. No primeiro semiciclo Q h um pool de ubiquinona reduzida, que vai fornecer os seus electres, sendo oxidada. Ela transfere electres para o citocromo C, que recebe apenas estas partculas, libertando-se os protes, mas s um dos electres vai para aquela molcula, pois o outro foi reduzir o pool de ubiquinona na forma UUQ (forma de semiquinona). Nesta primeira fase, a ubiquinona completamente reduzida fornece dois electres, mas os dois protes saram. Dois protes so ejectados quando h transferncia de electres; ____ ____ de dois electres saem dois protes. Um dos electres vai para o citocromo C e o outro para a ubiquinona UUC. No segundo semiciclo Q, um electro da ubiquinona reduzida vai tambm para o citocromo C, enquanto o outro vai reduzir a ubiquinona do pool no estado UQ-. Ela fica com dois electres, mas, para ficar reduzida, tem de captar dois protes. Na primeira fase do ciclo foram ejectados 2 protes, e na segunda foram ejectados mais 2. H, assim, 4 protes ejectados e foram captados mais 2. O complexo III contribui grandemente para o gradiente, pois h libertao de 4 protes e captao de mais 2. d) Citocromo C Os electres vo do complexo III para o citocromo C, outro intermedirio da cadeia respiratria, que s recebe electres e no protes, ies hidreto. Ele recebe electres pois as suas molculas tm grupos heme, no centro, com ferro. H uma protoporfirina IX ferrosa, que existe tambm na hemoglobina. No citocromo C, o grupo heme, semelhante, heme C, tem resduos de cistena. No grupo heme A, que existe no citocromo A, existe uma cadeia isoprenoide e um grupo formil. Os citocromos diferem no grupo heme, importante na captao de electres. e) Complexo IV Citocromo oxidase O citocromo C vai fornecer os electres ao complexo IV, tambm designado de citocromo oxidase. Os citocromos transferem s electres. Estas partculas so transportadas para o oxignio, sendo essa a funo deste complexo. O O2 tem potencial muito positivo e os electres vo fluindo sempre para potencias mais positivos. Alguns (Os) componentes do complexo IV so protenas cpricas, com cobre, e fazem-se transferncias de um electro de cada vez, por limitao dos centros. Depois passa-se para centros com ferros e, de seguida, os electres passam para o citocromo A3, com ferro. Depois vo para outro componente com cobre e, por fim, vo reduzir oxignio, que vai originar gua. O2, mais 2 protes, origina gua. Em termos da produo de gradiente, a matriz fica mais bsica, pelo que isto equivale a um transporte de protes par o exterior. A este nvel h contribuio de 2 protes para o gradiente. So captados 2 protes da matriz por cada electro transportado pelo complexo. Quando o electro passa do ltimo centro cprico para o oxignio, para formar gua, h captao de 2 protes.
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4.7. Gradiente electrqumico Todos os complexos esto, assim, a contribuir para a formao de ____ um gradiente de protes. Deste modo, mostra-se que o transporte de electres ao longo da cadeia respiratria forma um gradiente osmtico. Os protes tm carga e, ao nvel da membrana interna, forma-se um gradiente elctrico, para alm do qumico, devido diferena de concentrao. No interior o potencial negativo e a concentrao mais baixa, enquanto no exterior o potencial positivo e a concentrao maior. Formou-se um gradiente electroqumico. Foi Mitchell quem props a teoria quimiosmtica, a teoria que defende que a energia do gradiente que provoca a produo de ATP. G = RTln([C2]/[C1]) + ZF A alterao da energia livre tem dois componentes, um qumico e um elctrico. G = RTln([H+]out/[H+]in) + F G = -2,3RT(pHout pHin) + F pH = log [H+] O , o gradiente elctrico que se forma, aproximadamente igual a 0,18 V. O gradiente osmtico ____, mais ou menos, uma unidade. Para o fluxo de 1 mole de H+: G = 2,3RT + F G = 5,9 KJ + 17,4 Kj = 23,2 KJ Os protes esto, portanto, a ser ejectados de um modo desfavorvel, contra o gradiente, pelo que tem de haver energia. Quando os protes vo para dentro, a reaco favorvel, e a sua energia que usada para sintetizar ATP. 4.8. ATP sintetase Quem vai usar a energia da passagem dos protes para o interior da mitocndria a ATP sintetese, designada de complexo V. O mecanismo de sntese de ATP levado a cabo por uma ATPase, e uma transmutase que transporta o ATP para ____. O transporte de electres na cadeia respiratria permite a ejeco de protes, o que contribui para a formao do gradiente electroqumico destas partculas. Esse gradiente tem energia que usada pela ATP sintetase que existe na mitocndria e que sintetiza ATP. a) Partes e subunidades A ATP sintetase apresenta protuberncias para dentro da mitocndria e tem vrias subunidades, pelo que designada de complexo V. Na parte F0 existem subunidades A, B e C. As C so importantes pois delimitam um poro, atravs do qual os protes que estabelecem o gradiente, em maior concentrao fora, tendem a ir para a matriz. esse influxo de protes que permite dissipar o gradiente. Na formao do F = 96,485 KJ/V T = 37 C
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gradiente conserva-se a energia, enquanto a energia da dissipao do mesmo usada para sintetizar o ATP. Na parte F1 h subunidades e , imporetantes por controlarem a interaco entre F0 e F1. A subunidade controla a abertura do poro e h tambm duas subunidades e uma . b) Teoria quimiosmtica a ATP sintetase que permite a sntese de ATP por dissipao do gradiente electroqumico (qumico e osmtico, com as componentes qumica, de concentrao, e elctrica). Mitchell teorizou isto na sua teoria quimiosmtica e estava certo, tendo ganho o prmio Nobel. Na comprovao, fizeram-se vesculas artificiais, com bicamada lipdica e as enzimas necessrias. Formaram-se vesculas em tubos de ensaio e isolou-se a ATPase, que foi colocada nas vesculas. Isolou-se tambm uma protena de bactrias que, na presena de luz, ____ protes, e colocou-se nas vesculas. Na luz, havia transporte de protes para o interior, que ficava mais cido. Adicionando ADP, verificava-se que se formava ATP. Demonstrou-se assim que a nica fonte de energia o gradiente de protes. c) Conformaes da ATP sintetase e etapas do processo de sntese de ATP A ATP sintetase sintetiza ATP quando, por ela, passam protes. Ela tem trs conformaes: O, inactiva, com baixa afinidade para com os ligandos; L, com fraca afinidade, mas j implicada ___ligaes; e conformao T, activa, com alta afinidade para os ligandos. A sntese de ATP pela enzima processa-se por um mecanismo em que so essenciais estas trs etapas. Os ligandos, ADP e Pi, ligam-se, inicialmente, ao estado conformacional L, onde ocorre a formao de ATP. No entanto, esta molcula s sintetizada quando a subunidade L passa a T, e, para isso, o ATP da subunidade T libertado. H uma rotao de subunidades Ao libertar-se o ATP, a conformao T passa a O e a L a T. A posio que inicialmente era T passa a O e a que era L passa a T. Depois destas trs etapas, a nova conformao T liberta ATP e fica na conformao O. Resumindo, os ligandos ligam-se a L, que sintetiza ATP na forma T e, que, aps libertar a molcula formada, fica na conformao O. 4.9. Fosforilao oxidativa Este processo de sntese de ATP chama-se fosforilao oxidativa, pois h fosforilao de ADP e transporte de electres. O transporte de electres ao longo da cadeia provoca oxidaes. 4.10. Inibidores da cadeia respiratria H venenos enormes especficos para estes processos. Alguns, como a rotenona (entre outros), bloqueiam os electres no complexo I. H venenos, como a fluoroacetona, o tenuilfluoroacetato, entre outros, que bloqueiam o complexo II. A antimicina bloqueia especificamente o transporte de electres ao nvel do complexo III. ____, cianeto e monxido de carbono actuam ao nvel da citocromo oxidase.
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Se a cadeia estiver ____ a partir do complexo II, a contribuio do succinato para o gradiente osmtico pode permitir a sntese de ATP. No bloqueio a partir do complexo III, j no h substrato natural que permita a sntese de ATP, embora haja substratos artificiais que ainda permitem o processo, pelo gradiente formado a partir da parte livre. A oligomicina e a ____ bloqueiam a ATP sintetase, e, mesmo fornecendo electres, no h fosforilao. Os desacopladores, como o dinitrofenol e outros, tornam a membrana permevel a protes (ela tem de ser impermevel). Nessa caso, j no h gradientes, no havendo fosforilao de ADP para ATP. O desacoplamento entre a parte oxidativa e fosforilativa impede a sntese de ATP, mas continua o transporte de electres, pois no h nada que o bloqueia. At continua mais depressa, pois o gradiente est a ser dissipado pela substncia, e a mitocndria trabalha para o repr. Tudo venenoso, dependendo da dose Paracelsus As amndoas tm cianeto, mas em baixas quantidades. O monxido de carbono perigoso e ocorre na fase gasosa. 4.11. ADP-ATP exchange O gradiente necessrio para haver sntese de ATP, mas, propriamente, a formao de ATP que fica ligado ATP sintetase ocorre mesmo na ausncia de protes (mesmo na ausncia de protes isso ocorre). Na ausncia do gradiente de protes aparece o AP ligado enzima, mas no h net sntese de ATP, pois no h libertao desta molcula, no havendo energia para isso. No pode (Pode) haver a reaco de exchange de ADP e ATP sem o gradiente, cuja energia necessria para se libertar o ATP, para se poder formar (podendo formar-se) mais. O gradiente permite a simples ADP-ATP exchange. Para haver net sntese necessria energia, para se libertar ATP ( essa a etapa que requer energia). 4.12. Transporte de ATP e ADP. O ATP sintetizado na mitocndria mas tem de sair, pois utilizado fora dela, enquanto o ADP tem de entrar. O transporte de ATP para fora e a entrada de ADP na mitocndria d-se graas ATP-ADP transmutase, que usa o gradiente electroqumico que ocorre ao nvel da membrana interna. O ATP tem 4 cargas negativas e o ADP tem 3. Saindo 4 e entrando 3, em termos net s uma carga negativa sai, o que equivale entrada de um proto. O gradiente elctrico tende a dissipar-se. A sntese de ATP implica que um proto entre atravs do poro da ATP sintetase, saindo uma carga negativa. O gradiente est a ser dissipado. O prprio transporte tem um custo energtico, usando energia do transporte de electres. Em experincias, ao longo do tempo, a velocidade de transporte de electres (medida pelo gradiente de O2 observado) aumenta quando se adiciona ADP. Nessa situao, h transporte de ADP e dissipa-se o gradiente, pelo que tem de se transportar mais rapidamente os electres para ele ser reposto. A velocidade depende, portanto, da presena de ADP. Enquanto ele existir, a velocidade de transporte maior.
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6. Efeito Pasteur
Pasteur verificou que leveduras consumiam muita mais glucose se estivessem n a ausncia de oxignio; na presena de oxignio, a glucose consumida menor. Este o efeito Pasteur: em anaerobiose, o consumo de glicose maior, enquanto que, na presena de oxignio, menor. Isto verifica-se em leveduras, mas tambm em clulas musculares. Na gliclise h enzimas-chave na sua regulao, e uma delas a piruvato cinase, que inibida por ATP. No segundo ponto de regulao, a enzima-chave a fosfofrutocinase, que tambm inibida por ATP. Na presena de oxignio, uma clula tem mais ATP, que mais produzido. O ATP que se est a formar vai ter uma aco inibitria neste ponto de regulao da gliclise, inibindo-a. Assim se explica o efeito Pasteur.
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Gluconeognese
1. Processo global
A gluconeognese, tal como o nome indica, a sntese de glucose, um processo oposto da gliclise. A via anablica no pode ter uma reversibilidade completa; so dois processos opostos, mas s h reversibilidade parcial. Pode partir-se (comear-se) do piruvato ou do lactato, que tambm (____) origina piruvato. Na gliclise, o fosfoenolpiruvato passa a piruvato, mas a reaco no reversvel, pelo que tem de haver algo que faa a transformao de produtos. ______________________________________________________________________ ______________________________________________________________________ _____________________________________. O cido 3-fosfo____ passa a cido-1,3bifosfo____ (h reversibilidade). Depois, este convertido a gliceraldedo-3-fosfato noutra reaco reversvel, que passa, mais tarde, a frutose-1,6-bifosfato, em mais uma reaco reversvel. De seguida h uma reaco irreversvel, em que a frutose-1,6bifosfato vai formar ____ e frutose-6-fosfato. A frutose-1,6-bifosfato passa a este composto por uma reaco de desfosforilao tpica, catalizada por uma fosfatase. Depois, a frutose-6-fosfato passa a glucose-6-fosfato, por isomerizao, noutra reaco reversvel da gliclise, e aquela ltima tem de ser desfosforilada, numa reaco tpica da gluconeognese (no uma reaco reversvel da gliclise) em que h uma fosfatase que provoca a desfosforilao. H, assim, trs reaces irreversveis, e so estas as reaces tpicas da gluconeognese. As duas ltimas reaces exclusivas, catalizadas por fosfatases, esto separadas por isomerizao. Tm uma variao de energia livre muito negativa, que constitui uma grande contribuio para que a gluconeognese tenha uma variao de energia livre muito negativa, que torna o processo espontneo e favorvel. Se gliclise tivesse uma reversibilidade completa, no se processaria espontaneamente na Natureza. As ____ que impedem a reversibilidade completa da gliclise. A gliclise exergnica e, se a gluconeognese fosse o reverso (a reversibilidade), seria endergnica, no se processando na Natureza. As duas reaces de fosfatases separadas por uma isomerizao contribuem para o G negativo. Os dois processos tambm no ocorrem em simultneo; quando um ocorre, o outro est inibido, tendo de haver uma regulao recproca. Isto permite que ambos os processos sejam espontneos. Tudo isto ultrapassado pois existem aquelas trs reaces especficas.
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A desfosforilao de frutose-1,6-bifosfato a frutose-6-fosfato o segundo ponto de irreversibilidade da gliclise. A reaco que ocorre na gliclise catalizada por outra enzima, a fosfofrutocinase, enquanto, neste caso, a reaco catalizada pela frutose-1,6-bifosfatase, que regulada por citrato, um activador halostrico, e inibida por frutose-2,6-biofosfato. Os factores que inibem a via anablica tambm regulam a gliclise, mas estimulando-a. c) Desfosforilao da glucose-6-fosfato a glucose A terceira reaco especfica da gluconeognese outra reaco irreversvel, a passagem de glucose-6-fosfato a glucose. tambm catalizada por uma fosfatase, a glucose-6-fosfatase, e passa-se ao nvel do retculo endoplasmtico. A enzima existe ao nvel da membrana desta estrutura. A glucose-6-fosfato entra no retculo endoplasmtico, passando pela membrana e, nesse processo, sofre desfosforilao, originando glucose. Este acar entra na corrente sangunea por exocitose. A glucose-6fosfatase tem um resduo de histidina muito importante que, no processo de desfosforilao, vai levar a que se forme um intermedirio de fosfohistidina.
3. Requisitos energticos
De facto, a gluconeognese ocorre espontaneamente pois, no processo, foi necessria energia. Foi necessrio ATP na passagem de piruvato a oxaloacetato (fosfoenolpiruvato), e, na passagem de oxaloacetato a fosfoenolpiruvato, foi necessrio GTP. Para que a gluconeognese ocorra so necessrios 4 ATPs e 2 GTPs, e tambm 2 NADH. Para que este processo ocorra, tem de ____ mais energia que no processo de gliclise. So necessrios 6 nuclosideos-trifosfato. Se o processo de gliclise fosse reversvel, a sntese de glucose no seria espontnea. A adio de ATP e GTP e as duas reaces finais da gluconeognese levam a que o processo seja favorvel e ocorra espontanemaente.
4. Ciclo de Cori
O metabolismo de um rgo pode estar ligado ao de outro rgo. O metabolismo est todo interligado, quer numa clula, quer num rgo ou organismo. No ciclo de Cori evidencia-se a relao entre o fgado e os msculos. Os msculos requerem muita energia. Quando o msculo sujeito a exerccio violento, fica em anaerobiose, ocorrendo fermentao lctea, em que se produz lactato. Este, ao entrar no fgado, vai sofrer o processo oposto, ocorrendo a gluconeognese, em que o piruvato passa a glucose. A glucose sintetizada entra na corrente sangunea e vai fornecer o msculo. Chama-se a isto o ciclo de Cori, a relao metablica entre rgos.
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2. Compartimentao
A via das pentoses-fosfato ou via do fosfogluconato passa-se no citoplasma, juntamente com a gliclise e com a sntese cidos gordos. Isto tem a sua razo de ser, pois a sntese de cidos gordos requer NADPH, formado pela via do fosfogluconato. O ciclo de Krebs, como foi visto, passa-se na matriz da mitocndria, assim, como a oxidao dos cidos gordos. A ____ passa-se na membranana __ ____ ____.
3. Processo global
Como foi j referido, a glucose, na gliclise, passa a glucose-6-fosfato, por aco da hexocinase. A glucose-6-fosfato pode ento seguir a via da gliclise, ou a via das pentoses, conforme seja necessrio. As coisas s se passam quando necessrio. Na via das pentoses, h reaces de oxidao. A glucose-6-fosfato oxidada, sendo os seus electres fornecidos a NADP+, que passa a NADPH. A enzima que cataliza este primeiro processo a glucose-6-fosfato desidrogenase. Forma-se 6fosfogluconolactona que, por aco de ____, origina 6-fosfogluconato. Ocorre uma segunda oxidao, descarboxilativa, por aco da 6-fosfogluconato desidrogenase, formando-se uma pentose, a ribulose-5-fosfato que, por isomerizao, numa reaco catalizada por uma isomerase, forma uma ribose-5-fosfato, com o enodiol como intermedirio. Origina-se um NADPH para a sntese cidos gordos e D-ribose-5fosfato para a sntese de nucletidos. A ribulose-fosfato-epimerase converte ribulose-5-fosfato em xilulose-5fosfato, por epimerizao. A xilulose e a ribulose podem reagir, numa reaco catalizada por uma tiamina pirofosfato, formando gliceraldedo-3-fosfato e sedoheptulose-7-fosfato. Estes dois podem interagir e formar, numa reaco catalizada por uma transaldolase (transcetolase), eritrose-4-fosfato, com quatro carbonos, e
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frutose-6-fosfato. A xilulase e a eritrose, por aco de uma transcetolase, podem originar gliceraldedo-3-fosfato e frutose-6-fosfato, que so usados na gliclise. Assim, como foi visto, a ribulose-5-fosfato pode ser isomerizada, formando ribose-5-fosfato, ou epimerizada, originando xilulose-5-fosfato Nesta via formam-se, assim, compostos com 4, 5 e 6 carbonos. uma via muito activa no tecido adiposo, onde se formam os cidos gordos; nos msculos, no h muita biossntese. As vias do fosfogluconato e da gliclise esto interligadas pelas reaces catalizadas pelas transcetolases e transaldolases.
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e) Epimerizao da ribulose-5-fosfato a xilulose-5-fosfato A ribulose-5-fosfato, uma cetose, tambm pode ser epimerizada, passando a xilulose-5-fosfato. A reaco catalizada por uma epimerase e forma-se um enediolato como composto intermedirio. H troca de um grupo no mesmo carbono, passando para o lado oposto. Primeiro h a remoo de um proto, estabelece-se uma dupla ligao, forma-se enediolato, e ento necessrio readicionar o proto. Este -o no lado oposto, e forma-se uma xilulose. f) Formao do glicerladedo-3-fosfato e da sedoheptolase-7-fosfato a partir da xilulose-5-fosfato e da ribose-5-fosfato A xilulose-5-fosfato e a ribose-5-fosfato (?), por aco de uma transcetolase, originam gliceraldedo-3-fosfato e sedoheptolose-7-fosfato. A xilulose a molcula dadora de unidades de dois carbonos. g) Formao da eritrose-4-fosfato e da frutose-6-fosfato a partir da sedoheptolose-7-fosfato e do glicerladedo-3-fosfato Depois pode ocorrer uma reaco catalizada por uma transaldolase, em que a sedoheptolose-7-fosfato e o glicerladedo-3-fosfato formam eritrose-4-fosfato, com quatro carbonos, e frutose-6-fosfato, com 6 carbonos. Um composto em C7 e outro em C5 formam um em C4 e outro em C6. Nesta reaco de transaldolase, a enzima, como no outro caso, tem resduos de lisina importantes com grupos amnicos, que formam um intermedirio de base de Schiff entre a sedoheptolase-7-fosfato e o resduo de lisina. Depois de se formar a base de Schiff sai a eritrose-4-fosfato e forma-se um carbanio, com carga negativa, que vai atacar o carbono do gliceraldedo-3-fosfato, que origina a frutose-6-fosfato. h) Formao do gliceraldedo-3-fosfato e da frutose-6-fosfato a partir da eritrose-4-fosfato e do xilulose-5-fosfato Na outra reaco, catalizada por uma transcetolase, h transferncia de duas unidades de carbono. A eritrose-4-fosfato pode interagir com uma xilulose-5-fosfato, formando-se gliceraldedo-3-fosfato e frutose-6-fosfato. Um composto em C5 (C6) e outro em C4 originam um em C3 e outro em C6. A via das pentoses pode ocorrer como alternativa gliclise, mas pode colaborar com ela, caso seja necessrio. O mecanismo de catlise desta transcetolase no envolve, ao contrrio da reaco anterior, bases de Schiff, mas TPP (tiamina pirofosfato). Se se remover um fosfato, forma-se um carbanio que vai atacar um carbono da xilulose. No ataque, possvel remover uma parte da molcula, permitindo a expulso do gliceraldedo-3fosfato. Depois, na segunda fase, h uma transferncia de unidades de dois carbonos (um aldol) que vm da eritrose para o que resta. H uma recepo aldol da eritrose, formando-se a eritrose. No primeiro passo foi expulsa uma aldose e, no segundo passo, foi-se buscar um aldol, at se formar a frutose-6-fosfato. Resumindo, a xilulose-5-fosfato e a eritrose-4-fosfato formam gliceraldedo-3fosfato e frutose-6-fosfato, numa reaco catalizada pela transcetolase e em que necessria TPP.
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gliceraldedo que tambm produzido tambm um intermedidio desse processo. Era necessrio NADPH e, na gliclise, forma-se NADPH, NADH e ATP.
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Catabolismo do glicognio
1. Clivagens fosforoltica e hidroltica
O glicognio tem n resduos, o que significa que o polmero pode ter uma grande cadeia. Se for degradado, vai ser degradado sucessivamente para poder dar mais unidades de glucose. H uma reaco em que o glicognio reduzido em uma unidade de glucose. Essa libertao sucessiva de uma unidade de glucose da cadeia linear de glicognio feita por uma reaco de fosforilao. O ortofosfato, Pi, promove a lise e libertao de cada unidade de glucose. A fosforilao implica a libertao de unidades de glucose, na cadeia linear. H introduo de Pi, que responsvel pela ___ da ligao -1,4. A reaco de fosforilao catalizada por uma enzima, a fosforilase do glicognio. O que se liberta uma glucose fosforilada, e a clula tem uma vantagem por ela aparecer nesta forma. No estado fosforilado, a glucose no sai facilmente da clula, mantendo-se l. A glucose j est fosforilada __ ____, portanto, entra nas vias sem se consumir mais ATP. Esta uma reaco de fosforlise, a clivagem fosforoltica do glicognio. A clivagem fosforoltica relaciona-se com um piridoxalfosfto, envolvido no mecanismo fosforoltico do glicognio. O fosfato d um proto ao glicognio e o piridoxalfosfato d outro. Forma-se um io carbnio que atacado por fosfato e, finalmente, forma-se o resduo de glucose-1-fosfato. O pirifoxalfosfato adquire, depois, o proto. As cadeias laterais so ligadas por ligaes -1,6. Primeiro o glicognio digerido fosforoliticamente na cadeia principal, mas a clivagem de uma ligao -1,6 hidroltica, em vez de fosforoltica. A reaco catalizada por uma glucosidase e origina-se glicose e glicognio com menos um resduo. Esta enzima desramificadora. Parar degradar o glicognio h vrias fases. Inicialmente, comea a clivagem fosforoltica, em que as ligaes -1,4 vo sendo sucessivamente clivadas pelo Pi, na reaco catalizada pela fosforilase. Esta enzima s reconhece a ligao at um certo ponto e, quando as cadeias so curtas, j no reconhece. Os resduos que no podem ser reconhecidos vo para outro brao, por aco de uma transferase. A cadeia linear fica maior e resta apenas uma ramificao. H uma clivagem hidroltica, catalizada pela glucosidase, a enzima desramificadora, que hidrolisa os resduos com ligao -1,6. Fica uma nica cadeia simples e a degradao seguinte catalisada pela fosforilase. So, assim, necessrias duas enzimas.
2. Destino da glicose-1-fosfato
Desta libertao de unidades de glucose resulta a glucose-1-fosfato, fosforilada na posio 1, mas, para que entre nas vias metablicas, necessrio que esteja fosforilada na posio 6. Interessa que o que resulta do catabolismo do glicognio seja transformado em glucose-6-fosfato, pelo que necessrio mudar a posio do fosfato. A mutase, uma enzima com um resduo fosforilado, vai catalizar uma reaco em que a glucose-1-fosfato fica com mais um grupo fosfato, na posio 6, uma forma instvel. A enzima vai depois captar o fosfato da posio 1, uma vez que interessa ter glucose-6-fosfato. Esta forma-se, ento, graas mutase. A glucose-6-fosfato pode ser desfosforilada por uma fosfatase, formando glucose. A fosfatase ocorre no fgado,
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mantendo o nvel de glicose no sangue, mas no no msculo ou no crebro, onde este acar entra logo no metabolismo.
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Anabolismo do glicognio
1. Processo global
O glicognio um polmero que vai crescendo, aquando da sntese desta molcula. A sntese consiste na juno sucessiva de unidades de glucose. Para se juntar cadeia de glicognio, a glucose tem de estar activa, na forma de uridina-difosfato-glucose. A glucose ligada a uridina-difosfato, sendo esta a forma de activar da molcula. Isto semelhante ao que acontece com o ATP, uma forma activa da ____. O acetil-Coenzima A a forma activa do acetato e a UDP-glucose a forma activa da glucose. Este acar entra depois na cadeia e o UDP libertado. A glicose-1-fosfato origina glicose-1-fosfato (A glicose), que interage com UTP, uridina trifosfato, originando UDP-glucose e saindo dois fosfatos. A reaco catalizada pela UDP-glucose-pirofosforilase e reversvel. Como o pirofosfato facilmente hidrolisado em duas molculas de Pi, a reaco tem tendncia a progredir no sentido visto. Depois de activada a glucose j possvel juntar as unidades de glucose formadas, na cadeia de glicognio. A UDP-glucose adicionada cadeia de glicognio em crescimento, com n resduos, ficando o glicognio com n+1 resduos e libertando-se o UDP. Isto s pode ocorrer para cadeias em crescimento com mais de 4 resduos. Para constituir um primer de 4 resduos, necessria uma protena, a glicogenina, que permite a autogliclosilao. Ela permite a formao do conjunto de quatro unidades de glucose. S depois do primer estar formado que se forma a cadeia, constituda pela aco da fosforilase. O glicognio um polmero ramificado, pelo que tm de se formar os ramos. Aqui, vo aparecer ligaes glicosdicas -1,6, ramificaes, e uma enzima ramificadora que permite o seu estabelecimento (das ligaes). As ramificaes, como foi visto, tm de ser degradadas de um maneira especial.
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fosfatase 1 que vai desfosforilar a fosfatase do glicognio e a fosfatase cinase, inactivando-as a ambas. A fosfatase 1, que catalisa a desfosforilao das fosforilases, tambm regulada. Quando aparece epinefrina, estimulando as cinases A, estas vo catalizar a fosforilao de protenas e, nessas reaces, uma subunidade da fosfatase 1 fosforilada. Quando a fosfatase fosforilada, esta subunidade vai ficar inactiva. Verifica-se ainda que h a fosforilao de um inibidor, que ainda inibe mais a fosfatase 1. Estando esta inibida, a fosfatase do glicognio est activa. A libertao da hormona implica que a fosforilase do glicognio trabalhe vontade. O glicognio importante pois regula o nvel de glucose no sangue. No havendo glucose no sangue, ele tem de ir busc-la ao glicognio (ela necessria para o crebro, por exemplo); se houver muita glucose, ela armazenada no polmero em causa. Isto pode ser visto numa experincia simples. Se se adicionar glucose, no necessrio degradar glicognio, pelo que a fosforilase do glicognio perde actividade. Com o decrscimo do nvel de glucose, a actividade de sntese diminui, ficando a fosforilase do glicognio activa.
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2. Degradao do glicerol
O glicerol vai ser fosforilado, por aco de uma glicerol cinase, formando-se o glicerol-3-fosfato. Depois h uma oxidao, catalizada por uma desidrogenase, a glicerol-fosfato-desidrogenase, que origina dihidroxiacetona-fosfato. Esta pode ser isomerizada e formar gliceraldedo-3-fosfato. Se for necessria energia, este segue a gliclise; se no for, segue para a gluconeognese.
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+ ATP + HSCoA
+AMP + Pi
A activao necessita de ATP e acetil-Coenzima A. Os cidos gordos ficam na forma activa, de acil-Coenzima A, sendo a reaco catalisada pela acil-Coenzima Asintetase. O cido gordo, mais o ATP, originam o acil-adenilato. O grupo carboxlico ____ ao grupo adenil do ATP. O acil-adenilato, na segunda fase, reage com HSCoenzima A, formando-se acil-Coenzima A e AMP. No incio tinha-se ATP e resta AMP, libertando-se, na segunda fase, pirofosfato. O ATP tem trs grupos fosfato e, por perda de duas ligaes, forma-se AMP e pirofosfato. Consumiram-se duas ligaes de alta energia e s se formou uma, a tioster, no grupo sulfifril. A acil-Coenzima A tem de ir para dentro da mitocndria, para l da (para a) membrana interna, mas no pode entrar directamente, sendo necessria uma molcula chamada carnitina. O acil-Coenzima A e a carnitina formam acil-carnitina, que pode ser transportado atravs da membrana interna da mitocndria. Na transferncia do grupo acil para a carnitina participa a enzima acil-carnitina-transferase I. O grupo acil vai ser transportado para o grupo OH da carnitina e a ligao Ogrupo acil tem alto potencial de transferncia, pelo que, quando a acil-carnitina entra na miotocndria, pode formar-se de novo acil-Coenzima A. A acil-carnitina pode atravessar a membrana pois existe um transportador, uma translocase. A enzima acil-carnitina-transferase II transporta o grupo acil para a Coenzima A, restando a carnitina e formando-se acilCoenzima A. 3.3. Processo global Na mitocndria ocorrem quatro reaces e, para cada ciclo de quatro reaces, so libertadas unidades de dois carbonos na forma de acetil-Coenzima A. Nas reaces de -oxidao h, ao incio, uma reaco de oxidao, na qual o acil-Coenzima A oxidado a trans 2 enuil-Coenzima A, pela acil-Coenzima A desidrogenase. o FAD+ que recebe os electres, passado a FADH2. O G suficiente para haver reduo do FAD+, mas no do NAD+. Depois h uma reaco de hidratao, uma adio de molculas de gua, em que o trans 2 enuil-Coenzima A passa a L-3, hidroxiacilCoenzima A, por aco de uma hidratase. uma reaco esteroespecfica, formando-se apenas um ismero. A mais uma reaco de oxidao, catalisada por uma desidrogenase, aparecendo cetoacil-Coenzima A. A ultima reaco uma tilise, catalisada por uma cetoliase. H libertao de acetil-Coenzima A, ficando o resto da cadeia encurtada por dois carbonos. No fim de cada ciclo de -oxidao, a cadeia encurtada em unidades de dois carbonos. O cido gordo degradado. O acetil-Coenzima A d enuil-Coenzima A, que origina hidroxiacil-Coenzima A, que, por sua vez, d cetoacil-Coenzima A. O conjunto de reaces consiste numa oxidao, uma hidratao e outra oxidao. Tambm no ciclo de Krebs, o succinato oxidado a fumarato, que hidratado a malato, que oxidado a oxaloacetato. Reaces de oxidao intercaladas com hidrataes so tpicas do catabolismo. Em cada ciclo, isto , com a repetio do ciclo, a cadeia vai sendo encurtada. Se o cido gordo tiver uma cadeia longa, participa (h) uma desidrogenase da longa cadeia, a long-chain acil-Coenzima A dsidrogenase. H desidrogenase de cadeia mdia e desidrogenase de cadeia curta, tambm.
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a) Oxidao acil-Coenzima A a trans 2 enuil Coenzima A A primeira reaco , ento, uma reaco de oxidao, catalizada pela acilCoenzima A desidrogenase. O FAD+ recebe os electres tornando-se FADH2 e o acilCoenzima A convertido em trans 2 enuil Coenzima A. O acil-Coenzima A vai transferir os electres para o FAD+, que se torna FADH2, e este transfere-os para outra protena, tambm com FAD+, ______, uma protena transportadora d electres. Mais uma vez, o FAD passa a FADH 2. Os electres so ento transportados para outra enzima, uma reputase, com ferro, que fica na forma reduzida, e so depois lanados ubiquinona, passando esta a ubiquinal, reduzido. Este composto tambm existe na cadeia respiratria. Assim, logo na primeira reaco, h fornecimento de electres cadeia respiratria. Logo nesta reaco, j h conservao de energia. b) Hidratao do trans 2 enuil Coenzima A a L-3 hidroxiacil-Coenzima A O trans 2 enuil Coenzima A hidratado, formando-se L-3 hidroxiacilCoenzima A. Forma-se L pois s se formaria D se a hidratao fosse numa ligao cis. A hidratao d-se numa dupla ligao trans, que s pode formar o estereoismero L. c) Oxidao do L-3 hidroxiacil-Coenzima A a cetoacil-Coenzima A A terceira reaco de oxidao. O L-3 hidroxiacil-Coenzima A vai ser oxidado, passando o NAD+ a NADH e formando-se o cetoacil-Coenzima A. d) Tilise e libertao de acetil-Coenzima A Na clivagem h uma tilise em que se libertam os dois carbonos na forma de acetil-Coenzima A. O cetoacil-Coenzima A requer mais uma Coenzima A. Fica um acil-Coenzima A com menos dois carbonos e este composto que resta vai sofrer um novo ciclo. Um cido gordo de grande cadeia vai perdendo unidades de dois carbonos, com o decorrer dos ciclos sucessivos. 3.5. -oxidao de cidos gordos com duplas ligaes A -oxidao vista relativa a casos em que os cidos gordos no tm duplas ligaes. Quando um cido gordo tem uma ligao dupla ou um nmero mpar de ligaes, a situao diferente. Quando o cido palmitoleico 9, tem uma ligao dupla de 9 para 10. Primeiro h ciclos sucessivos at ligao e, quando se atinge essa zona, forma-se 3 enuil-Coenzima A. Ao aparecer este produto, ele no reconhecido pelas enzimas da -oxidao. A desidrogenase no reconhece este produto e h que transform-lo em 2 enuil-Coenzima A. Isto consegue-se por uma isomerase. Quando existe uma dupla ligao ou um nmero mpar destas ligaes, o problema resolvido por uma isomerase. O 2 enuil-Coenzima A j um substrato usado na -oxidao dos cidos gordos. Quando h duas ligaes duplas, ou um nmero par destas ligaes, a situao diferente. No cido _____________, com duas ligaes duplas ____, o processo igual at aparecer o 9, isto , (, mas) ocorre o mesmo que no caso anterior. Quando se
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atinge o 12, 4, na cadeia agora diminuda, o processo diferente. D-se origem a 2,4dienuil-Coenzima A, que tambm no reconhecido pelas enzimas do ciclo normal da -oxidao, tendo, portanto, de sofrer uma transformao. O 2,4-dienuil-Coenzima A vai ser reduzido, captando electres cedidos por NADPH, e passa a cis 3-enuilCoenzima A. Este composto tambm no reconhecido, ____ ____ isomerase, passa a trans 2-enuil-Coenzima A, que j pode entrar no sistema de -oxidao. Quando h duas duplas ligaes, formam-se dois produtos que no so reconhecidos. Quando o nmero de ligaes mpar, o problema resolve-se com a isomerizao. Quando o nmero par, necessria uma isomerizao e uma __________. 3.6. Terminao e destino dos produtos Quando um cido gordo de cadeia longa sucessivamente encurtado, vo saindo unidades de dois carbonos. Se o nmero de carbonos for par, no final aparecem duas molculas de acetil-Coenzima A. Se o nmero de carbonos for mpar, aparece uma molcula de acetil-Coenzima A e fica parte da molcula encurtada, uma molcula de propionil-Coenzima A. Se a clula no precisar de energia, a acetil-Coenzima A usada para formar cidos gordos; se for necessria energia, o composto vai para o ciclo de Krebs. O propionil-Coenzima A vai ser carboxilado originando D-metilmalonil-Coenzima A, e uma epimerase origina L-metilmalonil-Coenzima A a partir daquele composto. Por uma mutase, que muda a posio dos grupos, ele origina succinil-Coenzima A, que tambm um intermedirio do ciclo de Krebs. 3.7. Formao de corpos cetnicos A formao de corpos cetnicos que ocorre no fgado tambm importante. Quando predomina o catabolismo das gorduras, formam-se grandes quantidades de acetil-Coenzima A, pelo que se podem formar corpos cetnicos. Duas acetil-Coenzima A, por aco de uma tiolase, formam ________________. Uma sintetase forma hidroximetilglutaril-Coenzima A e libertase uma molcula de Coenzima A. A glutaril-Coenzima A vai ser clivada numa reaco catalisada por uma enzima de clivagem, formando-se acetoacetato, que constitui os corpos cetnicos. O acetoacetato pode ser reduzido na matriz da mitocndria, estando envolvido o NADH, que passa a NAD+, e pode tambm ser carboxilado. O acetato, a acetona e outros so corpos cetnicos. Os corpos cetnicos so muito importante em termos metablicos. O acetoacetato formado muito importante no metabolismo, podendo ser usado como combustvel. importante pois transportado na corrente sangunea. O acetoacetato difunde-se da mitocndria para o citoplasma e lanado na corrente sangunea, e por isso so importantes os corpos cetnicos. O acetoacetato, numa reaco catalisada por uma transferase, passa a ____________________________________________________ ______________________________________________________________________ ______________________________________________________________________ ______________________________________________________________________ ______________________________________________________________________ ______________________________________________________________________ ______________________________________________________________________.
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O acetoacetil que foi formado pode ser metabolizado pela clula, originando acetil-Coenzima A, que pode entrar no ciclo de Krebs. Quando o metabolismo das gorduras predominante, formam-se corpos cetnicos, forma-se acetoacetato, que pode ser usado na forma de acetil-Coenzima A. O msculo cardaco e o crtex renal preferem metabolizar o acetoacetato. O crebro e os eritrcitos preferem glucose aos corpos cetnicos, em condies de dieta normal. Se no houver glucose, o crebro pode tambm ir buscar os corpos cetnicos, que so, portanto, usados em condies de fome. 75% do combustvel utilizado no crebro acetoacetato. 3.8. Interaco entre o metabolismo das gorduras e o metabolismo dos acares Quando predomina o catabolismo dos cidos gordos, formam-se corpos cetnicos, enquanto que, quando o metabolismo dos cidos gordos e dos acares equilibrado, o acetil-Coenzima A entra no ciclo de Krebs, condensando-se com oxaloacetato e originando citrato. necessrio que haja oxaloacetato para se condensar com o acetil-Coenzima A. Os intermedirios do ciclo de Krebs so repostos por reaces aneplerticas, e o piruvato origina oxaloacetato, nestas reaces. necessrio, portanto, que haja piruvato, resultante do metabolismo dos hidratos de carbono. As gorduras so queimadas na chama dos hidratos de carbono. 3.9. Balano energtico _______: Cnacil-CoA + FAD+ + NAD+ + H2O + CoA Cn-2acilCoA + FADH2 + NADH + acetilCoA + H+ No exemplo do palmitoil-Coenzima A (C16acil-CoA) h 7 ciclos. Palmitoil-CoA + 7 FAD+ + 7 NAD+ + 7 CoA + 7 H2O 8 acetilCoA + 7 FADH2 + 7 NADH + 7 H+ Cada NADH d 2,5 ATPs; multiplicando por 7, originam-se, ento, 17,5 ATPs. Cada FADH2 d 1,5 ATPs, multiplicando d 10,5 ATP. Cada acetilCoenzima A, no ciclo de Krebs, d 10 ATPs; multiplicando por 8 d 80 ATPs. No total, formam-se 108 ATPs. Como foram gastas duas ligaes (reaces) ricas em energia, para activar, o rendimento net ser 106 ATPs. Catabolizando as gorduras, h um total net de 106 ATPs. Os hidratos de carbono tm um rendimento energtico prximo de 30, pelo que o rendimento energtico das gorduras maior.
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que exigia bicarbonato e resulta da carboxilao do acetil. Todos os carbonos que ficam nos cidos gordos so derivados de acetil-Coenzima A. Depois, o acetoacetil-ACP convertido em hidroxibutiril-ACP, numa reaco de reduo na qual os electres vm de NADPH. O hidroxibutiril-ACP sofre uma reaco de desidratao, passando a protonil-ACP (protonil) e saindo gua. Aquele reduzido a butiril-ACP, vindo os electres, mais uma vez, de NADPH. Por repetio deste conjunto de reaces repetem-se ciclos que originam os cidos gordos. As molculas de acetil-Coenzima A no se podem usar porque_________________________________________________________________ ______________________________________________________________________ ______________________________________________________________________. Tudo est ligado a ACP. Em cada ciclo repetem-se as reaces e vo-se adicionando unidades de dois carbonos, alongando-se a cadeia. 2.2. Repetio do ciclo Numa segunda volta, o segundo ciclo, o butiril-ACP e o malonil-ACP originam C6--cetoacil-ACP. Este, aps reduo, uma desidratao e uma reduo origina C6acil-ACP. Uma terceira volta leva continuao. Na sntese de palmitato, 7 malonil-Coenzima A e acetil-Coenzima A mais ___________________________________ originam palmitato e ______________________________________________________________________. Como a sntese de malonil vem:
A reaco global :
2.3. Funcionamento da sintase de cidos gordos A sintase de cidos gordos um dmero com trs domnios. No domnio 1 h uma transacilase, a malonil transacilase, que liga malonil-Coenzima A a ACP, e a enzima de condensao. No domnio 2 _________________________________ est a desidratase, a enuil reductase, que catalisa a segunda reduo. No domnio 3 est a tioesterase. No domnio 2 esto ainda as restantes enzimas de cada volta (, portanto). tambm uma cadeia deste domnio que confere flexibilidade, passando a cadeia de cidos gordos de uma subunidade para a outra. Graas a esta flexibilidade a cadeia passa de um lado para o outro. O acetil, depois de ter sido ligado ao ACP, deixa-o e liga-se enzima de condensao. Depois, o dador o malonil ligado a ACP. No incio do alongamento, o acetil condensa-se com o malonil, ficando estes ligados (ficando ligado) a ACP e a enzima de condensao livre. A ____ ____ da enzima de condensao liga-se poro de dois carbonos do malonil em ACP, formando-se acetoacetatil, com libertao de CO2. O acetoacetil reduzido a butil, ainda ligado a ACP, e h, depois, uma translocao desse composto para a protena. De seguida, o ACP liga-se, de novo, a malonil.
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Isto passa-se sucessivamente. Mais cinco voltas produzem o cido palmtico, com 16 carbonos. O palmitoil fica na enzima de condensao, depois passa a cido palmtico, e _________ leva libertao desse composto. Ambas as unidades do dmero contribuem para a sntese do cido gordo, que anda de um lado para o outro. 2.4. Introduo de ligaes duplas e formao de cidos gordos mais longos A introduo de ligaes duplas e a formao de (/) cidos gordos mais longos do que o cido palmtico so realizadas por uma enzima do retculo endoplasmtico, que tambm tem uma cadeia de transporte de electres. A introduo de ligaes duplas forma lpidos insaturados.________________ ______________________________________________________________________ ______________________________________________________________________. O ______-Coenzima A, mais o NADH, mais H+, mais O2, formam oleilCoenzima A, NAD+ e 2 H2O. O cido esterico tem 18 carbonos. O oleato pode ser alongado para 20 carbonos, com uma ligao dupla 11, ou ter 18 carbonos, com duas ligaes duplas, 6 e 9. O palmitato e o palmitolato_________________________________ ______________________________________________________________________ ______________________________________________________________________. O linoleato (C18:2) e o linolenato (C18:3) so essenciais, mas no so sintetizados no organismo, tendo de ser introduzidos na dieta. Os cidos gordos insaturados podem ter como precursores o palmitoleato (16:2), o oleato (18:1), o linol______________________________________________ ______________________________________________________________________. Contanto os carbonos, conhece-se os percurso.
3. Transporte de acetil-Coenzima A
O acetil-Coenzima A pode resultar da degradao dos cidos gordos, mas pode tambm resultar do catabolismo dos hidratos de carbono, pois o piruvato pode originar acetil-Coenzima A. Ambos os processos ocorrem na mitocndria, pelo que l que o acetil-Coenzima A surge. No entanto, a sntese de cidos gordos d-se no citosol, pelo que o acetil-Coenzima A tem de ir para l, mas no pode passar directamente. Pode condensar-se com oxaloacetato, formando citrato, na primeira reaco do ciclo de Krebs. O citrato, caso seja necessria energia, continua no ciclo de Krebs; se no for, este composto vai para o citosol. A divide-se em acetil-Coenzima A e oxaloacetato, que pode ser reduzido a malato, que pode ser descarboxilado a piruvato, numa reaco que forma NADPH. Este importante no anabolismo dos cidos gordos e tambm formado na via das pentoses. A passagem de oxaloacetato a piruvato uma reaco aneplertica. O piruvato pode voltar mitocndria e formar oxaloacetato numa carboxilao, catalisada por uma carboxilase. Nada se perde: o acetil-Coenzima A passa para o citossol e o oxaloacetato volta a formar-se.
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b) Reaco de desaminao O primeiro passo , ento, a remoo do grupo amnico. Este fica no glutamato, e , depois, removido, formando-se -cetocido. H desaminao directa. A serina, por desidratao, forma aminooilato, instvel, que perde um grupo amnico, formando piruvato. E treonina outro aminocido que pode ser desaminado directamente, formando -cetobutirato e NH4+. O io amnio txico e sempre excretado. Tem de ser transformado para sair do organismo, e f-lo sob a forma de ureia.
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Ciclo da ureia
1. Processo global
Como foi j referido, no catabolismo dos aminocidos, a primeira coisa que ocorre a remoo do grupo amnico, que se converte no io aminio, que tem de ser removido. Ele tem de entrar no ciclo da ureia, muito importante no metabolismo. Este foi o primeiro ciclo a ser descoberto. A arginina, por hidrlise catalisada pela ____, origina ornitina. Sai o io amnio, que vai para a ureia, excretada na urina. A ornitina transcarbamoilase converte a ornitina em citrulina, entrando, nessa reaco, carbamoilfosfato. A citrulina, numa reaco de condensao, com aspartato, forma argininosuccinato, e, depois, pela arginina succinase, sai fumarato, originando-se arginina.
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c) Condensao da argininosuccinato
citrulina
com
aspartato
formao
de
A citrulina condensa-se com aspartato, originando argininosuccinato, numa reaco catalisada pela argininosuccinato sintase, em que h necessidade de consumo de energia. O ATP convertido em AMP e PPi que, por hidrlise, origina dois Pi. d) Converso da argininosuccinato em arginina e fumarato A arginina succinase converte o argininosuccinato em arginina e fumarato, que participa tambm no ciclo de Krebs. Ele origina malato, que, por sua vez, forma oxaloacetato. Este, numa transaminao, forma aspartato. O oxaloacetato tem vrios destinos metablicos: no ciclo de Krebs condensa-se com acetil-Coenzima A, enquanto que, na gluconeognese, pode ser convertido em glucose. Outro destino este. O oxaloacetato participa, assim, a vrios nveis. O ciclo de Krebs e o ciclo da ureia esto ligados.
4. Compartimentao
O ciclo da ureia ocupa dois compartimentos: o citosol e a mitocndria. A citrulina forma-se na matriz da mitocndria e sai para o citosol. A ornitina forma-se no citosol e entra na mitocndria. Tm de haver transportadores na membrana da mitocndria para transportar estes compostos.
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Captulo 6: Fotossntese
Introduo
1. Processo global
A fotossntese faz parte do metabolismo dos hidratos de carbono e um metabolismo dos organismos autotrficos. O processo global da fotosstnese define-se por: luz 6 CO2 + 6 H2O C6H12O6 + 6 O2 A fotossntese consiste na produo de matria orgnica a partir de matria inorgnica. A fotossntese consiste na fixao de CO2 e formao de acares, glicose, com participao de gua. a luz que promove a reaco. Cerca de 1% da energia luminose que atinge a Terra absorvida pelos organismos e usada na fotossntese. A energia luminosa pode ser convertida em energia qumica. A energia, no fim da biossntese, fica disponvel para outros organismos, atravs da cadeia alimentar. Em certos casos, h fixao de outras formas inorgncias, como nitrognio e enxofre. O processo fotossinttico o oposto da respirao. No processo de respirao, a glicose e o oxignio originam CO2 e gua. Este um processo que liberta energia, para produzir trabalho. um processo exergnico. A fotossntese necessariamente endergnica e a fonte de energia a fonte luminosa (o Sol ou luz artificial). A reaco requer energia pois d-se contra o potencial termodinmico. A reaco da fotosstnese no se d de forma directa. Foi estudada durante muitos anos e, ainda hoje, o , revelando-se novos processos. H reaces de luz e reaces de escuro.
2. Cloroplastos
Os organismos fotossintticos tm organitos especializados, os cloroplastos. Estes apresentam duas membranas, dentro das quais h tilacides ligados por lamelas. O lquido que est dentro dos cloroplastos o estroma. As reaces de luz ocorrem na membrana dos tilacides e delas resulta NADPH e ATP. Esses produtos vo ser usados nas reaces de escuro, que consistem na sntese de hidratos de carbono, a partir da fixao de CO2. Estas ltimas reaces do-se no estroma.
3. Pigmentos fotossintticos
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3.1. Diversidade dos pigmentos A energia para o processo endergnico vem do Sol. Para os organismos utilizarem essa energia tm algo: pigmentos. Nas molculas de clorofila h quatro grupos pinlicos, que ligam magnsio, e uma cadeia hidrofbica fitil, que ancora a clorofila a protenas. Este pigmento semelhante hemoglobina, mas tem magnsio em vez de ferro. A absoro da radiao luminosa deve-se alternncia de ligaes duplas e simples que h nos tomos ligados a magnsio. As plantas tm outros pigmentos, ficobilinas e -caroteno, tambm importantes na absoro de luz, pois absorvem comprimentos de onda diferentes daqueles que so absorvidos pela clorofila. Pode visualizar-se a absoro em espectros de absoro de luz, fceis de elaborar a partir de um espectofotmetro. As clorofilas a e b absorvem maximamente comprimentos de onda diferentes, o que vantajoso. H uma zona intermdia em que os dois no absorvem, mas h picos junto dos 400 e dos 650 nm. A existncia de vrios pigmentos, que absorvem maximamente a diferentes comprimentos de onda, vantajosa, pois permite aproveitar maximamente vrios comprimentos de onda. O caroteno e as ficobilinas tambm contribuem para isto. 3.2. Efeito da luz sobre os pigmentos A luz, ao insidir sobre uma molcula de pigmento, faz com que fique no estado excitado, passando um electro para uma orbita de maior energia. Esse quantum de energia luminosa que foi absorvido pode ter vrios destinos. O quantum de energia pode ser libertado sob a forma de calor, com o regresso ao estado inicial, na rbita interior. A energia pode tambm ser simplesmente perdida. O electro que est excitado perde a energia e, sem ela, volta ao estado inicial. Essa energia pode ser perdida por emisso de luz, fluorescncia. Outro destino a transferncia de energia para uma molcula de pigmento vizinha. Esta fica excitada, embora no directamente pela luz, mas pela energia transferida pela molcula vizinha. Essa energia chama-se de excito e chama-se a isto uma transferncia de energia de ressonncia Frster. Este caso j importante na fotossntese. A energia transferida de umas molculas de pigmento para outras. Um outro destino o desaparecimento do electro excitado. H perda de um electro fotoexcitado, por parte do pigmento, que fica oxidado. Esse quantum de energia pode ento levar oxidao do pigmento, e a oxidao do pigmento que constitui a fotossntese. Esse electro vai implicar as reaces de escuro. Numa unidade fotossinttica, a energia captada por uma molcula, (que) conduzida para molculas vizinhas, pelo efeito de ____, e, depois, para uma outra molcula, onde h perda de electres. esta oxidao que consittui o incio da fotossntese.
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Os investigadores foram analisar a eficincia fotossinttica em funo do comprimento de onda. Quando a luz estava no comprimento de onda onde se iniciava a zona do vermelho, a fotosstnese caa bruscamente. O fenmeno foi designado de queda no vermelho. Pensou-se que os pigmentos no absorvessem no vermelho, mas, no entanto, verificou-se que, na zona do vermelho, os pigmentos absorvem significativamente. Os investigadores resolveram adicionar uma luz ____ com comprimento de onda mais curto (680), na parte em que no havia fotossntese nenhuma. A adio de duas luzes de diferentes comprimentos de onda j levava a eficincia fotossinttica. Eram necessrios dois tipos de luz para no haver queda no vermelho. Assim se concluiu que havia dois fotossistemas.
dador de hidrognio
aceitador reduzido
Dador desidrogenado
A fotossntese ser estudada relativamente s plantas verdes e, portanto, gua como redutor de CO2.
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Reaces de luz
1. Processo global
H dois fotossistemas, o I, P700, e o II, P680, sendo eles excitados pelos comprimentos de onda correspondentes numerao. A luz faz clivar a gua, que cede electres que acabam por ir reduzir NADP+, que origina NADPH. O fotossistema P680, excitado na zona do vermelho, na forma excitada perde um electro. Este desloca-se para potenciais mais negativos, o que termodinamicamente desfavorvel. O electro passa feofitinada plastoquinona e, depois, continua num complexo do citocromo bf. Os electres so recebidos pela plastocianina, ficando-se ao nvel do P700. Este deslocamento dos electres j termodinamicamente favorvel, passando de potenciais mais negativos para mais positivos. O P680, aps perder os electres, pode receber mais electres da gua, num mecanismo que usa mangansio. O fotossistema fica, depois, no estado no excitado. O P700, ao ser excitado pela luz, perde um electro contra o potencial termodinmico. Este vai ser recebido por clorofila a0, depois por a1, e, de seguida, por protenas com aglomerados sulfuroferrosos. Depois o electro passa ferredoxina, flavoprotena e, por fim, ao NADP+, formando-se NADPH. Os electres da plastocianina vo para o P700, que fica no estado no excitado. Forma-se ento NADPH e os electres vm, em ltimo caso, da gua. A gua clivada por aco da luz. O NADPH, com grande potencial redutor, utilizado nas reaces de escuro, a fase seguinte. Os fotossistemas colaboram um com o outro. O P680 e o P700 esto a colaborar porque, quando o primeiro excitado, vai extrair electres da gua, h clivagem da gua e liberta-se O2. Quando excitado, o P680 torna-se um forte oxidante, extraindo electres da gua e levando-os para potencias negativos. A plastocianina um fraco redutor. O P700 um fraco oxidante e, aps excitao, torna-se um fraco redutor, que leva formao de NADPH, um forte redutor. Os electres, naturalmente, vo de potenciais mais negativos para mais positivos. Forma-se outro composto importante, o ATP. Este transporte de electres est associado a movimento de protes para dentro do lmen dos tilacides, cujo pH desce. Esse gradiente de protes permite a formao de ATP. Tambm no cloroplasto, semelhana do que acontece na mitocndria, possvel sintetizar o ATP pelo mecanismo da teoria quimiosmtica. A formao de ATP, neste caso, designa-se de fotofosforilao.
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O P680 excitado pela luz, perdendo electres. As quinonas de cada lado do complexo so reduzidas pela gua. Na fotosstense, h clorofilas a, b e carotenides. O fotossistema II, P680, catalisa a transferncia de electres (/) da gua para a plastoquinona, por aco da luz. luz 2 Q + 2 H2O O2 + 2 QH2 A plastoquinona transfere-os para a plastocianina. O P680, quando recebe luz, fica excitado. 10 ps aps a excitao, um electro logo perdido. Ele vai para a feofitina, sendo perdido e ficando o P680 oxidado. Aps 100 ps, o electro passa para a plastoquinona, o aceitador de electres, uma quinona, que est no lado A. A plastoquinona recebe 2 protes e 2 electres, formando plastohidroquinona. No lado B est outra quinona, que recebe o electro do lado A. (H ainda outra, e,) Quando esta quinona reduzida, forma-se QH2, e nesta forma que se converte a energia dos electres. A oxidao da gua envolve o transporte de 4 electres e a utilizao de 2 Qs. Duas molcula de gua fornecem 4 electres, mas cada um desloca-se independentemente. So necessrios dois para se formar QH2, pelo que cada duas molculas de gua levam formao de dois QH2. O electro que saiu do fotossistema II vai reduzir a quinona e, depois, entra na cadeia de transporte. Chega plastocianina, sendo recebido pelo cobre desta protena. A plastocianina reduzida vai transferir os electres para o complexo do fotossistema I. b) Fotlise da gua Quando o fotossistema II excitado pela luz, h uma primeira quantisdade de eneriga a incidir. A perda de um electro leva a que passe ao estado S1. A sucessiva perda de electres por aco dos quanta de energia leva formao dos estados S2, S3 e S4 de oxidao. Ao perder um electro, o fotossistema fica oxidado e apto a ir buscar um electro gua, mas, no entanto, para libertar O2, duas molculas de gua tm de perder 4 electres. S quando o fotossistema est no estado S4 vm os 4 electres. O mangansio importante neste processo. 2 mangansios coordenam 2 molculas de gua. 4 quanta de energia levam libertao de O2, 4 H+ e 4 electres, que vo para o fotossistema. Este o mecanismo molecular que explica a extruso de electres da gua. c) Reaces do fotossistema I O fotossistema I tambm um complexo com vrias subunidades, um sistema de protenas que atravessa a membrana dos tilacides. As subunidades psa A e psa B so importates pois l que se encontra o centro de reaco (na figura, o A0 o A1, e vice-versa). O electro passa de A0, uma clorofila, para o A1, deste para Fx e daqui salta para psa C. Finalmente, os electres so lanados na ferredoxina. A psa F serve para permitir a ligao da plastocianina, enquanto a psa D liga a ferredoxina no lado do estroma, onde os electres a vo reduzir. Para formar NADPH so necessrios 2 electres, pelo que necessrio reduzir 2 ferredoxinas, tendo o ciclo de ocorrer 2 vezes. O fotossistema, quando excitado, vai buscar os electres plastocianina e passlos ferredoxina, que vai reduzir o NADP+ a NADPH.
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d) Formao de ATP por fotofosforilao A reaco net entre o fotossistema II, o citocromo bf (o fotossistema I) e o fotossistema I : luz 2 H2O + 2 NADP O2 + 2 NADPH + 2 H+
+
A luz promove o fluxo de electres de H2O para NADPH e leva formao de uma fora protomotriz, que permite a sntese de ATP. O fotossistema II fotoexcitado, os electres convertem Q em QH2, depois passam pelo conjunto de citocromos, de seguida para a plastocianina e para o fotossistema I, depois, e da para a ferredoxina, formando-se, no final, NADPH. Formase um gradiente de protes e a sntese de ATP d-se por aco de uma ATP sintetase semelhante da mitocndria (F0F1 ATP sintetase), a C F0F1 ATP sintetase. Quando os protes passam por esse complexo, forma-se ATP; os protes translocados, passando pela ATP sintetase, levam sntese de ATP. A fora protomotriz, p, tem duas componentes, uma elctrica, , porque este gradiente forma um potencial, e uma componente qumica. Na mitocndria, e componente elctrica que contribui mais. No cloroplasto, o contriobui pouco para p. Neste organito, quando se forma o gradiente de protes, o potencial elctrico fraco, pois, juntamente com os protes, entra Cl-, e as cargas neutralizam-se. O potencial no , por isso mesmo, alto. Para alm disso, quando entra H+, sai magnsio. por isso que o potencial elctrico fraco. Para cada electro que vem da gua, so translocados 2 protes e fica 1. Na passagem das quinonas para os citocromos, h translocao de mais 1 e, da oxidao da gua, fica mais um. So assim translocados 3 protes, o necessrio para a sntese de ATP. H translocao de um fosfato que basifica ________.
3. Fotofosforilao no cclica
O electro libertado pela excitao do P700 vai reduzir a ferredoxina. Se as clulas tiverem muito NADPH, preciso NADP+ para receber os electres. Se o P700 perder um electro e as clulas no precisarem de NADPH porque tm muito, os electres voltam para o sistema de citocromos, vo para a plastocianina e voltam ao P700. O electro no segue o trajecto normal para o NADP+. Sem gradiente de protes no h sntese de ATP. Neste caso, no actua o fotossistema II, no havendo fotlise da gua nem libertao de O2.
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Reaces de escuro
O NADPH e o ATP formados nas reaces de luz permitem a fixao de CO2 que ocorre nas reaces de escuro, que no necessitam de luz e levam formao dos hidratos de carbono.
1. Fixao de CO2
Os estudos das reaces de escuro foram feitos por Calvin. Ele estudou suspenses da alga Chlorella, que submeteu a carbono radioactivo. Passados 5 s, a radioactividade estava toda no cido-3-fosfoglicmico; aos 60s estava em vrios compostos. Se o cido-3-fosfoglicrido tem 3 carbonos, a molcula que fixaria o CO2 teria 2 carbonos, formando-se molculas com 3 carbonos. No entanto, a molcula que fica o CO2 tem 5 carbonos: a ribulose-1,5-bifosfato. Numa reaco catalisada pela ribulose-1,5-bifosfato carboxilase oxigenase forma um intermedirio, o enediol, que recebe o CO2, formando 2-carboxi-ceto-Darabinitol-1,5-bifosfato. Por hidratao, este forma um interemdirio hidratado que clivado em carbanio e cido-3-fosfoglicrido. O carbanio tambm forma o mesmo cido.
imperfeio da RUBISCO por modificao gentica. As plantas de zonas tropicais, em que a actividade de oxigenase grande, arranjaram forma de a diminuir.
3. Formao de hexoses-fosfato
A RUBISCO, funcionando como carboxilase, catalisa a fixao de CO2. O objectivo da fotossntese fazer a sntese de hexoses, isto , o que interessa fazer a sntese de hidratos de carbono. O primeiro produto da fixao o cido-3fosfoglicrido. Existendo CO2 forma-se esse composto. A ____ segue-se uma via muito semelhante gluconeognese. O cido-3-fosfoglicrido fosforilado, originando-se cido-1,3bifosfoglicrido e sendo o ATP necessrio formado nas reaces de luz. O cido-1,3bifosfoglicrido passa a gliceraldedo-3-fosfato, numa reaco de reduo que requer NADPH. O composto formado passa a frutose-1,6-bifosfato que, depois de desfosforilao, origina frutose-6-fosfato, sendo j estes dois compostos hexoses. A frutose-6-fosfato, aps desfosforilao, pode originar frutose.
4. Ciclo de Calvin
necessrio regenerar a ribulose-1,5-bifosfato. Na regenerao desse composto h reaces semelhantes s da via das pentoses-fosfato. A frutose-6-fosfato, mais o gliceraldedo-3-fosfato, numa reaco catalisada por uma transcetolase, formam xilose5-fosfato e eritrose-4-fosfato (C6 + C3 = C4 + C5) Por aco de uma aldolase, esta ltima e dihidroxiacetona-fosfato originam sedoheptulose-1,7-bifosfato. Esta, mais gliceraldedo-3-fosfato, formam ribose-5-fosfato e xilose-5-fosfato, por aco de uma transcetolase. A ribose-5-fosfato e a xilose-5-fosfato podem converter-se em ribulose5-fosfato (ribulose), a primeira por isomerizao, catalisada por uma isomerase, e a outra por epimerizao, catalisada por uma epimerase. Para regenerar ribulose-1,5fosfato, h fosforilao de ribulose-5-fosfato, por uma cinase. Este o ciclo de Calvin. No ciclo de Calvin, a ribulose-1,5-bifosfato fixa CO2, formando cido-3fosfoglicrido. Gasta-se ATP, 2, vindos das reaces de luz, para formar cido-1,3bifosfoglicrido, e, depois, h reduo deste composto a gliceraldedo-3-fosfato, vindo os electres de 2 NADPH. Forma-se frutose-6-fosfato que, juntamente com o gliceraldedo-3-fosfato, gasta para regenerar a ribulose. Parte da frutose-6-fosfato tambm usada para regenerar glicose. A ribulose-5-fosfato, regenerada pelo conjunto de reaces catalisadas por transcetolases, transaldolases e outras enzimas, fosforilada a ribulose-1,5-bifosfato. Formam-se 12 gliceraldedos-3-fosfato, 8 so gastos para sintetizar hidratos de carbono e os outros ficam para regenerao. Chama-se a este ciclo ciclo de Calvin pois foi Calvin quem o estudou. A reaco net vem: 6 CO2 + 18 ATP + 12 NADPH + 12 H+ + 12 H2O glucose + 18 ADP + 18 Pi 12 NADP+ Este processo ocorre nas plantas C3, que fixam carbono em molculas de 3 carbonos.
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Protelise lisossmica
A degradao ocorre nos lisossomas, que tm vrias enzimas, hidrolases, que degradam vrias molculas. As proteasas, nos lisossomas, degradam as protenas. Estes compartimentos tm um pH muito baixo, mantido por uma bomba de protes (ATPase protnica), que mantm o gradiente destas partculas. As proteases referidas requerem esse pH baixo para funcionar. As enzimas do interior do lisossoma no so ____ fora dele, pois no funcionam para valores de pH a existentes. Os lisossomas tm tambm importantes protenas transportadoras, que transportam os produtos a degradar e os produtos da degradao. H tambm protenas glicosiladas, protegidas contra as enzimas hidrolticas. Os lissomas so tambm importantes para degradar organismos estranhos fagocitados. Outros processos digestivos podem ocorrer relativamente a partculas ou a partes da prpria clula (autofagia). Uma mitocndria pode ser digerida. A protelise lisossmica no selectiva, digerindo tudo. importante, mas mais para os processos digestivos referidos.
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Protelise extralisossmica
H tambm protelise extralisossmica, com grande selectividade, j que, neste caso, as protenas (Elas) tm de ser reconhecidas para serem degradadas. Esses mecanismos ocorrem no citoplasma.
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b) Transferncia da ubiquitina para E1 A ubiquitina activada transferida para um local tiol de E1, formando uma ligao tioster de altas energia. c) Transesterificao da ubiquitina Depois, a ubiquitina, ligada a E1, transferida para E2, a enzima transportadora. d) Seleco das protenas substrato As protenas a degradar tm de ser reconhecidas e a enzima E3 que faz esse reconhecimento. e) Conjugao da ubiquitina com as protenas-alvo Depois de haver o reconhecimento, vem a fase final, em que se transfere a ubiquitina, transportada por E2, para a protena a degradar. Saem depois a E2 e a E3, uma ligase, e a ubioquitina conjuga-se, assim, com a protena-alvo. 2.4. Clivagem das protenas Protenas que estejam marcadas com ubiquitina so degradadas no proteossoma. O proteossoma o complexo onde so degradadas as protenas. As protenas, marcadas com ubiquitina, so degradadas, libertando-se a ubiquitina e resultando peptdeos. 2.5. Reconhecimento de protenas substrato Os -aminogrupos so muito importantes no reconhecimento. Todas as protenas tm um terminal amnico e ele que determina o perodo de meia-vida das protenas. Terminais amnicos de Tyr, Ile, Glu, His, Arg, Lys, Phe, Trp, Leu, Asn ou Asp determinam perodos de meia-vida curtos. Se tiverem resduos terminais de Met, Ser, Ala, Thr, Val, Gly, Pro ou Cys, as protenas tm meia-vida longa. Quando so sintetetizadas tm sempre um resduo de meteonina no terminal amnico, que removido por uma enzima, a meteonina aminopeptidase. Isso necessrio porque, depois, expe-se o segundo resduo. A acetil transferase tambm modifica, alterando a enzima por acetilao. Muitas vezes, nas protenas, h lisinas, com -aminogrupos, no terminais, laterias, a que se liga a ubiquitina, aumentando-se a velocidade. Este sistema de protelise envolve esta selectividade. um sistema que remove protenas defeituosas e protenas reguladoras de vida curta. Dentro dos vrios factores reguladores, importantssimos, h protenas reguladoras, que devem ter um tempo de meia-vida curto. a enzima E3 que identifica os substratos. H vrios tipos de E3, que reconhecem certos tipos de protenas com certos terminais amnicos. As protenas com terminais amnicos bsicos so reconhecidas pelo tipo I; o tipo II reconhece protenas com terminais hidrofbicos; o tipo III reconhece protenas com terminais amnicos de Ser, Ala e Thr; o tipo IV reconhece protenas com terminais amnicos de Met, Ile, Pro, Gly e Val., mas no pelo terminal. Estas ltimas protenas so reconhecidas por
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sequncias PEST que possuem, relativas a Pro, Glu, Ser e Tr. A acetilao dos aminocidos reconhecidos pelos tipos I, II e III impede o reconhecidmento. As protenais reconhecidas pelo tipo IV, se forem acetiladas, so reconhecidas na mesma, pois o que se reconhece a sequncia PEST. As protenas com aminocidos terminais acdicos no so reconhecias por E3. Os aminocidos terminais Asn e Glu tm de ser arginilados, por adio de arginina, passando a ser bsicos e a ser reconhecidos pelo tipo I. A asparagina e a glutamina, por uma asparaginase e uma glutaminase, respectivamente, passam a aspartato e glutamato. Estes podem ser arginilados, passando a ser bsicos. Protenas com terminais amnicos acdicos necessitam de RNAt para serem arginiladas. preciso um RNAt que traga o grupo arginil, que ir arginilar os aminocidos. E3 tem locais negativmente carregados que necessitam de resduos bsicos para se ligar.
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3. Ciclos de substrato
Na reaco da gliclise em que a fosfofrutocinase converte frutose-6-fosfato em frutose-1,6-bifosfato, o equivalente de ATP -1, j que o ATP convertido em ADP. Na gluconeognese, na passagem de frutose-1,6-bifosfato a frutose-6-fosfato, catalizada pela enzima frutose-bifosfatase, no h transformao de ATP, sendo o equivalente 0. H uma hidrlise net de ATP, sem haver converso net de substrato. A isto chama-se ciclos de substrato, que so fteis em termos energticos. Uma maneira de serem evitados utilizar os processos reguladores do metabolismo. No caso visto, as duas enzimas so reguladas de maneira contrria, o que impede estes ciclos fteis. s vezes os ciclos fteis tambm so necessrios. H uma abelha que necessita de uma tempertura de 30C no trax para bater as asas. Elas conseguem voar em menores temperaturas, pois h ciclos de substrato a produzir calor. Para que o ciclo se d, o regulador, AMP, inibido. De uma maneira estes ciclos so fteis mas, em alguns casos, podem ter utilidade.
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3. Ciclos metablicos
Os vrios rgos tm uma certa especificidade metablica. Tm processos especficos, o que importante. Os rgos podem comunicar entre si em termos metablicosm e isso importante.
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3.1. Ciclo glucose-cidos gordos Entre o tecido adiposo (adipcitos) e o msculo ocorre um desses ciclos, o ciclo glucose-cidos gordos. O msculo requer glicose para realizar gliclise, para produzir energia. Se houver um baixo nvel de glicose, h um baixo nvel de insulina, a hormona que facilita o transporte deste acar. A insulina inibe a liplise no adipcito, pelo que, quando a glicose baixa, a inibio da lipise levantada. Os triglicerdeos do origem aos cidos gordos e ao glicerol. Os primeros entram nos msculos e so usados para produzir energia, tendo como produto final o acetil-Coenzima A. Quando este abundante, vai regular negativamente a enzima que catalisa a converso do piruvato em acetil-Coenzima A. Este pode entrar no ciclo de Krebs, no qual um dos intermedirios o citrato, que tambm inibe a gliclise, inibindo a fosfofrutocinase. A degradao de cidos gordos tambm leva formao de NADH. Quando a glicose pouco abundante, os msculos vo utilizar cidos gordos, produzindo-se compostos que inibem a gliclise, j que no favorvel que a glicose seja degradada. A inibio leva a que o msculo prefira os cidos gordos. 3.2. Ciclo de Cori O ciclo de Cori importante porque permite a interligao de rgos, passandose entre dois, o fgado e o msculo. Neste ltimo usa-se fundamentalmente glicose, produzindo-se ATP usado na contraco. Em anaerobiose, a gliclise, no msculo (fgado), forma lactato, que vai at ao fgado pela corrente sangunea. A, o lactato, por gluconeognese, forma glicose, que volta, depois, pela corrente sangunea, ao msculo. A gluconeognese requer energia, que provm da degradao de cidos gordos existentes no fgado. No ciclo, h uma reciclagem de carbono e um transporte de energia. 3.3. Ciclo glucose-alanina Outro ciclo metablico importante o ciclo glucose-alanina, que se passa entre os mesmo rgos. No msculo, a glicose convertida em piruvato, que pode originar alanina, em vez de originar lactato, o que pode ser vantajoso. A alanina um regulador de um tipo de piruvato cinase. A alanina formado nos msculos pode ir para o fgado e, a, ser metabolizada po aco de transaminases, e originar piruvato. H formao de ies amnio que podem ser excretados pela urina, na forma de ureia. O piruvato, por gluconeognese, pode originar glucose, que volta para o msculo, onde h utilizao desse acar. A alanina pode, ento, formar glucose, no fgado. H um aproveitamento energtico. A passagem de piruvato a lactato levou perda de energia, tendo-se perdido NADH, uma molcula importante. Estes ciclos dependem da especificidade de vrios rgos, que usada por todo o organismo, por aco destes reguladores metablicos.
4. Homeostasia de combustveis
O fgado um rgo de grande importncia em termos metablicos, apresentando funo de tampo, impedindo o excesso ou a deficincia de combustveis.
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Aps uma refeio, h abundncia de glucose no sangue. Nestas condies e graas hormona insulina, h sntese de glicognio, onde a glucose fica armazenada, no fgado. A glucose passa a glucose-6-fosfato. Parte armazenada e outra usada para sintetizar cidos gordos e para sintetizar energia para o prprio fgado. A glucose-6-fosfato pode formar cidos gordos pois, no final da gliclise, converte-se em acetil-Coenzma A. Uma vez sintetizados no fgado, os cidos gordos vo para o tecido adiposo. Se se passar muito tempo sem comer (de noite, por exemplo), o glicognio armazenado degradado em glicose, que distribuda. uma hormona, glucgono, a responsvel por isto. Muitos cidos gordos podem ir para o fgado, para serem tambm convertidos em glicose. Durante fome progressiva, os nveis de glicose vo baixando, os cidos gordos vo subindo e os corpos cetnicos vo aumentando. A insulina baixa, pois no preciso armazenar glicose, e o glucgono aumenta. Nas primeiras quatro horas depois de comer, a glucose no sangue abundante e a primeira a ser utilizada. Esta fase a absorptiva. Se, passadas quatro horas, no se comer, a glucose exgena j foi gasta, e o organismo vai buscar a glicose ao glicognio. Esta fase a ps-absorptiva. Se se continuar em fome, atinge-se a terceira fase, uma fome mais perigosa, a fome inicial. O organismo comea a sintetizar glicose a partir da gluconeognese, no fgado. Se os dias forem passando, ao incio ainda h gluconeognese, mas depois ela vai diminuindo. a fome intermdia. A quinta fase pode durar ainda mais tempo e muito perigosa. O primeiro rgo a ser afectado o crebro, que requer sempre glicose. Ele est sempre a funcionar, mesmo a dormir, e no tem reservas.
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